Name: humanized nog mice for intravaginal hiv exposure and treatment of hiv infection
Uploaded: 2020-01-31T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Humanized NOG Mice for Intravaginal HIV Exposure and Treatment of HIV Infection at JoVE.com

Gli autori desiderano ringraziare il personale di Biomedicine Animal Facility dell'Università di Aarhus, in particolare la sig.ra Jani Kàr per la manutenzione delle cozioni e per il monitoraggio del peso dei topi. Gli autori desiderano ringraziare il professor Florian Klein per lo sviluppo di cART standard-of-care e per la guida. Il seguente reagente è stato ottenuto attraverso il NIH AIDS Reagent Program, Division of AIDS, NIAID, NIH: pRHPA.c/2635 (cat-11744) dal Dr. John Kappes e dalla dott.ssa Christina Ochsenbauer.

Tutti i campioni di sangue cordonale sono stati ottenuti in stretta conformità con protocolli approvati localmente, compreso il consenso informato della donazione anonima da parte dei genitori. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati ed eseguiti in stretta conformità con le normative nazionali danesi ai sensi della licenza 2017-15-0201-01312.
AVVISO: Gestire topi e sangue esposti all'HIV con estrema cautela. Decontaminare tutte le superfici e i liquidi che sono stati a conta...

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V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequencies+of+gene+variant+CCR5-&#916;32+in+87+countries+based+on+next-generation+sequencing+of+1.3+million+individuals+sampled+from+3+national+DKMS+donor+centers.">Frequencies of gene variant CCR5-&#916;32 in 87 countries based on next-generation sequencing of 1.3 million individuals sampled from 3 national DKMS donor centers.</a> Human Immunology. 78 (11-12), 710-717 (2017).</li><li>Ochsenbauer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Transmitted/Founder+HIV-1+Infectious+Molecular+Clones+and+Characterization+of+Their+Replication+Capacity+in+CD4+T+Lymphocytes+and+Monocyte-Derived+Macrophages.">Generation of Transmitted/Founder HIV-1 Infectious Molecular Clones and Characterization of Their Replication Capacity in CD4 T Lymphocytes and Monocyte-Derived Macrophages.</a> Journal of Virology. 86 (5), 2715-2728 (2012).</li><li>Andersen, A. 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F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=cAIMP+administration+in+humanized+mice+induces+a+chimerization-level-dependent+STING+response.">cAIMP administration in humanized mice induces a chimerization-level-dependent STING response.</a> Immunology. 157 (2), 163-172 (2019).</li><li>Tanaka, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+Mature+and+Functional+Human+Myeloid+Subsets+in+Hematopoietic+Stem+Cell-Engrafted+NOD/SCID/IL2r+KO+Mice.">Development of Mature and Functional Human Myeloid Subsets in Hematopoietic Stem Cell-Engrafted NOD/SCID/IL2r KO Mice.</a> The Journal of Immunology. 188 (12), 6145-6155 (2012).</li><li>Quan, P. 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Lo sforzo murino gravemente immunocompromesso NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Sug/JicTac (NOG) è estremamente adatto per il trapianto di cellule e tessuti umani. Entrambe le vie immunitarie innate e adattativi in questi topi sono compromesse. I topi NOG e NSG ospitano una mutazionedi scied di Prkdc che si traduce nella funzione difettosa delle cellule T e B. Inoltre, questi topi non hanno un recettore funzionale dell'interleuchina-2 (catena gamma comune, IL2r...

