Name: measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry
Uploaded: 2020-05-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

نشكر جميع أعضاء URCACyt ، منصة قياس الخلايا التدفق ، وموظفي قسم علم المناعة ، وموظفي قسم الطب الباطني وطب الشيخوخة ، الذين ساهموا في تحسين البروتوكول والتحقق من صحته. تم تمويل هذا العمل من قبل مستشفيات جامعة ريمس (رقم المنحة AOL11UF9156).

وقد استعرضت لجنة الأخلاقيات الإقليمية بروتوكول جمع الدم البشري والتعامل معه ووافقت عليه، ورقم البروتوكول هو 2011-A00594-37. ولأن البروتوكول التالي يصف التعامل مع الدم البشري، ينبغي اتباع مبادئ توجيهية مؤسسية للتخلص من المواد الخطيرة بيولوجياً. يجب ارتداء معدات السلامة المختبرية، مثل معاطف ال...

تتوفر العديد من التقنيات لتحديد كثافة الكريات الدم الحمراء CR1 (CR1/E). وكانت التقنيات الأولى المستخدمة agglutination من خلايا الدم الحمراء من قبل الأجسام المضادة المضادة لCR131 وتشكيل الورود في وجود كريات الدم الحمراء المغلفة مع C3b32. تم استبدال هذه التقنيات البدائية بسرعة ب?...

