Name: an intravital microscopy-based approach to assess intestinal permeability and epithelial cell shedding performance
Uploaded: 2020-12-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Intravital Microscopy-Based Approach to Assess Intestinal Permeability and Epithelial Cell Shedding Performance at JoVE.com

A pesquisa que levou a esses resultados recebeu financiamento do Programa Pessoas (Ações Marie Curie) sob o acordo de subvenção DA REA nº 302170 do Sétimo Programa-Quadro da União Europeia (FP7/2007-2013); o Centro Interdisciplinar de Pesquisa Clínica (IZKF) da Universidade Erlangen-Nuremberg; o Centro de Pesquisa Colaborativa TRR241 e o Grupo de Pesquisa Clínica KFO257 do Conselho Alemão de Pesquisa (DFG); e o DFG.

O seguinte protocolo foi aprovado pelas autoridades locais relevantes em Erlangen (Regierung von Unterfranken, Würzburg, Alemanha). Os camundongos foram alojados em condições específicas sem patógenos.
NOTA: A inibição da prenilação mediada por GGTase dentro dos IECs causa uma alteração severa da permeabilidade intestinal em camundongos Pggt1biΔIEC 24. Portanto, este modelo de mouse foi usado para demonstrar como o protocolo pode ser úti...

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	<li>Buhner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+basis+for+increased+intestinal+permeability+in+families+with+Crohn's+disease:+role+of+CARD15+3020insC+mutation?.">Genetic basis for increased intestinal permeability in families with Crohn's disease: role of CARD15 3020insC mutation?.</a> Gut. 55 (3), 342-347 (2006).</li><li>Pastorelli, L., De Salvo, C., Mercado, J. R., Vecchi, M., Pizarro, T. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+barrier+function+in+vivo+is+sustained+despite+gaps+in+epithelial+layers.">Epithelial barrier function in vivo is sustained despite gaps in epithelial layers.</a> Gastroenterology. 129 (3), 902-912 (2005).</li><li>Haep, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon+Gamma+Counteracts+the+Angiogenic+Switch+and+Induces+Vascular+Permeability+in+Dextran+Sulfate+Sodium+Colitis+in+Mice.">Interferon Gamma Counteracts the Angiogenic Switch and Induces Vascular Permeability in Dextran Sulfate Sodium Colitis in Mice.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 21 (10), 2360-2371 (2015).</li><li>Lopez-Posadas, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibiting+PGGT1B+Disrupts+Function+of+RHOA,+Resulting+in+T-cell+Expression+of+Integrin+alpha4beta7+and+Development+of+Colitis+in+Mice.">Inhibiting PGGT1B Disrupts Function of RHOA, Resulting in T-cell Expression of Integrin alpha4beta7 and Development of Colitis in Mice.</a> Gastroenterology. , (2019).</li><li>Fischer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effects+of+alpha4beta7+and+GPR15+on+homing+of+effector+and+regulatory+T+cells+from+patients+with+UC+to+the+inflamed+gut+in+vivo.">Differential effects of alpha4beta7 and GPR15 on homing of effector and regulatory T cells from patients with UC to the inflamed gut in vivo.</a> Gut. 65 (10), 1642-1664 (2016).</li></ol>

Embora tecnicamente desafiadora, a metodologia baseada em microscopia intravital representa uma abordagem experimental única para visualizar o processo celular altamente dinâmico em tempo real, como o desempenho de derramamento de células. Até agora, não há uma abordagem experimental alternativa para visualizar a extrusão celular in vivo. Acreditamos que este protocolo pode contribuir para a descrição de diversos processos celulares desempenhando um papel na manutenção da homeostase intestinal.
<p class="j...