Il virus dell'immunodeficienza umana (HIV) è un'infezione cronica con più di 37 milioni di individui infetti in tutto il mondo1. La terapia antivirale combinata (cART) è una terapia salvavita, ma una cura è ancora giustificata. Pertanto, vi è la necessità di modelli animali che rispecchiano il sistema immunitario umano e le sue risposte al fine di facilitare la ricerca continua sull'HIV. Sono stati sviluppati diversi tipi di topi umanizzati che sono in grado di supportare l'innesto di cellule e tessuti trapiantando cellule umane in topi gravemente immunosensibili2. Tali topi umanizzati sono suscettibili all'infezione da HIV e forniscono un'importante alternativa ai modelli di virus immunodeficienza dei primati non umani, in quanto sono più economici e più semplici da usare rispetto ai primati non umani. I topi umanizzati hanno facilitato la ricerca sulla trasmissione virale dell'HIV, la patogenesi, la prevenzione e il trattamento3,4,5,6,7,8,9,10,11.
Vi presentiamo un sistema modello umanizzato flessibile per la ricerca sull'HIV sviluppato trapiantando cellule staminali umane derivate dal sangue cordonale nei topi del NOD. Cg-PrkdcscidIl2rgtm1Sug/JicTac (NOG) sfondo. Oltre ad essere di origine non fetale, la bioingegneria pratica di questi topi è meno tecnicamente impegnativa rispetto alle procedure microchirurgiche coinvolte nel trapianto del costrutto sangue-fegato-timo (BLT).
Mostriamo come stabilire l'infezione da HIV attraverso la trasmissione intravaginale e come monitorare il carico virale al plasma con una configurazione sensibile basata su PCR digitale (ddPCR) di goccia. Successivamente, descriviamo l'istituzione di cART standard somministrata come parte della dieta quotidiana del topo. L'obiettivo di questi metodi combinati è quello di ridurre lo stress per gli animali e facilitare esperimenti su larga scala in cui il tempo impiegato per la manipolazione di ogni animale è limitato a12.
Nell'uomo, un genotipo CCR5n. 32/wt o CCR5-32 provoca una ridotta suscettibilità all'infezione da HIV con virus del trasmettitore/fondatore13, e alcune precauzioni devono essere prese quando i topi bioingegnerizzati con cellule staminali ai fini degli studi sull'HIV. Ciò è particolarmente vero nella nostra regione perché le varianti naturali nel gene CCR5, in particolare le delezioni di 32 dollari, sono più diffuse nelle popolazioni indigene scandinave e baltiche rispetto al resto del mondo14,15. Pertanto, il nostro protocollo include un semplice test ad alto throughput per lo screening delle cellule staminali ematopoietiche dei donatori per le varianti CCR5 prima del trapianto.
Per l'esposizione intravaginale abbiamo scelto il virus R5 trasmettitore/fondatore RHPA4259, isolato da una donna in una fase precoce dell'infezione che è stata infettata intravaginalmente16. Abbiamo esposto i topi a una dose virale sufficiente a produrre una trasmissione di successo nella maggior parte dei topi, ma al di sotto di un tasso di trasmissione del 100%. La scelta di una dose di questo tipo consente una portata dinamica sufficiente nel tasso di trasmissione tale che gli effetti antivirali di un farmaco candidato possono provocare animali protetti negli esperimenti di prevenzione dell'HIV e una riduzione del carico virale per gli studi di trattamento.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Blue pad</td>
			<td>VWR</td>
			<td>56616-031</td>
			<td>Should be sterilized prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A8022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD19 (clone sj25c1) PE-Cy7</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>557835</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 (clone OKT3) FITC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>317306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD3 (clone SK7) BUV395</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>564001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34 (clone AC136) FITC</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-113-740</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4 (clone SK3) BUV 496</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>564652/51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 (clone 2D1) APC</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>368511/12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD8 (clone RPA-T8) BV421</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>562428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ddPCR Supermix for probes (no dUTP)</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1863025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Merck</td>
			<td>10,02,95,21,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4263</td>
			<td>For suspension buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTP mix</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>R0192</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbeccos phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>L0615-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Human Cord Blood CD34 Positive Selection Kit II</td>
			<td>Stemcell</td>
			<td>17896</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15575-038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Lysing solution 10X</td>
			<td>BD</td>
			<td>349202</td>
			<td>Dilute 1:10 in dH20 immediately before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes (Falcon 5 mL round-botton)</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fc Receptor blocking solution (Human Trustain FcX)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>422302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F8192-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque PLUS</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17144002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowjo v.10</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gauze</td>
			<td>Mesoft</td>
			<td>157300</td>
			<td>Should be sterilized prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating lamp</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Custom made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemacytometer (B&#252;rker-T&#252;rk)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>DOWC1597418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane gas</td>
			<td>Orion Pharma</td>
			<td>9658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSR Fortessa X20 flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes, PCR-PT approved</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72692405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse cART food</td>
			<td>ssniff Spezialdi&#228;ten GmbH</td>
			<td>Custom made product</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse restrainer</td>
			<td></td>
			<td>Custom made product</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle, Microlance 3, 30G &#189;&#34;</td>
			<td>BD</td>
			<td>304000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOG mice NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Sug/JicTac</td>
			<td>Taconic</td>
			<td>NOG-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free water</td>
			<td>VWR chemicals</td>
			<td>436912C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucleospin 96 Virus DNA and RNA isolation kit</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>740691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR-approved microcentrifuge tubes</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.692.405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin solution 100X</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>L0022-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion Hot Start II DNA polymerase</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>F549S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette tips, sterile, ART 20P Barrier</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>2149P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>NEB</td>
			<td>100005398</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantaSoft software</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QX100 Droplet Generator</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1886-3008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QX100 Droplet Reader</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>186-3003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBC lysis solution</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>420301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase-free DNAse size F + reaction buffer</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>740963</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNAseOUT Recombinant Ribonuclease inhibitor</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>10777-019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>Biowest</td>
			<td>L0501-500</td>
			<td>Dissolve in H20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Softject 1 mL syringe</td>
			<td>Henke Sass Wolf</td>
			<td>5010-200V0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superscript III Reverse Transcriptase</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>18080044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermoshaker</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89370-910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypane blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure 0.5 EDTA, pH 8.0</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>15575-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon S (virus disinfectant)</td>
			<td>Dupont</td>
			<td>7511</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

