Name: quantification of ethanol levels in zebrafish embryos using head space gas chromatography
Uploaded: 2020-02-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Ethanol Levels in Zebrafish Embryos Using Head Space Gas Chromatography at JoVE.com

La recherche présentée dans cet article a été soutenue par des subventions antérieures des National Institutes of Health/National Institute of Dental and Craniofacial Research (NIH/NIDCR) R01DE020884 à J.K.E. et National Institutes of Health/National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (NIH/NIAAA) F32AA021320 to C.B.L. et par la subvention actuelle des National Institutes of Health/National Institute on Alcohol Abuse (NIH/NIAAA) R00AA023560 to C.B.L. Nous remercions Rueben Gonzales d’avoir fourni et aidé à l’analyse des chromatographes à gaz. Nous remercions Tiahna Ontiveros et la Dre Gina Nobles.

Tous les embryons de poissons zèbres utilisés dans cette procédure ont été élevés et élevés selon les protocoles établis de l’IACUC27. Ces protocoles ont été approuvés par l’Université du Texas à Austin et l’Université de Louisville.
REMARQUE: La ligne de poisson zèbre Tg(fli1:EGFP)y1 a été utilisée dans cette étude28. Toute l’eau utilisée dans cette procédure est stérile eau d’osmose inverse...

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J., Mangieri, R. A., Dilly, G. A., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdialysis+of+ethanol+during+operant+ethanol+self-administration+and+ethanol+determination+by+gas+chromatography.">Microdialysis of ethanol during operant ethanol self-administration and ethanol determination by gas chromatography.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), e4142 (2012).</li><li>Adalsteinsson, E., Sullivan, E. V., Mayer, D., Pfefferbaum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+ethanol+kinetics+in+rat+brain.">In vivo quantification of ethanol kinetics in rat brain.</a> Neuropsychopharmacology. 31 (12), 2683-2691 (2006).</li><li>Quertemont, E., Green, H. L., Grant, K. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol-+and+acetaldehyde-mediated+developmental+toxicity+in+zebrafish.">Ethanol- and acetaldehyde-mediated developmental toxicity in zebrafish.</a> Neurotoxicology and Teratology. 26 (6), 769-781 (2004).</li><li>Zhang, C., Ojiaku, P., Cole, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forebrain+and+hindbrain+development+in+zebrafish+is+sensitive+to+ethanol+exposure+involving+agrin,+Fgf,+and+sonic+hedgehog+function.">Forebrain and hindbrain development in zebrafish is sensitive to ethanol exposure involving agrin, Fgf, and sonic hedgehog function.</a> Birth Defects Research Part A: Clinical and Molecular Teratology. 97 (1), 8-27 (2013).</li></ol>

En tant que modèle de développement, le poisson zèbre est idéal pour étudier l’impact des facteurs environnementaux sur le développement. Ils produisent un grand nombre d’embryons fécondés à l’extérieur, ce qui permet un moment précis et des paradigmes de dosage dans les études sur l’éthanol. Ceci, combiné avec les capacités d’imagerie en direct et la conservation génétique et développementale avec les humains, font du poisson zèbre un puissant système modèle pour les études de tératologi...