O intestino é um órgão altamente especializado com uma função fortemente regulamentada que permite processos conflitantes, ou seja, nutrição e proteção contra substâncias luminais nocivas. Forro entre o corpo humano e o ambiente, o epitélio intestinal atua como uma barreira física e imunológica e contribui para a manutenção da homeostase mucosa no intestino1,,2. A perda de integridade epitelial e o aumento da permeabilidade da junção apertada é bem conhecido por estar associado à Doença Inflamatória Intestinal (DII)3,,4,,5,6. Alterações epiteliais são então consideradas como causas e amplificadores secundários para inflamação intestinal crônica no DII. Assim, uma melhor compreensão das alterações epiteliais precoces no intestino dos pacientes com IBD seria de imenso valor para o desenvolvimento de novas estratégias para restaurar a integridade epitelial para previsão confiável e posterior prevenção de recaídas do IBD.
O epitélio intestinal segue um processo de rotatividade complexo e bem regulado. A partir do fundo da cripta, as células epiteliais intestinais (IECs) terminantemente diferenciadas derivadas de células-tronco pluripotentes migram para cima para a ponta villus, onde células envelhecidas/danificadas são derramadas no lúmen7. O equilíbrio entre divisão e extrusão celular permite a manutenção dos números de células epiteliais intestinais, evitando a formação de lacunas e vazamentos, bem como o acúmulo de células epiteliais potencialmente levando a massas celulares e tumorigênese8,,9,,10. Apesar do papel fundamental do derramamento de células epiteliais na renovação fisiológica do epitélio intestinal, o conhecimento sobre os mecanismos moleculares que conduzem a extrusão das células na ponta villus é limitado. Assim, há a necessidade de pesquisas básicas fornecendo uma descrição precisa da sequência de eventos moleculares envolvidos no derramamento de células epiteliais.
Interações complexas entre diferentes tipos de células dentro da mucosa intestinal são fundamentais para entender os mecanismos moleculares que regulam a rotatividade epitelial e a homeostase intestinal. Assim, estudos in vivo oferecem altas vantagens sobre abordagens in vitro e ex vivo nesse contexto. Além disso, as técnicas de imagem em tempo real permitem a descrição da sequência de eventos que controlam fenômenos específicos. Nesse contexto, o estudo de processos altamente dinâmicos exige o uso de técnicas otimizadas de alta resolução para a observação direta do tecido. As técnicas de imagem intravital aparecem como ferramentas únicas e adequadas para o estudo do derramamento de células epiteliais no intestino.
O termo "microscopia intravital" refere-se a abordagens experimentais que aproveitam técnicas de imagem de alta resolução (microscopia multifotícola ou confocal) para visualizar diretamente células e tecidos em seus ambientes nativos dentro de um animal vivo11. Permite a aquisição em tempo real de informações in vivo até a resolução unicelular, e implica vantagens claras sobre métodos estáticos ou de baixa resolução. A microscopia intravital fornece informações complementares e supera algumas limitações de técnicas clássicas e/ou high-end, como artefatos devido ao processamento de tecidos. Em contrapartida, a principal limitação da microscopia intravital é que o tecido deve ser diretamente exposto ao microscópio, que na maioria dos casos requer cirurgia. Embora abordagens sofisticadas preservem a vitalidade e minimizem o impacto do tecido imageado (câmaras de dobras cutâneas e janelas de imagem)12,13, na maioria dos casos é realizada uma simples incisão cutânea para a externalização do tecido (retalhos de pele)14. Na última década, essas abordagens contribuíram com evidências fundamentais sobre processos altamente dinâmicos, antes inescrutáveis. Traduzindo, a imagem em tempo real forneceu novas percepções biológicas sobre células-tronco e leucócitos15,bem como a disseminação do câncer e a formação de metástases13,16. No contexto clínico, a endomicroscopia é atualmente explorada como ferramenta diagnóstica de câncer17 e doenças gastrointestinais, como o IBD18,19; enquanto a microscopia confocal mosaico tornou-se uma ferramenta de patologia rápida durante a cirurgia20. Juntas, a microscopia intravital tem emergido recentemente como uma ferramenta valiosa e versátil para pesquisa biomédica e futura aplicação na clínica.
A microscopia intravital está aqui implementada para visualização em tempo real de vazamento epitelial intestinal e observação de eventos de derramamento de células epiteliais. O vazamento da permeabilidade intestinal pode ser identificado por outras técnicas in vivo não invasivas, como a quantificação da administração oral de rastreadores fluorescentes no soro21. No entanto, essa técnica não permite a observação direta do desempenho de derramamento nem a segregação entre permeabilidade para-e transcelular. A combinação de experimentos de rastreador padrão e microscopia intravital representa uma abordagem adequada para: i) identificar distúrbios na permeabilidade intestinal, e ii) segregar entre permeabilidade epitelial para e transcelular. Além do derramamento de células, a microscopia intravital em combinação com a rotulagem de fluorescência in vivo permite o estudo de outros mecanismos celulares e moleculares (por exemplo, redistribuição de junção apertada durante o derramamento de células usando camundongos repórteres fluorescentes22 ou interações entre IECs e outras células dentro da mucosa intestinal23).
O método aqui apresentado representa uma adaptação da microscopia intravital para permitir a observação em tempo real da mucosa intestinal, utilizando microscopia de escaneamento a laser confocal (CLSM). Portanto, usamos camundongos eliminatórios condicionais de GGTase (Geranylgeranyltransferase) em células epiteliais intestinais (IECs) em(camundongos Pggt1biΔIEC), uma vez que sofrem de uma doença intestinal grave e aumento da permeabilidade epitelial24. São descritas a preparação cirúrgica do camundongo e a coloração da mucosa intestinal, bem como as configurações adequadas utilizadas para aquisição de imagens e análise pós-aquisição. Este protocolo poderia permitir estudos futuros contribuindo para o conhecimento atual sobre dinâmica e cinética do derramamento de células epiteliais intestinais. Além disso, o protocolo poderia servir de base para várias adaptações para estudar outros fenômenos que ocorrem na superfície da mucosa intestinal, e até mesmo em outros tecidos.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acriflavine hydrochloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A8251</td>
			<td>1 mg/mL solution in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deltaphase isothermal pad</td>
			<td>BrainTree</td>
			<td>B-DP-PAD</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gemini Cautery System</td>
			<td>BrainTree</td>
			<td>B-GEM-5917</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin</td>
			<td>WDT</td>
			<td>9089.01.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS X</td>
			<td>Leica</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM microscope SP8</td>
			<td>Leica</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Biochrom</td>
			<td>L182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhodamine B dextran</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>D1824</td>
			<td>10,000 kDa MW; 2 mg/mL solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard forceps (Dumont SS)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11203-23</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight fine scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14060-10</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T5648</td>
			<td>50 mg/mL in ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazin</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>1320422</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an intravital microscopy-based approach to assess intestinal permeability and epithelial cell shedding performance

