Name: a rapid method for multispectral fluorescence imaging of frozen tissue sections
Uploaded: 2020-03-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rapid Method for Multispectral Fluorescence Imaging of Frozen Tissue Sections at JoVE.com

Imaging en analyse begeleiding werd verstrekt door het Research Resources Center - Research Histology and Tissue Imaging Core aan de Universiteit van Illinois in Chicago opgericht met de steun van het kantoor van de vice-kanselier voor onderzoek. Het werk werd ondersteund door NIH/NCI RO1CA191317 aan CLP, door NIH/NIAMS (SBDRC grant 1P30AR075049-01) aan Dr. A. Paller, en door ondersteuning van het Robert H. Lurie Comprehensive Cancer Center aan de Immunotherapy Assessment Core aan de Northwestern University.

Muismilt en HLF16 muistumorweefsels23 werden verkregen uit ons laboratorium. Menselijk tonsillenweefsel werd gekocht bij een commerciële leverancier. Details zijn opgenomen in de tabel van materialen.
1. Weefselinbedding
<ol><li>Sluit vers weefsel in octop (optimale snijtemperatuur) oplossing en snap bevriezen met behulp van droogijs of vloeibare stikstof.</li>
	<li>Bewaar weefsels op -80 °C.</li>
</ol>2. Cryosectioning
<ol...

Bevroren weefsels zijn op grote schaal gebruikt voor mIF-beeldvorming om traditioneel drie tot vier markers31 op een weefsel te detecteren met behulp van de directe en indirecte methode32. In de directe methode worden antilichamen geconjugeerd tot fluorescerende kleurstoffen of quantumdots33 om het weefsel te labelen, terwijl in de indirecte methode een niet-geconjugeerd primair antilichaam wordt gebruikt om het weefsel te labelen, gevolgd door een d...

