Name: quantification of ethanol levels in zebrafish embryos using head space gas chromatography
Uploaded: 2020-02-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Ethanol Levels in Zebrafish Embryos Using Head Space Gas Chromatography at JoVE.com

La ricerca presentata in questo articolo è stata supportata da precedenti sovvenzioni da National Institutes of Health/National Institute of Dental and Craniofacial Research (NIH/NIDCR) R01DE020884 a J.K.E. e National Institutes of Health/National Institute on Alcohol Abuse and Alcoholism (NIH/NIAAA) F32AA021320 a C.B.L. e con l'attuale sovvenzione da parte dei National Institutes of Health/National Institute on Alcohol Abuse (NIH/NIAAA) R00AA023560 a C.B.L. Ringraziamo Rueben Gonzales per aver fornito e assistito l'analisi del cromatografo a gas. Ringraziamo Tiahna Ontiveros e la dott.ssa Gina Nobles a scrivere assistenza.

Tutti gli embrioni di pesce zebra utilizzati in questa procedura sono stati allevati e allevati seguendo i protocolli IACUC stabiliti27. Questi protocolli sono stati approvati dall'Università del Texas ad Austin e dall'Università di Louisville.
NOTA: La linea di pesce zebra Tg(fli1:EGFP)y1 è stata utilizzata in questo studio28. Tutta l'acqua utilizzata in questa procedura è acqua sterile di osmosi inversa. Tutte le analis...

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J., Mangieri, R. A., Dilly, G. A., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microdialysis+of+ethanol+during+operant+ethanol+self-administration+and+ethanol+determination+by+gas+chromatography.">Microdialysis of ethanol during operant ethanol self-administration and ethanol determination by gas chromatography.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), e4142 (2012).</li><li>Adalsteinsson, E., Sullivan, E. V., Mayer, D., Pfefferbaum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+ethanol+kinetics+in+rat+brain.">In vivo quantification of ethanol kinetics in rat brain.</a> Neuropsychopharmacology. 31 (12), 2683-2691 (2006).</li><li>Quertemont, E., Green, H. L., Grant, K. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol-+and+acetaldehyde-mediated+developmental+toxicity+in+zebrafish.">Ethanol- and acetaldehyde-mediated developmental toxicity in zebrafish.</a> Neurotoxicology and Teratology. 26 (6), 769-781 (2004).</li><li>Zhang, C., Ojiaku, P., Cole, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forebrain+and+hindbrain+development+in+zebrafish+is+sensitive+to+ethanol+exposure+involving+agrin,+Fgf,+and+sonic+hedgehog+function.">Forebrain and hindbrain development in zebrafish is sensitive to ethanol exposure involving agrin, Fgf, and sonic hedgehog function.</a> Birth Defects Research Part A: Clinical and Molecular Teratology. 97 (1), 8-27 (2013).</li></ol>

Come sistema di modelli di sviluppo, il pesce zebra è ideale per studiare l'impatto dei fattori ambientali sullo sviluppo. Producono un gran numero di embrioni fecondati esternamente, il che consente di tempistica precisa e paradigmi di dosaggio negli studi sull'etanolo. Questo, combinato con le capacità di imaging dal vivo e la conservazione genetica e dello sviluppo con gli esseri umani, rende il pesce zebra un potente sistema modello per gli studi di teratologia. Descritto è un protocollo per misurare le concentraz...

