Name: inducing acute liver injury in rats via carbon tetrachloride (ccl4) exposure through an orogastric tube
Uploaded: 2020-04-28T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inducing Acute Liver Injury in Rats via Carbon Tetrachloride CCl4 Exposure Through an Orogastric Tube at JoVE.com

Os autores agradecem bertha Delgado, Departamento de Patologia, Soroka Medical Center, Faculdade de Ciências da Saúde, Universidade Ben-Gurion do Negev, por sua ajuda no laboratório, bem como na análise histologia.

Os experimentos foram realizados de acordo com as recomendações das Declarações de Helsinque e Tóquio e das Diretrizes para o Uso de Animais Experimentais da Comunidade Europeia. Os experimentos foram aprovados pelo Comitê de Cuidados Animais da Universidade Ben-Gurion do Negev.
NOTA: O modelo CCL4 foi gerado e utilizado em um estudo anterior17. O cronograma do protocolo é demonstrado na Tabela 1.
1. Preparar ...

<ol>
	<li>Hoofnagle, J. H., Carithers, R. L., Shapiro, C., Ascher, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fulminant+hepatic+failure:+Summary+of+a+workshop.">Fulminant hepatic failure: Summary of a workshop.</a> Hepatology. 21 (1), 240-252 (1995).</li><li>Rakela, J., Lange, S. M., Ludwig, J., Baldus, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fulminant+hepatitis:+Mayo+clinic+experience+with+34+cases.">Fulminant hepatitis: Mayo clinic experience with 34 cases.</a> Mayo Clinic Proceedings. 60 (5), 289-292 (1985).</li><li>Riordan, S. M., Williams, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+hepatic+encephalopathy.">Treatment of hepatic encephalopathy.</a> New England Journal of Medicine. 337, 473-479 (1997).</li><li>Bernuau, J., Rueff, B., Benhamou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fulminant+and+subfulminant+liver+failure:+Definitions+and+causes.">Fulminant and subfulminant liver failure: Definitions and causes.</a> Seminars in Liver Disease. 6 (2), 97-106 (1986).</li><li>Lidofsky, S. 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J., Alvarez, M., Culebras, J. M., Gonz&#225;lez-Gallego, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+animal+models+for+investigating+the+pathogenesis+and+therapeutic+strategies+in+acute+hepatic+failure.">An overview of animal models for investigating the pathogenesis and therapeutic strategies in acute hepatic failure.</a> World Journal of Gastroenterologyl. 15 (25), 3086-3098 (2009).</li><li>van de Kerkhove, M. P., Hoekstra, R., van Gulik, T. M., Chamuleau, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large+animal+models+of+fulminant+hepatic+failure+in+artificial+and+bioartificial+liver+support+research.">Large animal models of fulminant hepatic failure in artificial and bioartificial liver support research.</a> Biomaterials. 25 (9), 1613-1625 (2004).</li><li>Butterworth, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+hepatic+encephalopathy:+ISHEN+guidelines.">Experimental models of hepatic encephalopathy: ISHEN guidelines.</a> Liver International. 29 (6), 783-788 (2009).</li><li>Zhang, B., Gong, D., Mei, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+of+regenerating+liver+after+partial+hepatectomy+from+carbon+tetrachloride+hepatotoxicity+in+rats:+Role+of+hepatic+stimulator+substance.">Protection of regenerating liver after partial hepatectomy from carbon tetrachloride hepatotoxicity in rats: Role of hepatic stimulator substance.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 14 (10), 1010-1017 (1999).</li><li>Ugazio, G., Danni, O., Milillo, P., Burdino, E., Congiu, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+protection+against+carbon+tetrachloride+toxicity.+I.+prevention+of+lethal+effects+by+partial+surgical+hepatectomy.">Mechanism of protection against carbon tetrachloride toxicity. I. prevention of lethal effects by partial surgical hepatectomy.</a> Drug and Chemical Toxicology. 5 (2), 115-124 (1982).