Name: targeting the rat's small bowel: long-term infusion into the superior mesenteric artery
Uploaded: 2021-04-08T13:00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Targeting the Rat's Small Bowel: Long-Term Infusion into the Superior Mesenteric Artery at JoVE.com

Yazarlar Cen.Ri.S.'i kabul etmek istiyor. (Centro di ricerche sperimentali) Università Cattolica del Sacro Cuore roma izinler için.

Bu yazıda açıklanan çalışmalar yerel hayvan Etik Komitesi (Università Cattolica del Sacro Cuore, Roma) tarafından onaylanmış ve İtalya Sağlık Bakanlığı'na uygun olarak yürütülmüştir.
1. SMA'nın proksimal dalına sokulması için canül hazırlanması
<ol><li>0,93 mm O.D, 0,5 mm I.D. büyüklüğündeki daha büyük canülleri gerekli uzunluğa (yaklaşık 30 cm) kesin.</li>
	<li>Daha küçük olan canülleri (0,4 mm O.D, 0,25 mm I.D.) yaklaşık 5 cm uzunluğa kesin ve daha büyük bir canül içine 1 cm yerleştirin.</li>
	<li>İki kanolüni siyanoakrilat tutkal ile sabitleyerek lümenin tıkanması önlenir.</li>
	<li>Daha büyük bir damarın serbest ekstremitesini, tuzlu su çözeltisi ile dolu 1 mL şırınna monte edilmiş bir Luer saplama adaptörüne (23 G) bağlayın.</li>
	<li>Kateterin SMA'nın dalına yerleştirilmesini kolaylaştırmak için küçük canülün serbest ucunu makasla keskinleştirin.</li>
	<li>Salin çözeltisi ile yıkanarak canül açıklığını kontrol edin. NOT: Kanüllerin keskin ucu, hayvanın hareketi sırasında artere zarar vermeyecektir, çünkü sabitlenecek ve damar boyunca kaymayacaktır.</li>
</ol>2. Sıçanın cerrahi prosedür için hazırlanması
<ol><li>Ketamin/ksilazin (100/10 mg/kg) ile kas içi anestezi gerçekleştirin. NOT: Yeterli anestezik derinlik, pençe sıkışma refleksinin yokluğu veya yokluğu ile değerlendirilür.</li>
	<li>Kürkü cerrahi bölgelerden tıraş edin: SMA cannülasyonunun dalı için karın ve canül çıkışı için boynun arkası.</li>
	<li>Cerrahi bölgeleri cerrahi bir pençe sıkışma refleksi kullanarak aseptik olarak temizleyin. NOT: Tüm hazırlık aseptik teknikle yapılmalıdır.</li>
	<li>dairesel bir hareketle uygulanan ovma veya çözelti, ardından steril salin veya% 70 etanol, 3 kez.</li>
	<li>Hayvanı dört uzvu hareketsiz hale getirecek şekilde bir supine pozisyonuna yerleştirin.</li>
</ol>3. SMA'nın proksimal bir dalının canülasyonu
<ol><li>Kesiden önce pençe sıkışma refleksini test ederek uygun anestezik derinliği sağlayın.</li>
	<li>Steril cerrahi, suya dayanıklı bir örtü uygulayın.</li>
	<li>Neşter bıçağı ile, mezogastrik bölgenin orta hattında düz 3 cm'lik bir kesi ile karın duvarını tüm karın düzlemlerinden peritona açın.</li>
	<li>Tuzlu su çözeltisi ile ıslatılmış gazlı bezleri, cerrahi örtünün üzerine laparotomi kesisinin etrafına yerleştirin. Cerrahi kesiyi açık tutmak için dikiş kullanın. NOT: Tüm sürüntü örnekleri ve cerrahi aletler steril olmalıdır.</li>
	<li>İnce bağırsağı tanımlamak ve açığa çıkarmak için pamuklu çubuklar kullanın. Mezenteri tanımlamak için doğal eğilimini takip edin. Mezentery'yi laparotomik kesimden çıkarın ve gazlı bezlerin üzerine doğru yatırın (Şekil 1A).</li>
	<li>Titreşimi hissederek SMA'yı tanımlayın.</li>
	<li>Mezenterik yağ arasında "yol açmak" ve SMA'yı ve proksimal dallarının 2-3'ünü ortaya çıkarmak için pamuklu çubukları kullanın.</li>
	<li>SMA'nın proksimal bir dalını, canülasyonun cerrahi manevralarına izin vermek için yeterince büyük seçin. Bu dalı (4-0 ipek dikişli) kaynağından 3-4 cm aşağı doğru bağlayarak dikiş uçlarını daha sonra manipüle edilecek kadar uzun süre tutmasına izin verin.</li>
	<li>SMA'nın dalının altına sert bir destek yerleştirin. Cerrahi ataların sapı burada yeterli.</li>
	<li>Daha küçük damarın ekstremitesini (karşı ekstremitedeki daha büyük damarla bağlantılı) baskın el ile tutun ve kabı zorlamak ve kateterin girişini kolaylaştırmak için dikiş uçlarını diğer elinizle çekin (Şekil 1B).</li>
	<li>Kanül ucunu damar düzleminden kan akışının karşısındaki yönde 20° açıyla tutun.</li>
	<li>Arter duvarına nüfuz etmek ve kanülleri yerleştirmek için ucu hafifçe bastırın. NOT: Kanülasyon arter kesilmeden gerçekleştirilir; kateterin ucu damar duvarını kıracak ve girişi kolaylaştıracaktır. Kanüle geri akan kan doğru yerleştirmeyi doğrular.</li>
	<li>Kanüllerin yerleştirilmesine SMA'dan gelen kökene yakın arteriyel dalda 1 cm daha devam edin.</li>
	<li>Kanülü bir cerrahi düğüm (4-0 ipek) ile artere sabitlayın ve 1 mL steril salin çözeltisini yıkayarak veya kan örneklemesi ile doğru çalışmasını doğrulayın.</li>
</ol>4. Kanül tünelleri ve infüzyon destek sistemine yerleştirme
<ol><li>Hayvanın pozisyonunu değiştirmeden önce kesi üzerine steril bir cerrahi örtü yerleştirin. NOT: Arkadan karına tünel, sivri cerrahi bir aletle deri altı boşluğunda basınç uygulanarak oluşturulur. Karın ve sırt kesilerinde steril cerrahi örtü kullanılmalıdır.</li>
	<li>Boynun arka bölgesinin 1 cm'lik bir kesisini yapın ve küresel bir valfi barındırın.</li>
	<li>Kasarotomi erişimindeki akülleri boyun içine yerleştirilen kapakçıklara deri altı dokulardan geçirin (Şekil 2A). Hava girişini önlemek için bir kateter fişi ile çanakül distal ekstremitesini kapatın.</li>
	<li>Karın boşluğundaki ince bağırsağı değiştirin. Karın duvarını kapatın ve cilt kesilerini sürekli 3-0 ipek dikiş ile kapatın.</li>
	<li>Valfi dikişlerle boyun derisine sabitleyin. Cilt kesilerini sürekli 3-0 ipek dikiş ile kapatın.</li>
</ol>5. Ameliyat sonrası yönetim