I disturbi dello spettro dell'alcolfe fetale (FASD) descrivono una vasta gamma di menomazioni neurologiche e dismorfologie craniofacciali associate all'esposizione all'etanolo embrionale1. Molteplici fattori, tra cui la tempistica e il dosaggio dell'esposizione all'etanolo e il background genetico, contribuiscono alla variazione del FASD2,3. Nell'uomo, la complessa relazione di queste variabili rende difficile lo studio e la comprensione dell'eziologia della FASD. I modelli animali si sono dimostrati cruciali nello sviluppo della nostra comprensione della base meccanicistica della teratogenicità dell'etanolo. Un'ampia varietà di sistemi di modelli animali è stata utilizzata per studiare molteplici aspetti della FASD e i risultati sono stati notevolmente coerenti con quanto si trova nell'esposizionenell'uomo 4. I sistemi modello Roditori sono utilizzati per esaminare molti aspetti del FASD, con i topi che sono i più comuni5,6,7. La maggior parte di questo lavoro si è concentrata sui difetti dello sviluppo per l'esposizione precoce all'etanolo8, anche se in seguito l'esposizione all'etanolo ha dimostrato di causare anomalie dello sviluppo pure9. Inoltre, le capacità genetiche dei topi hanno notevolmente aiutato nella nostra capacità di sondare le basi genetiche di FASD10,11. Questi studi sui topi suggeriscono fortemente che ci sono interazioni gene-etanolo con il percorso riccio sonoro, segnalazione dell'acido retinoico, dismutasi Superossido, sintesi di ossido nitrico I, Aldh2 e Fancd28,10,11, 12,13,14,15,16,17,18 19,20,21. Questi studi dimostrano che i modelli animali sono fondamentali per far progredire la nostra comprensione della FASD e dei suoi meccanismi sottostanti.
Il pesce zebra è emerso come un potente sistema modello per esaminare molti aspetti della teratogenesi dell'etanolo22,23. A causa della loro fecondazione esterna, dell'elevata fecondità, della trattatibilità genetica e delle capacità di imaging dal vivo, i pesci zebra sono ideali per studiare fattori come tempismo, dosaggio e genetica della teratogenesi dell'etanolo. L'etanolo può essere somministrato a embrioni messi in scena con precisione e gli embrioni possono quindi essere immagine per esaminare l'impatto diretto dell'etanolo durante i processi di sviluppo. Questo lavoro può essere correlato direttamente agli esseri umani, perché i programmi genetici di sviluppo sono altamente conservati tra il pesce zebra e gli esseri umani e può quindi aiutare a guidare gli studi umani FASD24. Mentre il pesce zebra è stato utilizzato per esaminare la teratogenesi dell'etanolo, la mancanza di consenso nel segnalare concentrazioni di etanolo embrionale rende difficile il confronto con gli esseri umani25. Nei sistemi dei mammiferi, i livelli di alcol nel sangue sono correlati direttamente ai livelli di etanolo tissutale26. Molti degli studi sui pesci zebra trattano gli embrioni prima della formazione completa del loro sistema circolatorio. Senza un campione materno da esaminare, è necessario un processo per valutare le concentrazioni di etanolo per quantificare i livelli di etanolo all'interno dell'embrione. Qui descriviamo un processo per quantificare le concentrazioni di etanolo in un embrione di pesce zebra in via di sviluppo utilizzando la cromatografia del gas dello spazio della testa.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Air</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided by contract to the university</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical Balance</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10204-962</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoSampler, CP-8400</td>
			<td>Varian</td>
			<td></td>
			<td>Gas Chromatograph Autosampler</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatograph vial with polytetrafluoroethylene/silicone septum and plastic cap 2 mL</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>8010-0198</td>
			<td>Can reuse the vials after cleaning, but not the caps/septa</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas Chromatograph, CP-3800</td>
			<td>Varian</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Helium</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided by contract to the university</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HP Innowax capillary column</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>19095N-123I</td>
			<td>30 m x 0.53 mm x 1.0 &#956;m film thick</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyrdogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Provided by contract to the university</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium Sulfate (Heptahydrate)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M63-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tube 1.5 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>2682002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette tips 10 &#956;L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13611106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette tips 1000 &#956;L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13611127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette tips 200 &#956;L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13611112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes 100 mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB012924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman L p1000L Micropipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>FA10006M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman L p200L Micropipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>FA10005M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetman L p2L Micropipette</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>FA10001M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polytetrafluoroethylene/silicone septum and plastic cap</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5190-7021</td>
			<td>Replacement caps/septa for gas chromatograph vials</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P217-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Phosphate (Dibasic)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9266-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97062-916</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica Beads .5 mm</td>
			<td>Biospec Products</td>
			<td>11079105z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silica Beads 1.0 mm</td>
			<td>Biospec Products</td>
			<td>11079110z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9280-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S271-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate (Dibasic)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S374-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid-phase microextraction fiber assembly Carboxen/Polydimethylsiloxane</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>57343-U</td>
			<td>Replacement fibers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Star Chromatography Workstation</td>
			<td>Varian</td>
			<td></td>
			<td>Chromatography software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermogreen Low Bleed (LB-2) Septa</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>23154</td>
			<td>Replacement inlet septa</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of ethanol levels in zebrafish embryos using head space gas chromatography