</li><li>Taniguchi, M., Takeuchi, T., Nakatsuka, R., Watanabe, T., Sato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+process+in+acute+liver+injury+and+regeneration+induced+by+carbon+tetrachloride.">Molecular process in acute liver injury and regeneration induced by carbon tetrachloride.</a> Life Science. 75 (13), 1539-1549 (2004).</li><li>Gordis, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+metabolites+of+carbon+tetrachloride.">Lipid metabolites of carbon tetrachloride.</a> Journal of Clinical Investigation. 48 (1), 203-209 (1969).</li><li>Albrecht, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+RNA+synthesis+in+experimental+hepatogenic+encephalopathy.">Cerebral RNA synthesis in experimental hepatogenic encephalopathy.</a> Journal of Neuroscience Research. 6 (4), 553-558 (1981).</li><li>Terblanche, J., Hickman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+fulminant+hepatic+failure.">Animal models of fulminant hepatic failure.</a> Digestive Diseases and Sciences. 36 (6), 770-774 (1991).</li><li>Gruenbaum, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-free+DNA+as+a+potential+marker+to+predict+carbon+tetrachloride-induced+acute+liver+injury+in+rats.">Cell-free DNA as a potential marker to predict carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats.</a> Hepatology International. 7 (2), 721-727 (2013).</li><li>Juricek, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+evaluation+of+the+clinical+chemistry+analyzer+Olympus+AU2700+plus.">Analytical evaluation of the clinical chemistry analyzer Olympus AU2700 plus.</a> Biochemia Medica. 20 (3), 334-340 (2010).</li><li>Feldman, A. T., Wolfe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+processing+and+hematoxylin+and+eosin+staining.">Tissue processing and hematoxylin and eosin staining.</a> Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).</li><li>Wang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+dehydrocavidine+on+carbon+tetrachloride-induced+acute+hepatotoxicity+in+rats.">Protective effects of dehydrocavidine on carbon tetrachloride-induced acute hepatotoxicity in rats.</a> Journal of Ethnopharmacology. 117 (2), 300-308 (2008).</li><li>Ye, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatoprotective+effects+of+coptidis+rhizoma+aqueous+extract+on+carbon+tetrachloride-induced+acute+liver+hepatotoxicity+in+rats.">Hepatoprotective effects of coptidis rhizoma aqueous extract on carbon tetrachloride-induced acute liver hepatotoxicity in rats.</a> Journal of Ethnopharmacology. 124 (1), 130-136 (2009).</li><li>Wills, P. J., Asha, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+lygodium+flexuosum+(L.)+sw.+extract+against+carbon+tetrachloride-induced+acute+liver+injury+in+rats.">Protective effect of lygodium flexuosum (L.) sw. extract against carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats.</a> Journal of Ethnopharmacology. 108 (3), 320-326 (2006).</li><li>Senior, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+for+hepatotoxicity:+What+is+the+predictive+value+of+liver+"function"+tests.">Monitoring for hepatotoxicity: What is the predictive value of liver "function" tests.</a> Clinical Pharmacology &amp; Therapeutics. 85 (3), 331-334 (2009).</li><li>Karmen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+note+on+the+spectrometric+assay+of+glutamic-oxalacetic+transaminase+in+human+blood+serum.">A note on the spectrometric assay of glutamic-oxalacetic transaminase in human blood serum.</a> Journal of Clinical Investigation. 34 (1), 131-133 (1955).</li><li>Hubner, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructural+liver+damage+caused+by+direct+action+of+carbon+tetrachloride+in+vivo+and+in+vitro.">Ultrastructural liver damage caused by direct action of carbon tetrachloride in vivo and in vitro.</a> Virchows Archiv fur Pathologische Anatomie und Physiologie und fur Klinische Medizin. 339 (3), 187-197 (1965).</li><li>Newsome, P. N., Plevris, J. N., Nelson, L. J., Hayes, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+fulminant+hepatic+failure:+A+critical+evaluation.">Animal models of fulminant hepatic failure: A critical evaluation.</a> Liver Transplantation. 6 (1), 21-31 (2000).</li></ol>

