Name: development of a larval zebrafish infection model for clostridioides difficile
Uploaded: 2020-02-14T13:30:00
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Somos gratos a Timo Fritsch por um excelente cuidado animal. Agradecemos aos membros dos laboratórios Köster e Steinert por apoio e discussões úteis. Agradecemos ao Dr. Dandan Han por ler o manuscrito. Reconhecemos com gratidão o financiamento do Estado Federal da Baixa Saxônia, Niedersächsisches Vorab (VWZN2889).

Todo o trabalho animal descrito aqui foi realizado de acordo com as normas legais (DIRETIVA UE 2010/63, licença AZ 325.1.53/56.1-TUBS e licença AZ 33.9-42502-04-14/1418).
1. Preparação de Agarose de Baixo Derretimento, Placa de Gel e Agulhas microinjeção/microgavage
<ol><li>Dissolver 0,08 g de agarose de baixo derretimento (Tabela de Materiais, agarose A2576) em 10 mL de 30% danieau médio (0,12 mM MgSO4, 0,18 mM Ca [NO3]2), 0,21 mM KCl...

<ol>
	<li>Rupnik, M., Wilcox, M. H., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clostridium+difficile+infection:+new+developments+in+epidemiology+and+pathogenesis.">Clostridium difficile infection: new developments in epidemiology and pathogenesis.</a> Nature Reviews Microbiology. 7, 526-536 (2009).</li><li>Yang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+protection+against+Clostridium+difficile+infection+by+the+monoclonal+antitoxin+antibodies+actoxumab+and+bezlotoxumab.">Mechanisms of protection against Clostridium difficile infection by the monoclonal antitoxin antibodies actoxumab and bezlotoxumab.</a> Infection and Immunity. 83, 822-831 (2015).</li><li>Kelly, C. 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M., Sambol, S. P., Johnson, S., Gerding, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+Fatal+Clostridium+difficile+-Associated+Disease+during+Continuous+Administration+of+Clindamycin+in+Hamsters.">Prevention of Fatal Clostridium difficile -Associated Disease during Continuous Administration of Clindamycin in Hamsters.</a> The Journal of Infectious Diseases. 188, 1922-1927 (2003).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mouse+Model+of+Clostridium+difficile-Associated+Disease.">A Mouse Model of Clostridium difficile-Associated Disease.</a> Gastroenterology. 135, 1984-1992 (2008).</li><li>Page, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evolutionarily+conserved+program+of+B-cell+development+and+activation+in+zebrafish.">An evolutionarily conserved program of B-cell development and activation in zebrafish.</a> Blood. 122, 1-12 (2014).</li><li>Benard, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infection+of+Zebrafish+Embryos+with+Intracellular+Bacterial+Pathogens.">Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens.</a> Journal of Visualized Experiments. (61), e3781 (2012).</li><li>Theriot, C. M., Young, V. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+mCherry+red+fluorescent+protein+for+studies+of+protein+localization+and+gene+expression+in+Clostridium+difficile.">Use of mCherry red fluorescent protein for studies of protein localization and gene expression in Clostridium difficile.</a> Applied and Environmental Microbiology. 81 (5), 1652-1660 (2015).</li><li>Cocchiaro, J. L., Rawls, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microgavage+of+Zebrafish+Larvae.">Microgavage of Zebrafish Larvae.</a> Journal of Visualized Experiments. (72), e4434 (2013).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mouse+Model+of+Clostridium+difficile-Associated+Disease.">A Mouse Model of Clostridium difficile-Associated Disease.</a> Gastroenterology. 135 (6), 1984-1992 (2008).</li><li>Hutton, M. L., Mackin, K. 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C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonizing+the+Embryonic+Zebrafish+Gut+with+Anaerobic+Bacteria+Derived+from+the+Human+Gastrointestinal+Tract.">Colonizing the Embryonic Zebrafish Gut with Anaerobic Bacteria Derived from the Human Gastrointestinal Tract.</a> Zebrafish. 10, 194-198 (2013).</li><li>Bloemberg, G. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+static+immersion+and+intravenous+injection+systems+for+exposure+of+zebrafish+embryos+to+the+natural+pathogen+Edwardsiella+tarda.">Comparison of static immersion and intravenous injection systems for exposure of zebrafish embryos to the natural pathogen Edwardsiella tarda.</a> BMC Immunology. 12, 58 (2011).</li><li>D&#237;az-Pascual, F., Ort&#237;z-Sever&#237;n, J., Varas, M. A., Allende, M. L., Ch&#225;vez, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+host-pathogen+interaction+as+revealed+by+global+proteomic+profiling+of+zebrafish+larvae.">In vivo host-pathogen interaction as revealed by global proteomic profiling of zebrafish larvae.</a> Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 1-11 (2017).</li><li>Valenzuela, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+the+capacity+of+human+gut+microorganisms+to+colonize+the+zebrafish+larvae+(Danio+rerio).">Evaluating the capacity of human gut microorganisms to colonize the zebrafish larvae (Danio rerio).</a> Frontiers in Microbiology. 9, (2018).</li></ol>