I disturbi dello spettro dell'alcolfe fetale (FASD) descrivono un continuum altamente variabile di difetti dello sviluppo indotti dall'etanolo, tra cui dismofomorfologie facciali e disturbi neurologici. Con una patologia complessa, FASD colpisce circa 1 bambino su 100 nati negli Stati Uniti ogni anno. A causa della natura altamente variabile della FASD, i modelli animali si sono dimostrati critici nella nostra attuale comprensione meccanicistica dei difetti di sviluppo indotti dall'etanolo. Un numero crescente di laboratori si è concentrato sull'utilizzo del pesce zebra per esaminare i difetti dello sviluppo indotti dall'etanolo. I pesci zebra producono un gran numero di embrioni emblari traslucidi, geneticamente trattivi, che sono esportati esternamente. Ciò consente ai ricercatori di controllare con precisione la tempistica e il dosaggio dell'esposizione all'etanolo in più contesti genetici e di quantificare l'impatto dell'esposizione all'etanolo embrionale attraverso tecniche di imaging dal vivo. Questo, combinato con l'elevato grado di conservazione della genetica e dello sviluppo con gli esseri umani, ha dimostrato che il pesce zebra è un modello potente in cui studiare la base meccanicistica della teratogenicità dell'etanolo. Tuttavia, i regimi di esposizione all'etanolo hanno variato tra diversi studi sui pesci zebra, il che ha confuso l'interpretazione dei dati dei pesci zebra in questi studi. Ecco un protocollo per quantificare le concentrazioni di etanolo negli embrioni di pesce zebra utilizzando la cromatografia del gas dello spazio della testa.

I livelli di etanolo sanguigno non possono essere determinati nei primi pesci zebra embrionali, perché non hanno un sistema circolatorio completamente formato. Per determinare il livello di concentrazione di etanolo negli embrioni di pesce zebra, i livelli di etanolo sono misurati direttamente dal tessuto embrionale omogeneizzato. Per misurare correttamente le concentrazioni di etanolo embrionale, è necessario tener conto del volume embrionale. L'embrione (tuorlo attaccato) si trova all'interno del chorion (guscio d'uo...

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Quantification of Ethanol Levels in Zebrafish Embryos Using Head Space Gas Chromatography

Questo lavoro descrive un protocollo per quantificare i livelli di etanolo in un embrione di pesce zebra utilizzando la cromatografia del gas dello spazio della testa da metodi di esposizione adeguati alla lavorazione degli embrioni e all'analisi dell'etanolo.

Quantificazione dei livelli di etanolo negli embrioni di pesce zebra utilizzando la cromatografia dello spazio della testa

Fetal Alcohol Spectrum Disorders (FASD) describe a highly variable continuum of ethanol-induced developmental defects, including facial dysmorphologies ...