Neste protocolo, CCl4 é usado como uma toxina hepática para induzir ALI em ratos. Ali é caracterizada pela perda de parenchyma hepático e subsequente desregulação das funções metabólicas e sintéticas do fígado. Drogas, vírus, toxinas, doenças autoimunes, doenças metabólicas e doenças vasculares induzem a morte hepatocito, e a resposta inflamatória subsequente contribui para a patogênese da ALI.
O insulto inicial ao fígado leva à produção de citocina, liberaçã...

A frequência de insultos tóxicos ao fígado, especialmente devido ao abuso de álcool e drogas, está aumentando. A lesão hepática aguda (ALI) está associada a altas taxas de mortalidade e tem causado preocupações clínicas1,2. Lesões tóxicas levam à morte sinalizando caminhos no fígado, resultando em apoptose hepatocito, necrose ou piropose. A ALI desempenha um papel crucial no desenvolvimento da insuficiência hepática, caracterizada por disfunção hepática grave, incluindo complicações como encefalopatia hepática e síntese proteica prejudicada3,4. Embora pesquisas recentes tenham aumentado nosso conhecimento sobre as mudanças fisiológicas e patológicas que acompanham a insuficiência hepática, ela não explicou completamente as características patomoleculares que afetam os mecanismos da morte celular. Além disso, não há medicamentos disponíveis atualmente para reverter a deterioração progressiva em pacientes ali. Atualmente, o único tratamento significativamente eficaz é o transplante hepático5,6.
A fim de investigar o mecanismo e fisiopatologia da ALI e testar diferentes estratégias hepatoprotetoras, diferentes modelos animais são usados para induzir ali. Um modelo animal preferencial da ALI deve imitar o processo patológico da doença por meio de um método confiável, validado, barato e fácil de aplicar. Exemplos de modelos experimentais incluem agentes hepatotóxicos, procedimentos cirúrgicos como hepatectomia total ou parcial, devascularização completa ou transitória e procedimentos infecciosos7,8,9. Substâncias hepatotóxicas conhecidas incluem galactosamina, acetaminofeno, thioacetamina, azoxymetano e ClC4. Destes, o CCl4 é amplamente utilizado, embora ainda não tenha sido bem caracterizado10,11,12,13.
CCl4 é um composto líquido incolor orgânico com um cheiro doce e quase nenhuma inflamabilidade em temperaturas mais baixas. A exposição a altas concentrações de ClC4 pode causar danos ao sistema nervoso central, incluindo deterioração do fígado e rins. CCl4 induz ALI através de sua biotransformação no fígado, que forma espécies reativas de oxigênio. Isso ocorre através da enzima citocromo P450 2E1, formando um metabólito ativo e resultando em dano celular por ligação de macromoléculas, aumento da peroxidação lipídica e perturbação da homeostase de cálcio intracelular14. Além disso, o modelo CCl4 pode ser usado para estimular os astrócitos ao nível da síntese de RNA15. Esta hepatotoxina tem sido administrada pelas rotas intraperitoneal, intraportal, oral e intratragastrica16.
Neste protocolo, descrevemos em detalhes ccl4-induzido ALI em ratos através de uma sonda orogástrica. Este método induz ali robusto e reprodutível que pode ser usado para investigar a patogênese de ALI. A determinação da gravidade da doença hepática é monitorada pela medição do soro glutamato-piruvato transaminase (GPT), enzimas transaminase oxaloacticais glutamicas (GOT) e bilirrubina total (TB), bem como diagnóstico histológico definitivo por hematoxilina e eosina (H&E) tecidos hepáticos manchados. A exposição ao CCl4 através de um acesso intragastric permite um método prático, barato e minimamente invasivo com risco mínimo de risco.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:924px;" width="923">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">22 G catheter BD Neoflon TM</td>
			<td style="width:153px;">Becton Dickinson Infusion Therapy AB</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td style="width:443px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:212px;">4% buffered formaldehyde solution</td>
			<td style="width:153px;">Sigma - Aldrich lab materials technologies</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">BD Microtainer SST TM Tubes</td>
			<td style="width:153px;">Becton Dickinson and Company</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:212px;">Carbone tetrachloride</td>
			<td style="width:153px;">Sigma - Aldrich lab materials technologies</td>
			<td style="width:116px;">CAS 56-23-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">Isofluran, USP 100%</td>
			<td style="width:153px;">Piramamal Critical Care, Inc</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:212px;">Olympus AU2700 Chemistry-Immuno Analyzer</td>
			<td style="width:153px;">Olympus (MN, USA)</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td>Analysis of blood samples was done by the fluorescence method</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:212px;">Olympus BX 40 microscope</td>
			<td style="width:153px;">Olympus</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:212px;">RAT Feeding Needles</td>
			<td style="width:153px;">ORCHID SCIENTIFICS</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:212px;">SYRINGE SET 1 and 2 ml MEDI -PLUS</td>
			<td style="width:153px;">Shandong Zibo Shanchuan Medical Instruments Co., Ltd</td>
			<td style="width:116px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