CR1 (استكمال مستقبلات النوع 1، CD35) هو 200 كيلو دا بروتين سكري عبر الغشاء الموجود على سطح العديد من أنواع الخلايا، مثل كريات الدم الحمراء1،B الخلايا الليمفاوية2،الخلايا الأحادية، بعض الخلايا التائية،خلايادالجريب 3، الخلايا الفلكية الجنينية4،والخلايا البوائية الكروية5. CR1 التدخل مع ليغاندس C3b, C4b, C3bi6,,7,,8,,9,وحدة فرعية من مكون تكملة الأولى, C1q10 و MBL (المنان ملزمة lectin)11 يمنع تفعيل تكملة وتشارك في استجابة المناعة الفكاهية والخلوية.
في الرئيسيات ، بما في ذلك البشر ، تشارك كريات الدم الحمراء CR1 في نقل المجمعات المناعية إلى الكبد والطحال ، لتنقية الدم ومنع تراكمها في الأنسجة الضعيفة مثل الجلد أو الكلى12،13،14. هذه الظاهرة من التصاق المناعة بين المجمعات المناعية والكريات الحمراء يعتمد على عدد جزيئات CR115. في البشر ، فإن متوسط كثافة CR1 /E هو 500 فقط (أي 500 جزيء من CR1 لكل إريثروسيت). تختلف هذه الكثافة من فرد إلى آخر (100-1200 CR1/E) ومن كريات حمراء إلى أخرى في نفس الشخص. بعض الأفراد من النمط الظاهري "فارغة" التعبير عن أقل من 20 CR1/E16.
يتم تنظيم كثافة CR1/E من قبل اثنين من أليلات autosomal المشتركة المهيمنة المرتبطة بطفرة نقطة في intron 27 من الترميز الجيني لCR1 * 117،18. تنتج هذه الطفرة موقع تقييد إضافي لإنزيم HindIII. شظايا القيد التي تم الحصول عليها بعد الهضم مع HindIII في هذه الحالة هي 7.4 كيلوبايت للأليل مرتبطة بتعبير قوي من CR1 (H: allele عالية) و 6.9 كيلوبايت للأليل المرتبطة بالتعبير CR1 منخفضة (L: allele منخفضة). تم العثور على هذا الرابط في القوقازيين والآسيويين ولكن ليس في السكان المنحدرين من أصل أفريقي19.
ويرتبط أيضا مستوى التعبير عن ERythrocyte CR1 مع وجود الطفرات النيوكليوتيدات نقطة في exon 13 ترميز SCR 10 (I643T) وفي exon 19 ترميز SCR16 (Q981H). وهو مرتفع في homozygous 643I/981Q وانخفاض في homozygous 643T/981H الأفراد20. وهكذا، يعبر الأفراد "المنخفضون" عن حوالي 150 CR1/E، ويعبر الأفراد "المتوسطون" عن حوالي 500 CR1/E، ويعبر الأفراد "المرتفعون" عن حوالي 1000 CR1/E.
بالإضافة إلى تعدد الأشكال كثافة الكريات الحمراء هذا ، يتميز CR1 بتعدد الأشكال الطول المطابق لأربعة أنماط من الأحجام المختلفة: CR1 * 1 (190 kDa) ، CR1 * 2 (220 kDa) ، CR1 * 3 (160 kDa) ، وCR1 * 4 (250 kDa)21 وتعدد الأشكال المضادة للطبيعة المقابلة لمجموعة الدم KN22.
نقدم طريقتنا على أساس قياس التدفق الخلوي لتحديد كثافة CR1/E. باستخدام ثلاثة مواضيع تعرف كثافتها CR1/E، يعبر عن مستوى كثافة منخفض (180 CR1/E)، ومستوى كثافة متوسطة (646 CR1/E)، ومستوى كثافة عالية (966 CR1/E)، فمن السهل قياس شدة الفلورسال (MFI) المنخفضة لخلايا الدم الحمراء أو خلايا الدم الحمراء (RBC)، أو RBC MFI، بعد المكافحة المناعية لـ CR1 باستخدام مقياس تدفق. يمكن للمرء بعد ذلك رسم خط قياسي يمثل MFI كدالة لكثافة CR1/E. قياس MFI من المواضيع التي CR1 / E كثافة غير معروفة ومقارنتها مع هذا الخط القياسي ، فمن الممكن تحديد الأفراد CR1 / E كثافة. وقد استخدمت هذه التقنية لسنوات عديدة في المختبر، ومكنتنا من الكشف عن انخفاض في التعبير عن الكريات الحمراء CR1 في العديد من الأمراض مثل الذئبة الجهازية (SLE)23،متلازمة نقص المناعة المكتسب (الإيدز)24، الملاريا25، ومؤخرا مرض الزهايمر (AD)26،27. تطوير الأدوية التي تستهدف CR1 إلى زوجين مع كريات الدم الحمراء، كما هو الحال في الأدوية المضادة للتجلط28 يتطلب تقييم كثافة CR1/E، وتوافر تقنية قوية لتحديد CR1.
عرض البروتوكول أشواط في singlicate. وهو قابل للتكيف لتحديد كثافة CR1/E على العديد من الأفراد باستخدام 96 لوحات بئر محددة متاحة تجاريا (انظر جدول المواد). لتحقيق هذه الغاية، فمن السهل لتكييف طريقتنا إلى أي لوحة جيدة 96. لكل عينة، يتم توزيع تعليق الخلية من كريات الدم الحمراء (0.5 × 106- 1 × 106 كريات الدم الحمراء) لكل بئر. لكل بئر، أولاً يتم إضافة الأجسام المضادة لCR1 الأولية، ثم العقدية PE، والجسم المضاد الثانوي المضاد للستريبتافيدين، ومرة أخرى streptavidin PE، وذلك باستخدام نفس التخفيفات مثل تلك من طريقتنا، ولكن عن طريق تكييف وحدات التخزين واحترام التناسب.
وينبغي سحب عينات الدم من مواضيع النطاق ومن المواضيع التي يتعين قياسها كميا ً لـ CR1 في نفس الوقت، وتخزينها في الثلاجة عند درجة حرارة 4 درجات مئوية، والتعامل معها عند 4 درجات مئوية (على الثلج و/أو في الثلاجة).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:752px;" width="753">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1000E Barrier Tip</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">2079E</td>
			<td style="width:179px;">sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1-100 &#181;L Bevelled, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1120-1840</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Biotinylated anti-CR1 monoclonal antibody (J3D3)</td>
			<td style="width:239px;">Home production of non-commercial monoclonal antibody, courtesy of Dr J. Cook</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Blouse</td>
			<td style="width:239px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>protection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bovin serum albumin (7,5%)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">15260037</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">11176917</td>
			<td>centrifugation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Clean Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340345</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Comorack-96</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">944060P</td>
			<td>rack</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">655051</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Formaldehyde solution 36.5 %</td>
			<td style="width:239px;">Sigma Aldrich, F-38070 Saint Quentin Fallavier, France</td>
			<td style="width:119px;">F8775-25ML</td>
			<td>Fixation</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">10 &#181;L Graduated, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1121-3810</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">LSRFORTESSA Flow Cytometer</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">647788</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Microman Capillary Pistons</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">067494</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micronic 1.40 mL round bottom tubes</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">MP32051</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micropipette Microman - type M25 -</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">066379</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Phosphate buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">10010031</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Pipette PS 325 mm, 10 mL</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">391952</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">powder-free Nitrile Exam gloves</td>
			<td style="width:239px;">Medline Industries, Inc, Mundelein, IL 60060, USA</td>
			<td style="width:119px;">486802</td>
			<td>sample protection</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 0,5-10 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000024</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 20-100 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000059</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="57">
			<td height="57" style="height:57px;width:216px;">Reference 2 pipette, 100-1000 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000083</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Rinse Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340346</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Round bottom tube</td>
			<td style="width:239px;">Sarstedt, F-70150 Marnay, France</td>
			<td style="width:119px;">55.1579</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">0030120086</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">streptavidin R-PE</td>
			<td style="width:239px;">Tebu Bio, F-78612 Le Perray-en-Yvelines, France</td>
			<td style="width:119px;">AS-60669</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:216px;">Tapered Centrifuge Tubes 50 mL</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td>10203001</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vector anti streptavidin biotin</td>
			<td style="width:239px;">Eurobio Ingen, F-91953 Les Ulis, France</td>
			<td style="width:119px;">BA-0500</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vortex-Genie 2</td>
			<td style="width:239px;">Scientific Industries, Inc, Bohemia, NY 111716, USA</td>
			<td style="width:119px;">SI-0236</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry

CR1 (CD35, مكمل مستقبلات نوع 1 لC3b/C4b) هو غشاء الوزن الجزيئي عالية جليكوبروتين من حوالي 200 كيلو دا التي تسيطر على استكمال التنشيط, ينقل المجمعات المناعية, ويشارك في استجابات المناعة الفكاهية والخلوية. CR1 موجود على سطح العديد من أنواع الخلايا، بما في ذلك كريات الدم الحمراء، ويعرض تعدد الأشكال في الطول، والهيكل (Knops، أو KN، مجموعة الدم)، والكثافة. متوسط كثافة CR1 لكل كريات الدم الحمراء (CR1/E) هو 500 جزيء لكل كريات الدم الحمراء. تختلف هذه الكثافة من فرد إلى آخر (100-1200 CR1/E) ومن كريات حمراء إلى أخرى في نفس الشخص. نقدم هنا طريقة قوية لقياس الخلايا المتدفقة لقياس كثافة CR1/E ، بما في ذلك في الموضوعات التي تعبر عن كثافة منخفضة ، بمساعدة نظام تضخيم المناعة. وقد مكنتنا هذه الطريقة من إظهار انخفاض التعبير عن كريات الدم الحمراء CR1 في أمراض مثل مرض الزهايمر (AD) ، الذئبة الجهازية erythematosus (SLE) ، الإيدز ، أو الملاريا.

الكريات الحمراء من ثلاثة مواضيع التي من المعروف كثافة CR1 ("منخفضة" الموضوع [180 CR1/E], موضوع "متوسط" [646 CR1/E]، وموضوع "عالية" [966 CR1/E])، ومن بين اثنين من المواضيع التي كثافة CR1 التي تحتاج إلى تحديد كانت مناعية من قبل الأجسام المضادة المضادة لCR1 إلى جانب نظام تضخيم باستخدام فلوروكروم phycoerythrin. في البداية...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry

والهدف من هذه الطريقة هو تحديد كثافة CR1 في كريات الدم الحمراء من أي موضوع عن طريق مقارنة مع ثلاثة مواضيع التي يعرف كثافة CR1 الكريات الحمراء. تستخدم هذه الطريقة قياس الخلايا المتدفقة بعد المناعة من كريات الدم الحمراء للأشخاص بواسطة جسم مضاد أحادي النسيلة مضاد لـ CR1 إلى جانب نظام مضخم باستخدام phycoerythrin (PE).

قياس مستقبلات مكملة الإريثروسيت 1 باستخدام قياس التدفق الخلوي

CR1 (CD35, Complement Receptor type 1 for C3b/C4b) is a high molecular weight membrane glycoprotein of about 200 kDa that controls complement activation, ...