humanized nog mice for intravaginal hiv exposure and treatment of hiv infection

I topi umanizzati forniscono una piattaforma sofisticata per studiare la virologia del virus dell'immunodeficienza umana (HIV) e per testare i farmaci antivirali. Questo protocollo descrive la creazione di un sistema immunitario umano nei topi NOG adulti. Qui, spieghiamo tutti i passaggi pratici dall'isolamento delle cellule CD34 umane derivate dal sangue del cordone ombelicale e il loro successivo trapianto endovenoso nei topi, alla manipolazione del modello attraverso l'infezione da HIV, alla terapia antiretrovirale combinata ( cART), e il campionamento del sangue. Circa 75.000 cellule hCD34 vengono iniettate per via endovenosa nei topi e il livello di chimerismo umano, noto anche come umanizzazione, nel sangue periferico è stimato longitudinalmente per mesi dalla citometria di flusso. Un totale di 75.000 cellule hCD34 produce cellule CD45 per un totale di 75.000 hCD34 nel sangue periferico. I topi sono suscettibili all'infezione intravaginale da HIV e il sangue possono essere campionati una volta alla settimana per l'analisi e due volte al mese per periodi prolungati. Questo protocollo descrive un saggio per la quantificazione del carico virale al plasma utilizzando la PCR digitale delle goccionelline (ddPCR). Mostriamo come i topi possono essere trattati efficacemente con un regime cART standard-of-care nella dieta. La consegna di cART sotto forma di chow topo regolare è un significativo affinamento del modello sperimentale. Questo modello può essere utilizzato per l'analisi preclinica di composti di profilassi pre-esposizione sia sistemici che topici, nonché per testare nuovi trattamenti e strategie di cura dell'HIV.

La strategia di gating per l'analisi della purezza delle cellule staminali è illustrata nella Figura 1. Figura 1A-C mostra la popolazione PURificata CD34 e Figura 1D– F il CD34- flow-through utilizzato per illustrare che la quantità minima della popolazione CD34 è perso nel processo di isolamento. La purezza delle cellule staminali isolate CD34 è stata tra l'85%-95% con meno dell'1% di contami...

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Humanized NOG Mice for Intravaginal HIV Exposure and Treatment of HIV Infection

Abbiamo sviluppato un protocollo per la generazione e la valutazione di un modello murino NOG infettato da virus dell'immunodeficienza umana e umile basato sul trapianto di cellule staminali, sull'esposizione al virus dell'immunodeficienza umana intravaginale e sull'RNA PCR digitale a goccia e droplet Quantificazione.

Mitrai NOG umanizzati per l'esposizione all'HIV intravaginale e il trattamento dell'infezione da HIV

Humanized mice provide a sophisticated platform to study human immunodeficiency virus (HIV) virology and to test antiviral drugs. This protocol describes ...

