Name: a rapid method for multispectral fluorescence imaging of frozen tissue sections
Uploaded: 2020-03-30T14:00:00
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화상 진찰 및 분석 지도는 연구 자원 센터에 의해 제공되었습니다 – 연구 조직학 및 시카고에 있는 일리노이 대학에 있는 조직 화상 진찰 코어는 연구를 위한 부총장의 사무실에서 지원으로 설치했습니다. 이 작품은 NIH/NCI RO1CA11317에 의해 CLP에, NIH/NIAMS (SBDRC 교부금 1P30AR075049-01)에 의해 A. Paller 박사에게, 그리고 노스웨스턴 대학의 면역 요법 평가 코어에 로버트 H. 루리 종합 암 센터의 지원에 의해 지원되었습니다.

마우스 비장 및 HLF16 마우스 종양조직(23)은 당사의 실험실로부터 수득되었다. 인간 편도선 조직은 상용 공급 업체로부터 구입되었습니다. 자세한 내용은 재료 표에제공됩니다.
1. 조직 포함
<ol><li>OCT (최적의 절삭 온도) 용액에 신선한 조직을 포함하고 드라이 아이스 또는 액체 질소를 사용하여 동결을 스냅.</li>
	<li>조직을 -80 °C에서 보관하십시...

냉동 조직은 MIF 이미징을 위해 광범위하게 사용되어 왔으며 전통적으로 직접 및 간접 방법32를사용하여 조직에 3~4개의마커(31)를 검출하였다. 직접적인 방법에서, 항체는 조직을 표지하기 위하여 형광 염료 또는양자점(33)에 공액되고, 반면 간접적인 방법에서는, 비공액 1차 항체는 1차 항체를 특이적으로 인식하는 형광공 결합이차 항체에 선행...