A microscopia intravital do intestino usando imagens confocal permite a observação em tempo real do derramamento de células epiteliais e vazamento de barreira em animais vivos. Portanto, a mucosa intestinal de camundongos anestesiados é topicamente manchada com coloração inespecífica (acriflavine) e um rastreador fluorescente (dextran rhodamine-B), montado em uma placa salina lavada e diretamente imageado usando um microscópio confocal. Esta técnica pode complementar outras técnicas não invasivas para identificar vazamento de permeabilidade intestinal, como a passagem transmucosal de rastreadores administrados oralmente. Além disso, a abordagem aqui apresentada permite a observação direta dos eventos de derramamento de células em tempo real. Em combinação com camundongos repórteres fluorescentes apropriados, esta abordagem é adequada para lançar luz em mecanismos celulares e moleculares que controlam a extrusão de células epiteliais intestinais, bem como para outros processos biológicos. Nas últimas décadas, estudos interessantes utilizando microscopia intravital contribuíram para o conhecimento sobre permeabilidade endotelial, homing intestinal de células imunes, comunicação imuno-epitelial e invasão de componentes luminosos, entre outros. Juntos, o protocolo aqui apresentado não só ajudaria a aumentar a compreensão dos mecanismos que controlam a extrusão de células epiteliais, mas também poderia ser a base para o desenvolvimento de outras abordagens a serem utilizadas como instrumentos para visualizar outros processos celulares altamente dinâmicos, mesmo em outros tecidos. Entre as limitações técnicas, as propriedades ópticas do tecido específico, bem como a configuração selecionada da tecnologia de imagem e microscópio, por sua vez, determinariam a distância de trabalho de imagem e a resolução de imagens adquiridas.

O protocolo aqui apresentado descreve uma abordagem baseada em microscopia intravital para visualizar o vazamento epitelial intestinal e observar o desempenho de derramamento de células no intestino em tempo real. Resumidamente, os camundongos são anestesiados e submetidos à preparação cirúrgica a fim de expor a superfície da mucosa do intestino delgado. Os IECs são então manchados através da aplicação tópica de acriflavina; enquanto a rhodamina luminal B-dextran é usada com...

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An Intravital Microscopy-Based Approach to Assess Intestinal Permeability and Epithelial Cell Shedding Performance

Aproveitando a microscopia intravital, o método aqui apresentado permite a visualização em tempo real do derramamento de células epiteliais intestinais em animais vivos. Portanto, a mucosa intestinal topicamente manchada (acriflavina e rhodamineB-dextran) de camundongos anesthetizados é imageda até a resolução unicelular usando microscopia confocal.

Uma abordagem baseada em microscopia intravital para avaliar a permeabilidade intestinal e o desempenho do derramamento de células epiteliais

Intravital microscopy of the gut using confocal imaging allows real time observation of epithelial cell shedding and barrier leakage in living animals. ...