inducing acute liver injury in rats via carbon tetrachloride (ccl4) exposure through an orogastric tube

A lesão hepática aguda (ALI) desempenha um papel crucial no desenvolvimento da insuficiência hepática, que é caracterizada por disfunção hepática grave, incluindo complicações como encefalopatia hepática e síntese proteica prejudicada. Modelos animais adequados são vitais para testar o mecanismo e a fisiopatologia da ALI e investigar diferentes estratégias hepatoprotetoras. Devido à sua capacidade de realizar transformações químicas, o tetracloreto de carbono (CCl4) é amplamente utilizado no fígado para induzir ali através da formação de espécies reativas de oxigênio. A exposição doClC 4 pode ser realizada intraperitonicamente, por inalação ou por sonda nasogástrica ou orogástrica. Aqui, descrevemos um modelo de roedor, no qual ali é induzido pela exposição ccl4 através de uma sonda orogástrica. Este método é barato, facilmente realizado e tem risco mínimo. O modelo é altamente reproduzível e pode ser amplamente utilizado para determinar a eficácia de potenciais estratégias hepatoprotetoras e avaliar marcadores de lesão hepática.

Os níveis de TB, GOT e GPT aumentaram significativamente 24 h após induzirem ALI (mais doses de CCl4) em comparação com controles falsos (p < 0,001) (Figura 1). Os níveis de TB, GOT e GPT na linha de base eram normais e não eram significativamente diferentes dos controles operados por fraude. Às 24 horas, todos os três grupos intervencionais, 1 mL/kg CCl4 (1, 1−2), 2,5 mL/kg CCl4 (3, 3−4) e 5 mL/kg CCl4 (4, 4-5,75), apresentaram um esco...

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Inducing Acute Liver Injury in Rats via Carbon Tetrachloride CCl4 Exposure Through an Orogastric Tube

Este protocolo descreve um método comum e viável de induzir lesão hepática aguda (ALI) através da exposição ao ClC4 através de uma sonda orogástrica. A exposição ao CCl4 induz ali através da formação de espécies reativas de oxigênio durante sua biotransformação no fígado. Este método é utilizado para analisar a fisiopatologia da ALI e examinar diferentes estratégias hepatoprotetoras.

Induzindo lesão hepática aguda em ratos via tetracloreto de carbono (CCl4) exposição através de um tubo orogástrico

Acute liver injury (ALI) plays a crucial role in the development of hepatic failure, which is characterized by severe liver dysfunction including ...