Les troubles du spectre de l’alcoolisation fœtale (ETCAF) décrivent un large éventail de déficiences neurologiques et de dysmorphologies craniofaciales associées à l’exposition à l’éthanol embryonnaire1. De multiples facteurs, y compris le moment et la posologie de l’exposition à l’éthanol et le bagage génétique, contribuent à la variation de l’ETCAF2,3. Chez l’homme, la relation complexe de ces variables rend difficile l’étude et la compréhension de l’étiologie de l’ETCAF. Les modèles animaux se sont avérés cruciaux dans le développement de notre compréhension de la base mécaniste de la tératogénicité de l’éthanol. Une grande variété de systèmes de modèles animaux a été utilisé pour étudier de multiples aspects de l’ETCAF et les résultats ont été remarquablement compatibles avec ce qui se trouve dans l’exposition chez l’homme4. Les systèmes modèles de rongeurs sont utilisés pour examiner de nombreux aspects de l’ETCAF, avec des souris étant les plus communs5,6,7. La majorité de ces travaux ont porté sur les défauts de développement à l’exposition précoce à l’éthanol8, bien que l’exposition ultérieure à l’éthanol a été montré pour causer des anomalies du développement ainsi9. En outre, les capacités génétiques des souris ont grandement aidé dans notre capacité à sonder les fondements génétiques de l’ETCAF10,11. Ces études chez la souris suggèrent fortement qu’il existe des interactions gènes-éthanol avec la voie du hérisson sonore, la signalisation acide rétinoïque, Superoxide dismutase, oxyde nitrique synthase I, Aldh2 et Fancd28,10,11,12,13,14,15,16,17,18, 19,20,21. Ces études montrent que les modèles animaux sont essentiels pour faire progresser notre compréhension de l’ETCAF et de ses mécanismes sous-jacents.
Le poisson zèbre a émergé comme un système modèle puissant pour examiner de nombreux aspects de la tératogenèse de l’éthanol22,23. En raison de leur fécondation externe, de leur fécondité élevée, de leur région génétique et de leurs capacités d’imagerie vivante, le poisson zèbre est idéal pour étudier des facteurs tels que le moment, la posologie et la génétique de la tératogénèse à l’éthanol. L’éthanol peut être administré à des embryons mis en scène avec précision et les embryons peuvent ensuite être représentés pour examiner l’impact direct de l’éthanol pendant les processus de développement. Ce travail peut être directement lié à l’homme, parce que les programmes génétiques de développement sont fortement conservés entre le poisson zèbre et l’homme et peuvent donc aider à guider les études humaines de l’ETCAF24. Alors que le poisson zèbre a été utilisé pour examiner la tératogénèse à l’éthanol, un manque de consensus dans la déclaration des concentrations d’éthanol embryonnaire rend la comparaison avec les humains difficile25. Dans les systèmes de mammifères, les niveaux d’alcool dans le sang sont directement corrélés aux niveaux d’éthanol tissulaire26. Bon nombre des études sur le poisson zèbre traitent les embryons avant la formation complète de leur système circulatoire. En l’absence d’échantillon maternel à examiner, un processus d’évaluation des concentrations d’éthanol est nécessaire pour quantifier les niveaux d’éthanol à l’intérieur de l’embryon. Ici nous décrivons un processus pour quantifier des concentrations d’éthanol dans un embryon en développement de poisson zèbre utilisant la chromatographie de gaz d’espace de tête.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Air</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided by contract to the university</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical Balance</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10204-962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoSampler, CP-8400</td>
			<td>Varian</td>
			<td></td>
			<td>Gas Chromatograph Autosampler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatograph vial with polytetrafluoroethylene/silicone septum and plastic cap 2 mL</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>8010-0198</td>
			<td>Can reuse the vials after cleaning, but not the caps/septa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Chromatograph, CP-3800</td>
			<td>Varian</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided by contract to the university</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HP Innowax capillary column</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>19095N-123I</td>
			<td>30 m x 0.53 mm x 1.0 &#956;m film thick</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyrdogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided by contract to the university</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate (Heptahydrate)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M63-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube 1.5 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>2682002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette tips 10 &#956;L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13611106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette tips 1000 &#956;L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13611127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette tips 200 &#956;L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13611112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes 100 mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB012924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman L p1000L Micropipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>FA10006M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman L p200L Micropipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>FA10005M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman L p2L Micropipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>FA10001M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polytetrafluoroethylene/silicone septum and plastic cap</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5190-7021</td>
			<td>Replacement caps/septa for gas chromatograph vials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate (Dibasic)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9266-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica Beads .5 mm</td>
			<td>Biospec Products</td>
			<td>11079105z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica Beads 1.0 mm</td>
			<td>Biospec Products</td>
			<td>11079110z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9280-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate (Dibasic)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S374-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid-phase microextraction fiber assembly Carboxen/Polydimethylsiloxane</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>57343-U</td>
			<td>Replacement fibers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Star Chromatography Workstation</td>
			<td>Varian</td>
			<td></td>
			<td>Chromatography software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermogreen Low Bleed (LB-2) Septa</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>23154</td>
			<td>Replacement inlet septa</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of ethanol levels in zebrafish embryos using head space gas chromatography