현미경 화상 진찰 기술에 있는 최근 어드밴스는 생물학 프로세스 및 질병 상태의 우리의 지식 그리고 이해를 현저하게 향상했습니다. 염색체 면역 조직 화학 (IHC)를 통해 조직에 있는 단백질의 situ 탐지에서는 병리학에서 일상적으로 수행됩니다. 그러나, 발색성 IHC 염색을 이용한 다중 마커의 검출은 다중 면역형광(mIF) 염색 접근법을 사용하는1가지 및 새로운 방법이며, 여기서 다중 생물학적 마커는 단일 조직 샘플에 표지되고, 개발되고 있다. 다중 생물학적 마커의 검출은 조직 구조, 세포의 공간 분포 및 항원 공생과 관련된 정보가 모두 단일 조직 샘플2에서포착되기 때문에 유용하다. 다중 스펙트럼 형광 화상 진찰 기술의 사용은 다중 생물학 마커의 검출가능하게 했습니다. 이 기술에서는, 특정 광학을 사용하여 각 개별 형광공의 형광 스펙트럼을 분리하거나 "혼합되지 않은", 어떤 스펙트럼 크로스토크 없이 다중 마커의 검출을 가능하게한다 3. 다스펙트럼 형광 이미징은 세포 생물학, 전임상 약물 개발, 임상 병리학 및 종양 면역 프로파일링4,,5,,6에서중요한 접근법이 되고 있다. 중요하게도, 면역 세포(특히 CD8 T 세포)의 공간 분포는 기존 종양을 가진 환자에 대한 예후 인자로서 작용할 수 있다7.
멀티플렉스 형광 염색에 대한 다양한 접근법이 개발되어 동시에 또는 순차적으로 수행될 수 있습니다. 동시 염색 방법에서, 모든 항체는 조직을 라벨링하는 단일 단계에서 칵테일로서 함께 첨가된다. UltraPlex 기술은 융동포극성 1차 항체의 칵테일을 사용하고, 그 다음에 는 형광공화 항체-합텐 이차 항체의 칵테일을 사용합니다. InSituPlex 기술8은 조직에 동시에 첨가되는 독특한 DNA 공액 1차 항체의 칵테일을 사용하여 증폭 단계와 최종적으로 1차 항체상에서 각각의 독특한 DNA 서열에 상보적인 플루오로포폴화 결합 프로브를 사용한다. 이 두 가지 기술은 핵 염색을 위한 4개의 마커와 4', 6-다이아미노-2-페닐린들레(DAPI)를 검출할 수 있게 합니다. 동시 멀티플렉스 염색을 위한 두 가지 다른 접근법은 이차 이온 질량분석9를기반으로 한다. 하이페리온 이미징 시스템은 이미징 질량 세포 분석10을 사용하여 최대 37개의 마커를 감지합니다. 이 기술은 금속 공액 항체의 칵테일을 사용하여 조직을 염색하고 조직의 특정 영역은 레이저에 의해 압산되어 금속 이온이 검출되는 질량 세포계로 옮겨지습니다. 또 다른 유사한 기술은 다중 이온 빔 이미징 기술11을사용하는 IONPath입니다. 이 기술은 금속 공액 항체를 제거하기 위해 레이저 대신 수정된 질량 분석 기기와 산소 이온 소스를 사용합니다. 이러한 모든 동시 멀티플렉스 염색 접근법은 여러 마커의 검출을 가능하게 하는 반면, 항체에 DNA, 합텐 또는 금속을 결합시키는 데 수반되는 비용, 절제로 인한 조직의 손실 및 혼합을 위한 광범위한 이미지 처리를 과소평가할 수 없습니다. 또한 키트 및 염색 프로토콜은 현재 FFPE 조직에서만 사용할 수 있으며 사용자 지정 패널을 개발하는 것은 추가 시간과 지출을 수반합니다.
이와 는 대조적으로 순차적 멀티플렉스 염색 방법은 하나의 마커에 항체로 조직을 라벨링하고, 항체를 제거하기 위해 스트립을 하고, 이 과정의 순차적 반복을 통해 다중마커(12)를표지하는 것을 포함한다. 티라미드 신호 증폭(TSA)은 가장 자주 사용되는 순차 적중 법입니다. 다른 두 개의 멀티플렉싱 기술은 동시 및 순차적 염색 방법의 조합을 사용합니다. CODEX 플랫폼13은 색인 된 중합 단계를 사용하여 결국 불소로 표지되는 독특한 DNA 올리고뉴클레오티드 서열에 결합된 항체의 칵테일을 채택하고 이미징, 스트립 및 반복하여 최대 50개의 마커를 검출하는 과정을 반복한다. MultiOmyx 멀티플렉스 염색 접근법14는 3~4개의 형광공형 항체의 칵테일로 염색을 반복하고, 형광을 담금질하고, 이 주기를 반복하여 단일 섹션에서 최대 60개의 마커를 검출한다. 동시 멀티플렉스 염색 방법과 유사하게 광범위한 마커를 검출할 수 있지만 염색, 이미지 수집, 처리 및 분석에 수반되는 시간은 광범위합니다. 스트리핑/담금질 단계는 가열 및/또는 조직 견본을 표백하는 관련시키고, 이렇게, 순차적인 다중 배차 염색 접근은 가열 또는 표백시 조직 무결성을 유지하는 FFPE 조직에 일반적으로 수행됩니다.
포르말린 고정 및 후속 파라핀 삽입은 임상 환경에서 용이하게 수행되고, 조직 블록은 저장이 용이하며, 여러 멀티플렉스 염색 프로토콜을 사용할 수 있다. 그러나, FFPE 조직의 처리, 포함 및 탈파화뿐만 아니라 항원회수(15)는항체가 에피토프에 더 잘 접근할 수 있는 과정은 시간이 많이 걸린다. 더욱이, FFPE 조직에 관여하는 처리는자가형광(16) 및 마스크 표적 에피토프에 기여하며, 그 결과 FFPE 조직17,,18,,19에서항원을 검출할 수 있는 항체 클론의 가변성 및 결여를 초래한다. 일례로 인간 백혈구 항원(HLA) 클래스 I Alleles20이다. 대조적으로, 조직의 스냅 동결은 항원회수(21,,22)의필요성을 우회하고, 광범위한 표적을 검출하는 데 유익하게 하기 전 또는 후에 광범위한 처리 단계를 수반하지 않는다. 따라서 다스펙트럼 형광 이미징에 냉동 조직을 사용하여 전임상 및 임상 연구를 위한 표적을 검출하는 것이 유용할 수 있습니다.
FFPE 조직을 사용할 때 위에서 언급 한 한계를 감안할 때, 우리는 다중 스펙트럼 형광 이미징이 냉동 조직에서 수행 될 수 있는지 여부를 물었다. 이 문제를 해결하기 위해, 우리는 여러 항원을 검출하기 위해 형광 공조 항체의 패널을 사용하여 동시 멀티 플렉스 염색 방법을 테스트하고 반자동 다중 스펙트럼 이미징 시스템을 사용하여 염색을 분석했다. 우리는 90 분 안에 단 하나 조직 단면도에 있는 6개의 마커까지 동시에 얼룩을 수 있었습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetone (histological grade)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A16F-1GAL</td>
			<td>Fixing tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 anti-mouse CD3</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100212</td>
			<td>Clone - 17A2; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488, eBioscience anti-human CD20</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>53-0202-82</td>
			<td>Clone - L26; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 555 Mouse anti-Ki-67</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558617</td>
			<td>Primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 anti-human CD3</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>300446</td>
			<td>Clone - UCHT1; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 594 anti-mouse CD8a</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100758</td>