Gostaria de apresentar nosso trabalho sobre lesão hepática aguda induzida em ratos através da exposição ao tetraclorito de carbono através da sonda orogástrica. Selecione ratos adultos machos Sprague-Dawley pesando de 300 a 350 gramas. Fornecer comida de rato e ad libitum de água.Realize todos os experimentos entre seis am e 12 PM. A comédia de cuidados com animais da Universidade Ben-Gurion do Negev, Israel aprovou todo o procedimento de tratamento e teste usado neste protocolo. Mantenha os ratos à temperatura ambiente de 22 graus Celsius com luzes de 12 horas e ciclos escuros de 12 horas. Cannulate a veia da cauda com um cateter calibre 22.Coletar amostras de sangue na linha de base. A análise bioquímica sanguínea inclui a medição do soro GOT, GPT e bilirrubina total. O exame das enzimas hepáticas e o nível total de bilirrubina foram realizados no laboratório bioquímico do Soroka Medical Center.Atenção: a exposição à alta concentração de tetraclorito de carbono, incluindo vapor ou absorção da pele pode afetar o sistema nervoso central, degenerar o fígado e o rim, e exposição prolongada pode levar ao coma ou à morte. Prepare uma solução de 50% de tetraclorito de carbono misturado com azeite de oliva como veículo em uma proporção para um. Induzir a pathotoxicidade in vivo pela administração de tetraclorito de carbono através de uma sonda orogástrica.Insira uma sonda orogástrica através da cavidade oral do rato. Exponha os ratos a diferentes doses de tetraclorito de carbono. Um mililitro por quilo para lesão hepática aguda leve, dois ponto cinco mililitros por quilo para lesão hepática aguda moderada, ou cinco mililitros por quilo para lesão hepática aguda grave.Para o grupo falso, exponha os ratos a cinco mililitros por quilo apenas azeite. Coletar amostras de sangue a 24 horas da exposição ao tetraclorito de carbono. A análise bioquímica sanguínea inclui a medição do soro GOT, GPT e bilirrubina total.Coloque rato morto na placa de dissecação em recombinante dorsal com o abdominal voltado para cima e raspe o abdômen. Usando bisturi, inciso o comprimento total do ventrum do ânus até o queixo. Reflita a pele.Com o bisturi, inciso a parede abdominal do ânus à cartilagem xifoide para expor as vísceras abdominais. Transfira o fígado para uma placa de petri. Faça uma coloração de hematoxilina e eosina.Examine as fatias sob ampliação do microscópio de 200 vezes com um comprimento objetivo de 20 milímetros. A seção hepática deve ser classificada por um patologista especializado, cego ao protocolo de tratamento. O escore de zero indica que não há anormalidades hepáticas, um a dois indica lesão hepática leve, três a quatro indica lesão hepática moderada, e cinco a seis indica lesão hepática grave.Os vários grupos de ratos em diferentes momentos são mostrados no esquema. 24 horas após a indução de lesão hepática aguda, houve um aumento significativo nos níveis de GOT, GPT e bilirrubina total, dependendo do tetraclorito de carbono exposto em comparação com o grupo controle. O valor p foi inferior a zero ponto zero zero um.Alterações histopatológicas foram observadas após 24 horas em todos os grupos após intoxicação por tetraclorito de carbono em várias doses. A pontuação de classificação histológica em 24 horas entre os três grupos intervencionais para o grupo controle foi significativamente maior. O valor p foi inferior a zero ponto zero cinco.Nosso grupo de pesquisa apresentou o método comum e físico de lesão hepática aguda induzida em ratos através da exposição ao tetraclorito de carbono através da sonda orogástrica. Este método é usado para investigar a fisiopatologia da lesão hepática aguda e para testar diferente sobre a estratégia protetora. Muito obrigado por sua atenção.

Research

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Medicine

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