Os métodos apresentados modificam e estendem uma abordagem existente para infectar larvas de zebrafish realizando injeção e microgavage10,14. Também demonstra uma abordagem para estudar patógenos anaeróbicos com larvas de zebrafish22. Além disso, o protocolo facilita a análise das respostas inatas das células imunes inatos no vivo sobre o CDI e após a colonização de C. difficile em zebrafish. O método é reprodutível...

C. difficile é um bacilo produzido por esporos, anaeróbico e produtor de toxinas que é a principal causa de infecções graves no trato gastrointestinal1. Os sintomas típicos do CDI incluem diarreia, dor abdominal e colite pseudomembrannosa fatal, e às vezes pode levar à morte1,2. Evidências mostraram que as respostas imunes hospedeiras desempenham um papel crítico tanto na progressão quanto no resultado desta doença3. Além da resposta imune, a microbiota intestinal indígena é crucial para o início e a patogênese do CDI4. Na última década, tanto o número de casos quanto a taxa de mortalidade do DiEd aumentaram significativamente devido ao surgimento de uma cepa hipervirulenta de C. difficile (BI/NAP1/027)5,6. Uma melhor compreensão dos mecanismos imunológicos subjacentes e o papel da microbiota durante o CDI ajudarão a levar a novos desenvolvimentos terapêuticos e avanços, possibilitando um melhor controle desta epidemia.
Vários modelos animais, como o hamster e o rato, foram desenvolvidos para fornecer uma visão da defesa imunológica contra C. difficile7,8. No entanto, o papel das células imunes inatas ainda é mal compreendido, particularmente porque o comportamento inato das células imunes é derivado principalmente da análise histológica ou células cultivadas in vitro. Portanto, estabelecer um modelo transparente de zebrafish para revelar a resposta imune inata a C. difficile dentro de um organismo de vertebrado vivo facilitará tais estudos. As larvas de zebrafish têm um sistema imunológico inata funcional, mas não têm o sistema imunológico adaptativo até 4-6 semanas após a fertilização9. Essa característica única faz das larvas de zebrafish um excelente modelo para estudar a resposta isolada e a função das células imunes inatas no CDI.
Este relatório descreve novos métodos usando larvas de zebrafish para estudar as interações entre C. difficile e células imunes inatas, como macrófagos e neutrófilos. Primeiro, um protocolo de microinjeção localizado que inclui c. difficile inoculum e coloração é apresentado. Usando imagens de lapso de tempo confocal in vivo, a resposta de neutrófilos e macrófagos em relação ao local da infecção é registrada, e observa-se a fagocitose de bactérias por neutrófilos e macrófagos. No entanto, foi relatado que a injeção em si causa danos teciduais e leva ao recrutamento de leucócitos independentes das bactérias10. Portanto, um protocolo microgavage não invasivo para entregar C. difficile no intestino de larvas de zebrafish é posteriormente descrito. Estudos anteriores demonstraram que a microbiota gastrointestinal indígena protege um hospedeiro contra a colonização de C. difficile11. Portanto, larvas de zebrafish gnotobióticos também são usadas para predispor os zebrafish que estão infectados 12. Posteriormente, a dissecção intestinal é realizada para recuperar o difundido c. viável e validar a duração de sua presença em tratos intestinais de zebrafish.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2576</td>
			<td>Ultra-low gelling agarose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose low-melting (LM)</td>
			<td>Pronadisa</td>
			<td>8050</td>
			<td>It is used in agarose plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BacLight Red Bacterial Stain</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>B35001</td>
			<td>Fluorescent dye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain-Heart-Infusion Broth</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>X916.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brass (wild-type)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>deficient in melanin synthesis, used to generate stable transgenic lines</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium nitrate (Ca(NO3)2)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1396</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capillary Glass</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>30-0019</td>
			<td>Injection needles</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clostridioides difficile</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>R20291,, a ribotype 027 strain, TcdA+/TcdB+/CDT+ production</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>A994</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FIJI</td>
			<td>open-source platform</td>
			<td></td>
			<td>Image processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>6763</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horizontal needle puller</td>
			<td>Sutter instrument Inc</td>
			<td>P-87</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-cysteine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>168149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica Application Suite X (LAS X)</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td>Image processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>P026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro injector</td>
			<td>eppendorf</td>
			<td>5253000017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjection molds</td>
			<td>Adaptive Science Tools</td>
			<td>TU1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol Red</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P0290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>5346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>9265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurocholate</td>
			<td>Carl Roth GmbH</td>
			<td>8149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg(lyZ: KalTA4)bz17/Tg(4xUAS-E1b:EGFP)hzm3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>stable transgenic line in which in which the lyZ promoters drive the expression of EGFP fluorescent protein in neutrophils</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg(mpeg1.1: KalTA4)bz16/Tg(4xUAS-E1b:EGFP)hzm3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>stable transgenic line in which in which the mpeg1.1 drive the expression of EGFP fluorescent protein in macrophages</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast extract</td>
			<td>BD Bacto</td>
			<td>212750</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

