Name: measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry
Uploaded: 2020-05-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

Благодарим всех членов URCACyt, тет-цитометрии технической платформы, сотрудников кафедры иммунологии, а также сотрудников кафедры внутренней медицины и гериатрии, которые внесли свой вклад в оптимизацию и проверку протокола. Эта работа финансировалась больницами Университета Реймса (грант AOL11UF9156).

Протокол по сбору и обработке крови человека был рассмотрен и утвержден региональным комитетом по этике (CPP Est II), а протоколномер 2011-A00594-37. Поскольку в следующем протоколе описывается обработка человеческой крови, должны соблюдаться институциональные руководящие принципы по утилизаци...

Несколько методов доступны для определения плотности эритроцита CR1 (CR1/E). Первыми методами были агглютинация красных кровяных телец анти-CR1 антител31 и образование розетов в присутствии эритроцитов, покрытых C3b32. Эти рудиментарные методы были быстро заменены им...

CR1 (дополнение рецептора типа 1, CD35) является 200 kDa трансмембранного гликопротеина присутствует на поверхности многих типов клеток, таких как эритроциты1, B лимфоцитов2, моноцитные клетки, некоторые Т-клетки, фолликулярные дендритные клетки3, фетальные астроциты4, и glomerular podocytes5. CR1 вмешиваясь в его лиганды C3b, C4b, C3bi6,,7,,8,9, подразделение первого компонента дополнения, C1q10 и MBL (манна-связывающий лектин)11 подавляет активацию дополнения и участвует в гуморальном и клеточном иммунном ответе.
У приматов, в том числе людей, эритроцит CR1 участвует в транспортировке иммунных комплексов в печень и селезенку, очищает кровь и предотвращает их накопление в уязвимых тканях, таких как кожа или почки12,13,14. Это явление иммунной адгезии между иммунными комплексами и эритроцитами зависит от количества молекул CR115. У человека средняя плотность CR1/E составляет всего 500 (т.е. 500 молекул CR1 на эритроцит). Эта плотность варьируется от одного человека к другому (100-1200 CR1/E) и от одного эритроцита к другому в том же человеке. Некоторые лица "нулевой" фенотип выразить менее 20 CR1/E16.
Плотность CR1/E регулируется двумя содоминирующими аутосомными аллелями, связанными с точечной мутацией в интронном 27 кодирования гена для CR1'117,18. Эта мутация создает дополнительный узел ограничения для фермента HindIII. Фрагменты ограничения, полученные после пищеварения с HindIII в данном случае 7,4 кб для аллеля, связанного с сильным выражением CR1 (H: high allele) и 6,9 кб для аллеля, связанного с низким выражением CR1 (L: низкий аллель). Эта связь встречается у кавказцев и азиатов, но не у людей африканского происхождения19.
Уровень экспрессии эритроцита CR1 также коррелирует с наличием точечных нуклеотидных мутаций в экзоне 13 кодирования SCR 10 (I643T) и в экзоне 19 кодирования SCR16 (981H). Он высок в гомозиготных 643I/981 "и низкий в гомозиготных 643T/981H лиц20. Таким образом, "низкие" лица выражают около 150 CR1/E, "средние" лица выражают около 500 CR1/E, а "высокие" лица выражают около 1000 CR1/E.
В дополнение к этому полиморфизму плотности эритроцита, CR1 характеризуется полиморфизмом длины, соответствующим четырем аллотипам разных размеров: CR1'1 (190 kDa), CR1'2 (220 kDa), CR1'3 (160 kDa) и CR1'4 (250 kDa)21 и антигенийский антигенныйантигенистый антигенный антигенный антиген.
Мы представляем наш метод, основанный на цитометрии потока, чтобы определить плотность CR1/E. Используя три предмета, плотность которых известна как CR1/E, выражая низкий уровень плотности (180 CR1/E), средний уровень плотности (646 CR1/E), и высокий уровень плотности (966 CR1/E), легко измерить среднюю интенсивность флуоресценции (МФИ) их эритроцитов или красных кровяных телец (РБК) Затем можно построить стандартную линию, представляющую МФО в зависимости от плотности CR1/E. Измеряя МФО субъектов, плотность CR1/E не известна, и сравнивая ее с этой стандартной линией, можно определить плотность CR1/E. Этот метод был использован в течение многих лет в лаборатории, и позволило нам обнаружить снижение экспрессии эритроцитов CR1 во многих патологиях, таких как системная волчанка эритематоза (СКВ)23, Синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД)24, малярия25, и недавно болезнь Альцгеймера (AD)26,27. Разработка препаратов, нацеленных на CR1 в паре с эритроцитами, как и в случае антитромботических препаратов28 требует оценки плотности CR1/E, а также наличия надежной техники количественной оценки CR1.
Представленный протокол проходит в singlicate. Он адаптируется для определения плотности CR1/E на многих людей, использующих конкретные коммерчески доступные 96 пластин скважин (см. Таблицу Материалов). С этой целью, это легко адаптировать наш метод к любой 96 хорошо пластины. Для каждого образца на один колодец распределяется клеточная суспензия эритроцитов (0,5 х 106-1 х 106 эритроцитов). Для каждого колодца сначала добавляются первичные анти-CR1 антитела, затем стрептавидин ПЭ, вторичное антиорганизмы против стрептавидина, и снова стрептавидиновые ПЭ, использующие те же разбавления, что и наш метод, но путем адаптации объемов и соблюдения пропорциональности.
