Name: quantifying liver size in larval zebrafish using brightfield microscopy
Uploaded: 2020-02-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Liver Size in Larval Zebrafish Using Brightfield Microscopy at JoVE.com

Мы хотели бы отметить Моурин Хоббс и централизованный ресурс животных зебрафиш (КЗАР) в Университете штата юта за предоставление зебры, лабораторное пространство и оборудование для проведения части этого исследования. Расширение ЦАР частично поддерживается грантом NIH No 1G20OD018369-01. Мы также хотели бы поблагодарить Родни Стюарт, Хлоя Лим, Лэнс Грэм, Коди Джеймс, Гарретт Никум, и Хантсман институт рака (HCI) Зебрафиш фонда для лечения зебры. Мы хотели бы поблагодарить Кеннета Компасса за помощь в программировании R. Эта работа была частично профинансирована грантами Фонда рака Хантсмана (в сочетании с грантом P30 CA042014, присужденным Институту рака Хантсмана) (KJE) и NIH/NCI R01CA222570 (KJE).

Исследования на животных проводятся в соответствии с процедурами, утвержденными Институциональным комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) Университета штата
1. Фиксация лирва
<ol><li>В 3-7 дней после оплодотворения (dpf), эвтаназии личинок с трикаин метанесульфонат ...