<ol><li>Düğme vanasını korumak için sıçanı bir ceketle giydirin. Kanüllerin açıkta kalan kısmını infüzyon sırasında çelik bir çubukla koruyun ve valflere sabitleyin (Şekil 2B). NOT: Ameliyat aseptik teknikle yapıldığı için antibiyotik belirtilmez. NSAID ağrı kontrolü için ameliyat öncesi uygulanmalıdır (5 mg/mL Meloxicam enjekte edilebilir, 3 güne kadar günde bir kez 1 mg/kg). Operasyondan sonra, sıçanı infüzyon zamanı için metabolik bir kafeste stabilize edin (24 saat). Daha sonra infüzyon sistemini sökmek için gerekli süre boyunca sıçanı izofluran inhalasyonu ile yeniden uyuşturun. Daha sonra sıçanı 12 saatlik açık / karanlık bir döngüye ve yiyecek ve suya ücretsiz erişime sahip normal bir kafeste barındırmak mümkündür.</li>
	<li>Sıçanı infüzyon zamanı için metabolik bir kafeste stabilize edin. Sıçan şimdi uyanık ve kafeste hareket etmek ve yemek yemek için özgür.</li>
	<li>Canülün distal ekstremitesini 50 mL steril salin çözeltisi ile dolu bir elastomerik pompaya (100 mL hacim maksimum, 5,0 mL/h akış hızı) bağlayın. 24 saat boyunca infüzyon ile devam edin (Şekil 2C).</li>
	<li>İlk gün, intramüsküler antibiyotikler (ilk 24 saat için enrofloksasin 10 mg / kg) ve daha sonra oral uygulama (içme suyunda 500 mL'de enrofloksasin 100 mg) geçirin. Uyanma sırasında (ketoprofen 5.0 mg / kg) ve sonraki günlerde ağızdan (içme suyunda parasetamol 200 mg) analjezik tedaviyi intramüsküler olarak dağıtın. NOT: Katlanılabilir bir tat elde etmek için içme suyunda uygulanan oral terapiyi seyreltin. Vücut ağırlığı ölçümünü ve hidrasyonunu izleyin.</li>
	<li>İnfüzyon süresinin sonunda (24 saat), pompayı, ceketi, çelik çubuğu ve vanayı sıçandan çıkararak hayvanın dış infüzyon sistemini sökün. Yara dikişi sonrası bu ekstremiteyi boyun derisinin altına bırakarak, boynun içinden çıkarken kavuğu kapatın ve kesin. NOT: Bu aşamada sıçanları izofluoran inhalasyonu ile birkaç dakika uyuşturmak gerekebilir.</li>
	<li>Sıçanı, ayrı ayrı, 12 saatlik açık / karanlık bir döngüye ve yiyecek ve suya ücretsiz erişime sahip normal bir kafeste barındırın. NOT: Temel ameliyat sonrası gıda alımı yaklaşık 30 g./gün Temel su alımı yaklaşık 50 ml/gün'dür. Ortalama ağırlık yaklaşık 400 mg olmalıdır.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Zhang, Z., Chen, X., Zhu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Percutaneous+mechanical+thrombectomy+treatment+of+acute+superior+mesenteric+artery+embolism.">Percutaneous mechanical thrombectomy treatment of acute superior mesenteric artery embolism.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery Short Reports. 34, 17-20 (2017).</li><li>Wang, M. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transradial+approach+for+transcatheter+selective+superior+mesenteric+artery+urokinase+infusion+therapy+in+patients+with+acute+extensive+portal+and+superior+mesenteric+vein+thrombosis.">Transradial approach for transcatheter selective superior mesenteric artery urokinase infusion therapy in patients with acute extensive portal and superior mesenteric vein thrombosis.</a> Cardiovascular and Interventional Radiology. 33 (1), 80-89 (2010).</li><li>Zammit, M., Toledo-Pereyra, L. H., Malcom, S., Konde, W. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+cranial+mesenteric+vein+cannulation+in+the+rat.">Long-term cranial mesenteric vein cannulation in the rat.</a> Laboratory Animal Science. 29 (3), 364-366 (1979).</li><li>Aguiar, J. L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+for+long-term+infusion+into+the+inferior+mesenteric+artery+of+unrestrained+rats.">Technique for long-term infusion into the inferior mesenteric artery of unrestrained rats.</a> Laboratory Animals. 22 (2), 173-176 (1988).</li><li>Trevaskis, N. L., Hu, L., Caliph, S. M., Han, S., Porter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mesenteric+lymph+duct+cannulated+rat+model:+application+to+the+assessment+of+intestinal+lymphatic+drug+transport.">The mesenteric lymph duct cannulated rat model: application to the assessment of intestinal lymphatic drug transport.</a> Journal of Visualized Experiments. (97), e52389 (2015).</li><li>Leivestad, O., Malt, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+infusion+into+the+hepatic+artery+and+vena+cava+of+the+rat.">Continuous infusion into the hepatic artery and vena cava of the rat.</a> Surgery. 74 (3), 401-404 (1973).</li><li>Eloy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+vascular+perfusion+of+the+isolated+rat+small+bowel.+Importance+of+the+intestinal+brush+border+enzyme-release+in+basal+conditions.">Ex vivo vascular perfusion of the isolated rat small bowel. Importance of the intestinal brush border enzyme-release in basal conditions.</a> European Surgical Research. 9 (2), 96-112 (1977).</li><li>Liu, R. N., Wei, X. J., Li, S. P., Jiang, C., Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+invasive+dynamic+blood+pressure+between+superior+mesenteric+artery+and+common+carotid+artery+in+rats.">Comparison of invasive dynamic blood pressure between superior mesenteric artery and common carotid artery in rats.</a> World Journal of Emergency Medicine. 11 (2), 102-108 (2020).</li><li>Leung, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superior+mesenteric+artery+is+more+important+than+inferior+mesenteric+artery+in+maintaining+colonic+mucosal+perfusion+and+integrity+in+rats.">Superior mesenteric artery is more important than inferior mesenteric artery in maintaining colonic mucosal perfusion and integrity in rats.</a> Digestive Diseases and Sciences. 37 (9), 1329-1335 (1992).