ويمكن استخدام هذا البروتوكول لقياس عدد المواقع المضادة للضداد على مستقبلات الخلوية من الفائدة. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تنتج نتائج قوية، حتى بالنسبة للمستقبلات التي يعبر عنها بكثافة منخفضة. هذه الطريقة تمكن من تقييم الحد من CR1 التعبير الكريات الكرسيه وهذا هو مثل مرض الزهايمر, الذئبة الحمامية الجهازية, الإيدز, والملاريا.هذا البروتوكول مفيد لأي تحليل كثافة مستقبلات الخلايا ويمكن أيضا أن تطبق على دراسة تعبير مستقبلات الخلايا عن طريق المجهر fluorescence. نوصي بتباعد الأنابيب أثناء توزيع الخلايا والأجسام المضادة، وأن يكون مصحوبًا بأخصائي قياس الخلايا أثناء التحليل الأول إن أمكن. إن البرهان المرئي على القياس الكمي للمناعة والكثافة حسب قياس التدفق هو أمر بالغ الأهمية لفهم كيفية تعيين معلمات التحليل بشكل صحيح.قبل البدء في التحليل، إضافة 250 ميكرولترات من الصوديوم EDTA تخثر الدم كله من أنابيب تخزين الدم في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر تحتوي على 20 ملليلتر من أربع درجات مئوية PBS-BSA. اخلط محتويات الأنبوب عن طريق انعكاس لطيف وتدور الخلايا عن طريق الطرد المركزي. استخدام ماصة 10 ملليلتر لتجاهل عظمى وإعادة تعليق بعناية بيليه في حجم المتبقية من الحل.إضافة 20 ملليلتر من PBS-BSA الباردة والطرد المركزي الخلايا مرة أخرى. في نهاية الطرد المركزي، ضع الأنبوب في رف، يوضع على الجليد وينقل ثمانية ميكرولترات من كريات الدم الحمراء المغسولة إلى أنبوب 50 ملليلتر يحتوي على ثلاثة ملليلترات من PBS-BSA. ثم اخلط كريات الدم الحمراء بلطف عن طريق الغزل للحصول على تعليق الخلية المتجانسة.بالنسبة لمعالجة مناعة كريات الدم الحمراء، قم بنقل 100 ميكرولترات من كريات الدم الحمراء المخففة بعناية إلى أنابيب فردية 1.5 ملليلتر وجمع خلايا الدم الحمراء عن طريق الطرد المركزي. بعد التخلص من المواد الخارقة ، قم بإضافة 20 ميكرولترات بعناية من 0.5 ميكروغرام لكل ميكرولتر تركيز من الأجسام المضادة للـ CR1 J3D3 في PBS-BSA ، مباشرة إلى كل بيليه. إضافة 20 ميكرولترات من PBS-BSA العازلة وحدها إلى خلايا التحكم السلبية مع خلط لطيف واحتضان العينات لمدة 45 دقيقة في أربع درجات مئوية.في نهاية الحضانة، وغسل العينات مرتين مع 750 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني جديد-BSA لكل أنبوب، في غسل. بعد الغسيل الثاني، إضافة 20 ميكرولترات من واحد إلى 10 تخفيف من streptavidin فيكويريثيرين في PBS-BSA إلى كل أنبوب مع خلط لطيف، واحتضان العينات لمدة 45 دقيقة في أربع درجات مئوية. في نهاية الحضانة ، وغسل العينات مرتين ، كما هو موضح.بعد الغسيل الثاني، قم بإصلاح كل بيليه عينة خلية مع 450 ميكرولترات من عازل التثبيت أثناء الدوامة، قبل نقل كل عينة إلى أنابيب أسفل مستديرة خمس ملليلتر فردية لمدة تصل إلى 48 ساعة من التخزين عند أربع درجات مئوية. لتحليل كريات الدم الحمراء المثبطة للانسياب، انقر زر التجربة الجديد في مقياس التدفق، ثم أعد تسمية التجربة الجديدة. حدد التشتت الأمامي، والتشتت الجانبي، والـPE في نافذة إعدادات مقياس المقاييس.في التجربة المفتوحة، حدد إعدادات إعدادات مقياس البيانات cytometer إعدادات التطبيق وإنشاء ورقة عمل عمومية، وذلك باستخدام مربعات رمادية وتقاطع الشعر لتوجيه التحسين. عندما تم تعيين كل من المعلمات، تحميل أنبوب التحكم غير المطّط على مقياس السيتومي وتشغيل عملية الاقتناء، وتحسين الفولتية إلى الأمام والجانب مبعثر للقضاء على الحطام وضمان أن السكان من الفائدة على نطاق واسع. المقبل، رسم بوابة حول خلايا الدم الحمراء على المؤامرة إلى الأمام مقابل الجانب مبعثر وعرض السكان خلايا الدم الحمراء في مؤامرة نقطة من الفلورس PE.إذا كانت السكان إيجابية على نطاق، تحميل أنبوب التحكم الملون على مقياس السيمتر وتشغيل عملية الاستحواذ. لتسجيل العينات وتحليلها، قم بتفريغ العينة الملطخة وإنشاء مخطط مبعثر أمامي مقابل جانبي ومرسم مدرج تكراري للفلوروس PE على ورقة عمل عالمية جديدة. تحميل العينة الأولى على مقياس الخلايا، تشغيل اقتناء ورسم بوابة خلايا الدم الحمراء حول كريات الدم الحمراء في مؤامرة إلى الأمام مقابل الجانب مبعثر.عرض مجموعة خلايا الدم الحمراء في الرسم البياني للفلورس PE وتحت علامة تبويب الإحصاءات، حدد المتوسط لمعلمات الفلورس في PE على مجموعات خلايا الدم الحمراء. في لوحة معلومات الامتلاك، حدد كافة الأحداث في بوابة الإيقاف و 10,000 حدث لتسجيلها، ثم انقر فوق تسجيل البيانات. عندما يتم تسجيل الحدث، قم بإزالة الأنبوب من مقياس الصوت.يجب أن تبدو مخططات ورقة العمل العمومية كما هو موضح. تحليل تدفق الخلايا cytometric من الدمى الحمراء المثبطة للمناعة من ثلاثة مواضيع من الكثافة CR1 المعروفة يسمح قياس شدة الفلورس المتوسطة للتسمية لكل موضوع. يسمح رسم منحنى باستخدام قيم الموضوع مع الكثافة المعروفة للCR1 الكريت الكرسيه الكريت هذه البيانات أن يتم الإبلاغ عنها كدالة من شدة الفلورسيه المتوسط.مقارنة خط الانحدار الناتج عن هذا المنحنى إلى قيم متوسط كثافة الفلورانس من المواضيع الأخرى تسمح بتحديد كثافة الكرسى CR1 الخاصة بهم. يجب الحرص على أن يتم توزيع كريات الدم الحمراء والأجسام المضادة بشكل صحيح، وبالتالي فإن منحنيات المعايرة للعينات المجربة على التحكم السلبي تقع ضمن نطاق إعدادات مقياس الخلايا. من الممكن تكييف هذا الإجراء لقياس المستقبلات الخلوية الأخرى الكثافة ، ببساطة عن طريق تغيير الأجسام المضادة الأولية و / أو تكييف طبقات التضخيم.كلما كنت التعامل مع الدم، وهناك خطر التلوث المسببة للأمراض. لذلك، تأكد من استخدام الممارسات المختبرية الجيدة وارتداء معدات الحماية الشخصية المناسبة.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