Les troubles du spectre de l’alcoolisation fœtale (ETCAF) décrivent un continuum très variable de défauts développementaux induits par l’éthanol, y compris les dysmorphologies faciales et les déficiences neurologiques. Avec une pathologie complexe, l’ETCAF touche environ 1 enfant sur 100 né aux États-Unis chaque année. En raison de la nature très variable de l’ETCAF, les modèles animaux se sont avérés essentiels dans notre compréhension mécaniste actuelle des défauts de développement induits par l’éthanol. Un nombre croissant de laboratoires se sont concentrés sur l’utilisation du poisson zèbre pour examiner les défauts de développement induits par l’éthanol. Les poissons zèbres produisent un grand nombre d’embryons fécondés, génétiquement traitables et translucides. Cela permet aux chercheurs de contrôler avec précision le moment et la posologie de l’exposition à l’éthanol dans de multiples contextes génétiques et de quantifier l’impact de l’exposition à l’éthanol embryonnaire grâce à des techniques d’imagerie en direct. Ceci, combiné avec le degré élevé de conservation de la génétique et du développement avec l’homme, s’est avéré le poisson zèbre pour être un modèle puissant dans lequel étudier la base mécaniste de la tératogénicité d’éthanol. Cependant, les schémas d’exposition à l’éthanol ont varié entre les différentes études sur le poisson zèbre, ce qui a confondu l’interprétation des données sur le poisson zèbre dans ces études. Voici un protocole pour quantifier les concentrations d’éthanol dans les embryons de poissons zèbres à l’aide de la chromatographie de gaz de l’espace de la tête.

Les niveaux d’éthanol dans le sang ne peuvent pas être déterminés chez les poissons zèbres embryonnaires précoces, car ils n’ont pas de système circulatoire entièrement formé. Pour déterminer le niveau de concentration d’éthanol dans les embryons de poissons zèbres, les niveaux d’éthanol sont mesurés directement à partir de tissus embryonnaires homogénéisés. Pour bien mesurer les concentrations embryonnaires d’éthanol, il faut tenir compte du volume embryonnaire. L’embryon (jaune attaché) ...

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Quantification of Ethanol Levels in Zebrafish Embryos Using Head Space Gas Chromatography

Ce travail décrit un protocole pour quantifier les niveaux d’éthanol dans un embryon de poisson zèbre à l’aide de la chromatographie de gaz de l’espace de la tête à partir de méthodes d’exposition appropriées au traitement des embryons et à l’analyse de l’éthanol.

Quantification des niveaux d’éthanol dans les embryons de poisson zèbre à l’aide de la chromatographie de gaz de l’espace de tête

Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASD) describe a highly variable continuum of ethanol-induced developmental defects, including facial dysmorphologies ...