<ol>
	<li>Lin, D. -. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+and+Epigenomic+Heterogeneity+of+Hepatocellular+Carcinoma.">Genomic and Epigenomic Heterogeneity of Hepatocellular Carcinoma.</a> Cancer Research. 77 (9), 2255-2265 (2017).</li><li>Ghouri, Y. A., Mian, I., Rowe, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+hepatocellular+carcinoma:+Epidemiology,+etiology,+and+carcinogenesis.">Review of hepatocellular carcinoma: Epidemiology, etiology, and carcinogenesis.</a> Journal of Carcinogenesis. 16, 1 (2017).</li><li>Evason, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Chemical+Inhibitors+of+&#946;-Catenin-Driven+Liver+Tumorigenesis+in+Zebrafish.">Identification of Chemical Inhibitors of &#946;-Catenin-Driven Liver Tumorigenesis in Zebrafish.</a> PLoS Genetics. 11 (7), 1005305 (2015).</li><li>Kalasekar, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneous+beta-catenin+activation+is+sufficient+to+cause+hepatocellular+carcinoma+in+zebrafish.">Heterogeneous beta-catenin activation is sufficient to cause hepatocellular carcinoma in zebrafish.</a> Biology Open. 8 (10), (2019).</li><li>Nguyen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high+level+of+liver-specific+expression+of+oncogenic+Kras(V12)+drives+robust+liver+tumorigenesis+in+transgenic+zebrafish.">A high level of liver-specific expression of oncogenic Kras(V12) drives robust liver tumorigenesis in transgenic zebrafish.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (6), 801-813 (2011).</li><li>Nguyen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inducible+kras(V12)+transgenic+zebrafish+model+for+liver+tumorigenesis+and+chemical+drug+screening.">An inducible kras(V12) transgenic zebrafish model for liver tumorigenesis and chemical drug screening.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 5 (1), 63-72 (2012).</li><li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+zebrafish+liver+tumor+model+with+inducible+Myc+expression+reveals+conserved+Myc+signatures+with+mammalian+liver+tumors.">A transgenic zebrafish liver tumor model with inducible Myc expression reveals conserved Myc signatures with mammalian liver tumors.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (2), 414-423 (2013).</li><li>Cox, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yap+reprograms+glutamine+metabolism+to+increase+nucleotide+biosynthesis+and+enable+liver+growth.">Yap reprograms glutamine metabolism to increase nucleotide biosynthesis and enable liver growth.</a> Nature Cell Biology. 18 (8), 886-896 (2016).</li><li>Sadler, K. C., Amsterdam, A., Soroka, C., Boyer, J., Hopkins, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+screen+in+zebrafish+identifies+the+mutants+vps18,+nf2+and+foie+gras+as+models+of+liver+disease.">A genetic screen in zebrafish identifies the mutants vps18, nf2 and foie gras as models of liver disease.</a> Development. 132 (15), 3561-3572 (2005).</li><li>Huang, X., Zhou, L., Gong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+tumor+models+in+transgenic+zebrafish:+an+alternative+in+vivo+approach+to+study+hepatocarcinogenes.">Liver tumor models in transgenic zebrafish: an alternative in vivo approach to study hepatocarcinogenes.</a> Future Oncology. 8 (1), 21-28 (2012).</li><li>Yan, C., Yang, Q., Gong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-Associated+Neutrophils+and+Macrophages+Promote+Gender+Disparity+in+Hepatocellular+Carcinoma+in+Zebrafish.">Tumor-Associated Neutrophils and Macrophages Promote Gender Disparity in Hepatocellular Carcinoma in Zebrafish.</a> Cancer Research. 77 (6), 1395-1407 (2017).</li><li>Schindelin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fiji:+an+open-source+platform+for+biological-image+analysis.">Fiji: an open-source platform for biological-image analysis.</a> Nature Methods. 9 (7), 676-682 (2012).</li><li>Rueden, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ImageJ2:+ImageJ+for+the+next+generation+of+scientific+image+data.">ImageJ2: ImageJ for the next generation of scientific image data.</a> BMC Bioinformatics. 18 (1), 529 (2017).</li><li>Schindelin, J., Rueden, C. T., Hiner, M. C., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ImageJ+ecosystem:+An+open+platform+for+biomedical+image+analysis.">The ImageJ ecosystem: An open platform for biomedical image analysis.</a> Molecular Reproduction and Development. 82 (7-8), 518-529 (2012).</li><li>Landis, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+call+for+transparent+reporting+to+optimize+the+predictive+value+of+preclinical+research.">A call for transparent reporting to optimize the predictive value of preclinical research.</a> Nature. 490 (7419), 187-191 (2012).</li><li>Dai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+plus+high+cholesterol+diet+lead+to+hepatic+steatosis+in+zebrafish+larvae:+a+novel+model+for+screening+anti-hepatic+steatosis+drugs.">High fat plus high cholesterol diet lead to hepatic steatosis in zebrafish larvae: a novel model for screening anti-hepatic steatosis drugs.</a> Nutrition &amp; Metabolism. 12, 42 (2015).</li><li>Kim, S. -. H., Speirs, C. K., Solnica-Krezel, L., Ess, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+model+of+tuberous+sclerosis+complex+reveals+cell-autonomous+and+non-cell-autonomous+functions+of+mutant+tuberin.">Zebrafish model of tuberous sclerosis complex reveals cell-autonomous and non-cell-autonomous functions of mutant tuberin.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 4 (2), 255-267 (2011).</li><li>Delous, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox9b+is+a+key+regulator+of+pancreaticobiliary+ductal+system+development.">Sox9b is a key regulator of pancreaticobiliary ductal system development.</a> PLoS Genetics. 8 (6), 1002754 (2012).</li><li>Shin, D., Lee, Y., Poss, K. D., Stainier, D. Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restriction+of+hepatic+competence+by+Fgf+signaling.">Restriction of hepatic competence by Fgf signaling.</a> Development. 138 (7), 1339-1348 (2011).</li><li>Yin, C., Evason, K. J., Maher, J. J., Stainier, D. Y. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+basic+helix-loop-helix+transcription+factor,+heart+and+neural+crest+derivatives+expressed+transcript+2,+marks+hepatic+stellate+cells+in+zebrafish:+analysis+of+stellate+cell+entry+into+the+developing+liver.">The basic helix-loop-helix transcription factor, heart and neural crest derivatives expressed transcript 2, marks hepatic stellate cells in zebrafish: analysis of stellate cell entry into the developing liver.</a> Hepatology. 56 (5), 1958-1970 (2012).</li></ol>

Количественная оценка размера печени имеет решающее значение в исследованиях, направленных на понимание развития печени, регенерации и онкогенеза. Описанный здесь протокол является относительно быстрой, легкой и дешевой техникой количественной оценки размера печени у личинок зебры....

