Name: measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry
Uploaded: 2020-05-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

Wij danken alle leden van de URCACyt, flow cytometrie technisch platform, het personeel van de afdeling Immunologie, en het personeel van de afdeling Interne Geneeskunde en Geriatrie, die hebben bijgedragen aan het optimaliseren en valideren van het protocol. Dit werk werd gefinancierd door de universitaire ziekenhuizen van Reims (subsidienummer AOL11UF9156).

Het protocol voor het verzamelen en behandelen van menselijk bloed werd herzien en goedgekeurd door de regionale ethische commissie (CPP Est II), en het protocolnummer is 2011-A00594-37. Omdat het volgende protocol de behandeling van menselijk bloed beschrijft, moeten institutionele richtlijnen voor het verwijderen van biogevaarlijk materiaal worden gevolgd. Laboratoriumveiligheidsuitrusting, zoals laboratoriumjassen en handschoenen, moet worden gedragen.
1. Erytrocyten wassen
<p class="jove...

Er zijn verschillende technieken beschikbaar om de dichtheid van erythrocyte CR1 (CR1/E) te bepalen. De eerste gebruikte technieken waren de agglutinatie van rode bloedcellen door anti-CR1 antilichamen31 en de vorming van rozetten in aanwezigheid van erytrocyten bekleed met C3b32. Deze rudimentaire technieken werden snel vervangen door immunobevlekmethoden met behulp van anti-CR1-antilichamen met behulp vanradiolabel1 1,3...