Stabilire questo modello di topo umanizzato può aiutare negli studi preclinici sulla ricerca sull'HIV. Ad esempio, è possibile valutare sia diversi ceppi virali che nuovi interventi sull'HIV. Questi protocolli possono essere utilizzati per valutare lo stato della variante CCR5 del donatore di cellule staminali e per infettare in modo efficiente i topi umanizzati con HIV e per quantificare i carichi virali del plasma di topo.Il protocollo di quantificazione dell'RNA può essere facilmente adattato per quantificare qualsiasi sequenza di RNA virale di scelta rilevabile nei campioni di plasma. Per lo screening genetico di campioni di sangue del cordone ombelicale per le varianti CCR5 delta 32, incubare 1,25 microlitri di flusso non pelletato con 11,25 microlitri di miscela PCR contenenti 200 mix di dNTP micromolare, 0,01 unità per microlitro di DNA polimerasi ad alta fedeltà e primer avanti e indietro come descritto nella tabella. Regolare il volume con acqua priva di nucleasi a circa 12,5 microlitri per ogni reazione PCR e amplificare i frammenti genomici con il programma di ciclismo PCR come indicato nella tabella.Al termine della reazione, separare i prodotti PCR su un gel di agarosio al 2%. I prodotti PCR degli alleli di tipo selvaggio e gli alleli delta 32 producono frammenti PCR rispettivamente di 196 coppie di basi e 164 coppie di basi, rendendo le bande facilmente distinguibili per elettroforesi in gel. Per l'esposizione all'HIV intravaginale, posizionare una lampada riscaldante focalizzata sul centro dello spazio di lavoro in cui si trova il mouse e posizionare punte sterili di pipetta da 20 microliter in una pipetta appropriata nel cofano.Posizionare un contenitore con disinfettante liquido nella cappa per l'inattivazione immediata di tutti i materiali e liquidi che sono stati a contatto con il virus. Posizionare il mouse anestetizzato su un cuscinetto blu sterile nella posizione supina sotto la lampada con la coda del mouse rivolta verso la parte posteriore del cappuccio e confermare la mancanza di risposta al riflesso del pedale nel mouse. Afferrare l'animale alla base della coda.Sollevando delicatamente il mouse dalla base della coda, sostenere l'animale in posizione verticale capovolta. Utilizzare una punta sterile per stimolare l'area genitale con un delicato accarezzare verso l'ano per indurre lo svuotamento del retto e alleviare la pressione sulla vagina. Per esporre l'apertura vaginale, avvolgere con cura la coda del mouse sulle dita, in modo che la vulva si apra naturalmente.Utilizzando una nuova punta di pipetta, posizionare la punta a livello dell'apertura vaginale e rilasciare atraumaticamente 20 microlitri del virus nella vagina, consentendo alla gravità di tirare la sospensione virale nella vagina. Una volta che tutto il virus è stato consegnato, conservare il mouse in questa posizione per cinque minuti per evitare perdite indotte dalla gravità del virus. Quindi, riportare con attenzione il mouse nella sua gabbia di casa in posizione supina e monitorare fino al completo recupero.Per isolare l'RNA dai campioni di plasma di topo scongelati, utilizzare un kit di isolamento dell'RNA virale secondo le istruzioni del produttore. Aggiungere il campione che si lega alla colonna e aggiungere una fase di trattamento della DNasi su colonna per garantire la rimozione di tutto il DNA all'interno del campione plasmatico. Quindi conservare i campioni di RNA a 80 gradi Celsius per almeno un'ora.Per sintetizzare il cDNA, utilizzare la transcriptasi inversa secondo i protocolli standard, inclusi 0,5 microlitri di un inibitore della RNasi all'interno della reazione cDNA per evitare la degradazione dell'RNA, quindi eseguire la sintesi cDNA come descritto nella tabella e conservare i campioni di cDNA a 80 gradi Celsius per almeno un'ora. Per preparare i campioni per ddPCR, mescolare 11 microlitri di miscela di reazione della sonda ddPCR contenente polimerasi e dNTP con 250 nanomolari di sonda legante a scanalatura minore e 900 nanomolari di ciascuno dei primer avanti e indietro, come indicato nella tabella. Aggiungere tre microlitri di ogni campione di cDNA e regolare i volumi totali di PCR a 22 microlitri con acqua priva di nucleasi.Utilizzare olio di generazione di goccioline per sonde su un generatore di goccioline secondo il protocollo del produttore per emulsionare le miscele PCR. Quindi eseguire il programma PCR come descritto nella tabella. Per il trattamento cART dopo l'infezione da HIV confermata, nutrire i topi con pellet preparati da un fornitore esterno contenente un regime cART standard, come indicato nella tabella.Usa una dieta cART di colore rosso per distinguerlo facilmente dal normale chow di topo e usa una dieta di controllo chow senza cART in un colore marrone standard. Per l'inizio del trattamento, posizionare la dieta chow contenente cART in gabbie sterili prima di trasferire i topi dalla vecchia gabbia alla nuova gabbia. Quindi monitorare i pesi dei topi e controllare il consumo di chow contenente cART ogni giorno per assicurarsi che i topi si adattino al cambiamento.Qui viene descritta la strategia di gating citometrica del flusso per l'analisi della purezza delle cellule staminali, con la purezza delle cellule staminali positive isolate CD34 che in genere vanno dall'85 al 95% con una contaminazione cellulare inferiore all'1%T. L'analisi PCR dimostra lo stato variante CCR5 delle cellule staminali donatrici purificate, rendendo facilmente identificabili i donatori eterozigoti CCR5 delta 32. La frequenza del genotipo mutante in un gruppo di 19 donatori era di circa il 15,8% in accordo con studi epidemiologici più grandi sulle popolazioni scandinave.Da tre a cinque mesi dopo il trasferimento adottivo di 7,5 volte 10 alla 4a cellule positive del CD45 umano nei topi riceventi, dal 20 al 50% dei globuli bianchi recuperati da campioni di sangue periferico animale ricevente sono cellule positive CD45 umane e i topi avranno sviluppato cellule B e T umane. Il 64% dei topi viene infettato dall'HIV a seguito dell'esposizione vaginale come dimostrato. Quattro settimane dopo il passaggio a una dieta di 40 giorni contenente cART standard, i carichi virali nei topi sieropositivi diminuiscono al di sotto del limite di rilevamento.Dopo la cessazione della dieta, il virus rimbalza, rispecchiando i dati clinici. È importante sottolineare che i topi su cART tollerano bene il cambiamento nella dieta. È fondamentale ricordare che questi animali sono immunodifesa e quindi vulnerabili all'ambiente.L'adesione alle tecniche asettiche aumenterà la salute generale degli animali e il successo del protocollo. Dopo l'istituzione della coorte di topi umanizzata per l'infezione da HIV, il protocollo può essere adattato per la quantificazione dell'RNA virale nei tessuti o per testare nuovi interventi in diversi ceppi virali. La flessibilità e l'accessibilità dei topi umanizzati per gli studi sulle infezioni da HIV hanno permesso progressi critici nella virologia, nell'immunologia e nella ricerca terapeutica dell'HIV.Prima di tentare protocolli riguardanti l'HIV infettivo, assicurarsi di ottenere l'approvazione dei funzionari locali dell'ambiente di lavoro e di aderire alle procedure di decontaminazione approvate.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Visualizing Cell-to-cell Transfer of HIV using Fluorescent Clones of HIV and Live Confocal Microscopy

