Name: measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry
Uploaded: 2020-05-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

Vi tackar alla medlemmar i URCACyt, flöde cytometri teknisk plattform, personalen vid institutionen för immunologi, och personalen vid institutionen för internmedicin och geriatrik, som bidragit till att optimera och validera protokollet. Detta arbete finansierades av Reims Universitetssjukhus (bidragsnummer AOL11UF9156).

Protokollet för insamling och hantering av humant blod granskades och godkändes av den regionala etikkommittén (CPP Est II), och protokollnumret är 2011-A00594-37. Eftersom följande protokoll beskriver hanteringen av humant blod, bör institutionella riktlinjer för bortskaffande av biohazardous material följas. Laboratoriesäkerhetsutrustning, såsom labbrockar och handskar, bör bäras.
1. Erytrocyt tvätt
OBS: Dagen före hantering, bered en PBS-BSA-buffert m...

Flera tekniker finns tillgängliga för att bestämma densiteten av erytrocyt CR1 (CR1/E). De första tekniker som användes var agglutination av röda blodkroppar av anti-CR1 antikroppar31 och bildandet av rosetter i närvaro av erytrocyter belagda med C3b32. Dessa rudimentära tekniker ersattes snabbt av immunfärgningsmetoder med radiomärkta anti-CR1-antikroppar1,33. Det är också möjligt att mäta koncentrati...

