Name: a rapid method for multispectral fluorescence imaging of frozen tissue sections
Uploaded: 2020-03-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rapid Method for Multispectral Fluorescence Imaging of Frozen Tissue Sections at JoVE.com

تم توفير التوجيه التصويري والتحليل من قبل مركز موارد البحوث - علم الأنسجة البحثي ومختبر تصوير الأنسجة الأساسية في جامعة إلينوي في شيكاغو التي أنشئت بدعم من مكتب نائب رئيس الجامعة للبحوث. تم دعم العمل من قبل المعاهد القومية للصحة / NCI RO1CA191317 إلى CLP ، من قبل المعاهد القومية للصحة / NIAMS (منحة SBDRC 1P30AR075049-01) إلى الدكتور A. Paller ، وبدعم من مركز روبرت H. Lurie الشامل للسرطان إلى مركز تقييم المناعة في جامعة نورث وسترن.

تم الحصول على طحال الفأر وأنسجة ورم الماوس HLF1623 من مختبرنا. تم شراء أنسجة اللوزة البشرية من بائع تجاري. وترد التفاصيل في جدول المواد.
1. تضمين الأنسجة
<ol><li>تضمين الأنسجة الطازجة في OCT (درجة حرارة القطع الأمثل) والتجميد المفاجئة باستخدام الجليد الجاف أو ا...

وقد استخدمت الأنسجة المجمدة على نطاق واسع لتصوير mIF للكشف تقليديا ثلاث إلى أربع علامات31 على الأنسجة باستخدام الطريقة المباشرة وغير المباشرة32. في الطريقة المباشرة ، يتم اقتران الأجسام المضادة بالأصباغ المفلورة أو النقاط الكمية33 لتسمية الأنسجة ، بين...