Гепатоцеллюлярной карциномы (HCC) является наиболее распространенной первичной злокачественности печени1 и третьей ведущей причиной смертности, связанной с раком2. Чтобы лучше понять механизмы гепатокарциногенеза и определить потенциальные терапии HCC, мы и другие разработали трансгенные зебры, в которых гепатоцитов конкретных выражение онкогенов, таких как з-катенин3,4, Крас (V12)5,6, Myc7, или Yap18 приводит к HCC у взрослых животных. В этих зебры, увеличение печени отмечается уже в 6 дней после оплодотворения (dpf), обеспечивая поверхностную платформу для тестирования воздействия наркотиков и генетических изменений на онкогена инициативе печени разрастание. Точное и точное измерение размера личинки печени имеет важное значение для определения последствий этих манипуляций.
Размер и форма печени могут быть оценены полуколичественно в фиксированных личинок зебры по маркировке CY3-SA9 или в живых личинок зебры с использованием гепатоцитов конкретных флуоресцентных репортеров и флуоресценции вскрытия микроскопии5,6. Последний метод является относительно быстрым, и его отсутствие точности может быть решена путем фотографирования и измерения площади каждой печени с помощью программного обеспечения обработки изображений7,10. Тем не менее, это может быть технически сложным, чтобы равномерно положение всех живых личинок в эксперименте, так что двумерная область печени является точное представление размера печени. Аналогичный метод для количественной оценки размера печени включает в себя использование светлиста флуоресценции микроскопии для количественной личинки печени объем8, которые могут быть более точными для обнаружения различий в размерах, когда печень расширяется неравномерно в различных измерениях. Флуоресценция активированных клеток сортировки (FACS) может быть использован для подсчета числа флуоресцентно помечены гепатоцитов и других типов клеток печени в личиночных печени8,11. При этом методе личиночная печень объединяются и разобщены, поэтому теряется информация об отдельных размерах и форме печени. В сочетании с другим методом определения размера печени, FACS позволяет дифференцировать между увеличением количества клеток (гиперплазия) и увеличение размера клеток (гипертрофия). Все эти методы используют дорогие технологии флуоресценции (микроскоп или сортировка клеток) и, за исключением маркировки CY3-SA, требуют маркировки гепатоцитов флуоресцентным репортером.
Здесь мы подробно описываем метод количественной оценки личинки зебры области печени с использованием ярко-поля микроскопии и обработки изображений программного обеспечения3,12,13,14. Этот протокол позволяет точно определить область отдельных печени на месте без использования флуоресценции микроскопии. При анализе размера печени, мы слепых личности изображения, чтобы уменьшить предвзятость следователя и улучшить научную строгость15.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Camera for dissecting microscope</td>
			<td>Leica, for example</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Leica, for example</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine (Dumont #5) forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass pipets</td>
			<td>VWR</td>
			<td>14672-608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image analysis software</td>
			<td>Image J/FIJI</td>
			<td></td>
			<td>ImageJ/FIJI can be dowloaded for free: <a href="https://imagej.net/Welcome" target="_blank">https://imagej.net/Welcome</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl cellulose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M0387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Various suppliers</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette pump</td>
			<td>VWR</td>
			<td>53502-233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Petri dishes</td>
			<td>USA Scientific Inc</td>
			<td>2906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyrex 9-well round-bottom glass dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89090-482</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software for blinding files</td>
			<td>R project</td>
			<td></td>
			<td>R can be downloaded for free: <a href="https://www.r-project.org/" target="_blank">https://www.r-project.org/</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scientific graphing and statistics software</td>
			<td>GraphPad Prism</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spreadsheet program</td>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine methanesulfonate (Tricaine-S)</td>
			<td>Western Chemical</td>
			<td>200-226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Very fine (Dumont #55) forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantifying liver size in larval zebrafish using brightfield microscopy

В нескольких трансгенных моделях зебры гепатоцеллюлярной карциномы (HCC) гепатомегалия может наблюдаться на ранних личиночных стадиях. Количественная оценка размера личинки печени в моделях HCC зебрафиш обеспечивает возможность быстрой оценки воздействия лекарств и других манипуляций на фенотип, связанный с онкогеном. Здесь мы покажем, как исправить личинки зебры, вскрыть ткани, окружающие печень, фотографировать печень с помощью ярко-поляной микроскопии, измерять область печени и анализировать результаты. Этот протокол обеспечивает быструю и точную количественную оценку размера печени. Поскольку этот метод включает в себя измерение площади печени, он может недооценивать различия в объеме печени, и дополнительные методологии необходимы для различать изменения в размере клеток и изменения в количестве клеток. Техника вскрытия, описанная здесь, является отличным инструментом для визуализации печени, кишечника и поджелудочной железы в их естественных положениях для множества приложений вниз по течению, включая оленивость иммунофлюоресценции и гибридизацию на месте. Описанная стратегия количественной оценки размеров личиночной печени применима ко многим аспектам развития и регенерации печени.

Трансгенные зебрафиш, выражающие гепатоцитов конкретных активированный катенин (Tg (fabp10a:pt-й-кошка) зебры)3 и не-трансгенных братьев и сестер контроля были усыплена в 6 dpf и области печени была количественно с помощью яркого поля микроскопии и программного обеспечен...

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Liver Size in Larval Zebrafish Using Brightfield Microscopy at JoVE.com

Quantifying Liver Size in Larval Zebrafish Using Brightfield Microscopy

Здесь мы демонстрируем метод количественной оценки размера печени у личинок зебры, обеспечивая способ оценки влияния генетических и фармакологических манипуляций на рост и развитие печени.