</li><li>Gui, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+artery+botulinum+toxin+(BoNT/A1)+infusion+selectively+blocks+bowel+peristalsis+in+rats.">Mesenteric artery botulinum toxin (BoNT/A1) infusion selectively blocks bowel peristalsis in rats.</a> Journal of the American Chemical Society. 231 (4), 19-20 (2020).</li><li>Lecomte, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+gut+microbiota+in+rats+fed+a+high+fat+diet+correlate+with+obesity-associated+metabolic+parameters.">Changes in gut microbiota in rats fed a high fat diet correlate with obesity-associated metabolic parameters.</a> PLoS One. 10 (5), 0126931 (2015).</li><li>Hajj Hussein, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+bowel+disease+in+rats:+bacterial+and+chemical+interaction.">Inflammatory bowel disease in rats: bacterial and chemical interaction.</a> World Journal of Gastroenterology. 14 (25), 4028-4039 (2008).</li></ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Bu sıçan SMA infüzyon modelinin ana avantajı, hayvanların büyük çoğunluğunda en az 24 saat boyunca kararlılığı ve dayanıklılığıdır. Pıhtı önleyici infüzyon bu zaman aralığını uzatabilir. Model, mezenterik bölgede, ince bağırsağı ve kolonun proksimal kısmını hedef alan, seçici olarak ilaçların güvenilir bir infüzyonunu sağlar.
Tekniğin başarısı için birkaç adım kritik öneme sahiptir. Çok küçük bir kapta canülasyon elde etmek için en az 400 g ağırlığında sıçanların seçilmesi önemlidir; seks ve yaş alakalı değildir. Doğru cerrahi aletleri ve kanül tipini seçmek de önemlidir. Burada, küçük artere ve daha büyük infüzyon sistemine her iki bağlantıya izin vermek için fonksiyonel ve kullanışlı bir kateter elde etmek için daha küçük bir poliüretan kanül (0,4 mm O.D, 0,25 mm I.D.) daha büyük kanüle (0,93 mm O.D, 0,5 mm I.D.) 1 cm yerleştirilir.
İlk cerrahi kritik adım, SMA'yı ve canülasyon için tanımlanan dalı çevredeki yağ dokusundan temizlemektir (adım 3.5). Bu, kanüllerin doku ve arter arasına yerleştirilmesini önlemeye yardımcı olur, bu yaygın bir hatadır. Ancak, SMA'nın küçük dalı kırılgan ve hasar görmesi kolay olduğu için bu temizleme adımı zordur. Dal yaralanırsa, hayvanı israf etmemek için kanamayı bağ yoluyla durdurmak ve farklı bir proksimal dal seçmek mümkündür.
Kanül içinde hava kabarcığı oluşumunu önlemek ve gaz embolisinden kaçınmak için, kanül dal içine sokulmadan önce ucuna kadar salin ile doldurulmalıdır. Kanülleri yerinde sabitlemek için, cerrahi iplik (4-0 ipek) uygulaması, kateterin etrafındaki damarın doğrudan üstünde, artere yerleştirme noktası ile kanül ucu arasında olmalıdır. Cerrahi düğüm, damarı sabitlemek için yeterince sıkı olmalı, ancak tıkanmak için çok sıkı olmamalıdır (adım 3.12).
Doğru bir kanülasyon sağlamanın en iyi yolu kanülden kan akışını görmektir (adım 3.10). Sorun giderme açısından, bu gerçekleşmezse, aşağıdaki nedenlerden kaynaklanabilir:
kanül artere doğru şekilde sokulmamıştır;
kanül arterin içindedir, ancak düğüm tarafından yanlış bir konumda tıkanır;
kanül atardamarın içindedir ve kanüldeki bir hava kabarcığı akışı yavaşlatır;
kanın içinde bir pıhtı oluştu.
Yanlış bir ekleme, arter ve yağ dokusu arasındaki boşlukta kanül konumlandırmasına bağlı olabilir. Bu durumda yeniden ekleme gereklidir. Damarın üzerindeki düğüm damarı tıkadığında, çok dikkatli bir şekilde çözüp yeniden yapmak mümkündür. Kateterdeki küçük hava kabarcıkları genellikle canülasyondan ödün vermez ve hayatı tehdit etmez; ancak kanülde büyük bir hava kabarcığı varsa, şırındıcı kullanarak kanüle geri çekilmek veya kateteri farklı bir dalda yeniden konumlandırmak gerekir. Genellikle operasyon sırasında arada bir 0,2 mL salin boluses aşılayarak pıhtı oluşumundan kaçınmak ve kanül patentini korumak mümkündür.
Bu çalışmanın bir sınırlaması, kanüllerin daha uzun infüzyon sürelerinde açıklığının eksik bir değerlendirmesidir: burada, metabolik bir kafeste bulunan sıçanlar sırasında 24 saatlik bir infüzyon yapıldı. Daha uzun bir infüzyon süresi elde etmek için, bu çalışmada uygulanmayan pıhtı önleyici tedavinin kullanılması yararlı olabilir. Bununla birlikte, infüzyon sırasında, sıçan metabolik kafeste barındırılmalıdır, çünkü infüzyon sistemini destekleyen tek kişidir. Bu konum, daha uzun süre tedavi edilirse strese sokabilecek hayvan için rahatsız edicidir. Ayrıca, infüzyon için sadece tuzlu su çözeltisi kullanılmıştır, bu nedenle spesifik ilaç kullanımı hakkında sonuç yoktur. Yöntemin bir sınırlaması, kateter için kullanılanın üzerindeki arteriyel dallarda (varsa) demlen imkansızlıktır. Bu nedenle en yakın dalın aorttan yalıttırülmeleri önerilir.
Edebiyatta sınırsız hayvanlar için başka bir sıçan SMA uzun vadeli infüzyon modeli yoktur. Yıllar önce açıklanan IMA kanülasyon modeli ile karşılaştırıldığında4, burada açıklanan teknik daha geniş bir deneysel hedefe sahiptir, çünkü SMA perfüzyon alanında ilaç infüzyonunu sağlar ve kolon ile sınırlı değildir. Son zamanlarda, ilk kez, SMA'nın bir dalının seçici kanülasyonu, bağırsak düz kası üzerindeki etkisini incelemek için doğrudan arteriyel mezenterik bölgede botulinum toksini infüzyonu için kullanıldı10, ancak gelecekte diğer birçok ilaç test edilebilir. Örneğin, antikoagülanlar mezenterik trombozu veya bağırsak mikrobiyotası etkisi olan ilaçları incelemek için aşılanabilir11 ve hatta enflamatuar bağırsak hastalıkları için ilaçlar12. İntra-arteriyel infüzyon özellikle bağırsak metabolizması çalışmaları için yararlıdır, çünkü kan hepatik metabolizmaya maruz kaldığı portal dolaşımdan geçmeden önce ilaç etkisi değerlidir.

