Name: measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry
Uploaded: 2020-05-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

Vi takker alle medlemmene av URCACyt, flow cytometri teknisk plattform, de ansatte ved Department of Immunology, og de ansatte ved Institutt for indremedisin og geriatriske, som bidro til å optimalisere og validere protokollen. Dette arbeidet ble finansiert av Reims Universitetssykehus (stipendnummer AOL11UF9156).

Protokollen for innsamling og håndtering av menneskelig blod ble gjennomgått og godkjent av den regionale etikkkomiteen (CPP Est II), og protokollnummeret er 2011-A00594-37. Fordi følgende protokoll beskriver håndteringen av menneskelig blod, bør institusjonelle retningslinjer for avhending av biologisk farlig materiale følges. Laboratoriesikkerhetsutstyr, som laboratoriefrakker og hansker, bør brukes.
1. Erytrocyttvask
MERK: Dagen før håndtering, klargjør e...

Flere teknikker er tilgjengelige for å bestemme tettheten av erytrocytt CR1 (CR1/E). De første teknikkene som ble brukt var agglutinering av røde blodlegemer ved anti-CR1 antistoffer31 og dannelsen av rosetter i nærvær av erytrocytter belagt med C3b32. Disse rudimentære teknikkene ble raskt erstattet av immunflekker metoder ved hjelp av radiomerkede anti-CR1 antistoffer1,33. Det er også mulig å måle konsent...