Образцы крови, взятые у субъектов диапазона и от предметов, которые должны быть количественно оценены для CR1, должны быть взяты в то же время, храниться в холодильнике при 4 градусах Цельсия и обрабатываться при 4 градусах Цельсия (на льду и/или в холодильнике).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:752px;" width="753">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1000E Barrier Tip</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">2079E</td>
			<td style="width:179px;">sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1-100 &#181;L Bevelled, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1120-1840</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Biotinylated anti-CR1 monoclonal antibody (J3D3)</td>
			<td style="width:239px;">Home production of non-commercial monoclonal antibody, courtesy of Dr J. Cook</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Blouse</td>
			<td style="width:239px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>protection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bovin serum albumin (7,5%)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">15260037</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">11176917</td>
			<td>centrifugation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Clean Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340345</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Comorack-96</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">944060P</td>
			<td>rack</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">655051</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Formaldehyde solution 36.5 %</td>
			<td style="width:239px;">Sigma Aldrich, F-38070 Saint Quentin Fallavier, France</td>
			<td style="width:119px;">F8775-25ML</td>
			<td>Fixation</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">10 &#181;L Graduated, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1121-3810</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">LSRFORTESSA Flow Cytometer</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">647788</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Microman Capillary Pistons</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">067494</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micronic 1.40 mL round bottom tubes</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">MP32051</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micropipette Microman - type M25 -</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">066379</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Phosphate buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">10010031</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Pipette PS 325 mm, 10 mL</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">391952</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">powder-free Nitrile Exam gloves</td>
			<td style="width:239px;">Medline Industries, Inc, Mundelein, IL 60060, USA</td>
			<td style="width:119px;">486802</td>
			<td>sample protection</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 0,5-10 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000024</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 20-100 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000059</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="57">
			<td height="57" style="height:57px;width:216px;">Reference 2 pipette, 100-1000 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000083</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Rinse Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340346</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Round bottom tube</td>
			<td style="width:239px;">Sarstedt, F-70150 Marnay, France</td>
			<td style="width:119px;">55.1579</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">0030120086</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">streptavidin R-PE</td>
			<td style="width:239px;">Tebu Bio, F-78612 Le Perray-en-Yvelines, France</td>
			<td style="width:119px;">AS-60669</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:216px;">Tapered Centrifuge Tubes 50 mL</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td>10203001</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vector anti streptavidin biotin</td>
			<td style="width:239px;">Eurobio Ingen, F-91953 Les Ulis, France</td>
			<td style="width:119px;">BA-0500</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vortex-Genie 2</td>
			<td style="width:239px;">Scientific Industries, Inc, Bohemia, NY 111716, USA</td>
			<td style="width:119px;">SI-0236</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry

CR1 (CD35, Дополнение Рецептор типа 1 для C3b/C4b) представляет собой большой молекулярный вес мембраны гликопротеин около 200 kDa, который контролирует дополнение активации, транспортирует иммунные комплексы, и участвует в гуморальных и клеточных иммунных реакций. CR1 присутствует на поверхности многих типов клеток, в том числе эритроцитов, и экспонаты полиморфизмов в длину, структуру (Knops, или KN, группа крови), и плотность. Средняя плотность CR1 на эритроцит (CR1/E) составляет 500 молекул на эритроцит. Эта плотность варьируется от одного человека к другому (100-1200 CR1/E) и от одного эритроцита к другому в том же человеке. Мы представляем здесь надежный метод цитометрии потока для измерения плотности CR1/E, в том числе в субъектах, выражающих низкую плотность, с помощью усиливающейся системы иммуностоинга. Этот метод позволил нам показать снижение экспрессии ЭРитроцита CR1 при таких заболеваниях, как болезнь Альцгеймера (АД), системная волчанка эритематоза (СКВ), СПИД или малярия.

Эритроциты трех субъектов, плотность которых CR1 известна ("низкий" предмет (180 CR1/E), "средний" предмет No646 CR1/E и "высокий" предмет No 966 CR1/E), а также двух субъектов, плотность CR1 которых должна была быть определена иммунопрепаратами, примыкающих к флюторной системе. В начале плотность CR1 испытуе...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry

Целью данного метода является определение плотности CR1 в эритроцитах любого предмета путем сравнения с тремя предметами, плотность которых известна плотность эритроцита CR1. Метод использует цитометрию потока после иммуностоцинирования эритроцитов испытуемых моноклональным антителом, в сочетании с усиленной системой с использованием фикоэритрина (ПЭ).

Измерение эритроцитов дополнение рецептор ато 1 Использование потока цитометрии

CR1 (CD35, Complement Receptor type 1 for C3b/C4b) is a high molecular weight membrane glycoprotein of about 200 kDa that controls complement activation, ...