وقد أدت التطورات الأخيرة في تقنيات التصوير المجهري إلى تحسين معرفتنا وفهمنا للعمليات البيولوجية وحالات المرض بشكل كبير. في الموقع الكشف عن البروتينات في الأنسجة عن طريق الكيمياء المناعية الكروميوم (IHC) يتم بشكل روتيني في علم الأمراض. ومع ذلك ، فإن الكشف عن علامات متعددة باستخدام تلطيخ Chromogenic IHC يشكلتحديًا 1 ويتم تطوير طرق أحدث لاستخدام أساليب تلطيخ الفلور المناعي (mIF) متعددة ، حيث يتم وضع علامات بيولوجية متعددة على عينة نسيج واحد. الكشف عن علامات بيولوجية متعددة مفيد، لأن المعلومات المتعلقة بهندسة الأنسجة، والتوزيع المكاني للخلايا، والتعبير المشترك للمستضد يتم التقاطها جميعها في عينة نسيج واحد2. وقد جعل استخدام تكنولوجيا التصوير الفلورية المتعددة الأطياف الكشف عن علامات بيولوجية متعددة ممكناً. في هذه التكنولوجيا، وذلك باستخدام بصريات محددة يمكن فصل أطياف الفلورسينس لكل فلوروفور الفردية أو "غير مختلطة"، مما يتيح الكشف عن علامات متعددة دون أي تقاطع الطيفية3. التصوير الفلوري متعدد الأطياف أصبح نهجا حاسما في بيولوجيا الخلايا، وتطوير الأدوية قبل السريرية، وعلم الأمراض السريرية، والورم المناعة التنميط4،5،6. الأهم من ذلك، يمكن أن يكون التوزيع السباسي للخلايا المناعية (على وجه التحديد خلايا CD8 T) بمثابة عامل تشخيصي للمرضى الذين يعانون من الأورام الموجودة7.
وقد وضعت أساليب مختلفة لتلطيخ الفلورسين المتعدد ويمكن القيام به إما في وقت واحد أو بالتسلسل. في طريقة تلطيخ في وقت واحد، يتم إضافة جميع الأجسام المضادة معا ككوكتيل في خطوة واحدة لتسمية الأنسجة. تستخدم تقنية UltraPlex مزيجًا من الأجسام المضادة الأولية النتنة متبوعة يليها مزيج من الأجسام المضادة الثانوية المضادة للنتن المترافقة مع الفلوروفور. InSituPlex التكنولوجيا8 يستخدم مزيجا من الأجسام المضادة الفريدة الحمض النووي الاقتران الأولية التي تضاف في وقت واحد إلى الأنسجة تليها خطوة التضخيم وأخيرا المخارج الفلوروفور مترافق التي هي مكملة لكل تسلسل الحمض النووي فريدة من نوعها على الأجسام المضادة الأولية. كل من هذه التكنولوجيات تمكن من الكشف عن أربع علامات بالإضافة إلى 4'،6-diamino-2-phenylindole (DAPI) للتلطيخ النووي. ويستند نهجين آخرين لتلطيخ متعددة في وقت واحد على الطيف كتلة الأيون الثانوية9. يستخدم نظام التصوير Hyperion قياس الخلايا الشامل التصوير10 للكشف عن ما يصل إلى 37 علامة. تستخدم هذه التقنية مزيجًا من الأجسام المضادة المعدنية المترافقة لتلطيخ الأنسجة ، ويتم تشعب مناطق محددة من الأنسجة بالليزر ونقلها إلى مقياس سيتومتر جماعي حيث يتم اكتشاف الأيونات المعدنية. آخر مماثلة التكنولوجيا هو IONPath، الذي يستخدم متعددة الأيون شعاع تكنولوجيا التصوير11. تستخدم هذه التقنية أداة قياس الطيف الكتلي المعدلة ومصدر أيون الأكسجين بدلاً من الليزر لإزالة الأجسام المضادة المعدنية المترافقة. في حين أن كل هذه النهج المتعددة المتزامنة تلطيخ تمكين الكشف عن علامات متعددة، لا يمكن التقليل من التكاليف التي ينطوي عليها لاقتران الحمض النووي، التعاز، أو المعادن إلى الأجسام المضادة، وفقدان الأنسجة بسبب الاجتثاث، ومعالجة الصور واسعة النطاق لعدم الاختلاط. وعلاوة على ذلك، لا تتوفر حاليا ً مجموعات وبروتوكولات تلطيخ إلا لأنسجة FFPE وينطوي تطوير لوحات مخصصة على وقت ونفقات إضافية.
طريقة تلطيخ متعددة متتابعة، في المقابل، تشمل وضع علامة على الأنسجة مع الأجسام المضادة لعلامة واحدة، وتجريد لإزالة الأجسام المضادة، تليها تكرار متتابعة لهذه العملية لتسمية علامات متعددة12. إن تضخيم إشارة التيراميد (TSA) هو الأسلوب متعدد الإرسال التسلسلي الأكثر استخدامًا. تستخدم اثنين من التقنيات متعددة أخرى متعددة مزيج من أساليب تلطيخ متزامنة ومتتابعة. تستخدم منصة CODEX13 مزيجًا من الأجسام المضادة المترافقة مع تسلسلoligonucleotide النووي الفريد الذي يتم تصنيفه في نهاية المطاف بفلوريفوروفور باستخدام خطوة بلمرة مفهرسة يتبعها التصوير والتجريد وتكرار العملية للكشف عن ما يصل إلى 50 علامة. نهج تلطيخ MultiOmyx متعددة14 هو تكرار للتلطيخ مع مزيج من ثلاثة إلى أربعة الأجسام المضادة المفلورة الزوجية ، والتصوير ، وإرواء الفلوروفوريات ، وتكرار هذه الدورة للكشف عن ما يصل إلى 60 علامة على مقطع واحد. على غرار طريقة تلطيخ متعددة في وقت واحد ، في حين يمكن الكشف عن مجموعة واسعة من العلامات ، فإن الوقت الذي ينطوي عليه تلطيخ ، وحيازة الصور ، والمعالجة ، والتحليل واسع النطاق. تتضمن خطوة التجريد /التروية التدفئة و / أو تبييض عينة الأنسجة ، وبالتالي ، يتم تنفيذ نهج تلطيخ متعدد الموجات المتسلسلة عادة على أنسجة FFPE التي تحافظ على سلامة الأنسجة عند التدفئة أو التبييض.
يتم تنفيذ التثبيت الرسمي وتضمين البارافين اللاحق بسهولة في بيئة سريرية ، وكتل الأنسجة سهلة التخزين ، وتتوفر العديد من بروتوكولات تلطيخ متعددة. ومع ذلك ، فإن معالجة وتضمين وإزالة الأنسجة FFPE ، وكذلك استرجاع المستضد15، وهي عملية يمكن من خلالها للأجسام المضادة الوصول بشكل أفضل إلى epitopes ، تستغرق وقتًا طويلاً. وعلاوة على ذلك، فإن المعالجة التي تنطوي عليها أنسجة FFPE يساهم في autofluorescence16 والأقنعة الهدف epitopes، مما أدى إلى تقلب وعدم وجود استنساخ الأجسام المضادة المتاحة للكشف عن المستضدات في أنسجة FFPE17،18،19. مثال على ذلك هو مستضد الكريات البيض البشرية (HLA) فئة I alleles20. في المقابل، لا ينطوي التجميد المفاجئة للأنسجة على خطوات معالجة واسعة النطاق قبل أو بعد التثبيت، والتحايل على الحاجة إلى استرجاع المستضد21،22، وجعله مفيدًا للكشف عن نطاق أوسع من الأهداف. لذلك ، يمكن أن يكون استخدام الأنسجة المجمدة لتصوير الفلورسينس متعدد الأطياف قيمًا للكشف عن أهداف الدراسات قبل السريرية والسريرية.