development of a larval zebrafish infection model for clostridioides difficile

A infecção por clostridioides difficile (CDI) é considerada uma das infecções gastrointestinais mais comuns associadas à saúde nos Estados Unidos. A resposta imune inata contra C. difficile foi descrita, mas os papéis exatos dos neutrófilos e macrófagos no CDI são menos compreendidos. No presente estudo, larvas de Danio rerio (zebrafish) são usadas para estabelecer um modelo de infecção por C. difficile para a imagem do comportamento e cooperação dessas células imunes inatas inatas inatas invivas. Para monitorar C. difficile, foi estabelecido um protocolo de rotulagem usando um corante fluorescente. Uma infecção localizada é alcançada pela microinjeção rotulada de C. difficile, que cresce ativamente no trato intestinal de zebrafish e imita o dano epitelial intestinal no CDI. No entanto, esse protocolo de infecção direta é invasivo e causa feridas microscópicas, que podem afetar os resultados experimentais. Assim, um protocolo microgavage mais não invasivo é descrito aqui. O método envolve a entrega de células C. difficile diretamente no intestino de larvas de zebrafish por intubação através da boca aberta. Este método de infecção imita de perto a rota de infecção natural de C. difficile.

C. difficile é estritamente anaeróbico, mas o cromosforo de proteínas fluorescentes geralmente requer oxigênio para amadurecer. Para superar esse problema, um corante fluorescente foi usado para manchar células c. difficile vivas que estavam crescendo ativamente (R20291, uma cepa ribótipo 027; Figura 1A). Usando o sistema Gal4/UAS, foram geradas linhas de zebrafish transgênicas estáveis para imagens vivas, nas quais os promotores mpeg1.1 ou...

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Development of a Larval Zebrafish Infection Model for Clostridioides difficile

Apresentado aqui é um método seguro e eficaz para infectar larvas de zebrafish com c. anaeróbico fluorescente rotulado por microinjeção e microgavage não invasivo.

Desenvolvimento de um Modelo de Infecção de Zebrafish Larval para Clostridioides difficile

Clostridioides difficile infection (CDI) is considered to be one of the most common healthcare-associated gastrointestinal infections in the United ...