CR1 (komplement reseptor type 1, CD35) er en 200 kDa transmembrane glykoprotein tilstede på overflaten av mange celletyper, for eksempel erytrocytter1, B lymfocytter2, monocytiske celler, noen T-celler, follikulære dendrittiske celler3, fosterastrocytter4, og glomerulære podocytes5. CR1 forstyrrer sin ligands C3b, C4b, C3bi6,7,8,9, en underenhet av den første komplementkomponenten, C1q10 og MBL (mannanbindende lectin)11 hemmer aktiveringen av komplement og er involvert i humoral og cellulær immunrespons.
I primater, inkludert mennesker, erytrocytt CR1 involvert i transport av immunkomplekser til lever en og milt, for å rense blodet og forhindre akkumulering i sårbare vev som hud eller nyrer12,13,14. Dette fenomenet immunvedhesjon mellom immunkomplekser og erytrocytter avhenger av antall CR1 molekyler15. Hos mennesker er gjennomsnittlig tetthet av CR1/E bare 500 (dvs. 500 molekyler av CR1 per erytrocytt). Denne tettheten varierer fra ett individ til en annen (100–1200 CR1/E) og fra en erytrocytt til en annen i samme person. Noen individer av "null" fenotype uttrykker færre enn 20 CR1/E16.
Tettheten av CR1/E reguleres av to co-dominerende autosomale alleler knyttet til en punktmutasjon i intron 27 av genkodingen for CR1 * 117,18. Denne mutasjonen gir et ekstra restriksjonssted for HindIII-enzymet. Begrensningsfragmentene oppnådd etter fordøyelsen med HindIII i dette tilfellet er 7,4 kb for allelen knyttet til et sterkt uttrykk for CR1 (H: høy allele) og 6,9 kb for allelen knyttet til lavt CR1-uttrykk (L: lav allele). Denne linken finnes i kaukasiere og asiater, men ikke hos personer av afrikansk avstamning19.
Uttrykket av erytrocytt CR1 er også korrelert med tilstedeværelsen av punkt nukleotid mutasjoner i exon 13 koding SCR 10 (I643T) og i exon 19 koding SCR16 (Q981H). Det er høyt i homozygot 643I/981Q og lav i homozygot 643T/981H individer20. Dermed uttrykker "lave" individer rundt 150 CR1 / E, "medium" individer uttrykker rundt 500 CR1 / E, og "høye" individer uttrykker rundt 1000 CR1 / E.
I tillegg til denne erytrocytttettheten polymorfisme, er CR1 preget av en lengde polymorfisme som tilsvarer fire allotyper av forskjellige størrelser: CR1* 1 (190 kDa), CR1 * 2 (220 kDa), CR1 * 3 (160 kDa), og CR1 * 4 (250 kDa)21 og en antigen polymorfisme tilsvarende blodgruppen KN22.
Vi presenterer vår metode basert på flow cytometri for å bestemme tettheten av CR1 /E. Ved hjelp av tre med CR1/E tetthet er kjent, uttrykker et lavt tetthetsnivå (180 CR1/E), et middels tetthetsnivå (646 CR1/E) og et høyt tetthetsnivå (966 CR1/E), er det lett å måle gjennomsnittlig fluorescensintensitet (MFI) av deres erytrocytter eller røde blodlegemer (RBC), eller RBC MFI, etter anti-CR1 immunfarging ved hjelp av et strømningscytometer. Man kan deretter tegne en standardlinje som representerer MFI som en funksjon av CR1/E-tetthet. Måling av MFI av personer med CR1/E tetthet ikke er kjent og sammenligne den med denne standardlinjen, er det mulig å bestemme individets CR1/E tetthet. Denne teknikken har blitt brukt i mange år i laboratoriet, og har gjort oss i stand til å oppdage en reduksjon i uttrykket av erytrocytt CR1 i mange patologier som systemisk lupus erythematosus (SLE)23, Ervervet immunsvikt syndrom (AIDS)24, malaria25, og nylig Alzheimers sykdom (AD)26,27. Utviklingen av legemidler rettet mot CR1 til par med erytrocytter, som i tilfelle av antitrombotiske legemidler28 krever evaluering av CR1 / E tetthet, og tilgjengeligheten av en robust teknikk for å kvantifisere CR1.
Protokollen som presenteres går i singlicate. Det kan tilpasses til å bestemme tettheten av CR1/E på mange personer som bruker spesifikke kommersielt tilgjengelige 96 brønnplater (se Materialtabellen). For dette formål er det lett å tilpasse vår metode til en hvilken som helst 96 brønnplate. For hver prøve fordeles en cellesuspensjon av erytrocytter (0,5 x 106–1 x 106 erytrocytter) per brønn. For hver brønn, først den primære anti-CR1 antistoff legges til, deretter streptavidin PE, sekundær anti-streptavidin antistoff, og igjen streptavidin PE, ved hjelp av de samme fortynninger som de av vår metode, men ved å tilpasse volumer og respektere proporsjonalitet.
Blodprøvene fra personer i området og fra forsøkspersoner som skal kvantifiseres for CR1 skal trekkes samtidig, oppbevares i kjøleskapet ved 4 °C, og håndteres ved 4 °C (på is og/eller i kjøleskapet).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:752px;" width="753">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1000E Barrier Tip</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">2079E</td>
			<td style="width:179px;">sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1-100 &#181;L Bevelled, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1120-1840</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Biotinylated anti-CR1 monoclonal antibody (J3D3)</td>
			<td style="width:239px;">Home production of non-commercial monoclonal antibody, courtesy of Dr J. Cook</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Blouse</td>
			<td style="width:239px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>protection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bovin serum albumin (7,5%)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">15260037</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">11176917</td>
			<td>centrifugation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Clean Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340345</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Comorack-96</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">944060P</td>
			<td>rack</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">655051</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Formaldehyde solution 36.5 %</td>
			<td style="width:239px;">Sigma Aldrich, F-38070 Saint Quentin Fallavier, France</td>
			<td style="width:119px;">F8775-25ML</td>
			<td>Fixation</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">10 &#181;L Graduated, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1121-3810</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">LSRFORTESSA Flow Cytometer</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">647788</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Microman Capillary Pistons</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">067494</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micronic 1.40 mL round bottom tubes</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">MP32051</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micropipette Microman - type M25 -</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">066379</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Phosphate buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">10010031</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Pipette PS 325 mm, 10 mL</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">391952</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">powder-free Nitrile Exam gloves</td>
			<td style="width:239px;">Medline Industries, Inc, Mundelein, IL 60060, USA</td>
			<td style="width:119px;">486802</td>
			<td>sample protection</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 0,5-10 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000024</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 20-100 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000059</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="57">
			<td height="57" style="height:57px;width:216px;">Reference 2 pipette, 100-1000 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000083</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Rinse Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340346</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Round bottom tube</td>
			<td style="width:239px;">Sarstedt, F-70150 Marnay, France</td>
			<td style="width:119px;">55.1579</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">0030120086</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">streptavidin R-PE</td>
			<td style="width:239px;">Tebu Bio, F-78612 Le Perray-en-Yvelines, France</td>
			<td style="width:119px;">AS-60669</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:216px;">Tapered Centrifuge Tubes 50 mL</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td>10203001</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vector anti streptavidin biotin</td>
			<td style="width:239px;">Eurobio Ingen, F-91953 Les Ulis, France</td>
			<td style="width:119px;">BA-0500</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vortex-Genie 2</td>
			<td style="width:239px;">Scientific Industries, Inc, Bohemia, NY 111716, USA</td>
			<td style="width:119px;">SI-0236</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry

CR1 (CD35, Complement Receptor type 1 for C3b/C4b) er en høy molekylvekt membran glykoprotein på ca 200 kDa som styrer komplement aktivering, transporterer immunkomplekser, og deltar i humoral og cellulær immunresponser. CR1 er til stede på overflaten av mange celletyper, inkludert erytrocytter, og viser polymorfismer i lengde, struktur (Knops, eller KN, blodgruppe) og tetthet. Den gjennomsnittlige tettheten av CR1 per erytrocytt (CR1/E) er 500 molekyler per erytrocytt. Denne tettheten varierer fra ett individ til en annen (100–1200 CR1/E) og fra en erytrocytt til en annen i samme person. Vi presenterer her en robust flytcytometrimetode for å måle tettheten av CR1/E, inkludert hos personer som uttrykker lav tetthet, ved hjelp av et forsterkende immunfargingssystem. Denne metoden har gjort oss i stand til å vise senking av CR1 erytrocytt uttrykk i sykdommer som Alzheimers sykdom (AD), systemisk lupus erythematosus (SLE), AIDS, eller malaria.

Erytrocytter av tre forsøkspersoner hvis tetthet av CR1 er kjent ("lav" subjekt [180 CR1/E], "medium" subjektet [646 CR1/E], og "høy" motiv [966 CR1/E]), og av to personer hvis CR1 tetthet måtte bestemmes ble immunisert av et anti-CR1 antistoff koblet til et forsterkningssystem ved hjelp av fycoerythrinfluorochrome. I begynnelsen ble CR1-tettheten til forsøkspersonene fra det lave høyområdet bestemt av Scatchard-metoden29 ved hjelp av radiomerkede antistoffer. Standardene (lav, middels og h?...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry

Målet med denne metoden er å bestemme CR1 tetthet i erytrocytter av ethvert emne ved å sammenligne med tre hvis erytrocytt CR1 tetthet er kjent. Metoden bruker flow cytometri etter immunfarging av forsøkspersonenes erytrocytter av et anti-CR1 monoklonalt antistoff koblet til et forsterket system ved hjelp av phycoerythrin (PE).

Måle Erytrocytt Komplement reseptor 1 ved hjelp av flow cytometri

CR1 (CD35, Complement Receptor type 1 for C3b/C4b) is a high molecular weight membrane glycoprotein of about 200 kDa that controls complement activation, ...