CR1 (complement receptor type 1, CD35) is een 200 kDa transmembraan glycoproteïne aanwezig op het oppervlak van vele celtypes, zoals erythrocyten1, B lymfocyten2,monocytische cellen, sommige T-cellen, folliculaire dendritische cellen3,foetale astrocyten4, en glomeraire podocyten5. CR1 die zijn liganden C3b, C4b, C3bi6,,7,8,,9verstoort, een subeenheid van de eerste complementcomponent, C1q10 en MBL (mannan-bindende lectine)11 remt de activering van complement en is betrokken bij humorale en cellulaire immuunrespons.
Bij primaten, waaronder mensen, is erytrocyten CR1 betrokken bij het transport van immuuncomplexen naar de lever en milt, om het bloed te zuiveren en hun accumulatie te voorkomen in kwetsbare weefsels zoals de huid of nieren12,13,14. Dit fenomeen van immuunhechting tussen immuuncomplexen en erytrocyten hangt af van het aantal CR1-moleculen15. Bij mensen is de gemiddelde dichtheid van CR1/E slechts 500 (d.w.z. 500 moleculen CR1 per erytrocyt). Deze dichtheid varieert van individu tot individu (100-1.200 CR1/E) en van de ene erytrocyt tot de andere in hetzelfde individu. Sommige personen van "null" fenotype uitdrukken minder dan 20 CR1/E16.
De dichtheid van CR1/E wordt geregeld door twee co-dominante autosomaltale allelen gekoppeld aan een puntmutatie in intron 27 van de gencodering voor CR1*117,18. Deze mutatie produceert een extra beperkingsplaats voor het HindIII-enzym. De beperkingsfragmenten verkregen na de vertering met HindIII zijn in dit geval 7,4 kb voor het allel gekoppeld aan een sterke expressie van CR1 (H: hoog allel) en 6,9 kb voor het allel gekoppeld aan lage CR1-expressie (L: laag allel). Deze link is te vinden in Kaukasiërs en Aziaten, maar niet in mensen van Afrikaanse afkomst19.
Het expressieniveau van erytrocyten CR1 is ook gecorreleerd met de aanwezigheid van puntnucleotidemutaties in exon 13 codering SCR 10 (I643T) en in exon 19 codering SCR16 (Q981H). Het is hoog in homozygous 643I/981Q en laag in homozygous 643T/981H individuen20. Zo, "lage" individuen express ongeveer 150 CR1 /E, "medium" individuen express ongeveer 500 CR1 /E, en "hoge" individuen express ongeveer 1.000 CR1 / E.
Naast deze erytrocytendichtheid polymorfisme, cr1 wordt gekenmerkt door een lengte polymorfisme die overeenkomt met vier allotypes van verschillende grootte: CR1 * 1 (190 kDa), CR1 * 2 (220 kDa), CR1 * 3 (160 kDa), en CR1 * 4 (250 kDa)21 en een antigenpolymorfisme die overeenkomt met de bloedgroep KN22.
We presenteren onze methode op basis van flow cytometrie om de dichtheid van CR1/E te bepalen. Met behulp van drie proefpersonen waarvan de CR1/E-dichtheid bekend is, die een laag dichtheidsniveau (180 CR1/E), een gemiddelde dichtheid (646 CR1/E) en een hoge dichtheid (966 CR1/E) uitdrukken, is het gemakkelijk om de gemiddelde fluorescentieintensiteit (MFI) van hun erythrocyten of rode bloedcellen (RBC) of RBC MFI te meten, na anti-CR1 immunostaining met behulp van een stroomcytometer. Men kan dan een standaardlijn uitzetten die de MFI vertegenwoordigt als functie van CR1/E-dichtheid. Het meten van de MFI van proefpersonen waarvan de CR1/E-dichtheid niet bekend is en deze te vergelijken met deze standaardlijn, is het mogelijk om de CR1/E-dichtheid van de individuen te bepalen. Deze techniek is gebruikt voor vele jaren in het laboratorium, en heeft ons in staat gesteld om een vermindering van de expressie van erythrocyte CR1 detecteren in vele pathologieën zoals systemische lupus erythematosus (SLE)23, Verworven immunodeficiëntie syndroom (AIDS)24, malaria25, en onlangs de ziekte van Alzheimer (AD)26,27. De ontwikkeling van geneesmiddelen gericht op CR1 om te koppelen met erythrocyten, zoals in het geval van anti-trombotische geneesmiddelen28 vereist de evaluatie van CR1/E-dichtheid en de beschikbaarheid van een robuuste techniek om CR1 te kwantificeren.
Het gepresenteerde protocol loopt in singlicaat. Het is aanpasbaar om de dichtheid van CR1/E op veel individuen te bepalen met behulp van specifieke commercieel beschikbare 96 putplaten (zie Tabel van materialen). Hiertoe is het eenvoudig om onze methode aan te passen aan elke 96 putplaat. Voor elk monster wordt een celsuspensie van erytrocyten (0,5 x 106–1 x 106 erythrocyten) per put verdeeld. Voor elke put, eerst de primaire anti-CR1 antilichaam wordt toegevoegd, dan streptavidinPE, de secundaire anti-streptavidinantilichaam, en opnieuw streptavidinPE, met behulp van dezelfde verdunningen als die van onze methode, maar door aanpassing van volumes en evenredigheid respect.
De bloedmonsters van proefpersonen uit het verspreidingsgebied en van de voor CR1 te kwantificeren onderwerpen moeten tegelijkertijd worden genomen, bij 4 °C in de koelkast worden opgeslagen en bij 4 °C (op ijs en/of in de koelkast) worden behandeld.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:752px;" width="753">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1000E Barrier Tip</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">2079E</td>
			<td style="width:179px;">sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1-100 &#181;L Bevelled, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1120-1840</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Biotinylated anti-CR1 monoclonal antibody (J3D3)</td>
			<td style="width:239px;">Home production of non-commercial monoclonal antibody, courtesy of Dr J. Cook</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Blouse</td>
			<td style="width:239px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>protection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bovin serum albumin (7,5%)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">15260037</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">11176917</td>
			<td>centrifugation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Clean Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340345</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Comorack-96</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">944060P</td>
			<td>rack</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">655051</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Formaldehyde solution 36.5 %</td>
			<td style="width:239px;">Sigma Aldrich, F-38070 Saint Quentin Fallavier, France</td>
			<td style="width:119px;">F8775-25ML</td>
			<td>Fixation</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">10 &#181;L Graduated, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1121-3810</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">LSRFORTESSA Flow Cytometer</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">647788</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Microman Capillary Pistons</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">067494</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micronic 1.40 mL round bottom tubes</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">MP32051</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micropipette Microman - type M25 -</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">066379</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Phosphate buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">10010031</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Pipette PS 325 mm, 10 mL</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">391952</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">powder-free Nitrile Exam gloves</td>
			<td style="width:239px;">Medline Industries, Inc, Mundelein, IL 60060, USA</td>
			<td style="width:119px;">486802</td>
			<td>sample protection</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 0,5-10 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000024</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 20-100 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000059</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="57">
			<td height="57" style="height:57px;width:216px;">Reference 2 pipette, 100-1000 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000083</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Rinse Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340346</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Round bottom tube</td>
			<td style="width:239px;">Sarstedt, F-70150 Marnay, France</td>
			<td style="width:119px;">55.1579</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">0030120086</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">streptavidin R-PE</td>
			<td style="width:239px;">Tebu Bio, F-78612 Le Perray-en-Yvelines, France</td>
			<td style="width:119px;">AS-60669</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:216px;">Tapered Centrifuge Tubes 50 mL</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td>10203001</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vector anti streptavidin biotin</td>
			<td style="width:239px;">Eurobio Ingen, F-91953 Les Ulis, France</td>
			<td style="width:119px;">BA-0500</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vortex-Genie 2</td>
			<td style="width:239px;">Scientific Industries, Inc, Bohemia, NY 111716, USA</td>
			<td style="width:119px;">SI-0236</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry

CR1 (CD35, Complement Receptor type 1 voor C3b/C4b) is een hoog moleculair gewicht membraan glycoproteïne van ongeveer 200 kDa dat de activering van de activatie regelt, immuuncomplexen vervoert en deelneemt aan humorale en cellulaire immuunreacties. CR1 is aanwezig op het oppervlak van vele celtypes, waaronder erythrocyten, en vertoont polymorfismen in lengte, structuur (Knops, of KN, bloedgroep), en dichtheid. De gemiddelde dichtheid van CR1 per erythrocyte (CR1/E) is 500 moleculen per erythrocyt. Deze dichtheid varieert van individu tot individu (100-1.200 CR1/E) en van de ene erytrocyt tot de andere in hetzelfde individu. We presenteren hier een robuuste flow cytometrie methode om de dichtheid van CR1/E te meten, ook in onderwerpen die een lage dichtheid uitdrukken, met behulp van een versterkend immunostaining systeem. Deze methode heeft ons in staat gesteld om het verlagen van CR1 erytrocytenexpressie te tonen bij ziekten zoals de ziekte van Alzheimer (AD), systemische lupus erythematosus (SLE), AIDS of malaria.

De erytrocyten van drie proefpersonen waarvan de dichtheid van CR1 bekend is ("laag" onderwerp [180 CR1/E], "medium" onderwerp [646 CR1/E], en "hoog" onderwerp [966 CR1/E]), en van twee proefpersonen waarvan de CR1-dichtheid moest worden bepaald, werden immunostained door een anti-CR1-antilichaam gekoppeld aan een versterkingssysteem met behulp van het fycoerythrinfluorchroom. In het begin werd de CR1-dichtheid van de proefpersonen uit het lage bereik bepaald door de Scatchard-methode29 met behulp...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry

Het doel van deze methode is om de CR1-dichtheid in de erytrocyten van elk onderwerp te bepalen door te vergelijken met drie proefpersonen waarvan de erytrocyten CR1-dichtheid bekend is. De methode maakt gebruik van flow cytometrie na immunostaining van de erytrocyten van de proefpersonen door een anti-CR1 monoklonale antilichaam gekoppeld aan een versterkt systeem met behulp van fycoerythrin (PE).