Recente ontwikkelingen in microscopische beeldvormingstechnieken hebben onze kennis en begrip van biologische processen en ziektetoestanden aanzienlijk verbeterd. In situ detectie van eiwitten in weefsels via chromogene immunohistochemie (IHC) wordt routinematig uitgevoerd in pathologie. Echter, detectie van meerdere markers met behulp van chromogene IHC kleuring is uitdagend1 en nieuwere methoden om multiplex immunofluorescentie (mIF) kleuring benaderingen te gebruiken, waarbij meerdere biologische markers worden gelabeld op een enkel weefsel monster, worden ontwikkeld. De detectie van meerdere biologische markers is nuttig, omdat informatie met betrekking tot weefselarchitectuur, ruimtelijke verdeling van cellen en antigeenco-expressie allemaal worden vastgelegd in één weefselmonster2. Het gebruik van multispectrale fluorescentiebeeldvormingstechnologie heeft detectie van meerdere biologische markers mogelijk gemaakt. In deze technologie kan met behulp van specifieke optiek de fluorescentiespectra van elke afzonderlijke fluorophore worden gescheiden of "ongemengd", waardoor meerdere markers kunnen worden gedetecteerd zonder spectrale kruisspraak3. Multispectrale fluorescentiebeeldvorming wordt een kritische benadering in de celbiologie, preklinische medicijnontwikkeling, klinische pathologie en tumorimmuunprofilering4,5,6. Belangrijk is dat de ruimtelijke verdeling van immuuncellen (met name CD8 T-cellen) kan dienen als een prognostische factor voor patiënten met bestaande tumoren7.
Verschillende benaderingen van multiplex fluorescentie kleuring zijn ontwikkeld en kan gelijktijdig of sequentieel worden uitgevoerd. In de simultaan kleuringmethode worden alle antilichamen als cocktail in één stap bij elkaar opgeteld om het weefsel te labelen. UltraPlex-technologie maakt gebruik van een cocktail van hapten-geconjugeerde primaire antilichamen, gevolgd door een cocktail van fluorophore-geconjugeerde anti-hapten secundaire antilichamen. InSituPlex technologie8 maakt gebruik van een cocktail van unieke DNA-geconjugeerde primaire antilichamen die tegelijkertijd worden toegevoegd aan het weefsel, gevolgd door een versterking stap en ten slotte fluorophore-geconjugeerde sondes die complementair zijn aan elke unieke DNA-sequentie op het primaire antilichaam. Beide technologieën maken de detectie van vier markers plus 4',6-diamino-2-phenylindole (DAPI) voor nucleaire kleuring mogelijk. Twee andere benaderingen voor gelijktijdige multiplex kleuring zijn gebaseerd op secundaire ionenmassaspectrometrie9. Het Hyperion Imaging System maakt gebruik van beeldmassacytometrie10 om tot 37 markers te detecteren. Deze technologie maakt gebruik van een cocktail van met metaal geconjugeerde antilichamen om de weefsels te bevlekken, en specifieke gebieden van de weefsels worden door een laser ontdaan en overgebracht naar een massacytometer waar de metaalionen worden gedetecteerd. Een andere soortgelijke technologie is de IONPath, die multiplexed ionbeam imaging technologiegebruikt 11. Deze technologie maakt gebruik van een gemodificeerde massaspectrometrie instrument en een zuurstof ionen bron in plaats van laser om de metaal-geconjugeerde antilichamen ablate. Hoewel al deze gelijktijdige multiplex vlekken benaderingen de detectie van meerdere markers mogelijk te maken, de kosten die betrokken zijn voor het conjugeren van DNA, haptens, of metalen aan antilichamen, het verlies van weefsel als gevolg van ablatie, en de uitgebreide beeldverwerking voor het niet mengen van de mengmenging kan niet worden onderschat. Bovendien zijn kits en kleuringprotocollen momenteel alleen beschikbaar voor FFPE-weefsels en brengt het ontwikkelen van aangepaste panelen extra tijd en uitgaven met zich mee.
De sequentiële multiplex kleuring methode, in tegenstelling, omvat het etiketteren van het weefsel met een antilichaam aan een marker, strippen om het antilichaam te verwijderen, gevolgd door opeenvolgende herhalingen van dit proces om meerdere markers label12. De tyramide signaalversterking (TSA) is de meest gebruikte sequentiële multiplexing methode. Twee andere multiplexing technologieën maken gebruik van een combinatie van gelijktijdige en sequentiële kleuring methoden. De CODEX platform13 maakt gebruik van een cocktail van antilichamen geconjugeerd om unieke DNA oligonucleotide sequenties die uiteindelijk worden gelabeld met een fluorophore met behulp van een geïndexeerde polymerisatie stap gevolgd door beeldvorming, strippen, en het herhalen van het proces om te detecteren tot 50 markers. De MultiOmyx multiplex kleuring aanpak14 is een iteratie van vlekken met een cocktail van drie tot vier gefluorofe-geconjugeerde antilichamen, beeldvorming, het doven van de fluorophoren, en het herhalen van deze cyclus te detecteren tot 60 markers op een enkele sectie. Vergelijkbaar met de gelijktijdige multiplex kleuring methode, terwijl een breed scala van markers kan worden gedetecteerd, de tijd die betrokken zijn bij kleuring, beeldverwerving, verwerking, en analyse is uitgebreid. De strippen / blussen stap omvat verwarming en / of bleken van het weefsel monster en dus, de sequentiële multiplex kleuring aanpak wordt vaak uitgevoerd op FFPE weefsels die weefsel integriteit te handhaven bij het verwarmen of bleken.