Sıçanlarda olduğu gibi insanlarda da üstün mezenterik arter (SMA) abdominal aorttan kaynaklanır ve bağırsağı duodenumdan proksimal enine kolona arteriyel kan ile sağlar. SMA çok sayıda şubeye yol açar.
Kılcal perfüzyondan sonra, mezenterik dolaşım portal damardan karaciğere boşaltılır ve burada sistemik dolaşıma geri alınmadan önce hepatik metabolizmaya tabir edilir. SMA'nın kanülasyonu, bağırsak üzerindeki etkiyi veya en önemlisi karaciğer metabolizmasını ve kimyasal boşluğu değerlendirmek için seçici veya sürekli bir şekilde tanısal amaçlar, terapötik embolizasyon ve ilaç infüzyonu için yararlıdır. İnsanlarda, endovasküler tedavi1 veya selektif ilaç infüzyonu2 için transfemoral veya transaksiller delinme ve kanülasyon gibi çeşitli perkütan yaklaşımlar kullanılarak SMA'nın minimal invaziv radyolojik kateterizasyonu gerçekleştirilir.
Küçük karın damarlarının farklı kanülasyon tekniklerinin literatür raporları vardır: üstün mezenterik damar (SMV)3, alt mezenterik arter (IMA)4, mezenterik lenf kanalı5, hepatik arter6 veya sıçanlarda bağırsak perfüzyonu üzerine ex vivo çalışmaları7 . Venöz tarafa kıyasla, sıçanlarda SMA'nın kanülasyonu, yüksek basıncı koşuluyla aynı anda tromboz ve kanama riskleri nedeniyle çok daha talep edicidir. Özellikle, sıçan cerrahi yatakta anesteziden uyandığında kanülasyonun faaliyette olması durumunda ve deney ameliyattan sonra bir kafeste serbest bir hayvan gerektiriyorsa daha fazla sorun ortaya çıkar.
Yakın tarihli bir makale, anestezi altındaki bir hayvanda SMA kanülasyonunu deneyin bir parçası (kan basıncı ölçümü) olarak tanımlamıştır8. Bununla birlikte, sınırsız bir hayvanda uzun süreli infüzyon için SMA'nın cerrahi kanülasyonunda herhangi bir teknik tanımlanmaz. Bu makalenin amacı, ilaçların mezenterik yatağa en az 24 saat (ve üzeri) seçici infüzyonunu sağlayan proksimal bir dal aracılığıyla SMA'nın uzun süreli kanülasyonu için cerrahi bir tekniği adım adım tanımlamaktır. Sabit ve sağlam bir cannülasyon, kateterin yerleştirildiği damarın kalıcı ligasyonunu ve kapatılmasını gerektirdiğinden, bu teknik bunun yerine kateteri doğrudan SMA9'a sokmaktan kaçınır ve damara, Aorttan SMA'nın kökenine mümkün olduğunca proksimal bir daldan yaklaşır. Proksimal infüzyon, infüze edilen ilacın ana damardan kan akışını kapatmadan mümkün olan en geniş anatomik yatağa ulaşmasını sağlar.
Sıçan SMA cannülasyon tekniğinin birçok uygulaması vardır. Gastrointestinal düzeyde lokal etki elde etmek ve sistemik etkilerden ve hepatik ilaç metabolizmasını önlemek için mezenterik arteriyel bölmede ilaçları seçici olarak uygulamak mümkündür. SMA tarafından konserve sıçan modelinin daha büyük hayvan modellerine göre avantajları vardır: daha ucuzdur, etik olarak kabul edilebilir ve gerçekleştirmek ve öğrenmek daha kolaydır. Fare modelinde fare modeline göre SMA canülasyon ameliyatının yapılması da daha kolaydır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Crile-Wood Needle Holder</td>
			<td>2Biological Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Tip Shape: Straight; Tip Width: 2 mm; Clamping Length: 14 mm; Lock: Yes; Scissors: No; Alloy / Material: Stainless Steel; Length: 15 cm; Serrated: Yes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Graefe Forceps</td>
			<td>2Biological Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Tip Width: 0.5 mm; Tip Dimensions: 0.5 x 0.5 mm; Alloy / Material: Stainless Steel; Length: 10 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer Stub Adapter</td>
			<td>BD Intramedic</td>
			<td></td>
			<td>23 gauge for use with 427410 tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Membrane valve</td>
			<td>Biomed</td>
			<td>Mod 617</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poliurethane Catheter</td>
			<td>ENKI</td>
			<td></td>
			<td>external diameter: 0.4 mm, internal diameter: 0.25 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silastic Catheter Laboratory tubing</td>
			<td>Healthcare industries</td>
			<td>508-002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spring Scissors</td>
			<td>2Biological Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Tip Shape: Angled; Tips: Sharp; Alloy / Material: Stainless Steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Student Surgical Scissors</td>
			<td>2Biological Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Tip Shape: Straight; Alloy / Material: Student Stainless Steel; Serrated: No; Feature: Student Quality</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