Het meten van Erythroocyte Complement Receptor 1 met behulp van Flow Cytometrie

CR1 (CD35, Complement Receptor type 1 for C3b/C4b) is a high molecular weight membrane glycoprotein of about 200 kDa that controls complement activation, ...

Dit protocol kan worden gebruikt om het aantal antigene sites op cellulaire receptor van belang te meten. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het robuuste resultaten produceert, zelfs voor receptoren uitgedrukt bij een lage dichtheid. Deze methode maakt de evaluatie van de vermindering van CR1 erythrocyte expressie en dit is zoals de ziekte van Alzheimer, systemische lupus erythematosus, AIDS, en malaria.Dit protocol is nuttig voor elke analyse van de dichtheid van de celreceptor en kan ook worden toegepast op de studie van celreceptorexpressie door fluorescentiemicroscoop. We raden aan om de buizen tijdens de cel- en antilichaamverdeling uit te spreiden en zo mogelijk vergezeld te gaan van een cytometrische specialist. Visuele demonstratie van de immunostaining en dichtheid kwantificering door flow cytometrie is van cruciaal belang om te begrijpen hoe de analyseparameters goed in te stellen.Voeg voor aanvang van de analyse 250 microliter natrium EDTA-antistollingsbloed uit bloedopslagbuizen toe in een 50 milliliter conische buis met 20 milliliter van vier graden Celsius PBS-BSA. Meng de buisinhoud door zachte inversie en draai de cellen door centrifugatie. Gebruik een pipet van 10 milliliter om de supernatant weg te gooien en de pellet voorzichtig opnieuw op te steken in het resterende volume van de oplossing.Voeg 20 milliliter koude PBS-BSA toe en centrifuge de cellen opnieuw. Plaats aan het einde van de centrifugatie de buis in een rek, plaats op ijs en breng acht microliter van de gewassen erytrocyten over in een buis van 50 milliliter met drie milliliter PBS-BSA. Meng vervolgens de erytrocyten voorzichtig door te spinnen om een homogene celsuspensie te verkrijgen.Voor erythrocyte immunostaining, breng voorzichtig 100 microliter van de verdunde erytrocyten over in individuele 1,5 milliliter buizen en verzamel de rode bloedcellen door centrifugatie. Voeg na het weggooien van de supernatants voorzichtig 20 microliter van een 0,5 microgram per microliterconcentratie biotinylated anti-CR1 J3D3-antilichaam in PBS-BSA, rechtstreeks aan elke pellet. Voeg 20 microliter PBS-BSA buffer alleen toe aan de negatieve controlecellen met zachte menging en ontcubeer de monsters gedurende 45 minuten bij vier graden Celsius.Aan het einde van de incubatie was je de monsters twee keer met 750 microliter verse PBS-BSA per buis, per wasbeurt. Voeg na de tweede wasbeurt 20 microliter van een één tot 10 verdunning van streptavidin fycoerythrin in PBS-BSA toe aan elke buis met zachte menging en broed de monsters gedurende 45 minuten bij vier graden Celsius uit. Aan het einde van de incubatie, was de monsters twee keer, zoals aangetoond.Na de tweede wasbeurt, bevestig elke cel monster pellet met 450 microliter fixatie buffer tijdens vortexing, alvorens elk monster in individuele vijf milliliter ronde bodembuizen voor maximaal 48 uur opslag op vier graden Celsius. Als u de immunostained erytrocyten voor stroomcytometrie wilt analyseren, klikt u op de nieuwe experimentknop in de stroomcytometer en wijzigt u de naam van het nieuwe experiment. Selecteer voorwaartse spreiding, zijverstrooiing en PE in het venster cytometerinstellingen.Selecteer in het geopende experiment toepassingsinstellingen voor cytometerinstellingen en maak een globaal werkblad met behulp van de grijze vakken en kruisharen om de optimalisatie te begeleiden. Wanneer alle parameters zijn ingesteld, laadt u de niet-bevlekte controlebuis op de cytometer en voert u de acquisitie uit, waarbij de voorwaartse en zijverstrooiingsspanningen worden geoptimaliseerd om vuil te elimineren en om ervoor te zorgen dat de populatie van belang op schaal is. Trek vervolgens een poort rond de rode bloedcellen op de voorwaartse versus zijverstrooiingsplot en geef de rode bloedcelpopulatie weer in de stipplot van PE-fluorescentie.Als de positieve populaties op schaal zijn, laadt u de bevlekte controlebuis op de cytometer en voert u de acquisitie uit. Als u monsters wilt opnemen en analyseren, lost u het gekleurde monster en maakt u een voorwaartse versus zijverstrooiingsplot en een PE-fluorescentie-histogram op een nieuw globaal werkblad. Laad het eerste monster op de cytometer, voer de acquisitie uit en trek een rode bloedcelpoort rond de erytrocyten in het voorwaartse versus zijverstrooiingsperceel.Geef de rode bloedcelpopulatie weer in het PE fluorescentie histogram en selecteer onder het tabblad statistieken het gemiddelde voor de PE-fluorescentieparameters voor rode bloedcelpopulaties. Selecteer in het acquisitiedashboard alle gebeurtenissen in de stopgate en 10.000 gebeurtenissen om gegevens op te nemen en klik op recordgegevens. Wanneer de gebeurtenis-opname is voltooid, verwijdert u de buis uit de cytometer.De globale werkbladplots moeten er als geïllustreerd uitzien. Flow cytometrische analyse van immunovlektetrocyten van drie proefpersonen van bekende CR1-dichtheden maakt het mogelijk om de gemiddelde fluorescentieintensiteit van de etikettering voor elk onderwerp te meten. Door een curve uit te plotten met behulp van de waarden van het onderwerp met de bekende dichtheid van erythrocyte CR1, kunnen deze gegevens worden gerapporteerd als een functie van de gemiddelde fluorescentieintensiteit.Vergelijking van de regressielijn als gevolg van deze curve met de waarden van de gemiddelde fluorescentieintensiteit van de andere proefpersonen maakt het mogelijk hun CR1 erythrocytendichtheid te bepalen. Zorg ervoor dat de erytrocyten en antilichamen goed worden verdeeld, zodat de kalibratiecurven van de geëxperimenteerde monsters op de negatieve controle binnen het bereik van de cytometer-instellingen liggen. Het is mogelijk om deze procedure aan te passen om andere cellulaire dichtheidreceptoren te meten, simpelweg door het primaire antilichaam te veranderen en/of de versterkingslagen aan te passen.Wanneer u bloed behandelt, bestaat het risico op besmetting met ziekteverwekkers. Zorg er daarom voor dat u goede laboratoriumpraktijken gebruikt en de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen draagt.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