Этот протокол может быть использован для измерения количества антигенных участков на клеточном рецепторе интереса. Основным преимуществом этой техники является то, что она дает надежные результаты, даже для рецепторов, выраженных при низкой плотности. Этот метод позволяет оценку сокращения экспрессии эритроцитов CR1, и это такие, как болезнь Альцгеймера, системная красная волчанка, СПИД и малярия.Этот протокол полезен для любого анализа плотности клеточных рецепторов, а также может быть применен к изучению экспрессии клеточных рецепторов с помощью флуоресцентного микроскопа. Мы рекомендуем расстояние между трубками во время распределения клеток и антител, и сопровождаться цитометрическим специалистом во время первого анализа, если это возможно. Визуальная демонстрация иммуностимулятора и количественной оценки плотности по цитометрии потока имеет решающее значение для понимания того, как правильно установить параметры анализа.Перед началом анализа добавьте 250 микролитров антикоагулированной цельной крови натрия из трубок для хранения крови в 50 миллилитровую коническую трубку, содержащую 20 миллилитров четырехградуса Цельсия PBS-BSA. Смешайте содержимое трубки нежной инверсией и вращайте клетки центрифугой. Используйте 10 миллилитровую пипетку, чтобы отказаться от супернатанта и тщательно повторно использовать гранулы в остаточном объеме раствора.Добавьте 20 миллилитров холодного PBS-BSA и снова центрифугировать клетки. В конце центрифуги поместите трубку в стойку, помещенную на лед, и перенесите восемь микролитров промытых эритроцитов в 50 миллилитровую трубку, содержащую три миллилитров PBS-BSA. Затем аккуратно смешайте эритроциты, вращаясь, чтобы получить однородную подвесную клетку.Для иммуностинерации эритроцитов тщательно перенесите 100 микролитров разбавленных эритроцитов в отдельные 1,5 миллилитровые трубки и соберите эритроциты путем центрифугации. После отказа от супернатантов, осторожно добавьте 20 микролитров 0,5 микрограмма на микролитер концентрации биотинилированных анти-CR1 J3D3 антитела в PBS-BSA, непосредственно к каждой гранулы. Добавьте 20 микролитров буфера PBS-BSA только к отрицательным контрольным клеткам с нежным смешиванием и инкубировать образцы в течение 45 минут при четырех градусах Цельсия.В конце инкубации, мыть образцы два раза с 750 микролитров свежих PBS-BSA на трубку, за стирку. После второй стирки добавьте 20 микролитров от одного до 10 разбавления стрептавидина фикоэритрона в PBS-BSA к каждой трубке с нежным смешиванием и инкубировать образцы в течение 45 минут при четырех градусах Цельсия. В конце инкубации, мыть образцы дважды, как попродемонстрировано.После второй стирки, исправить каждый образец клетки гранулы с 450 микролитров буфера фиксации во время вихря, прежде чем передавать каждый образец в отдельных пяти миллилитров круглых нижних труб до 48 часов хранения при четырех градусах по Цельсию. Чтобы проанализировать иммунотонкие эритроциты на цитометрию потока, нажмите новую кнопку эксперимента в цитометре потока и переименуй новый эксперимент. Выберите вперед рассеяния, бокового рассеяния и PE в цитометре настройки окна.В открытом эксперименте выберите настройки цитометра настройки приложения и создайте глобальный лист, используя серые коробки и перекрестия волос для руководства оптимизацией. Когда все параметры будут установлены, загрузите незапачканную трубку управления на цитометр и запустите приобретение, оптимизируя напряжение перемотки вперед и сбоку для устранения мусора и обеспечения того, чтобы население, которому представляет интерес, было в масштабе. Далее, нарисовать ворота вокруг красных кровяных телец на вперед по сравнению с боковой участок рассеяния и отображать популяцию красных кровяных телец в точка участок PE флуоресценции.Если положительные популяции находятся в масштабе, загрузите окрашенную контрольную трубку на цитометр и запустите приобретение. Для записи и анализа образцов, выгрузить окрашенные образца и создать вперед по сравнению с боковой рассеяния участка и PE флуоресценции гистограммы на новом глобальном листе. Загрузите первый образец на цитометр, запустите приобретение и нарисуйте ворота красных кровяных телец вокруг эритроцитов в участке рассеяния вперед по сравнению с боковой.Отображение популяции красных кровяных телец в флуоресценции Гистограммы PE и под вкладкой статистики, выберите среднее для параметров PE флуоресценции на популяциях красных кровяных телец. В панели мониторинга приобретения выберите все события в остановох воротах и 10 000 событий для записи и нажмите на данные записи. Когда запись события завершена, удалите трубку из цитометра.Глобальные графики листов должны выглядеть как иллюстрированные. Цитометрический анализ иммунотетроцитов из трех субъектов известных плотностей CR1 позволяет измерять средняю интенсивность флуоресценции маркировки для каждого субъекта. Построение кривой с использованием значений субъекта с известной плотностью эритроцитов CR1 позволяет эти данные быть зарегистрированы как функция средней интенсивности флуоресценции.Сравнение линии регрессии в результате этой кривой со значениями средней интенсивности флуоресценции других субъектов позволяет определить их плотность эритроцитов CR1. Позаботьтесь о том, чтобы эритроциты и антитела были правильно распределены, поэтому кривые калибровки экспериментируемых образцов на отрицательном контроле находятся в пределах цитометра. Можно адаптировать эту процедуру для измерения других плотности клеточных рецепторов, просто путем изменения первичного антитела и / или адаптации слоев усиления.Всякий раз, когда вы обрабатываете крови, есть риск патогенного загрязнения. Поэтому не забудьте использовать личные лабораторные практики и носить соответствующее средства индивидуальной защиты.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

Измерение 50% Гемолитическая Дополнение (CH 50) Активность сыворотки

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Измерение кальпаин деятельности в фиксированных и живых клеток методом проточной цитометрии

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Человек In Vitro Борьбе как инструмент для скрининга Признание ранней стадии иммунного дисбаланса

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Одноклеточный анализ Сенная Bacillus Биопленки с помощью флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Measuring Attachment and Internalization of Influenza A Virus in A549 Cells by Flow Cytometry

Измерение Вложений и интернализации вируса гриппа в клетках А549 методом проточной цитометрии

Attachment to target cells followed by internalization are the very first steps of the life cycle of influenza A virus (IAV). We provide here a detailed ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Флуоресценция активированных сортировки клеток для очистки плазмоцитов дендритных клеток из костного мозга мыши

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Оценка сетчатке микроглии фагоцитарной функции<em&gt; В Vivo</em&gt; С использованием анализа проточной цитометрии на основе

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Измерение Т-клетки с помощью визуализации аллореактивности проточной цитометрии

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Изоляции и в пробирке культуры мышиных и человека альвеолярные макрофаги

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Подготовка цельного костного мозга для анализа массовой цитометрии нейтрофил-линейных клеток

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...