targeting the rat's small bowel: long-term infusion into the superior mesenteric artery

Üstün mezenterik arter, femoral veya aksiller arterin minimal invaziv radyolojik kateterizasyonu ile insanlarda kanüle edilebilir. SMA cannülasyonu, küçük anatomik boyutlar nedeniyle sıçanlarda daha zordur. Çalışmanın amacı, sınırsız hayvanlarda SMA vasküler yatağına uzun süreli ilaç infüzyonu yapmak için sıçanlarda SMA'nın kanülasyonu için cerrahi bir teknik tanımlamaktır, bu da 24 saat boyunca cerrahi iyileşme sonrası yüksek oranda kateter açıklığı ile sonuçlanacaktır. 
SMA trombozu veya kanama riskini doğrudan erişimden önlemek için, SMA'nın proksimal bir dalı izole edilir, distal olarak liglenir ve ucu aorttan SMA'nın kökenine yakın ilerlemiş 0,25 mm poliüretan kılcal tüp ile kanüle edilir. Daha sonra kanol, yapay bir kapak aracılığıyla hayvanın boynunun arkasına ve deriden deri altından tünellendirilir. Kanüllerin dış kısmı yarı sert bir destek sistemine yerleştirilir ve sıçanın hareket etmek için serbest olduğu kafesin dışındaki sürekli infüzyon pompasına bağlanır. 
Ameliyat sonrası anjiyografi ve otopsi bulguları ile külüllerin doğru konumlandırılması gösterildi. SMA bölgesine 24 saatlik tuzlu infüzyondan sonra kateter açıklığı, çoğu sıçanda pompanın toplam deşarjı ve kan örneklemesi veya salin infüzyonu için fonksiyonel bir kanül tanınması ile güvence altına alınmıştır.