Formaline fixatie en daaropvolgende paraffine inbedding wordt gemakkelijk uitgevoerd in een klinische omgeving, weefselblokken zijn gemakkelijk op te slaan en verschillende multiplex kleuringprotocollen zijn beschikbaar. Echter, de verwerking, inbedding, en deparaffinisatie van FFPE weefsels, evenals antigeen ophalen15, een proces waarbij antilichamen beter toegang epitopes, is tijdrovend. Bovendien draagt de verwerking van FFPE-weefsels bij tot autofluorescentie16 en maskers op epitopen, wat resulteert in de variabiliteit en het gebrek aan antilichaamkloon die beschikbaar is om antigenen in FFPE-weefsels op te sporen17,18,19. Een voorbeeld is de menselijke leukocyteantigeen (HLA) klasse I alleles20. In tegenstelling, snap bevriezing van weefsels omvat geen uitgebreide verwerking stappen voorafgaand aan of na de vaststelling, het omzeilen van de noodzaak voor antigeen terugwinning21,22, en waardoor het gunstig is voor het opsporen van een breder scala van doelen. Daarom kan het gebruik van bevroren weefsels voor multispectrale fluorescentiebeeldvorming waardevol zijn om doelen voor preklinische en klinische studies te detecteren.
Gezien de bovengenoemde beperkingen bij het gebruik van FFPE weefsels, vroegen we of multispectrale fluorescentie beeldvorming kan worden uitgevoerd op bevroren weefsels. Om deze vraag aan te pakken, hebben we een gelijktijdige multiplex kleurmethode getest met behulp van een paneel van gefluorofe-geconjugeerde antilichamen om meerdere antigenen te detecteren en analyseerden we de kleuring met behulp van een semi-geautomatiseerd multispectral imaging systeem. We waren in staat om tegelijkertijd vlek tot zes markers in een enkel weefsel sectie binnen 90 min.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetone (histological grade)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A16F-1GAL</td>
			<td>Fixing tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-mouse CD3</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100212</td>
			<td>Clone - 17A2; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488, eBioscience anti-human CD20</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>53-0202-82</td>
			<td>Clone - L26; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 Mouse anti-Ki-67</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558617</td>
			<td>Primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 anti-human CD3</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>300446</td>
			<td>Clone - UCHT1; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 anti-mouse CD8a</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100758</td>
			<td>Clone - 53-6.7; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 anti-human CD8a</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>372906</td>
			<td>Clone - C8/144B; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 anti-mouse CD206 (MMR)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>141711</td>
			<td>Clone - C068C2; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 anti-mouse CD4 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100426</td>
			<td>Clone - GK1.5; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 Mouse</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td>27</td>
			<td>Mouse frozen tissues used for multispectral training</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin Jar</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S6016-6EA</td>
			<td>Rehydrating and washing slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Solution</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>564907</td>
			<td>Nucleic Acid stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond White Glass Charged Slides</td>
			<td>DOT Scientific</td>
			<td>DW7590W</td>
			<td>Adhering tissue sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline 1x (without Ca and Mg)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MT21031CV</td>
			<td>Washing and diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Slips</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>3306</td>
			<td>Protecting stained tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Normal Tonsil OCT frozen tissue block</td>
			<td>AMSBio</td>
			<td>AMS6023</td>
			<td>Human frozen tissue used for multispectral staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum 1X</td>
			<td>Gemini Bio-Products</td>
			<td>100-512</td>
			<td>Blocking and diluent for human tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>inForm</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>Version 2.4.1</td>
			<td>Machine learning software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP/Cyanine5.5 anti-human CD4</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>300529</td>
			<td>Clone - RPA-T4; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy 5.5 Rat Anti-CD11b</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550993</td>
			<td>Clone - M1/70; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenochart</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>Version 1.0.8</td>
			<td>Whole slide scan software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P36965</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Research Cryostat</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>CM3050 S</td>
			<td>Sectioning tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superblock 1X</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>37515</td>
			<td>Blocking mouse tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T Solution</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Embedding tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra 3.0 Automated Quantitative Pathology Imaging System, 6 Slide</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>CLS142568</td>
			<td>Semi-automated multispectral imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra Software</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>Version 3.0.5</td>
			<td>Software to operate microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rapid method for multispectral fluorescence imaging of frozen tissue sections