			<td>Clone - 53-6.7; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 anti-human CD8a</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>372906</td>
			<td>Clone - C8/144B; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 anti-mouse CD206 (MMR)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>141711</td>
			<td>Clone - C068C2; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 anti-mouse CD4 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100426</td>
			<td>Clone - GK1.5; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 Mouse</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td>27</td>
			<td>Mouse frozen tissues used for multispectral training</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin Jar</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S6016-6EA</td>
			<td>Rehydrating and washing slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Solution</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>564907</td>
			<td>Nucleic Acid stain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diamond White Glass Charged Slides</td>
			<td>DOT Scientific</td>
			<td>DW7590W</td>
			<td>Adhering tissue sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate Buffered Saline 1x (without Ca and Mg)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MT21031CV</td>
			<td>Washing and diluent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold Seal Cover Slips</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>3306</td>
			<td>Protecting stained tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Normal Tonsil OCT frozen tissue block</td>
			<td>AMSBio</td>
			<td>AMS6023</td>
			<td>Human frozen tissue used for multispectral staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum 1X</td>
			<td>Gemini Bio-Products</td>
			<td>100-512</td>
			<td>Blocking and diluent for human tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>inForm</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>Version 2.4.1</td>
			<td>Machine learning software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP/Cyanine5.5 anti-human CD4</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>300529</td>
			<td>Clone - RPA-T4; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy 5.5 Rat Anti-CD11b</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>550993</td>
			<td>Clone - M1/70; primary conjugated antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenochart</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>Version 1.0.8</td>
			<td>Whole slide scan software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Diamond Antifade Mountant</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>P36965</td>
			<td>Mounting medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Research Cryostat</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>CM3050 S</td>
			<td>Sectioning tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superblock 1X</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>37515</td>
			<td>Blocking mouse tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek O.C.T Solution</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td>Embedding tissues</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra 3.0 Automated Quantitative Pathology Imaging System, 6 Slide</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>CLS142568</td>
			<td>Semi-automated multispectral imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectra Software</td>
			<td>Akoya Biosciences</td>
			<td>Version 3.0.5</td>
			<td>Software to operate microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rapid method for multispectral fluorescence imaging of frozen tissue sections