Questo protocollo è significativo perché aiuta a comprendere la farmacocinetica dell'etanolo nello sviluppo di embrioni di zebrafish e questo aiuterà a standardizzare i regimi di esposizione all'etanolo negli studi sul pesce zebra. Il vantaggio principale della nostra tecnica è che consente ai ricercatori di misurare rapidamente e riproducibilmente i livelli di etanolo durante lo sviluppo embrionale, in particolare negli embrioni in cui l'apporto di sangue non è disponibile. Questo metodo può essere facilmente applicato ad altri sistemi di modelli e ad altri fattori ambientali assumendo una corretta configurazione della tecnica e delle attrezzature.Mi aspetto che le persone che eseguono questo protocollo per la prima volta lottino con la velocità necessaria per prevenire l'evaporazione dell'etanolo durante la lavorazione degli embrioni. Inizia trasferendo 10 embrioni con liquido embrionale extra in tubi di microcentrifugo da 1,5 millilitri contrassegnati da una linea con un volume di 250 microlitri. Aggiungere acqua alla linea di riempimento.Preparare ulteriori tubi di microcentrifugo per campioni dechorionati. Per rimuovere il corone, incubare gli embrioni in una piastra di Petri di 100 millimetri con due milligrammi per millilitro di cocktail di proteasi nei mezzi embrionale per 10 minuti. Ruotare delicatamente il piatto ogni pochi minuti per rompere il chorion.Una volta che tutti gli embrioni sono liberi dal chorion, rimuoverli dal cocktail proteasi e lavarli due volte con mezzi freschi. Quindi trasferire gli embrioni in un piatto fresco da 100 millimetri. Quando tutti i campioni sono pronti per la misurazione del volume, utilizzare una micropipetta P200 con la punta più piccola possibile per rimuovere con cura tutto il liquido da intorno agli embrioni.Pesare l'acqua con una scala con una precisione inferiore a 0,1 milligrammi, quindi determinare il volume dei 10 embrioni sottraendo il peso dell'acqua rimossa da 250 microlitri. Per determinare il volume di un singolo embrione, dividere la differenza per 10. Raccogliere gli embrioni dai serbatoi di accoppiamento e metterli in una piastra di Petri standard da 100 millimetri, quindi incubare il piatto a 28,5 gradi Celsius.A sei ore dalla fecondazione, trasferire fino a 100 embrioni in un nuovo piatto con mezzi embrionale e 1%etanolo o solo media. Coprire ma non sigillare le piastre di Petri e posizionarle in un'incubatrice di 28,5 gradi Celsius per 18 ore o fino a raggiungere le 24 ore dopo la fecondazione. Utilizzare due micropipette P200 impostate su 50 microlitri e aspirare la soluzione di cocktail proteasi in uno e acqua nel secondo.Quindi posizionare rapidamente 10 embrioni in un tubo di microcentrifugo da 1,5 millilitri usando una pipetta di vetro e chiudere il cappuccio. Ripetere questo processo per tutti i campioni da testare, i controlli e gli embrioni trattati con etanolo. Lavorando con un campione alla volta, aprire rapidamente il tappo e aspirare tutti i mezzi embrionale residui con una micropipetta P200 impostata su 200 microlitri.Aggiungere e rimuovere rapidamente ma delicatamente i 50 microlitri di acqua, quindi aggiungere i 50 microlitri del cocktail proteasi e chiudere il tappo del tubo. Lasciare riposare il campione per 10 minuti a temperatura ambiente, quindi aggiungere rapidamente 450 microlitri di cinque cloruro di sodio molare e chiudere il tappo del tubo. Omogeneizzare il campione vortice per 10 minuti e trasferire due microlitri di supernatante in una fiala gascromatografica.Sigillare la fiala con un cappuccio in politetrafluoroetilene. Dopo aver completato il metodo di avvio, caricare l'etanolo SPME corrente da due a cinque minuti. meth dal menu dei metodi nel software di analisi per ogni campione nell'elenco di esempio.Compilare l'elenco dei campioni a partire dall'aria, dall'acqua e da cinque spazi vuoti di cocktail di proteasi al cloruro di sodio molare. Quindi inserire gli standard dell'etanolo in ordine da 0,3125 a 40 millimolari. Segui gli standard con il secondo giro di spazi vuoti.Immettere tutti i campioni omogeneizzati di embrione supernatante da testare dalla concentrazione e dalla finitura di etanolo più bassa a più alta prevista inserendo un terzo ciclo di spazi vuoti. Aggiungere le fiale gascromatografiche all'autocampionatore nell'ordine in cui sono stati inseriti i campioni e consentire loro di riscaldarsi per 10-15 minuti. Quindi avviare l'esempio eseguito utilizzando il software.Al termine di tutte le esecuzioni, attivare il metodo di arresto aggiungendo un esempio finale nell'elenco di esempio ed eseguendo standby.meth. Eseguire il backup di tutti i dati acquisiti durante l'esecuzione dell'esempio. Una volta completato il metodo di arresto, fare clic sul cromatogramma aperto e aprire la cartella con i risultati.Gli esempi vengono integrati automaticamente in questo programma. Nei risultati, assicurarsi che i picchi corretti siano stati integrati. Una volta che tutti i campioni sono stati confermati, stampare o esportare i risultati.Tracciare l'altezza di picco degli standard di etanolo su un grafico, quindi calcolare la pendenza, l'intercetta y e i valori al quadrato r. Ottenere il valore dell'etanolo per ogni campione sottraendo l'altezza di picco del campione dall'intercetta y degli standard e dividendo questo valore per la pendenza degli standard. Per calcolare la concentrazione di etanolo negli embrioni, calcolare il fattore di diluizione per ciascun campione e moltiplicare il valore dell'etanolo campione per questo fattore di diluizione.Infine, calcolare i campioni di riferimento dei supporti moltiplicando il valore dell'etanolo multimediale per un fattore di diluizione pari a 10. Per calcolare correttamente le concentrazioni embrionali di etanolo, sono stati misurati i volumi di embrioni sia nel loro corione che rimossi dal loro corione. In questa analisi, l'embrione comprendeva il 56% del volume totale all'interno del corone.Sulla base di lavori pubblicati in precedenza, il 73,6% è stato utilizzato come contenuto di acqua embrionale per tutte le analisi presentate. Ciò ha portato ad acqua composta da 0,82 microlitri degli 1,1 microlitri di volume embrionale. Del volume totale dell'acqua, il 49% è contenuto nell'embrione e il 51% nel fluido extraembrionale.Per l'analisi gascromatografica sono stati analizzati due gruppi di 15 campioni e i mezzi con cui sono stati trattati misurati cinque volte per gruppo. I livelli di etanolo media erano di 143,6 millimolari per il primo gruppo e di 133,6 millimolare per il secondo gruppo. Le concentrazioni di etanolo degli embrioni sono state in media di 63,5 millimolare e 53,1 millimolare rispettivamente per i gruppi uno e due.È stato calcolato un rapporto tra concentrazione embrionale di etanolo e livelli media di etanolo per ciascun campione. Il primo gruppo aveva il 44% dei livelli di etanolo mediatico, mentre il gruppo aveva il 40% dei livelli di etanolo media. Gli embrioni di controllo non trattati sono stati misurati a concentrazione di etanolo mediale millimolare zero.La cosa più importante da ricordare quando si tenta questa procedura è che elaborare correttamente gli embrioni per l'analisi GC è fondamentale in quanto l'etanolo è volatile e evaporerà rapidamente. Il modo migliore per eseguire questo passaggio è descritto, ma deve essere praticato per sviluppare una corretta memoria muscolare. Questa procedura aiuterà a standardizzare i regimi di trattamento dell'etanolo nel pesce zebra e consentirà ai lavori futuri di sezionare i meccanismi genetici e cellulari della teratogenicità etano.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion (FDAP)