Ce protocole est important parce qu’il aide à comprendre la pharmacocinétique de l’éthanol dans le développement d’embryons de poisson zèbre, ce qui aidera à normaliser les régimes d’exposition à l’éthanol dans les études sur le poisson zèbre. Le principal avantage de notre technique est qu’elle permet aux chercheurs de mesurer rapidement et reproductiblement les niveaux d’éthanol pendant le développement embryonnaire, en particulier dans les embryons où l’approvisionnement en sang n’est pas disponible. Cette méthode peut être facilement appliquée à d’autres systèmes modèles ainsi qu’à d’autres facteurs environnementaux en supposant une technique et une configuration adéquates de l’équipement.Je m’attends à ce que les personnes qui exécutent ce protocole pour la première fois luttent avec la vitesse nécessaire pour prévenir l’évaporation de l’éthanol pendant le traitement de l’embryon. Commencez par transférer 10 embryons avec du liquide embryonnaire supplémentaire dans des tubes de microcentrifugeuse de 1,5 millilitre marqués d’une ligne à un volume de 250 microlitres. Ajouter de l’eau à la ligne de remplissage.Préparer d’autres tubes de microcentrifugeuse pour les échantillons déchorionnés. Pour enlever la chorion, incuber les embryons dans une boîte de Pétri de 100 millimètres avec deux milligrammes par millilitre de cocktail de protéase dans les médias embryonnaires pendant 10 minutes. Faites tourbillonner doucement le plat toutes les quelques minutes pour briser la chorion.Une fois que tous les embryons sont exempts de la chorion, retirez-les du cocktail de protéase et lavez-les deux fois avec des supports frais. Transférer ensuite les embryons dans un plat frais de 100 millimètres. Lorsque tous les échantillons sont prêts pour la mesure du volume, utilisez une micropipette P200 avec la plus petite pointe possible pour enlever soigneusement tout liquide autour des embryons.Pesez l’eau avec une balance avec moins de 0,1 milligramme de précision, puis déterminez le volume des 10 embryons en soustrayant le poids de l’eau prélevée de 250 microlitres. Pour déterminer le volume d’un seul embryon, divisez la différence par 10. Recueillir les embryons dans les réservoirs d’accouplement et les placer dans une boîte de Pétri standard de 100 millimètres, puis incuber le plat à 28,5 degrés Celsius.À six heures après la fécondation, transférer jusqu’à 100 embryons dans un nouveau plat avec des supports embryonnaires et 1 % d’éthanol ou de médias seuls. Couvrir, mais ne pas sceller les boîtes de Pétri et les placer dans un incubateur de 28,5 degrés Celsius pendant 18 heures ou jusqu’à ce qu’elles atteignent 24 heures après la fécondation. Utilisez deux micropipettes P200 réglées sur 50 microlitres et aspirez la solution de cocktail protéase en une seule et l’eau dans la seconde.Placez ensuite rapidement 10 embryons dans un tube de microcentrifugeuse de 1,5 millilitre à l’aide d’une pipette en verre et fermez le bouchon. Répétez ce processus pour que tous les échantillons soient testés, contrôlent et traités à l’éthanol des embryons. En travaillant avec un échantillon à la fois, ouvrez rapidement le bouchon et aspirez tous les supports embryonnaires résiduels avec une micropipette P200 réglée sur 200 microlitres.Ajouter rapidement mais doucement et retirer les 50 microlitres d’eau, puis ajouter les 50 microlitres de cocktail protéase et fermer le bouchon de tube. Laissez reposer l’échantillon pendant 10 minutes à température ambiante, puis ajoutez rapidement 450 microlitres de cinq chlorure de sodium molaire et fermez le bouchon de tube. Homogénéiser l’échantillon en vortexant pendant 10 minutes et transférer deux microlitres de supernatant à un flacon de chromatographie gazeuse.Sceller le flacon à l’aide d’un bouchon de polytétrafluoroéthylène. Après avoir terminé la méthode de démarrage, chargez 436 éthanol SPME actuels de deux à cinq minutes. meth du menu méthodes dans le logiciel d’analyse pour chaque échantillon sur la liste d’échantillons.Remplissez la liste des échantillons en commençant par l’air, l’eau et cinq blancs de cocktail de chlorure de sodium molaire. Ensuite, entrez dans les normes d’éthanol dans l’ordre de 0,3125 à 40 millimolar. Suivez les normes avec la deuxième série de blancs.Entrez tous les échantillons homogénéisés de supernatants embryonnaires à tester de la concentration et de la finition d’éthanol les plus faibles aux plus élevées prévues en entrant dans une troisième série de blancs. Ajouter les flacons de chromatographie gazeuse à l’autosampler dans l’ordre dans lequel les échantillons ont été entrés et leur permettre de se réchauffer pendant 10 à 15 minutes. Démarrez ensuite l’exemple à l’aide du logiciel.Une fois toutes les exécutions terminées, activez la méthode d’arrêt en ajoutant un échantillon final dans la liste d’échantillons et en exécutant standby.meth. Revenez sur toutes les données acquises pendant l’analyse de l’échantillon. Une fois la méthode d’arrêt terminée, cliquez sur le chromatogramme ouvert et ouvrez le dossier avec les résultats.Les échantillons sont automatiquement intégrés dans ce programme. Dans les résultats, assurez-vous que les pics corrects ont été intégrés. Une fois que tous les échantillons ont été confirmés, imprimez ou exportez les résultats.Tracez la hauteur maximale des normes d’éthanol sur un graphique, puis calculez la pente, l’interception y et les valeurs au carré r. Obtenez la valeur de l’éthanol pour chaque échantillon en soustrayant la hauteur maximale de l’échantillon de l’interception y des normes et en divisant cette valeur par la pente des normes. Pour calculer la concentration d’éthanol dans les embryons, calculer le facteur de dilution pour chaque échantillon et multiplier la valeur de l’éthanol échantillon par ce facteur de dilution.Enfin, calculer les échantillons de référence des médias en multipliant la valeur de l’éthanol média par un facteur de dilution de 10. Pour calculer correctement les concentrations embryonnaires d’éthanol, les volumes d’embryons dans leur chorion et retirés de leur chorion ont été mesurés. Dans cette analyse, l’embryon représentait 56 % du volume total à l’intérieur de la chorion.D’après les travaux publiés précédemment, 73,6 % ont été utilisés comme teneur en eau embryonnaire pour toutes les analyses présentées. Il en est résulté de l’eau comprenant 0,82 microlitres des 1,1 microlitres de volume embryonnaire. Sur le volume total de l’eau, 49% est contenu dans l’embryon et 51% dans le liquide extraembryonique.Pour l’analyse de la chromatographie gazeuse, deux groupes de 15 échantillons et les supports avec lesquels ils ont été traités ont été mesurés cinq fois par groupe ont été analysés. Les niveaux d’éthanol dans les médias étaient de 143,6 millimolaires pour le groupe 1 et de 133,6 millimolaires pour le groupe deux. Les concentrations d’éthanol des embryons étaient en moyenne de 63,5 millimlaires et de 53,1 millimolaires pour les groupes un et deux respectivement.Un rapport entre la concentration embryonnaire d’éthanol et les niveaux de éthanol dans les médias pour chaque échantillon a été calculé. Le premier groupe avait 44 % des niveaux d’éthanol dans les médias, tandis que le groupe avait 40 % des niveaux d’éthanol dans les médias. Les embryons de contrôle non traités ont été mesurés à zéro concentration millimolaire d’éthanol dans les médias.La chose la plus importante à retenir lors de la tentative de cette procédure est que le traitement des embryons pour l’analyse GC correctement est critique que l’éthanol est volatile et s’évaporera rapidement. La meilleure façon d’effectuer cette étape est décrite, mais il doit être pratiqué pour développer une bonne mémoire musculaire. Cette procédure aidera à normaliser les régimes de traitement de l’éthanol chez le poisson zèbre et permettra aux travaux futurs de disséquer les mécanismes génétiques et cellulaires de la tératgénicité éthanale.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