포르말린 고정 파라핀 임베디드(FFPE) 조직에 대한 다스펙트럼 형광 이미징을 통해 단일 조직 샘플에서 여러 마커를 검출할 수 있어 마커의 항원 공발 및 공간 분포에 대한 정보를 제공할 수 있습니다. 그러나, 포르말린 고정 조직에 적합한 항체의 부족은 검출될 수 있는 마커의 성질을 제한할 수 있다. 또한, 염색 방법은 시간이 많이 걸립니다. 여기에서 우리는 동결된 조직에 다중 스펙트럼 형광 화상 진찰을 능력을 발휘하는 급속한 방법을 기술합니다. 이 방법은 사용되는 형광공 조합, 마우스 및 인간 냉동 조직의 염색을 위한 상세한 단계, 및 스캐닝, 획득 및 분석 절차를 포함한다. 염색 분석을 위해 시판되는 반자동 다스펙트럼 형광 이미징 시스템이 사용됩니다. 이 방법을 통해, 단일 냉동 조직 섹션에서 최대 6개의 상이한 마커를 염색하고 검출하였다. 기계 학습 분석 소프트웨어는 정량 분석에 사용될 수 있는 표현형 세포를 표현할 수 있다. 동결 된 조직에 대해 여기에 설명된 방법은 FFPE 조직에서 검출 할 수 없거나 항체가 FFPE 조직에 사용할 수없는 마커의 검출에 유용합니다.