Bu çalışmada prosedür 15 sıçan üzerinde gerçeklenmiştir. 24 saatlik salin infüzyonu sonunda metabolik kafeslerde salin veya kan kaybı belirtisi görülmedi ve kafesler gibi tüm hayvanlarda karın yarası temiz çıktı.
Normal kafeslerde, sıçanlar günlük ağırlık ve su / gıda alımının izlenmesi ile 5 gün boyunca gözlendi. Bu dönemde, brüt muayenede hayvanların genel durumu davranışsal anormallik belirtisi olmadan iyiydi. Ameliyattan hemen sonra tüm sıçanlar tekrar beslenmeye başladı. Ortalama günlük gıda ve su alımı, sırasıyla Şekil 3A ve 3B'de gösterildiği gibi 3 gün sonra normale kadar artmıştır. Şekil 3C'de, kilo alımının düzenli olduğunu, gözlem süresinin sonuna kadar kademeli olarak arttığını görmek mümkündür. Bağırsak hareketlerinde herhangi bir değişiklik gerçekleşmedi ve günlük dışkı ve idrar çıkışı normaldi.
24 saat sonra, sadece 50 mL salin çözeltisi ile dolu 2 pompada tuzlu su kalıntısı (sırasıyla 40 mL ve 20 mL) bulunurken, diğerleri (%86,7) boştu. Ayrıca, bu infüzyon döneminden sonra, 12 kanül (%80) hem kan örneklemesi hem de salin infüzyonu (5 mL) için hala işlevselken, 3 kanül artık patentli değildi (bunlardan 2'si kalıntılı pompalara bağlı kanüllerdi) (Tablo 1).
Nekropside kanüllerin %100'ü (n=15) hala SMA branşında bulunuyordu ve hiçbir sıçanda bağırsak iskemisi (Şekil 4B) veya intrabdominal kanama belirtisi yoktu. Tıkalı 3 dinyak, SMA dalına yerleştirmeden sırasıyla 0,5 cm, 1 cm ve 1,5 cm'de bükülmüş olarak bulundu. Bu fenomen muhtemelen hayvanların kafeslerdeki hareketlerinden kaynaklanmaktadır.
5 sıçanda, işlemden hemen sonra ve pompa bağlantısından önce, görüntü yoğunlaştırıcı yoluyla anjiyografi elde etmek için mezenterik kanın içine 2 mL iyodinat kontrast ortamı enjekte edildi (anjiyografi intraoperatif olarak yapıldı). Her sıçanda (n=5), Şekil 4A'da gösterildiği gibi karın içine yayılan kontrast ortamı olmadan mezenterik arteriyel daireyi ve SMA'yı ve ana dallarını görmek possibile idi. Bu, canüllerin iyi yerleştirildidiğini ve SMA'nın dalına sabitlendiğini doğruladı.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60787/60787fig01.jpg"> Şekil 1: Deneysel fotoğraflar. (A) Bir gazlı bez üzerindeki doğal eğilimini takip eden ince bağırsak (SMA'yı tüm dallarla görselleştirmek mümkündür); (B) Canül'ün SMA dalına yerleştirilmesi operatörü. Tüpün yerleştirilmesini garanti etmek için kabın altında sağlam bir desteğe sahip olmak gerekir. Distal ipek dikiş damarı kapatır ve proksimal olan kateteri dalın içine sabitler. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60787/60787fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60787/60787fig02.jpg"> Şekil 2: infüzyon destek sistemi. (A) Deri altından tünellendikten sonra, kanon boynun arka bölgesinden beyaz kapakçıktan çıkar; (B) Beyaz vanayı stabilize etmek için ceket giyen bir sıçan. Çelik bir çubuk infüzyon sırasında kateteri korur. (C) Çelik çubuktan çıkan kanüle bağlı elastomerik bir pompa ile salin infüzyonu sırasında metabolik bir kafeste bulunan bir sıçanın diyagramsal gösterimi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60787/60787fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60787/60787fig03.jpg"> Şekil 3: 5 günlük gözlem süresinde sıçanların gıda alımı, su alımı ve kilo alımı için temsili veriler (n=15). Ortalama günlük gıda (A) ve su (B) alımı giderek artar ve 3 gün sonra fizyolojik seviyelerde stabilize olur. Ortalama kilo alımı (C) gözlem süresinin sonuna kadar kademeli olarak artar. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60787/60787fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60787/60787fig04.jpg"> Şekil 4: (A) kanülden kontrast infüzyondan sonra mezenterik arteriyel bölgenin kontrast anjiyografisinin fotoğrafları (yeterli şekilde yerleştirilmiş kanül kanıtı) ve (B) kanül otopsi sırasında hala iyi konumlandırılmış. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60787/60787fig04large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="2">Elastomerik pompa</td>
			<td colspan="2">Kanül</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Boş</td>
			<td>Kalıntılarla</td>
			<td>Patent</td>
			<td>Patent Değil</td>
		</tr>
<tr>
<td>n=15</td>
			<td>13</td>
			<td>2</td>
			<td>12</td>
			<td>3</td>
		</tr>
<tr>
<td>%</td>
			<td>86.7</td>
			<td>13.3</td>
			<td>80</td>
			<td>20</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: Elastomerik pompa deşarjı ve 24 saatlik tuzlu infüzyondan sonra kanül açıklığı. Patency, şırınçla kan çekilerek ve kanülde 5 mL salin aşılanarak test edildi.

Watch this Scientific Journal Video about Targeting the Rat's Small Bowel: Long-Term Infusion into the Superior Mesenteric Artery at JoVE.com

Targeting the Rat's Small Bowel: Long-Term Infusion into the Superior Mesenteric Artery

Sıçanların üstün mezenterik arterinde (SMA) uzun süreli infüzyona erişim, SMA'nın proksimal bir dalının kanülasyonundan oluşan cerrahi bir işlemdir. Kanolün karın yarasından çıkar ve deri altı boşluğundan kesitler arası kıvrıma kadar tünellanır.