Het meten van de 50% Hemolytische Complement (CH 50) Activiteit van Serum

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Het meten van calpaïne Activiteit in vaste en levende cellen door flowcytometrie

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Menselijk In Vitro Onderdrukking als Screening Tool voor de erkenning van een vroege staat van Immune Imbalance

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-cell analyse van Bacillus subtilis Biofilms met fluorescentie microscopie en Flow cytometrie

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Measuring Attachment and Internalization of Influenza A Virus in A549 Cells by Flow Cytometry

Meten Attachment en internalisering van influenza A-virus in A549 cellen door flowcytometrie

Attachment to target cells followed by internalization are the very first steps of the life cycle of influenza A virus (IAV). We provide here a detailed ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescentie-geactiveerde Cell Sorting voor Zuivering van plasmacytoïde dendritische cellen van de muis Bone Marrow

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Het beoordelen van het netvlies Microgliale fagocytosefunctietesten<em&gt; In Vivo</em&gt; Met behulp van een flowcytometrie-gebaseerde test

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Meting van de T-cel alloreactiviteit Met behulp van Imaging flowcytometrie

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolatie en In Vitro cultuur van lymfkliertest en menselijke alveolaire macrofagen

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Voorbereiding van het hele beenmerg voor massa Cytometry analyse van neutrofiele-Lineage cellen

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...