Visualizzazione Cell-per-cell trasferimento del virus HIV usando cloni fluorescenti di HIV e Live Microscopia confocale

By fusing the green fluorescent protein to their favorite proteins, biologists now have the ability to study living complex cellular processes using ...

Ricerca

Immunologia e infezioni

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Inferenza genotipica del virus HIV-1 Tropismo utilizzo basati sulla popolazione sequenziamento del V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Development of Cell-type specific anti-HIV gp120 aptamers for siRNA delivery

Sviluppo di Cell-tipo specifico anti-HIV gp120 aptameri per la consegna di siRNA

The global epidemic of infection by HIV has created an urgent need for new classes of antiretroviral agents. The potent ability of small interfering ...

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In uncoating vitro di HIV-1 Cores

The genome of the retroviruses is encased in a capsid surrounded by a lipid envelope. For lentiviruses, such as HIV-1, the conical capsid shell is ...

Rapid Screening of HIV Reverse Transcriptase and Integrase Inhibitors

Screening rapido di HIV trascrittasi inversa e inibitori dell&#39;integrasi

Although a number of anti HIV drugs have been approved, there are still problems with toxicity and drug resistance. This demonstrates a need to identify ...

Isolation of Exosomes from the Plasma of HIV-1 Positive Individuals

Isolamento di esosomi dal plasma di HIV-1 individui positivi

Exosomes are small vesicles ranging in size from 30 nm to 100 nm that are released both constitutively and upon stimulation from a variety of cell types. ...

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Misurazione<em&gt; In Vitro</em&gt; Integrazione di attività del virus HIV-1 preintegrazione Complessi

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SILAC Based proteomica Caratterizzazione di Esosomi da HIV-1 le cellule infette

Proteomics is the large-scale analysis of proteins. Proteomic techniques, such as liquid chromatography tandem mass spectroscopy (LC-MS/MS), can ...

Single-cell Quantitation of mRNA and Surface Protein Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infected CD4+ T Cells Isolated from Rhesus macaques

Single-cell Quantitation of mRNA and Surface Protein Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infected CD4+ T Cells Isolated from Rhesus macaques

Cella singola quantificazione del mRNA e l'espressione di proteine di superficie CD4 infettati da Virus di immunodeficienza delle scimmie+ T cellule isolate da macachi Rhesus

Single-cell analysis is an important tool for dissecting heterogeneous populations of cells. The identification and isolation of rare cells can be ...

Humanized NOD/SCID/IL2r&#947;null (hu-NSG) Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Humanized NOD/SCID/IL2rÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³null hu-NSG Mouse Model for HIV Replication and Latency Studies

Umanizzato NOD/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) Mouse modello per studi di latenza e di replicazione dell'HIV

Ethical regulations and technical challenges for research in human pathology, immunology, and therapeutic development have placed small animal models in ...