Sıçanın İnce Bağırsaklarını Hedeflemek: Üstün Mezenterik Artere Uzun Süreli infüzyon

The superior mesenteric artery can be cannulated in humans through minimally invasive radiological catheterization of the femoral or axillary artery. SMA ...

Sıçanda üstün mezenterik arter kanülasyonu zordur ve genellikle deneysel bir model olarak kullanılmaz. Bu teknik fonksiyonel bir kanülasyon yapmayı mümkün kılmak ve intra-arteriyel ilaçların ilk geçiş etkileri ile bir deney alanı açar. Bu yöntem, üstün mezenterik arterin kanülasyonuna rıza gösterirken kanama ve trombozu önler.Ve yiyebilen ve hareket edebilen nispeten serbest bir hayvanda uzun süreli ilaç infüzyonunu sağlar. Bağırsak üzerinde aktif olan ilaçlar üzerinde yapılan farmakolojik araştırmalar bu teknikten büyük ölçüde yararlanabilir. İlacın doğrudan tek bir geçişinin etkisini incelemek için alternatif yoktur.Daha büyük bir canül keserek başlayın. Daha sonra daha küçük bir canül kesin ve daha büyük bir canül içine bir santimetre yerleştirin. İki cannulayı siyanoakrilat tutkal ile birlikte sabitleyerek lümenin tıkanması önlenir.Daha sonra, daha büyük canülün serbest ekstremitesini, tuzlu su çözeltisi ile dolu bir mililitre şırıng üzerine monte edilmiş bir luer saplama adaptörüne bağlayın. Kateterin üstün mezenterik arterin dalına yerleştirilmesini kolaylaştırmak için küçük kanülün serbest ucunu makasla keskinleştirin. Salin çözeltisi ile yıkanarak canül açıklığını kontrol edin.Kürkü, üstün mezenterik arter veya SMA kanülasyonun dalı için karın ve kanül çıkışı için boynun arkası da dahil olmak üzere anestezi edilmiş sıçanın cerrahi bölgelerinden tıraş edin. Cerrahi bölgeleri aseptik olarak temizleyin. Ve hayvanı dört uzvu hareketsiz hale getirecek bir destek pozisyonuna getirin.Mezo gastrik bölgenin orta hattında düz üç santimetrelik bir kesi ile karın duvarını peritonun içine tüm karın düzlemlerinden açmak için bir neşter bıçağı kullanın. Laparotomi kesisinin etrafına tuzlu su çözeltisi ile ıslatılmış gazlı bezleri, cerrahi kesiyi açık tutmak için dikişler kullanarak yerleştirin. İnce bağırsağı tanımlamak ve açığa çıkarmak için pamuklu çubuklar kullanın ve mezentery'yi laparotomi kesiminden çıkarın ve gazlı bezlerin üzerine aşağı doğru yatırın.Titreşim hissederek SMA'yı tanımlayın. Pamuklu çubuklar kullanarak, mezenterik yağı ayırın ve SMA'yı ve proksimal dallarından iki ila üçünü ortaya çıkarın. SMA'nın, canülasyonun cerrahi manevralarına izin vermek için yeterince büyük bir proksimal dalını seçin.Dikiş uçlarını daha sonra manipüle edilecek kadar uzun süre tutarak genişlemesine izin vermek için bu dalı kökeninden üç ila dört santimetre aşağı bağlayın. SMA'nın dalının altına sert bir destek yerleştirin ve daha küçük canülün ekstremitesini tokmaklar kullanarak tutun, ardından kabı germek ve kateterin girişini kolaylaştırmak için dikiş uçlarını diğer elinizle çekin. Kanül ucunu damar düzleminden kan akışının karşısındaki yönde 20 derecelik bir açıyla tutun.Daha sonra arter duvarına nüfuz etmek ve kanülleri yerleştirmek için ucu hafifçe bastırın. Kanüllerin SMA'dan gelen kökene yakın arteriyel dalda bir santimetre takılmasına devam edin. Kanülü cerrahi bir düğümle artere sabitlayın ve bir mililitre steril salin çözeltisini yıkayarak veya kan örneklemesi yaparak doğru çalışmasını doğrulayın.Boynun arka bölgesinde bir santimetrelik bir kesi yapın ve küresel bir valfi barındırın. Daha sonra laparotomi erişiminden elde edilen akülleri boyun altı dokulardan geçirin ve hava girişini önlemek için bir kateter tıkacı ile damarın distal ekstremitesini kapatın. Karın boşluğundaki küçük kapakçığı değiştirin ve karın duvarını kapatın.Daha sonra valfi dikişlerle bir sonraki cilde sabitleyin. Düğme vanasını korumak için sıçanı bir ceketle giydirin. Kanüllerin açıkta kalan kısmını infüzyon sırasında çelik bir çubukla koruyun ve valflere sabitleyin.Kanülün distal ekstremitesini 50 mililitre steril salin çözeltisi ile dolu elastomerik bir pompaya bağlayın ve 24 saat boyunca infüzyonla devam edin. İnfüzyondan sonra, pompayı, ceketi, çelik çubuğu ve vanayı sıçandan çıkararak hayvanın dış infüzyon sistemini sökün. Yara dikişi sonrası ekstremiteyi boyun derisinin altında bırakarak, kavuğu boyundan çıkarken kapatın ve kesin.Bu çalışmada, 15 sıçan bu prosedüre tabi tutuldu ve ortalama günlük yiyecek ve su alımı üç gün sonra normale kadar kademeli olarak arttı. Kilo alımı da düzenliydi ve gözlem süresinin sonuna kadar giderek artıyordu. 24 saat sonra, sadece iki balon pompasında tuzlu su kalıntısı vardı, diğer 13'ü ise tamamen boştu.Ayrıca, infüzyon döneminden sonra, 12 kanül hem kan örneklemesi hem de tuzlu infüzyon için hala işlevselken, üç kanül artık patentli değildi. Nekropside, canüllerin% 100'ü SMA şubesinde bulundu. Ve hiçbir sıçanda bağırsak iskemisi veya intraabdominal kanama belirtisi yoktu.Mezenterik kanın içine iodonat kontrast ortamı enjekte ederek beş sıçanda anjiyografi elde edildi. Mezenterik arteriyel daire, özellikle SMA ve ana dalları, karın içine yayılan kontrast ortamı olmadan gözlendi ve kanüllerin iyi yerleştirildi ve SMA'nın dalına sabitlendiğini doğruladı. Patent, damarın altındaki dikişi geçen damarın aşağı doğru bağını yalıtmak için dalın titizlikle ıssızlaşması ve damarı delmek ve yerleştirmek için en uygun pozisyonu seçmek bu protokolün en önemli yönleridir.Hatalar düzeltilemez.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Experimental Investigation of Secondary Flow Structures Downstream of a Model Type IV Stent Failure in a 180&#176; Curved Artery Test Section