Este método pode responder à pergunta-chave sobre o papel do sistema imunológico inato na infecção pelo Clostridium, como se e como os macrófagos reconhecem ou fagocitam esse patógeno. A principal vantagem deste método é que ele pode ser aplicado a muitas bactérias anaeróbicas diferentes, que o tempo de infecção pode ser manipulado, e que a administração oral representa a infecção humana normal muito mais próxima. Depois de cultivar, transfira um mililitro da cultura em um cuvette espectrômetro, e meça o OD600.Transfira a quantidade necessária para um tubo fresco de 1,5 mililitro, a fim de alcançar um OD final de 1 a 1,2 em um mililitro de volume final. Lave uma vez com um mililitro de 1X PBS, e centrífuga a 5.000 vezes g por três minutos em temperatura ambiente. Resuspend em um mililitro de 1X PBS.Adicione três microliters de solução de trabalho do corante fluorescente preparado na suspensão bacteriana de um mililitro. Incubar a amostra por 15 minutos à temperatura ambiente no escuro. Depois disso, lave o Clostridioides difficile manchado uma vez com 1X PBS para remover corante residual, e resuspend em um mililitro de 1X PBS para alcançar um OD600 de 1.0.Primeiro, coloque uma queda de 0,8% de baixa derretimento agarose sobre as larvas de zebrafish em uma placa de Petri para cobrir. Ajuste suavemente as larvas para uma posição lateral. Coloque a placa de Petri no gelo por 30 a 60 segundos para permitir que a agarose de baixo derretimento se solidifique.Adicione 30% o meio de Danieau contendo 0,02% a 0,04% tricaine para cobrir a agarose. Para preparar a solução de injeção, adicione um microliter de 0,5% de fenol vermelho na solução PBS em nove microliters do clostridioides difficile inoculum manchado de corante. Carregue uma agulha de microinjeção calibrada com a solução de injeção usando um Microcarregador.Monte a agulha carregada em um micromanipulador, e posicione-a sob um microscópio estéreo. Ajuste a pressão de injeção entre 600 e 900 hectopascals. Defina o tempo de injeção para 0,1 a 0,3 segundos para obter nanolitadores de 0,5 a 1,0.Coloque a agulha no micromanipulador em um ângulo de aproximadamente 45 graus, apontando para as larvas incorporadas. Coloque a ponta da agulha acima do trato gastrointestinal, perto do poro urogenital. Perfure a agarose, depois o músculo com a ponta da agulha.Em seguida, insira-o no lúmen intestinal, e injete de 0,5 a 1,0 nanolitadores de Clostridioides difficile. Use um microscópio de fluorescência para monitorar as larvas injetadas e use uma ponta de Microloader flexível para pegar as larvas injetadas adequadamente para imagens confocal. Em uma placa de 1,5% de agarose com ranhuras, coloque uma queda de 0,8% de baixa derretimento nas larvas de zebrafish para cobrir.Ajuste suavemente as larvas com cabeças viradas para a vertical em ângulos de 45 graus na ranhura e caudas contra a parede da ranhura. Opere suavemente a agulha através da agarose, depois na boca de larvas de zebrafish, através do esôfago. Uma vez que a ponta da agulha esteja dentro da lâmpada intestinal anterior, pressione o pedal de injeção para liberar 0,5 para um nanoliters da cultura das bactérias.Encha o lúmen do intestino. Não deixe transbordar do esôfago ou cloaca. Retire suavemente a agulha da boca do zebrafish.Após gavage, resgate as larvas de zebrafish infectadas da agarose com uma ponta de Microloader flexível cortando primeiro a agarose, depois levantando as larvas. Transfira essas larvas para o meio estéril de 30% de Danieau e enxágue duas vezes. Depois de anestesiar as larvas de zebrafish, adicione 200 a 300 microliters de 1% de baixa derretimento agarose para cobrir as larvas anestesiadas.Coloque a região infectada das larvas contra uma lâmina de vidro o mais próximo possível. Deixe a agarose solidificar no gelo por 30 a 60 segundos. Submergir a agarose em 30% médio de Danieau contendo 0,02% a 0,04%.Vá para a imagem das larvas com um microscópio de varredura a laser confocal. Depois de eutanásia das larvas de zebrafish infectadas, insira uma agulha no tronco dorsal de larvas de zebrafish perto da cabeça para imobilizar o zebrafish. Remova a cabeça atrás das brânquias com uma lanceta.Insira uma segunda agulha no meio do tronco dorsal. Insira uma terceira agulha no abdômen do zebrafish, e puxe o intestino para fora da cavidade corporal. Use uma agulha de microinjeção para transferir 10 a 15 intestinos para um tubo de 1,5 mililitro contendo 200 microliters de PBS 1X estéreis.Homogeneize os intestinos com um pilão para interromper o tecido e preparar homogeneizadores. Certifique-se de que o pilão chegue ao fundo do tubo para interromper completamente todos os intestinos. Nos homogeneizadores, adicione clostridioides difficile meio de criação contendo D-cicloserina e cefoxitina, com ou sem taurocholate, e incubar em uma câmara anaeróbica.Neste estudo, tanto os neutrófilos quanto os macrófagos chegam aos locais de infecção. O exemplo de uma fagocitação de macrófago ativado duas bactérias mostra a clareira por fagocitose e digestão do clostridioides difuso rotulado. O microgavage para fornecer clostridioides rotulados de fluorescência difficile no lúmen intestinal das linhas de repórter macrófago e neutrófilo em cinco dias após a fertilização imita o caminho natural da infecção difficile clostridioides.No entanto, neutrófilos e macrófagos não mostraram migração óbvia para o trato gastrointestinal por até 12 horas após a microgavage. Enquanto isso, a fluorescência do clostridioides difficile rotulado desapareceu após cerca de cinco horas após a microgavage. Amostras intestinais 24 horas após a infecção foram dissecadas e mostraram crescimento bacteriano.Nenhuma bactéria cresceu no grupo controle. Posteriormente, as amostras incubadas só cresciam no meio contendo TCA, sugerindo que clostridioides totais difficile no intestino tinham formado esporos. 16S rDNA PCR identificou a bactéria cultivada como Clostridioides difficile, que produzem amplicons PCR específicos de tamanho previsível em torno de 800 pares de base.As culturas bacterianas cultivadas em uma placa CHROMID apareceram como colônias negras típicas, o que indicou ainda que as bactérias dos intestinos de zebrafish eram clostridioides difficile. Trabalhar com bactérias anaeróbicas requer que os passos aeróbicos sejam mantidos curtos porque isso influencia a biologia das bactérias, é claro. Células imunes inatas em zebrafish podem ser manipuladas.Por exemplo, eles podem decifrar o mecanismo das respostas das células imunes inatas à infecção. Nosso método indicou que o zebrafish pode ser uma ferramenta para estudar patógeno anaeróbico do intestino humano. Trabalhar com patógenos multi-resistentes requer que medidas de segurança apropriadas sejam tomadas.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Development of a Larval Zebrafish Infection Model for Clostridioides difficile