냉동 비장 섹션에서 단일 염색 마커 검출 반자동 이미징 시스템은 더 넓은 범위의 파장검출(25)을가능하게 하는 액정 튜닝 필터(LCTF) 시스템을 사용하며, 여기서 신호 증폭 단계가 수행되지 않기 때문에 현미경의 각 마커에 대한 1차 공액 항체의 검출을 먼저 최적화했습니다. 그림 1에는각 단일 염색 마커가 의사 색상의 빨간색인 예가 나와 있?...

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A Rapid Method for Multispectral Fluorescence Imaging of Frozen Tissue Sections

우리는 냉동 된 조직에 다중 스펙트럼 이미징을 수행하는 빠른 염색 방법을 설명합니다.

냉동 조직 섹션의 다스펙트럼 형광 이미징을위한 신속한 방법

Multispectral fluorescence imaging on formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues enables the detection of multiple markers in a single tissue sample ...

이 방법은 파라핀 섹션에서 일반적으로 검출할 수 없는 마커를 포함하여 단일 극저온 섹션에서 여러 바이오마커를 검출하고 공동 국소화하는 데 도움이 됩니다. 이러한 실험염색 방법을 사용하여 염색 시간이 현저히 감소하고 모든 실험실에서 방법을 수행할 수 있다. 이 방법을 시연하는 것은 디네시 자이샨카르입니다.그는 실험실에서 숙련 된 postdoc, 또한 면역 요법 평가 코어, 시설 관리자. 분석을 위해 항체를 선택할 때 반자동 이미징 시스템에서 사용할 수 있는 여기 및 방출 필터 세트를 고려하십시오. 그리고 형광소의 다양한 조합을 테스트 한 후 1 차 항체를 공각 한 후, 당신이 테이블에 제안 된 바와 같이 최소한의 스펙트럼 중복을 갖도록 사용되는 형광을 준비.멀티플렉스 염색의 경우, 미리 정해진 최적의 망상에서 호환되는 형광과 함께 항체의 칵테일을 준비하고, 관심있는 조직 섹션에 칵테일을 추가하십시오. 단일 마커 염색의 경우, 슬라이드에만 1차 공조 항체를 추가합니다. 모든 염색에 대해, 1차 공각 항체를 첨가하지 않고 동일한 염색 절차를 겪는 제어 미염색 슬라이드를 포함한다.빛으로부터 보호되는 실온에서 1시간 동안 잠복한 후 PBS로 슬라이드를 세척당 5분 동안 두 번 세척합니다. 두 번째 세척 후, 카운터는 빛으로부터 보호 실온에서 7 분 동안 DAPI와 멀티 플렉스 스테인드 슬라이드를 얼룩, PBS에서 두 5 분 세척. 스펙트럼 라이브러리를 만들려면 다중 스펙트럼 이미징 시스템의 램프 전력을 100%로 설정하고 현미경 작동 소프트웨어를 엽니다.프로토콜 편집 및 새 프로토콜을 선택합니다. 프로토콜 이름을 입력하고 이미징 모드에서 형광을 선택합니다. 그런 다음 스터디 이름을 제공하고 단일 스테인드 슬라이드를 스테이지에 로드합니다.노출 편집을 클릭하고 자동 초점 및 자동 노출 옵션을 사용하여 노출 시간을 조정하고 단일 스테인드 슬라이드에 대한 스냅숏을 얻습니다. 단일 스테인드 슬라이드를 이미징한 후 프로토콜을 저장합니다. 그리고 빌드 라이브러리의 탭 아래의 기계 학습 소프트웨어에서 각 스테인드 이미지를 로드합니다.적절한 바닥을 선택하고 추출을 클릭합니다. 이 소프트웨어는 자동으로 바닥에서 선택한 형광 신호를 추출합니다. 추출된 색상을 저장하려면 저장을 클릭하여 저장합니다.새 그룹을 만들거나 추출된 색상을 기존 그룹에 저장할 수 있습니다. 다중 스펙트럼 이미징의 경우 스펙트럼 라이브러리가 만들어지고 확인되면 멀티플렉스 스테인드 슬라이드의 초점 및 노출 시간을 설명한 대로 조정하고 스캔된 슬라이드를 열어 새로운 작업을 만듭니다. 슬라이드 ID를 제공하고 프로토콜을 선택합니다.작업에서 전체 슬라이드 스캔을 선택하여 멀티플렉스 스테인드 슬라이드에서 전체 슬라이드 스캔을 수행합니다. 전체 슬라이드 스캔 이미지에서 이미지 전체의 관심 영역을 선택합니다. 이러한 영역은 스펙트럼 언믹싱 및 분석에 사용되는 멀티플렉스 슬라이드에서 이전에 설정된 노출 시간을 사용하여 스캔됩니다.현미경 작동 소프트웨어에서 작업 중인 MSI 필드를 획득한 다음 프로세스 슬라이드를 클릭하여 20배 배율로 관심 영역을 획득합니다. 관심 영역을 획득하면 기계 학습 소프트웨어에서 수동 분석 탭에서 파일 및 열기를 클릭하여 멀티플렉스 스테인드 이미지를 로드합니다. 스펙트럼 라이브러리 소스를 선택하고 바닥 선택을 클릭하여 이전에 저장된 스펙트럼 라이브러리를 선택합니다.파일 및 열기를 클릭하여 얼룩이 없는 이미지를 로드합니다. 그런 다음 자동 불피성 잉크 마커 아이콘을 클릭하고 스테인드 슬라이드에 선 또는 영역을 그려 조직 내의 자동 형광을 식별합니다. 그런 다음 마커 및 색상 편집 탭에서 각 마커에 대한 이름을 할당하고 모두 준비를 클릭합니다.기계 학습 소프트웨어에서 스펙트럼 혼합 되지 않은 이미지를 확인한 후 패널에서 세포막 및 마커 옵션을 선택합니다. 그리고 타원 버튼을 사용하여, 이 신호를 사용하여 핵, 세포질 또는 막을 검출하기 위해 마커를 구성한다. 세포질 또는 멤브레인 마커를 선택하면 핵 분할 옵션을 지원하기 위해 신호 사용법을 선택합니다.이 소프트웨어는 핵, 세포질 및 멤브레인에 대한 개별 마스크를 자동으로 감지하고 생성합니다. 소프트웨어의 특정 마커 및 구성 옵션에 대한 병리학 보기를 사용하여 마스크를 조정하고 세그먼트 모두를 클릭하여 셀 세분화 맵을 만듭니다. 세포 세분화 후 마커를 선택하여 양수 세포를 표현합니다.또한, 선택된 마커로 염색되지 않은 적어도 5개의 세포를 선택하여 음세포를 표현한다. 그런 다음 Train Classifier를 클릭하여 소프트웨어를 학습하여 이미지 내에서 선택한 마커로 얼룩진 모든 셀을 자동으로 감지합니다. 표현형 맵이 만들어집니다.이러한 심상이 입증된 바와 같이, 혈류 세포측정을 위해 검증된 항체는 반자동 이미징 시스템에서 액정 튜닝 필터를 사용하여 조직 염색을 시각화하는 데 사용될 수 있다. 여기서 는 여포 발아 센터 내의 B 세포 및 증식 세포의 라벨링, 및 간 여포 T 세포 영역의 확산을 포함하는 고정된 인간 편도선의 반사혼합 이미지를 관찰할 수 있다. 병리학 보기 옵션은 관심있는 조직 내의 각 마커에 대한 개별 염색 패턴을 시각화 할 수 있으며, 멀티 플렉스 염색 방법 및 스펙트럼 이미징이 냉동 조직에 작용함을 시사합니다.냉동 마우스 종양 섹션에서 입증된 바와 같이, 다중 스펙트럼 이미징은 또한 종양 침투 T 세포, 및 종양 관련 대식세포를 포함한 다른 골수성 세포 계보를 시각화하는 데 사용될 수 있다. 세포 세분화 및 표현형 맵, 소프트웨어에 의해 분석된 각 마커에 대한 스테인드 셀의 수가 생성될 수 있으며, 이는 소프트웨어가 냉동 조직에 대한 다중 스펙트럼 염색의 정량화에 사용될 수 있음을 입증한다. 새로운 6to 기술의 경우, 플루오로크롬의 특정 특징을 파악하고 스펙트럼 을 최소화한 스펙트럼 중복으로 스펙트럼 을 풀기 위한 고품질 라이브러리 슬라이드를 준비하는 것이 중요합니다.항체 적정을 수행하는 것도 중요합니다. 우리의 의견으로는, 이 방법은 특히 타이밍이 본질일 때 암 및 그밖 치료 응용을 위한 면역 요법의 효험에 관하여 침대 측 정보를 제공할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