Measuring Protein Stability in Living Zebrafish Embryos Using Fluorescence Decay After Photoconversion FDAP

Misurare Protein Stabilità in Living embrioni di zebrafish Usando fluorescenza Decay Dopo Fotoconversione (FDAP)

Protein stability influences many aspects of biology, and measuring the clearance kinetics of proteins can provide important insights into biological ...

Ricerca

Biologia dello sviluppo

Mechanical Vessel Injury in Zebrafish Embryos

Mechanical Injury Vessel in embrioni di zebrafish

Zebrafish (Danio rerio) embryos have proven to be a powerful model for studying a variety of developmental and disease processes.  External development ...

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

analizzare<em&gt; In Vivo</em&gt; Migrazione cellulare utilizzando Trapianti cellulari e Time-lapse imaging in embrioni di zebrafish

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

Isolamento e caratterizzazione di singole cellule da embrioni di zebrafish

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Sviluppo di un modello di fegato Fibrotic etanolo-indotta in zebrafish per studiare progenitrici cellulo-mediata epatociti Rigenerazione

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Biosensing Motor Neuron Membrane Potential in Live Zebrafish Embryos

Biosensing potenziale del membrane del neurone del motore in embrioni di Zebrafish in tensione

The protocols described here are designed to allow researchers to study cell communication without altering the integrity of the environment in which the ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Induzione di ipossia in rana vivente e embryos zebrafish

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Visualization of Cellular Electrical Activity in Zebrafish Early Embryos and Tumors

Visualizzazione dell'attività elettrica cellulare in Zebrafish embrioni in anticipo e tumori

Bioelectricity, endogenous electrical signaling mediated by ion channels and pumps located on the cell membrane, plays important roles in signaling ...

Preparation of Drosophila Larval Samples for Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS)-based Metabolomics

Preparation of Drosophila Larval Samples for Gas Chromatography-Mass Spectrometry GC-MS-based Metabolomics

Preparazione di campioni larvale della drosofila per spettrometria della cromatografia-massa del Gas (GC-MS)-base di metabolomica

Recent advances in the field of metabolomics have established the fruit fly Drosophila melanogaster as a powerful genetic model for studying animal ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualizzare il nodo e la piastra Notochordal In embrioni di topo Gastrulating mediante microscopia elettronica a scansione e intero Monte immunofluorescenza

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...