Multispectrale fluorescentiebeeldvorming op formaline-vaste paraffine-embedded (FFPE) weefsels maakt het mogelijk om meerdere markers in één weefselmonster te detecteren die informatie kunnen geven over antigeencoexpressie en ruimtelijke verdeling van de markers. Een gebrek aan geschikte antilichamen voor formaline-vaste weefsels kan echter de aard van de gedetecteerde merkers beperken. Bovendien is de kleurmethode tijdrovend. Hier beschrijven we een snelle methode om multispectrale fluorescentiebeeldvorming uit te voeren op bevroren weefsels. De methode omvat de gebruikte fluorophorecombinaties, gedetailleerde stappen voor het kleuren van muizen- en menselijke bevroren weefsels en de scan-, acquisitie- en analyseprocedures. Voor kleuringsanalyse wordt gebruik gemaakt van een commercieel verkrijgbaar semi-geautomatiseerd multispectral eibeeldbeeldvormingssysteem. Door deze methode werden tot zes verschillende markers gekleurd en gedetecteerd in een enkele bevroren weefsel sectie. De machine learning analyse software kan fenotype cellen die kunnen worden gebruikt voor kwantitatieve analyse. De hier beschreven methode voor bevroren weefsels is nuttig voor de detectie van markers die niet kunnen worden gedetecteerd in FFPE-weefsels of waarvoor antilichamen niet beschikbaar zijn voor FFPE-weefsels.