Количественная оценка размера печени в Larval Зебрафиш Использование Brightfield микроскопии

In several transgenic zebrafish models of hepatocellular carcinoma (HCC), hepatomegaly can be observed during early larval stages. Quantifying larval ...

Этот метод обеспечивает способ количественного размера печени в личинки зебры. Он также позволяет оценить влияние генетических и фармакологических манипуляций на рост и развитие печени. Этот метод обеспечивает быстрый и точный способ визуализации и измерения печени, а также кишечника и поджелудочной железы.В дополнение к количественной оценки размера печени, этот метод вскрытия может быть полезным для подготовки печени, кишечника и поджелудочной железы для гибридизации на месте или конфокальных изображений. Перед попыткой deskinning на экспериментальных личинок, убедитесь, что вы потратили достаточно времени практикующих на не-экспериментальных образцов и имеют значительный успех. Очень важно визуализировать надлежащую ориентацию и движение личинок зебры и типсов, чтобы удалить кожу, не нарушая окружающих органов.В течение трех-семи дней после оплодотворения, после усыпения личинок, используйте стеклянную пипетку и пипетку насос для сбора до 15 личинок в двух миллилитровой трубке. Вымойте личинки дважды с одним миллилитром холодного 1X PBS на льду. Удалите как можно больше PBS с помощью стеклянной пипетки и пипетки насоса и добавить один миллилитр холодных четыре процента PFA в PBS.Инкубировать при четырех градусах по Цельсию по крайней мере на ночь с нежным качания. Используя стеклянную пипетку и пипетку насоса, удалить PFA из трубки и промыть три раза с одним миллилитров холодного PBS. Рок в течение пяти минут между полосканиями.Pipette несколько личинок в PBS в один колодец из девяти хорошо круглое дно стеклянное блюдо. Под микроскопом удалите кожу, окружающую печень, используя тонкие миппы, чтобы держать одну личинку на спине, сжимая по обе стороны головы как можно мягче. Затем используйте очень тонкие миппы в другой руке, чтобы захватить кожу просто чрезмерно сердце.Потяните кожу вниз по диагонали к хвосту рыбы в нижней части блюда на левой или правой стороне рыбы. Повторите для другой стороны. Продолжить захвата закрылки кожи и потянув вниз, пока все кожи и меланофоров чрезмерно или вблизи печени были удалены.Если желток присутствует в течение пяти-шести дней после оплодотворения личинок, поднимите желток в один кусок, держа рыбу с тонкой типсов на спине и с помощью очень тонкой типсов мягко подталкивать желток. В течение трех-четырех личинок DPF держите рыбу с тонкой типсом на спине и используйте очень тонкие миппы, чтобы погладить желток, начиная с брюшной стороны. Очисти желток на куски.Поместите расчлененные личинки в свежий, холодный PBS в двухми миллилитровую трубку с помощью стеклянной пипетки и пипетки насоса. Чтобы смонтировать личинки, налейте несколько миллилитров трехпроцентной метилцеллюлозы на крышку чистой пластиковой чашки Петри. Используйте стеклянную пипетку и пипетку насоса, чтобы добавить личинки метилцеллюлозы, добавив как можно меньше PBS с личинками, как это возможно.Под рассечением микроскопа при низком увеличении, использовать тонкие миппы, чтобы сориентировать рыбу, чтобы они лежали на правой стороне лицом влево. Подтвердите, что рыба, которую нужно сфотографировать, идеально выравнивается одним глазом прямо на другой глаз. Если хвост рыбы согнут, удалите хвост, сильно ущипнув его щипами, чтобы удалить его так, чтобы рыба лежит ровно.Увеличьте масштаб до высокого увеличения и сосредоточьтесь на печени, убедившись, что контур печени хорошо виден. Нажмите кнопку Capture Image, чтобы привязать картинку и сохранить файл. Повторите для всех рыб, убедившись, что увеличение является одинаковым для каждой картины.Смойте микрометр с помощью того же увеличения. Чтобы использовать программу R, чтобы ослепить все изображения печени, чтобы избежать потенциальной предвзятости следователя и содействовать научной строгости, переименовать файлы случайным образом и создать файл рандомизации, содержащий список исходных имен файлов и соответствующих ослепленных имен файлов. Откройте рандомизированные файлы в порядке, начиная с файла 1.Выберите инструмент Freehand Selections и наметите каждую печень. Пресс-контроль-М для измерения области каждой печени. Для любых печени, которые не могут быть точно измерены, потому что они имеют остаточную кожу, желток, находятся вне фокуса, или не нетронутыми, вставьте измерения заполнителя.Сохраните измерения в текстовом файле. Чтобы не прислепить и проанализировать данные, откройте файл измерений и файл рандомизации в электронной таблице программы. Вставьте новую колонку в файл измерений и добавьте исходные имена файлов для ослепительных файлов с помощью файла Рандомизации.Сохраните этот файл в качестве файла Unblinded Measurements. Сортировать данные по исходному имени файла. Исключите любые измерения печени, для которых фотографии не были адекватными.При необходимости преобразуем значения измерений в нужную шкалу в квадратные миллиметры. Откройте планку scale в программном обеспечении для обработки изображений. Используйте инструмент «Прямая линия» для измерения одного миллиметра на строке шкалы.Программное обеспечение обработки изображений затем измеряется в тех же единицах, что и печень, что дает коэффициент конверсии. Используйте коэффициент преобразования для преобразования измерений в файле Unblinded Measurements. Определите среднее и стандартное отклонение и вычислите P-значения.В течение шести дней после оплодотворения, не-трансгенных личинок зебры показали естественное положение и форму печени чрезмерно кишечника. Трансгенные зебры значительно увеличили размер печени по сравнению с их не трансгенными братьями и сестрами. Здесь показаны некоторые примеры неадекватных изображений и микрометра.Личинка с кожей, покрывающей печень, личинка с желтком, заслоняющим печень, личинка с частями печени ущипнула, а личинка с вывихнутой и падающей печенью, личинка с отсутствуют печенью, личинка с контуром печени, которую трудно определить, и личинка с неправильным позиционированием. При попытке этой процедуры, важно использовать небольшие и контролируемые движения, чтобы предотвратить повреждение печени. В дополнение к ярко-полевой микроскопии, мы также можем использовать личинки, расчлененные таким образом, для конфокаляций, для визуализации флуоресцентных белков репортера или иммунофлуоресцентного окрашивания, а также для гибридизации на месте.Формальдегид или ПФА является раздражающим и подозреваемым канцерогеном. Перчатки следует носить при обработке PFA и концентрированные решения должны быть обработаны в химическом капоте дыма.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Живая съемка врожденной иммунной и предраковых межклеточного взаимодействия, используя / UAS Expression System Индуцибельная Gal4 на личиночной данио рерио кожи