Utilizando microscopia intravital, este protocolo permite a visualização em tempo real do tecido intestinal até uma resolução unicelular e o estudo de processos altamente dinâmicos, como o derramamento de células. Em combinação com os experimentos de rastreador padrão, este protocolo permite a identificação de ambos os distúrbios de permeabilidade intestinal in vivo e a distinção entre permeabilidade para e transcelular. Este protocolo poderia ser usado como base para o desenvolvimento de abordagens adicionais de microscopia intravital para visualizar outros processos celulares altamente dinâmicos de interesses dentro de vários tecidos.A demonstração visual desse método é essencial para compreender as etapas de preparação cirúrgica e posicionar o animal vivo de forma a facilitar a aquisição de imagens na superfície mucosa intestinal. Antes de iniciar o procedimento, ligue a caixa base e o scanner de um microscópio de varredura a laser confocal e pressione comece a ligar o computador. Inicie o software de aquisição de imagens e selecione a configuração apropriada.Para definir a resolução de imagem apropriada, selecione configuração, hardware, resolução, profundidade de bits e 12. No menu de aquisição, selecione XYZT para o modo de aquisição de imagens e defina o objetivo para 20 ou 40X. Para configurar a configuração de aquisição sequencial, clique em procurar e adicionar e selecionar entre quadros.Para configurar a sequência um, ligue a caixa de laser visível. Coloque o tubo fotomultiplier um para cima e defina o comprimento de onda de emissão. Para configurar a sequência dois, ligue a caixa de laser visível.Ajuste o tubo fotomultiplier dois para cima e defina o comprimento de onda de emissão. Em seguida, ative os lasers apropriados. Após confirmar a falta de resposta ao dedo do pé, use um broto de algodão para aplicar pomada aos olhos do rato anestesiado e fazer uma incisão de um centímetro na região do ventrículo esquerdo do abdômen.Use fórceps para exteriorizar um segmento de três a cinco centímetros do intestino. Faça duas pequenas incisões na parte superior e inferior do segmento intestinal e introduza uma micropipette de vidro no lúmen intestinal. Em seguida, use a eletrocauterização para abrir o segmento intestinal exteriorizado longitudinalmente ao longo do lado anti-mesentérico e expor a mucosa.Enxágüe o tecido brevemente com solução salina para remover o conteúdo fecal. Para coloração da superfície da mucosa intestinal, aplique 100 microliters de um miligrama por mililitro de solução acriflavina em gotículas na superfície mucosa exposta e permita que a mancha se desenvolva por três minutos antes de lavar a solução restante com PBS. Em seguida, aplique 100 microliters de uma solução de dextran de rhodamina dextran de dois mililitros em gotículas na mucosa para incubação de três minutos antes de lavar com PBS.Em seguida, coloque o supino do rato anestesiado em um slide de cobertura montado na câmara enxaguada com 37 graus Celsius salino, ajustando a posição, se necessário, e coloque a preparação no estágio do microscópio invertido. Imediatamente após colocar o mouse no palco, ligue a fonte de luz e ajuste a posição XY até que o eixo de iluminação esteja focado na preparação do tecido. Para selecionar o campo de visão, selecione o cubo de filtro apropriado.Abra o obturador e use as macro e micro rodas para se concentrar na superfície da mucosa intestinal. Ajuste a posição XY para localizar uma área na qual vários villi podem ser visualizados dentro do campo de visão e alterar o cubo do filtro para verificar se a coloração do dextran de rhodamina também é visível nessa área. Quando uma área de interesse for identificada, inicie a aquisição da imagem e selecione a sequência uma para ajustar a potência do laser, ganho e deslocamento para a sequência um.Em seguida, selecione a sequência dois e ajuste a potência do laser, ganhe e compense para a sequência dois. Para definir a faixa de pilha Z, abra o menu de entrega da pilha Z. Use o controle de acesso Z para se concentrar na superfície da mucosa e clique em começar.Concentre-se no limite inferior de onde o sinal ainda é detectável e clique no final. Defina os números de pilhas Z, evitando lapsos de tempo por mais de dois minutos por dois pontos de tempo consecutivos e abra o menu de tempo para selecionar minimizar e adquirir até parar. Para definir a média da linha, selecione procurar um, linha média dois, buscar dois e linha média dois.Em seguida, para adquirir imagens, defina o formato para 1024 x 1024 pixels e a velocidade para 400 e clique em iniciar. Camundongos condicionais deficientes epiteliais específicos das células epiteliais desenvolveram patologia intestinal grave, como demonstrado pelo aumento do escore de dano histológico do intestino delgado e aumento da permeabilidade epitelial intestinal também pode ser detectado através de rastreador em experimentos in vivo usando FITC-dextran administrado oralmente. Eventos de derramamento de células poderiam ser identificados como células que saem da monocamada epitelial para o lúmen, levando a lacunas temporárias no teto do epitélio que são finalmente fechadas pelo contato entre as células vizinhas, um chamado efeito zíper.Essas lacunas são observadas tanto no controle quanto em camundongos deficientes GGTase, embora a frequência desse fenômeno seja maior neste último. Curiosamente, outras células também parecem captar o Dextran. Esses chamados eventos celulares permeáveis também ocorrem principalmente em camundongos eliminatórios condicional.A imunossuagem de proteínas de interesse relacionadas ao citoesqueleto e a junção apertada pode ser realizada para identificar alvos específicos que contribuem para possíveis interrupções epiteliais de permeabilidade determinadas através de microscopia intravital. Este método pode ser utilizado para a análise de outros fenômenos na superfície da mucosa intestinal, como vazamento endotelial ou comunicação epitelial imune no contexto da infecção intestinal.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Methods to Assess Beta Cell Death Mediated by Cytotoxic T Lymphocytes