قياس يكمل 50 ٪ الدم الانحلالي (CH 50) نشاط المصل

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

قياس نشاط خلايا في Calpain الثابتة والعيش من خلال التدفق الخلوي

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

الإنسان في المختبر قمع وأداة الكشف عن الاعتراف للدولة في وقت مبكر من الخلل المناعي

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

وحيد الخلية تحليل<emالعصوية الرقيقة> الأغشية الحيوية باستخدام المجهر الإسفار والتدفق الخلوي

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Measuring Attachment and Internalization of Influenza A Virus in A549 Cells by Flow Cytometry

قياس مرفق والتطبع الأنفلونزا A الفيروسات في خلايا A549 بواسطة التدفق الخلوي

Attachment to target cells followed by internalization are the very first steps of the life cycle of influenza A virus (IAV). We provide here a detailed ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

مضان تنشيط الفرز الخليوي لتنقية الخلايا الجذعية بلازماوية الشكل من الفأر نخاع العظم

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

تقييم الشبكية دبقية أكلة وظيفة<em&gt; في فيفو</em&gt; باستخدام الفحص القائمة على الخلوي التدفق

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

قياس T خلية Alloreactivity عن طريق التصوير التدفق الخلوي

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

العزلة والثقافة في المختبر من البلاعم السنخية مورين والبشرية

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

إعداد نخاع العظام كله لتحليل الكتلة الخلايا من الخلايا العدلية النسب

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...