Detectie van enkelbevlekte markeringen op bevroren miltsecties Aangezien het semi-geautomatiseerde beeldvormingssysteem gebruik maakt van een vloeistofkristaltable filter (LCTF) systeem dat een breder bereik van golflengtedetectie25mogelijk maakt , en omdat hier geen signaalversterkingsstappen zijn uitgevoerd, hebben we eerst de detectie geoptimaliseerd van onze primaire geconjugeerde antilichamen voor elke marker op de microscoop. Een voorbeeld wordt weergegeven in <strong cla...

Watch this Scientific Journal Video about A Rapid Method for Multispectral Fluorescence Imaging of Frozen Tissue Sections at JoVE.com

A Rapid Method for Multispectral Fluorescence Imaging of Frozen Tissue Sections

We beschrijven een snelle kleuringsmethode om multispectrale beeldvorming op bevroren weefsels uit te voeren.

Een snelle methode voor multispectrale fluorescentiebeeldvorming van bevroren weefselsecties

Multispectral fluorescence imaging on formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues enables the detection of multiple markers in a single tissue sample ...

Deze methode is handig om meerdere biomarkers in één cryosection te detecteren en te colokaliseren, inclusief markeringen die normaal gesproken niet detecteerbaar zijn in paraffinesecties. Met behulp van deze experimentele kleuringsmethode wordt de kleuringstijd aanzienlijk verkort en kan de methode in elk laboratorium worden uitgevoerd. Het demonstreren van deze methode zal Dinesh Jaishankar zijn.Hij is een ervaren postdoc uit het lab, en ook de Immunotherapy Assessment Core, Facilities Manager. Houd bij het selecteren van antilichamen voor de analyse rekening met de excitatie- en emissiefiltersets die beschikbaar zijn op het semi-geautomatiseerde beeldvormingssysteem. En na het testen van verschillende combinaties van fluorofofoër geconjugeerde primaire antilichamen, bereiden fluoroforen worden gebruikt, zodat u minimale spectrale overlap zoals voorgesteld in de tabel.Voor multiplex kleuring, bereiden een cocktail van antilichamen met compatibele fluoroforen bij vooraf bepaalde optimale wanen, en voeg de cocktail aan de weefselsecties van belang. Voor enkele marker kleuring, voeg de primaire geconjugeerde antilichaam alleen aan de dia. Voor alle kleuringen, omvatten een controle onbevlekte dia die dezelfde kleuring procedure ondergaat zonder de toevoeging van een primaire geconjugeerde antilichaam.Na een incubatie van een uur bij kamertemperatuur beschermd tegen licht, was de glijbanen twee keer met PBS gedurende vijf minuten per wasbeurt. Na de tweede wasbeurt, teller vlek de multiplex bevlekte dia's met DAPI gedurende zeven minuten op kamertemperatuur beschermd tegen licht, gevolgd door twee vijf minuten wasbeurten in PBS. Als u een spectrale bibliotheek wilt maken, stelt u de lampkracht van het multispectrale beeldvormingssysteem in op 100% en opent u de bedieningssoftware voor de microscoop.Selecteer Protocol en nieuw protocol bewerken. Voer een protocolnaam in en selecteer Fluorescentie onder de beeldmodus. Geef vervolgens een studienaam op en laad de enkele gekleurde dia's op het podium.Klik op Belichting bewerken en gebruik de opties voor automatisch scherpstellen en automatisch blootleggen om de belichtingstijden aan te passen en momentopnamen voor de enkele gekleurde dia's te verkrijgen. Sla na het beeldvorming van de enkele gekleurde dia's het protocol op. En laad in de machine learning-software onder het tabblad Build Library elke enkele gekleurde afbeelding.Selecteer de juiste vloer en klik op Uitpakken. De software zal automatisch het fluorescerende signaal dat in de vloer wordt geselecteerd, extraheren. Als u de geëxtraheerde kleur wilt opslaan, klikt u op Opslaan om op te slaan.Er kan een nieuwe groep worden gemaakt of de geëxtraheerde kleur kan worden opgeslagen in een bestaande groep. Voor multispectrale beeldvorming, zodra de spectrale bibliotheek is gemaakt en geverifieerd, pas de focus en belichtingstijden op de multiplex gekleurde dia zoals aangetoond, en opent gescande dia's om een nieuwe taak te maken. Geef een dia-id op en selecteer een protocol.Selecteer onder taak de hele diascan om een hele diascan uit te voeren op de met meerdere stained dia's. Selecteer in de hele diascanafbeelding interessegebieden in de afbeelding. Deze gebieden worden gescand met behulp van de eerder ingestelde belichtingstijden op de multiplexdia die moet worden gebruikt voor spectrale niet-mengen en analyseren.Selecteer in de microscoopbesturingssysteemsoftware de optie MSI-velden onder taak aanschaffen en klik vervolgens op Dia verwerken om interessegebieden te verwerven bij een vergroting van 20x. Zodra de interessegebieden zijn verworven, klikt u in de machine learning-software op Bestand en Openen onder het tabblad handmatige analyse om de multiplex gekleurde afbeeldingen te laden. Selecteer de spectrale bibliotheekbron en klik op Vloeren selecteren om de eerder opgeslagen spectrale bibliotheek te kiezen.Klik op Bestand en Openen om de niet-bevlekte afbeelding te laden. Klik vervolgens op het pictogram autofluorescentieinktmarkering en teken een lijn of gebied op de niet-gekleurde dia om autofluorescentie in het weefsel te identificeren. Wijs vervolgens onder het tabblad Markeringen en kleuren bewerken namen toe voor elke markering en klik op Alles voorbereiden.Selecteer in de machine learning-software de cytoplasmamemmembraan- en markeropties in het paneel nadat u het spectrally unmixed-afbeelding hebt geverifieerd. En met behulp van de ellipsknop, selecteert u gebruik maken van dit signaal te vinden, om de marker te configureren om ofwel de kernen, cytoplasma of membraan te detecteren. wanneer een cytoplasma- of membraanmarkering is gekozen, selecteert u de optie Signaal gebruiken om te helpen bij het splitsen van kernsplitsing.De software detecteert en creëert automatisch individuele maskers voor de kern, cytoplasma en membraan. Gebruik de pathologieweergave voor een specifieke markering en de configuratieopties in de software om de maskers aan te passen en klik op Alles segmenteren om een celsegmentatiekaart te maken. Selecteer na celsegmentatie de markeringen om de positieve cellen te fenotyperen.Selecteer bovendien ten minste vijf cellen die niet zijn gekleurd met de gekozen marker om de negatieve cellen te fenotypeeren. Klik vervolgens op Classificatie trainen om de software te trainen om automatisch alle cellen te detecteren die zijn gekleurd met de geselecteerde markeringen in de afbeelding. Er wordt een fenotypekaart gemaakt.Zoals deze beelden aantonen, antilichamen gevalideerd voor flow cytometrie kan worden gebruikt om weefsel vlekken visualiseren met behulp van de vloeibare kristal tunable filter in de semi-geautomatiseerde imaging systeem. Hier kan een spectraal ongemengde afbeelding van bevroren menselijke amandel worden waargenomen die etikettering van B-cellen en Prolifererende cellen binnen het folliculaire kiemvormige centrum, en het inter folliculaire T-celgebied omvat. De pathologieweergavenoptie maakt visualisatie van het individuele kleurpatroon voor elke marker in het weefsel van belang mogelijk, wat suggereert dat de multiplexkleuringsmethode en spectrale beeldvorming werken op bevroren weefsel.Zoals aangetoond op een bevroren muis tumor sectie, multispectrale beeldvorming kan ook worden gebruikt om tumor infiltreren T-cellen, en andere myeloïde cel lijntjes met inbegrip van tumor geassocieerde macrofagen visualiseren. Celsegmentatie en fenotype kaarten, en het aantal gekleurde cellen voor elke marker geanalyseerd door de software kan worden gegenereerd, waaruit blijkt dat de software kan worden gebruikt voor kwantificering van de multispectrale vlekken op bevroren weefsels. Voor iemand die nieuw is 6to de techniek, is het belangrijk om de specifieke kenmerken van uw fluorchromes te leren kennen en kwaliteitsbibliotheekdia's voor te bereiden op spectrale unmixing met minimale spectrale overlapping.Het is ook belangrijk om antilichaam titratie uit te voeren. Naar onze mening kan deze methode informatie aan het bed geven over de werkzaamheid van immunotherapie voor kanker en andere therapeutische toepassingen, vooral wanneer timing van essentieel belang is.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combinatie van Adhesive-tape-gebaseerde Sampling en fluorescentie In situ Hybridisatie voor snelle detectie van Salmonella Op Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescentie In situ Hybridisatie (LNA flow-FISH): een methode voor Bacteriële Kleine RNA-detectie