Imaging Subcellular Structures in the Living Zebrafish Embryo

Imagiologia estruturas celulares no embrião vivo Zebrafish

In vivo imaging provides unprecedented access to the dynamic behavior of cellular and subcellular structures in their natural context. Performing such ...

Biologia do Desenvolvimento

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

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analisando<em&gt; In Vivo</em&gt; Migração celular usando transplantes de células e de imagem Time-lapse em embriões Zebrafish

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Usando folha de luz microscopia de fluorescência para Imagem Desenvolvimento Zebrafish Eye

Light sheet fluorescence microscopy (LSFM) is gaining more and more popularity as a method to image embryonic development. The main advantages of LSFM ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Desenvolvimento de um modelo de fígado fibrótica induzida por etanol no peixe-zebra para estudar Progenitor mediada por células de regeneração de hepatócitos

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

A Versatile Mounting Method for Long Term Imaging of Zebrafish Development

Um método de montagem versátil para Long Term Imagens de Desenvolvimento Zebrafish

Zebrafish embryos offer an ideal experimental system to study complex morphogenetic processes due to their ease of accessibility and optical transparency. ...

Dissection of Larval Zebrafish Gonadal Tissue

Dissecção de larval Zebrafish gonadal Tissue

Although wild zebrafish possess a ZZ/ZW sex-determination system, domesticated zebrafish have lost the sex chromosome. They utilize a polygenic sex ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

Indução de hipóxia em sapos vivos e embriões de peixe-zebra

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Estabelecimento de Zebrafish Larval como um modelo Animal para investigar Trypanosoma cruzi motilidade In Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Electroretinogram Recording in Larval Zebrafish using A Novel Cone-Shaped Sponge-tip Electrode

Electroretinogram gravação no Zebrafish Larval usando eletrodo de esponja-ponta em forma de Cone de romance A

The zebrafish (Danio rerio) is commonly used as a vertebrate model in developmental studies and is particularly suitable for visual neuroscience. For ...