Experimental Investigation of Secondary Flow Structures Downstream of a Model Type IV Stent Failure in a 180Ãƒâ€šÃ‚Â° Curved Artery Test Section

180 ° Kavisli Arter Testi Bölüm Model Tip IV Stent Başarısızlık Mansap İkincil Akış Yapıların Deneysel İncelenmesi

The arterial network in the human vasculature comprises of ubiquitously present blood vessels with complex geometries (branches, curvatures and ...

Long-term Intravital Immunofluorescence Imaging of Tissue Matrix Components with Epifluorescence and Two-photon Microscopy

Epifluoresan ile Doku Matrix Bileşenler ve İki foton Mikroskopi uzun vadeli Intravital İmmünofloresan Görüntüleme

Besides being a physical scaffold to maintain tissue morphology, the extracellular matrix (ECM) is actively involved in regulating cell and tissue ...

The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture

Çok organ Chip - Uzun vadeli Çok doku kokültürü için mikroakışkan Platformu

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need ...

Solid Lipid Nanoparticles (SLNs) for Intracellular Targeting Applications

Solid Lipid Nanoparticles SLNs for Intracellular Targeting Applications

Katı Lipit nanopartiküller (SLNs) Hücre içi Hedefleme için başvurular

Nanoparticle-based delivery vehicles have shown great promise for intracellular targeting applications, providing a mechanism to specifically alter ...

Delivery of Proteins, Peptides or Cell-impermeable Small Molecules into Live Cells by Incubation with the Endosomolytic Reagent dfTAT

Endosomolitik Reaktif dfTAT ile kuluçkaya yatırılması ile Canlı hücreler içine proteinler, peptitler ya da hücre-geçirgen olmayan küçük moleküller teslimi

Macromolecular delivery strategies typically utilize the endocytic pathway as a route of cellular entry. However, endosomal entrapment severely limits the ...

A Rapid and Quantitative Fluorimetric Method for Protein-Targeting Small Molecule Drug Screening

Protein-Hedefleme Küçük Molekül İlaç Tarama için hızlı ve Nicel florimetrik Yöntemi

We demonstrate a new drug screening method for determining the binding affinity of small drug molecules to a target protein by forming fluorescent gold ...

Long-term Live Imaging Device for Improved Experimental Manipulation of Zebrafish Larvae

Zebra balığı larva geliştirilmiş deneysel manipülasyon için uzun vadeli canlı görüntüleme aygıtı

The zebrafish larva is an important model organism for both developmental biology and wound healing. Further, the zebrafish larva is a valuable system for ...

Protocol for MicroRNA Transfer into Adult Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells to Enable Cell Engineering Combined with Magnetic Targeting

Yetişkin kemik iliği türevi hematopoetik kök hücre mühendislik manyetik hedefleme ile kombine etkinleştirmek için hücre içine mikroRNA Transfer için iletişim kuralı

While CD133+ hematopoietic stem cells (SCs) have been proven to provide high potential in the field of regenerative medicine, their low retention rates ...

Screening and Identification of Small Peptides Targeting Fibroblast Growth Factor Receptor2 using a Phage Display Peptide Library

Faj Görüntüleme Peptid Kütüphanesi Kullanılarak Fibroblast Büyüme Faktörü Reseptörü 2'yi Hedefleyen Küçük Peptidlerin Taranması ve Tanımlanması

The human Fibroblast Growth Factor Receptor (FGFR) family comprises four members, namely, FGFR1, FGFR2, FGFR3, and FGFR4, that are involved in various ...

Automated Counterflow Centrifugal System for Small-Scale Cell Processing

Küçük Ölçekli Hücre İşleme için Otomatik Karşı Akım Santrifüj Sistemi

Successful commercialization of gene and cell-based therapies requires manufacturing processes that are cost-effective and scalable. Buffer exchange and ...