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

Niet-invasieve optische beeldvorming van de lymfatische vasculatuur van een muis

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D multimodale beeldvorming van<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infecties in Muizen

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Fluorescence Time-lapse Imaging of the Complete S. venezuelae Life Cycle Using a Microfluidic Device

Fluorescence Time-lapse Imaging of the Complete S. venezuelae Life Cycle Using a Microfluidic Device

Fluorescentie Time-lapse beeldvorming van de volledige<em&gt; S. venezuelae</em&gt; Life Cycle Met behulp van een microfluïdische apparaat

Live-cell imaging of biological processes at the single cell level has been instrumental to our current understanding of the subcellular organization of ...

A RAPID Method for Blood Processing to Increase the Yield of Plasma Peptide Levels in Human Blood

Een snelle methode voor bloedverwerkende de opbrengst aan plasma peptide niveaus in bloed verhogen

Research in the field of food intake regulation is gaining importance. This often includes the measurement of peptides regulating food intake. For the ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Niet-invasieve<em&gt; In Vivo</em&gt; Fluorescentie Optische Imaging van Inflammatorische MMP Activiteit Met behulp van een Activateerbare Fluorescerende Imaging Agent

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

An All-on-chip Method for Rapid Neutrophil Chemotaxis Analysis Directly from a Drop of Blood

Een all-on-chip methode voor snelle neutrofiele chemotaxis analyse direct van een druppel bloed

Neutrophil migration and chemotaxis are critical for our body's immune system. Microfluidic devices are increasingly used for investigating neutrophil ...

Visualizing Intracellular SNARE Trafficking by Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy

Visualiseren van intracellulaire SNARE mensenhandel door fluorescentie levensduur microscopie Imaging

Soluble N-ethylmaleimide sensitive fusion protein (NSF) attachment protein receptor (SNARE) proteins are key for membrane trafficking, as they catalyze ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

Mycobacterium tuberculosis in muizen met verslaggever enzym fluorescentie Imaging

Reporter enzyme fluorescence (REF) utilizes substrates that are specific for enzymes present in target organisms of interest for imaging or detection by ...