وبالنظر إلى القيود المذكورة أعلاه عند استخدام أنسجة FFPE، سألنا عما إذا كان يمكن إجراء التصوير الفلوري المتعدد الأطياف على الأنسجة المجمدة. لمعالجة هذا السؤال، اختبرنا طريقة تلطيخ متعددة في وقت واحد باستخدام لوحة من الأجسام المضادة المفلورة الزوجية للكشف عن مستضدات متعددة وحللنا تلطيخ باستخدام نظام تصوير متعدد الأطياف الآلية. تمكنا من تلطيخ ما يصل إلى ست علامات في قسم نسيج واحد في غضون 90 دقيقة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetone (histological grade)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A16F-1GAL</td>
			<td>Fixing tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-mouse CD3</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100212</td>
			<td>Clone - 17A2; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488, eBioscience anti-human CD20</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>53-0202-82</td>
			<td>Clone - L26; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 Mouse anti-Ki-67</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558617</td>
			<td>Primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 anti-human CD3</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>300446</td>
			<td>Clone - UCHT1; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 anti-mouse CD8a</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100758</td>
			<td>Clone - 53-6.7; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 anti-human CD8a</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>372906</td>
			<td>Clone - C8/144B; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 anti-mouse CD206 (MMR)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>141711</td>
			<td>Clone - C068C2; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 anti-mouse CD4 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100426</td>
			<td>Clone - GK1.5; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 Mouse</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td>27</td>
			<td>Mouse frozen tissues used for multispectral training</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin Jar</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S6016-6EA</td>
			<td>Rehydrating and washing slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Solution</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>564907</td>
			<td>Nucleic Acid stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond White Glass Charged Slides</td>
			<td>DOT Scientific</td>
			<td>DW7590W</td>
			<td>Adhering tissue sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline 1x (without Ca and Mg)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MT21031CV</td>
			<td>Washing and diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Slips</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>3306</td>
			<td>Protecting stained tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Normal Tonsil OCT frozen tissue block</td>
			<td>AMSBio</td>
			<td>AMS6023</td>
			<td>Human frozen tissue used for multispectral staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum 1X</td>
			<td>Gemini Bio-Products</td>
			<td>100-512</td>
			<td>Blocking and diluent for human tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>inForm</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>Version 2.4.1</td>
			<td>Machine learning software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP/Cyanine5.5 anti-human CD4</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>300529</td>
			<td>Clone - RPA-T4; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy 5.5 Rat Anti-CD11b</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550993</td>
			<td>Clone - M1/70; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenochart</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>Version 1.0.8</td>
			<td>Whole slide scan software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P36965</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Research Cryostat</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>CM3050 S</td>
			<td>Sectioning tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superblock 1X</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>37515</td>
			<td>Blocking mouse tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T Solution</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Embedding tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra 3.0 Automated Quantitative Pathology Imaging System, 6 Slide</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>CLS142568</td>
			<td>Semi-automated multispectral imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra Software</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>Version 3.0.5</td>
			<td>Software to operate microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rapid method for multispectral fluorescence imaging of frozen tissue sections