Denne protokollen kan brukes til å måle antall antigene steder på cellulær reseptor av interesse. Den største fordelen med denne teknikken er at den gir robuste resultater, selv for reseptorer uttrykt med lav tetthet. Denne metoden muliggjør evaluering av reduksjon av CR1 erytrocytt uttrykk og dette er som Alzheimers, systemisk lupus erythematosus, AIDS, og malaria.Denne protokollen er nyttig for enhver analyse av cellereseptortetthet og kan også brukes på studiet av cellereseptoruttrykk ved fluorescensmikroskop. Vi anbefaler avstand ut rørene under celle- og antistoffdistribusjonen, og å bli ledsaget av en cytometrisk spesialist under den første analysen hvis mulig. Visuell demonstrasjon av immunstaining og tetthet kvantifisering av flytcytometri er avgjørende for å forstå hvordan du skal sette analyseparametrene riktig.Før analysen begynner, tilsett 250 mikroliter natrium EDTA antikoagulert fullblod fra blodlagringsrør i et 50 milliliter konisk rør som inneholder 20 milliliter med fire grader Celsius PBS-BSA. Bland rørinnholdet ved mild inversjon og spinn cellene ved sentrifugering. Bruk en 10 ml pipette til å kaste den overnaturlige og forsiktig gjenbruke pelleten i restvolumet av oppløsningen.Tilsett 20 milliliter kald PBS-BSA og sentrifuger cellene igjen. På slutten av sentrifugeringen plasserer du røret i et stativ, plasseres på is og overfører åtte mikroliter av de vasket erytrocytter til et 50 milliliter rør som inneholder tre milliliter PBS-BSA. Bland deretter erytrocytter forsiktig ved å spinne for å oppnå en homogen cellesuspensjon.For erytrocyttimmunostaining, overfør forsiktig 100 mikroliter av fortynnede erytrocytter til individuelle 1,5 milliliter rør og samle de røde blodlegemene ved sentrifugering. Etter å ha kastet supernativa, legg forsiktig til 20 mikroliter av et 0,5 mikrogram per mikroliterkonsentrasjon av biotinylert anti-CR1 J3D3-antistoff i PBS-BSA, direkte til hver pellet. Tilsett 20 mikroliter PBS-BSA-buffer alene til de negative kontrollcellene med mild blanding og inkuber prøvene i 45 minutter ved fire grader Celsius.På slutten av inkubasjonen vask prøvene to ganger med 750 mikroliter frisk PBS-BSA per rør, per vask. Etter den andre vasken, tilsett 20 mikroliter av en 1 til 10 fortynning av streptavidin fycoerythrin i PBS-BSA til hvert rør med mild blanding, og inkuber prøvene i 45 minutter ved fire grader Celsius. På slutten av inkubasjonen, vask prøvene to ganger, som demonstrert.Etter den andre vasken, fest hver celleprøvepellet med 450 mikroliter fikseringsbuffer under vortexing, før du overfører hver prøve til individuelle fem milliliter runde bunnrør i opptil 48 timers lagring ved fire grader Celsius. Hvis du vil analysere immunostained erytrocytter for strømningscytometri, klikker du på den nye eksperimentknappen i strømningscytometeret og endrer navn på det nye eksperimentet. Velg fremoverspisse, sidespisse og PE i vinduet for cytometerinnstillinger.I det åpne eksperimentet velger du innstillinger for cytometerinnstillinger og oppretter et globalt regneark ved hjelp av de grå boksene og trådkorsene for å veilede optimaliseringen. Når alle parametrene er satt, laster du det uopphetede kontrollrøret på cytometeret og kjører oppkjøpet, optimaliserer forover- og sidesp scatter-spenningene for å eliminere rusk og for å sikre at populasjonen av interesse er i skala. Deretter tegner du en port rundt de røde blodlegemene på den fremre versus side scatter-plottet og viser den røde blodlegemerpopulasjonen i dot-plottet av PE fluorescens.Hvis de positive populasjonene er i skala, laster du det beisede kontrollrøret på cytometeret og kjører oppkjøpet. Hvis du vil registrere og analysere prøver, fjerner du den fargede prøven og oppretter et fremover mot sidespisseplott og et PE fluorescens histogrammet på et nytt globalt regneark. Last den første prøven på cytometeret, kjør oppkjøpet og tegn en røde blodlegemer rundt erytrocytter i fremover versus side scatter plot.Vis den røde blodlegemer populasjonen i PE fluorescens histogrammet og under statistikk kategorien, velg gjennomsnittet for PE fluorescens parametere på røde blodlegemer populasjoner. Velg alle hendelsene i stoppeporten og 10 000 hendelser som skal registreres, i instrumentbordet for anskaffelse, og klikk postdata. Når hendelsesopptaket er fullført, fjerner du røret fra cytometeret.De globale regnearkplottene skal se ut som illustrert. Flow cytometrisk analyse av immunostained erytrocytter fra tre personer av kjente CR1 tettheter tillater måling av gjennomsnittlig fluorescens intensitet av merkingen for hvert emne. Plotting av en kurve ved hjelp av motivets verdier med den kjente tettheten av erytrocytt CR1 gjør at disse dataene kan rapporteres som en funksjon av gjennomsnittlig fluorescensintensitet.Sammenligning av regresjonslinjen som følge av denne kurven til verdiene av den gjennomsnittlige fluorescensintensiteten til de andre fagene tillater bestemmelse av deres CR1 erytrocytttetthet. Vær forsiktig med at erytrocytter og antistoffer er riktig fordelt, slik at kalibreringskurvene til de eksperimenterte prøvene på den negative kontrollen er innenfor rekkevidden av cytometerinnstillingene. Det er mulig å tilpasse denne prosedyren for å måle andre tetthet cellulære reseptorer, bare ved å endre det primære antistoffet og / eller tilpasse forsterkningslagene.Når du håndterer blod, er det fare for patogenkontaminering. Sørg derfor for å bruke god laboratoriepraksis og bruke riktig personlig verneutstyr.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-celle Analyse av Bacillus subtilis Biofilm Bruke fluorescensmikroskopi og flowcytometrisystemer

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Measuring Attachment and Internalization of Influenza A Virus in A549 Cells by Flow Cytometry

Måling Vedlegg og internalisering av Influensa A virus i A549-celler ved flowcytometri

Attachment to target cells followed by internalization are the very first steps of the life cycle of influenza A virus (IAV). We provide here a detailed ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescens-aktivert cellesortering for Rensing av Plasmacytoid dendrittiske celler fra mus Bone Marrow

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Vurdere Netthinne microglial fagocyttfunksjon<em&gt; I Vivo</em&gt; Ved hjelp av en flowcytometrisystemer basert analyse

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Måling av T-celle alloreaktiviteten hjelp Imaging Flow Cytometry

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolasjon og In Vitro kultur Murine og menneskelig Alveolar makrofager

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Utarbeidelse av hele benmarg for Mass flowcytometri analyse av nøytrofile-Lineage celler

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...