Métodos para avaliar Mediated Beta Morte celular por linfócitos T citotóxicos

Type 1 diabetes (T1D) is a T cell mediated autoimmune disease.  During the pathogenesis, patients become progressively more insulinopenic as 
insulin ...

Imunologia e Infecção

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Aplicação de um rato ligado patch Peyer Assay alça intestinal para avaliar absorção pelas células bacterianas M

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

PRP as a New Approach to Prevent Infection: Preparation and In vitro Antimicrobial Properties of PRP

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PRP como uma nova abordagem para prevenir a infecção: Preparação e<em&gt; In vitro</em&gt; Propriedades antimicrobianas do PRP

Implant-associated infection is becoming more and more challenging to the healthcare industry worldwide due to increasing antibiotic resistance, ...

A Microplate Assay to Assess Chemical Effects on RBL-2H3 Mast Cell Degranulation: Effects of Triclosan without Use of an Organic Solvent

Um Ensaio de microplacas para avaliar os efeitos químicos de RBL-2H3 degranulação dos mastócitos: Efeitos do Triclosan, sem utilização de solventes orgânicos

Mast cells play important roles in allergic disease and immune defense against parasites. Once activated (e.g. by an allergen), they degranulate, a ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

In vitro Ensaio de cocultura para avaliar migração trans epitelial de neutrófilo induzida por patógenos

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Development of an IFN-&#947; ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

Development of an IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

Desenvolvimento de uma varicela-zoster imunidade mediada por células específicas do vírus ELISpot Ensaio para Avaliar-γ IFN Após Cordão Umbilical Transplante de Sangue

Varicella zoster virus (VZV) is a significant cause of morbidity and mortality following umbilical cord blood transplantation (UCBT). For this reason, ...

A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors

Uma abordagem simples e eficiente para construir vectores de vírus mutante Vaccinia

The CRISPR-associated endonuclease Cas9 can edit particular genomic loci directed by a single guide RNA (gRNA). The CRISPR/Cas9 system has been ...

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or A. baumannii

A Robust Pneumonia Model in Immunocompetent Rodents to Evaluate Antibacterial Efficacy against S. pneumoniae, H. influenzae, K. pneumoniae, P. aeruginosa or  A. baumannii

Um Modelo Pneumonia robusta em imunocompetentes Roedores para avaliar antibacteriano Eficácia contra<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; ou<em&gt; A. baumannii</em

Efficacy of candidate antibacterial treatments must be demonstrated in animal models of infection as part of the discovery and development process, ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Intestinal Organoids to Study and Modify Epithelial Cell Protection Against Salmonella and Other Pathogens

Using Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Intestinal Organoids to Study and Modify Epithelial Cell Protection Against Salmonella and Other Pathogens

Usando organóides intestinais derivados de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos para estudar e modificar a proteção de células epiteliais contra Salmonella e outros patógenos

The intestinal &#8216;organoid&#8217; (iHO) system, wherein 3-D structures representative of the epithelial lining of the human gut can be produced from ...

Functional Assessment of Intestinal Permeability and Neutrophil Transepithelial Migration in Mice using a Standardized Intestinal Loop Model

Avaliação Funcional da Permeabilidade Intestinal e Migração Transepitelial de Neutrófilo em Camundongos usando um Modelo de Laço Intestinal Padronizado

The intestinal mucosa is lined by a single layer of epithelial cells that forms a dynamic barrier allowing paracellular transport of nutrients and water ...