يتيح التصوير الفلوري المتعدد الأطياف على أنسجة البارافين المضمنة (FFPE) ذات البارافين ذات البارافين (FFPE) الكشف عن علامات متعددة في عينة نسيج واحد يمكن أن توفر معلومات حول التعبير المشترك للمستضد والتوزيع المكاني للعلامات. ومع ذلك، قد يؤدي عدم وجود أجسام مضادة مناسبة للأنسجة الثابتة الشكلية إلى تقييد طبيعة العلامات التي يمكن اكتشافها. بالإضافة إلى ذلك ، فإن طريقة تلطيخ تستغرق وقتًا طويلاً. هنا نصف طريقة سريعة لإجراء التصوير الفلوري متعدد الأطياف على الأنسجة المجمدة. وتشمل هذه الطريقة تركيبات الفلوروفور المستخدمة، والخطوات التفصيلية لتلطيخ الأنسجة المجمدة الماوس والإنسان، والمسح الضوئي، واقتناء، وإجراءات التحليل. لتحليل تلطيخ، يتم استخدام نظام التصوير متعدد الأطياف المتاحة تجاريا ً. من خلال هذه الطريقة ، تم تلطيخ ما يصل إلى ست علامات مختلفة واكتشافها في قسم واحد من الأنسجة المجمدة. يمكن لبرنامج تحليل التعلم الآلي أن يُستخدم في الخلايا الظاهرية التي يمكن استخدامها للتحليل الكمي. الطريقة الموصوفة هنا للأنسجة المجمدة مفيدة للكشف عن العلامات التي لا يمكن اكتشافها في أنسجة FFPE أو التي لا تتوفر الأجسام المضادة لأنسجة FFPE.