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접착제 테이프 기반의 샘플링 및 형광의 조합 현장에서</em의 신속한 감지를 위해> 하이브 리다이 제이션 살모넬라균 신선한 농산물에 대한

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

연구

면역학 및 감염병학

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

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옥내 핵산 흐름 Cytometry - 형광 현장에서 하이브 리다이 제이션 (LNA 흐름 - 물고기) : 세균의 소형 RNA 감지하는 방법

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

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4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

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의 4D 좌석 Multimodality 이미징<em&gt; Citrobacter rodentium</em마우스에서&gt; 감염

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

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Live-cell imaging of biological processes at the single cell level has been instrumental to our current understanding of the subcellular organization of ...

A RAPID Method for Blood Processing to Increase the Yield of Plasma Peptide Levels in Human Blood

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비 침습적<em&gt; In Vivo</em&gt; 활성화 가능한 형광 이미징 에이전트를 사용한 염증성 MMP 활성의 형광 광학 이미징

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

An All-on-chip Method for Rapid Neutrophil Chemotaxis Analysis Directly from a Drop of Blood

혈액 방울로부터의 신속한 호중구 화학 주 화성 분석을위한 올 온칩 (all-on-chip) 방법

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Soluble N-ethylmaleimide sensitive fusion protein (NSF) attachment protein receptor (SNARE) proteins are key for membrane trafficking, as they catalyze ...

Imaging Mycobacterium tuberculosis in Mice with Reporter Enzyme Fluorescence

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