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Capturing Tissue Repair in Zebrafish Larvae with Time-lapse Brightfield Stereomicroscopy

Захват восстановления тканей в данио рерио Личинки с Интерв светлого стереомикроскопия

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two ...

Hepatocyte-specific Ablation in Zebrafish to Study Biliary-driven Liver Regeneration

Гепатоцитов конкретных абляция в данио рерио по изучению желчных приводом печени Регенерация

The liver has a great capacity to regenerate. Hepatocytes, the parenchymal cells of the liver, can regenerate in one of two ways: hepatocyte- or ...

Analysis of Zebrafish Kidney Development with Time-lapse Imaging Using a Dissecting Microscope Equipped for Optical Sectioning

Анализ развития данио почки с течением времени покадровой визуализации Использование рассекает микроскопа, оборудованного для оптического секционирования

In order to understand organogenesis, the spatial and temporal alterations that occur during development of tissues need to be recorded. The method ...

Using Light Sheet Fluorescence Microscopy to Image Zebrafish Eye Development

Использование Light Sheet флуоресцентной микроскопии для изображения развития данио глаз

Light sheet fluorescence microscopy (LSFM) is gaining more and more popularity as a method to image embryonic development. The main advantages of LSFM ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

Вскрытие Личинки данио гонадная ткани

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Histological Analyses of Acute Alcoholic Liver Injury in Zebrafish

Гистологический анализ острой алкогольной травмы печени у данио

Alcoholic Liver Disease (ALD) refers to damage to the liver due to acute or chronic alcohol abuse. It is among the leading causes of alcohol-related ...

Correlative Super-resolution and Electron Microscopy to Resolve Protein Localization in Zebrafish Retina

Корреляционные суперразрешением и электронной микроскопии решить локализация белка в Zebrafish сетчатки

We present a method to investigate the subcellular protein localization in the larval zebrafish retina by combining super-resolution light microscopy and ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Создание личиночной данио рерио как модель животного к расследованию Trypanosoma cruzi подвижности In Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Визуализация узлов и Notochordal пластины в Gastrulating эмбрионов мыши, используя растровая электронная микроскопия и вся гора иммунофлуоресценции

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...