الكشف عن علامات واحدة ملطخة على أقسام الطحال المجمدة نظرًا لأن نظام التصوير شبه الآلي يستخدم نظام فلتر الكريستال السائل القابل للتغير (LCTF) الذي يسمح بنطاق أوسع من اكتشاف الطول الموجي25، ونظرًا لعدم تنفيذ خطوات تضخيم الإشارة هنا ، قمنا أولاً بتحسين اكتشاف أجسامنا ال...

Watch this Scientific Journal Video about A Rapid Method for Multispectral Fluorescence Imaging of Frozen Tissue Sections at JoVE.com

A Rapid Method for Multispectral Fluorescence Imaging of Frozen Tissue Sections

نحن نصف طريقة تلطيخ سريعة لإجراء التصوير متعدد الأطياف على الأنسجة المجمدة.

طريقة سريعة لتصوير الفلورسينس متعدد الأطياف لأقسام الأنسجة المجمدة

Multispectral fluorescence imaging on formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues enables the detection of multiple markers in a single tissue sample ...

هذه الطريقة مفيدة للكشف عن العلامات الحيوية المتعددة في عملية اكتاريب واحدة بما في ذلك علامات غير قابلة للكشف عادة في أقسام البارافين، والمشاركة في توطينها. باستخدام هذه الطريقة التلطين التجريبية ، يتم تقليل وقت التلطخ بشكل كبير ويمكن إجراء هذه الطريقة في أي مختبر. إظهار هذه الطريقة سيكون دينيش جايشانكار.وهو ما بعد الدكتوراه الماهرة من المختبر، وأيضاً مركز تقييم العلاج المناعي، مدير المرافق. عند اختيار الأجسام المضادة للتحليل، ضع في اعتبارك مجموعات الإثارة وتصفية الانبعاثات المتاحة على نظام التصوير شبه الآلي. وبعد اختبار مجموعات مختلفة من الأجسام المضادة الأولية الفلوروفور، إعداد الفلوروفورس لاستخدامها بحيث يكون لديك الحد الأدنى من التداخل الطيفي على النحو المقترح في الجدول.لتلطيخ متعددة، وإعداد مزيج من الأجسام المضادة مع الفلوروفورات متوافقة في الأوهام الأمثل المحددة سلفا، وإضافة كوكتيل إلى أقسام الأنسجة من الفائدة. بالنسبة لتلوين العلامة الواحدة، أضف الأجسام المضادة المترافقة الأولية فقط إلى الشريحة. لجميع البقع، وتشمل شريحة غير المقعة التحكم التي تخضع لنفس الإجراء تلطيخ دون إضافة الأجسام المضادة مترافق الأولية.بعد فترة حضانة لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة محمية من الضوء، وغسل الشرائح مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة خمس دقائق لكل غسل. بعد الغسيل الثاني ، وصمة عار مضادة الشرائح الملون متعددة مع DAPI لمدة سبع دقائق في درجة حرارة الغرفة المحمية من الضوء ، تليها اثنين من يغسل لمدة خمس دقائق في برنامج تلفزيوني. لإنشاء مكتبة طيفية، قم بتعيين قوة المصباح لنظام التصوير متعدد الأطياف إلى 100٪ وفتح برنامج تشغيل المجهر.حدد تحرير البروتوكول والبروتوكول الجديد. أدخل اسم بروتوكول وحدد الفلوريسنس ضمن وضع التصوير. ثم قم بتوفير اسم الدراسة، وقم بتحميل الشرائح الملطخة على المسرح.انقر فوق تحرير التعريض الضوئي، واستخدم خيارات التركيز التلقائي والفضح التلقائي لضبط أوقات التعرض والحصول على لقطات للشرائح الملطخة المفردة. بعد تصوير الشرائح الملطخة، احفظ البروتوكول. وفي برنامج التعلم الآلي تحت علامة التبويب مكتبة البناء ، قم بتحميل كل صورة ملطخة.حدد الكلمة المناسبة وانقر فوق استخراج. سيقوم البرنامج باستخراج الإشارة الفلورسنت المحددة في الطابق. لحفظ اللون المستخرج، انقر فوق حفظ لتخزين.قد يتم إنشاء مجموعة جديدة أو يمكن تخزين اللون المستخرج إلى مجموعة موجودة. للتصوير متعدد الأطياف، بمجرد إنشاء المكتبة الطيفية والتحقق منها، ضبط أوقات التركيز والتعرض على الشريحة الملون متعددة الأطياف كما هو موضح، وفتح الشرائح الممسوحة ضوئيا لإنشاء مهمة جديدة. قم بتوفير معرف شريحة وحدد بروتوكول.ضمن المهمة، حدد مسح كامل للشريحة لإجراء مسح كامل للشريحة على الشريحة الملطخة المتعددة. في صورة مسح الشرائح بالكامل، حدد المناطق التي تهمك عبر الصورة. وسيتم مسح هذه المناطق باستخدام أوقات التعرض المحددة سابقاً على الشريحة المتعددة لاستخدامها في فك التكتّن والتحليل الطيفي.في برنامج التشغيل المجهر، حدد الحصول على حقول MSI ضمن المهمة، ثم انقر فوق "عملية الشريحة" للحصول على مناطق ذات أهمية في تكبير 20x. مرة واحدة تم الحصول على المناطق ذات الاهتمام ، في برنامج التعلم الآلي ، انقر فوق ملف وفتح تحت علامة التبويب التحليل اليدوي لتحميل الصور الملون متعددة. حدد مصدر المكتبة الطيفية، وانقر فوق تحديد طوابق لاختيار المكتبة الطيفية المحفوظة مسبقاً.انقر فوق ملف وفتح لتحميل الصورة غير المُطَرَّة. ثم انقر فوق أيقونة علامة الحبر التلقائية للفلورس وارسم خطًا أو منطقة على الشريحة غير المُطَوَّقة لتحديد الفلورة التلقائية داخل الأنسجة. ثم ضمن علامة تحرير والألوان علامة التبويب، تعيين أسماء لكل علامة وانقر فوق إعداد الكل.بعد التحقق من الصورة غير المُزكَم بالمطياف، في برنامج التعلم الآلي، حدد غشاء السيتوبلازم وخيارات العلامة من اللوحة. وباستخدام زر القطع، حدد استخدام هذه الإشارة للعثور على، لتكوين العلامة لاكتشاف إما النوى، السيتوبلازم أو الغشاء. عندما يتم اختيار علامة cytoplasmic أو غشاء، حدد استخدام إشارة للمساعدة في الخيار تقسيم النووية.البرنامج سوف تلقائيا الكشف عن وخلق أقنعة الفردية للنواة، السيتوبلازم والغشاء. استخدم طريقة عرض علم الأمراض لعلامة معينة وخيارات التكوين في البرنامج لضبط الأقنعة، وانقر على مقطع الكل لإنشاء خريطة تجزئة الخلايا. بعد تجزئة الخلية، حدد علامات إلى الظاهري الخلايا الإيجابية.بالإضافة إلى ذلك، حدد على الأقل خمس خلايا التي لا تلطخ مع علامة المختارة إلى الظاهري الخلايا السلبية. ثم انقر فوق "Classifier Train" لتدريب البرنامج على الكشف تلقائيا عن جميع الخلايا الملطخة مع علامات المحددة داخل الصورة. سيتم إنشاء مخطط ظاهري.كما توضح هذه الصور، يمكن استخدام الأجسام المضادة التي تم التحقق منها لإجراء عملية استئصال خلايا التدفق لتصور تلطيخ الأنسجة باستخدام مرشح قابل للبلورة السائلة في نظام التصوير شبه الآلي. هنا يمكن ملاحظة صورة غير مُزكَّتة من اللوزتين البشرية المجمدة التي تشمل وضع علامات على الخلايا البائية والخلايا المتكاثرة داخل مركز الجرثومي الجرامي، ومنطقة الخلايا التائية الجريبة البينية. يسمح خيار مناظر علم الأمراض بالتصور لنمط التلطخ الفردي لكل علامة داخل الأنسجة ذات الاهتمام ، مما يشير إلى أن طريقة تلوين متعددة والتصوير الطيفي تعمل على الأنسجة المجمدة.كما هو موضح في قسم ورم الماوس المجمدة، التصوير متعدد الأطياف يمكن أيضا أن تستخدم لتصور الورم التسلل الخلايا التائية، وغيرها من نسب الخلايا النخاعية بما في ذلك الضامة المرتبطة بالورم. ويمكن توليد تجزئة الخلايا وخرائط النمط الظاهري ، وعدد الخلايا الملطخة لكل علامة تم تحليلها بواسطة البرنامج ، مما يدل على أنه يمكن استخدام البرنامج في القياس الكمي للتلوين متعدد الأطياف على الأنسجة المجمدة. بالنسبة لشخص جديد 6to هذه التقنية ، من المهم التعرف على الميزات المحددة لفلوروكروماتك ، وإعداد شرائح مكتبة عالية الجودة للتركب الطيفي مع الحد الأدنى من التداخل الطيفي.من المهم أيضًا إجراء معايرة الأجسام المضادة. في رأينا، يمكن لهذه الطريقة توفير معلومات حول فعالية العلاج المناعي للسرطان والتطبيقات العلاجية الأخرى، لا سيما عندما يكون التوقيت هو الجوهر.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