Mesure de la stabilité des protéines dans le salon embryons de poissons zèbres en utilisant la fluorescence Decay Après Photoconversion (FDAP)

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

Recherche

Biologie du développement

Mechanical Vessel Injury in Zebrafish Embryos

Blessure mécanique des bateaux dans embryons de poissons zèbres

Zebrafish (Danio rerio) embryos have proven to be a powerful model for studying a variety of developmental and disease processes.  External development ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

en cours d&#39;analyse<em&gt; In Vivo</em&gt; Migration cellulaire en utilisant Transplantations cellulaires et imagerie time-lapse en Zebrafish Embryons

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

Isolement et caractérisation de cellules isolées à partir d&#39;embryons de poisson zèbre

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Développement d&#39;un fibrotique du foie Modèle induite de l&#39;éthanol en Zebrafish pour étudier de cellules souches médiée hépatocytes Régénération

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Biosensing Motor Neuron Membrane Potential in Live Zebrafish Embryos

Biosensing Potentiel de membrane de neurones moteurs dans les embryons vivants de zébrés

The protocols described here are designed to allow researchers to study cell communication without altering the integrity of the environment in which the ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Induction de l&#39;hypoxie dans les écrevisses vivantes de grenouille et de poisson zèbre

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Visualization of Cellular Electrical Activity in Zebrafish Early Embryos and Tumors

Visualisation de l’activité électrique cellulaire dans les jeunes embryons de poisson-zèbre et tumeurs

Bioelectricity, endogenous electrical signaling mediated by ion channels and pumps located on the cell membrane, plays important roles in signaling ...

Preparation of Drosophila Larval Samples for Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)-based Metabolomics

Preparation of Drosophila Larval Samples for Gas Chromatography-Mass Spectrometry GC-MS-based Metabolomics

Préparation des échantillons de larves de drosophile pour chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse (GC-MS)-base de métabolomique

Recent advances in the field of metabolomics have established the fruit fly Drosophila melanogaster as a powerful genetic model for studying animal ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualiser le nœud et la notochorde plaque en Gastrulating des embryons de souris à l’aide de la microscopie électronique à balayage et toute monture Immunofluorescence

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...