مزيج من الشريط اللاصق على أساس أخذ العينات والإسفار في الموقع تهجين للكشف السريع عن السالمونيلا على المنتجات الطازجة

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

تأمين تدفق الأحماض النووية الخلوي ومضان في الموقع التهجين (LNA تدفق FISH) : طريقة لاكتشاف الحمض النووي الريبي البكتيرية الصغيرة

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

غير الغازية التصوير الضوئي من الأوعية الدموية اللمفية على فأرة الحاسوب

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D التصوير تعدد الوسائط من<em&gt; الليمونية rodentium</em&gt; التهابات في الفئران

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Fluorescence Time-lapse Imaging of the Complete S. venezuelae Life Cycle Using a Microfluidic Device

Fluorescence Time-lapse Imaging of the Complete S. venezuelae Life Cycle Using a Microfluidic Device

مضان الوقت الفاصل بين التصوير من كامل<em&gt; S. venezuelae</em&gt; دورة الحياة عن طريق جهاز ميكروفلويديك

Live-cell imaging of biological processes at the single cell level has been instrumental to our current understanding of the subcellular organization of ...

A RAPID Method for Blood Processing to Increase the Yield of Plasma Peptide Levels in Human Blood

طريقة سريعة لمعالجة الدم إلى زيادة الغلة من مستويات البلازما الببتيد في الدم البشري

Research in the field of food intake regulation is gaining importance. This often includes the measurement of peptides regulating food intake. For the ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

غير الغازية<em&gt; في فيفو</em&gt; الإسفار التصوير البصري من مب النشاط التهابات باستخدام عامل التصوير الفلورسنت أكتيفاتابل

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

An All-on-chip Method for Rapid Neutrophil Chemotaxis Analysis Directly from a Drop of Blood

طريقة الكل على رقاقة للتحليل الكيميائي العدلات السريعة مباشرة من قطرة الدم

Neutrophil migration and chemotaxis are critical for our body's immune system. Microfluidic devices are increasingly used for investigating neutrophil ...

Visualizing Intracellular SNARE Trafficking by Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

تصور داخل الخلايا المطوقة الاتجار بواسطة عمر Fluorescence التصوير المجهري

Soluble N-ethylmaleimide sensitive fusion protein (NSF) attachment protein receptor (SNARE) proteins are key for membrane trafficking, as they catalyze ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

تصوير بكتريا السل في الفئران مع "مراسل إنزيم الأسفار"

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...