CR1 (komplementreceptor typ 1, CD35) är en 200 kDa transmembrane glykoprotein som finns på ytan av många celltyper, såsom erytrocyter1, B lymfocyter2, monocytiska celler, vissa T-celler, follikulära dendritiska celler3, fetala astrocyter4, och glomerular podocyter5. CR1 störa dess ligands C3b, C4b, C3bi6,7,8,9, en underenhet av den första komplement komponenten, C1q10 och MBL (mannan-bindande lectin)11 hämmar aktivering av komplement och är involverad i humorala och cellulära immunsvar.
Hos primater, inklusive människor, erytrocyt CR1 är involverad i transport av immunkomplex till levern och mjälte, för att rena blodet och förhindra deras ackumulering i sårbara vävnader såsom hud eller njurar12,13,14. Detta fenomen av immun vidhäftning mellan immunkomplex och erytrocyter beror på antalet CR1-molekyler15. Hos människa är medeltätheten av CR1/E endast 500 (dvs. 500 molekyler av CR1 per erytrocyt). Denna densitet varierar från en individ till en annan (100–1 200 CR1/E) och från en erytrocyt till en annan i samma individ. Vissa individer av "null" fenotyp uttrycka färre än 20 CR1/E16.
Densiteten hos CR1/E regleras av två samdominerande autosomala alleler kopplade till en punktmutation i intron 27 av genkodningen för CR1*117,18. Denna mutation producerar en ytterligare begränsning webbplats för hindIII enzymet. Begränsningen fragment erhålls efter matsmältningen med HindIII i detta fall är 7,4 kb för allel kopplade till ett starkt uttryck för CR1 (H: hög allel) och 6,9 kb för allelen kopplade till låg CR1 uttryck (L: låg allel). Denna länk finns i Kaukasier och asiater men inte i människor av afrikansk härkomst19.
Nivån av uttryck för erytrocyt CR1 är också korrelerad med förekomsten av punkt nukleotid mutationer i exon 13 kodning SCR 10 (I643T) och i exon 19 kodning SCR16 (Q981H). Det är hög i homozygous 643I/981Q och låg i homozygous 643T/981H individer20. Således uttrycker "låga" individer runt 150 CR1/E, "medium" individer uttrycka runt 500 CR1/E, och "höga" individer uttrycka runt 1000 CR1/E.
Utöver denna erytrocyttäthet polymorfism, CR1 kännetecknas av en längd polymorfism som motsvarar fyra allotyper av olika storlekar: CR1 * 1 (190 kDa), CR1 * 2 (220 kDa), CR1 * 3 (160 kDa), och CR1 * 4 (250 kDa)21 och en antigen polymorfism som motsvarar blodgruppen KN22.
Vi presenterar vår metod baserad på flödescytometri för att bestämma densiteten hos CR1/E. Med hjälp av tre försökspersoner vars CR1/E-densitet är känd, uttrycker en låg densitetsnivå (180 CR1/E), en medeldensitetsnivå (646 CR1/E) och en hög densitetsnivå (966 CR1/E), är det lätt att mäta medelfluoresintensiteten (MFI) för deras erytrocyter eller röda blodkroppar (RBC) eller RBC MFI, efter anti-CR1-immunstämmande med hjälp av en flödescytometer. Man kan sedan rita en standardlinje som representerar MFI som en funktion av CR1/E densitet. Genom att mäta MFI för försökspersoner vars CR1/E-densitet inte är känd och jämföra den med denna standardlinje är det möjligt att bestämma individernas CR1/E-densitet. Denna teknik har använts i många år i laboratoriet, och har gjort det möjligt för oss att upptäcka en minskning av uttrycket av erytrocyt CR1 i många patologier såsom systemisk lupus erythematosus (SLE)23, Förvärvade immunbristsyndrom (AIDS)24, malaria25, och nyligen Alzheimers sjukdom (AD)26,27. Utvecklingen av läkemedel som riktar CR1 till par med erytrocyter, som i fallet med anti-trombotiska läkemedel28 kräver utvärdering av CR1/E densitet, och tillgången på en robust teknik för att kvantifiera CR1.
Det protokoll som presenteras körs i singlicate. Det är anpassningsbart att bestämma densiteten hos CR1/E på många individer med hjälp av specifika kommersiellt tillgängliga 96 brunnsplattor (se Tabell över material). För detta ändamål är det lätt att anpassa vår metod till någon 96 brunnsplatta. För varje prov fördelas en cellupphängning av erytrocyter (0,5 x 106–1x 106 erytrocyter) per brunn. För varje brunn tillsätts först den primära anti-CR1-antikroppen, sedan streptavidin PE, den sekundära anti-streptavidin antikroppen och återigen streptavidin PE, med samma utspädningar som vår metod, men genom att anpassa volymer och respektera proportionalitet.
Blodproverna från försökspersoner i intervallet och från försökspersoner som ska kvantifieras för CR1 bör tas samtidigt, förvaras i kylskåp vid 4 °C och hanteras vid 4 °C (på is och/eller i kylskåp).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:752px;" width="753">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1000E Barrier Tip</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">2079E</td>
			<td style="width:179px;">sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1-100 &#181;L Bevelled, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1120-1840</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Biotinylated anti-CR1 monoclonal antibody (J3D3)</td>
			<td style="width:239px;">Home production of non-commercial monoclonal antibody, courtesy of Dr J. Cook</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Blouse</td>
			<td style="width:239px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>protection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bovin serum albumin (7,5%)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">15260037</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">11176917</td>
			<td>centrifugation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Clean Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340345</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Comorack-96</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">944060P</td>
			<td>rack</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">655051</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Formaldehyde solution 36.5 %</td>
			<td style="width:239px;">Sigma Aldrich, F-38070 Saint Quentin Fallavier, France</td>
			<td style="width:119px;">F8775-25ML</td>
			<td>Fixation</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">10 &#181;L Graduated, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1121-3810</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">LSRFORTESSA Flow Cytometer</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">647788</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Microman Capillary Pistons</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">067494</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micronic 1.40 mL round bottom tubes</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">MP32051</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micropipette Microman - type M25 -</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">066379</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Phosphate buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">10010031</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Pipette PS 325 mm, 10 mL</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">391952</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">powder-free Nitrile Exam gloves</td>
			<td style="width:239px;">Medline Industries, Inc, Mundelein, IL 60060, USA</td>
			<td style="width:119px;">486802</td>
			<td>sample protection</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 0,5-10 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000024</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 20-100 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000059</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="57">
			<td height="57" style="height:57px;width:216px;">Reference 2 pipette, 100-1000 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000083</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Rinse Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340346</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Round bottom tube</td>
			<td style="width:239px;">Sarstedt, F-70150 Marnay, France</td>
			<td style="width:119px;">55.1579</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">0030120086</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">streptavidin R-PE</td>
			<td style="width:239px;">Tebu Bio, F-78612 Le Perray-en-Yvelines, France</td>
			<td style="width:119px;">AS-60669</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:216px;">Tapered Centrifuge Tubes 50 mL</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td>10203001</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vector anti streptavidin biotin</td>
			<td style="width:239px;">Eurobio Ingen, F-91953 Les Ulis, France</td>
			<td style="width:119px;">BA-0500</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vortex-Genie 2</td>
			<td style="width:239px;">Scientific Industries, Inc, Bohemia, NY 111716, USA</td>
			<td style="width:119px;">SI-0236</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry

CR1 (CD35, Complement Receptor typ 1 för C3b/C4b) är ett högmolekylmembran glykoprotein på ca 200 kDa som styr komplementaktivering, transporterar immunkomplex och deltar i humorala och cellulära immunsvar. CR1 finns på ytan av många celltyper, inklusive erytrocyter, och uppvisar polymorfismer i längd, struktur (Knops, eller KN, blodgrupp), och densitet. Den genomsnittliga tätheten av CR1 per erytrocyt (CR1/E) är 500 molekyler per erytrocyt. Denna densitet varierar från en individ till en annan (100–1 200 CR1/E) och från en erytrocyt till en annan i samma individ. Vi presenterar här en robust flöde cytometri metod för att mäta densiteten av CR1/E, inklusive i ämnen som uttrycker en låg densitet, med hjälp av en förstärkande immunstainning system. Denna metod har gjort det möjligt för oss att visa sänkning av CR1 erytrocyt uttryck vid sjukdomar som Alzheimers sjukdom (AD), systemisk lupus erythematosus (SLE), aids, eller malaria.

Erytrocyterna för tre försökspersoner vars densitet av CR1 är känd ("låg" subjekt [180 CR1/E], "medium" ämne [646 CR1/E] och "hög" ämne [966 CR1/E]), och av två ämnen vars CR1 densitet behövde fastställas var immunostained av en anti-CR1 antikropp kopplad till ett förstärkningssystem med hjälp av phycoerythrin fluorochrome. I början bestämdes CR1-densiteten hos försökspersonerna från det låghöga intervallet av Scatchardmetoden29 med hjälp av radiomärkta antikroppar. De sta...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry

Syftet med denna metod är att bestämma CR1 densitet i erytrocyter av något ämne genom att jämföra med tre ämnen vars erytrocyt CR1 densitet är känd. Metoden använder flödescytometri efter immunfärgning av försökspersonernas erytrocyter genom en anti-CR1 monoklonal antikropp kopplad till ett förstärkt system med fykoerytrin (PE).

Mätning Erytrocyt Komplement Receptor 1 Med hjälp av Flow Cytometry

CR1 (CD35, Complement Receptor type 1 for C3b/C4b) is a high molecular weight membrane glycoprotein of about 200 kDa that controls complement activation, ...

Detta protokoll kan användas för att mäta antalet antigena platser på cellulär receptor av intresse. Den största fördelen med denna teknik är att den ger robusta resultat, även för receptorer uttryckta i en låg densitet. Denna metod möjliggör utvärdering av minskningen av CR1 erytrocyt uttryck och detta är såsom Alzheimers, systemisk lupus erytematosus, aids, och malaria.Detta protokoll är användbart för någon analys av cellreceptordensiteten och kan också appliceras på studien av cellreceptoruttryck genom fluorescensmikroskop. Vi rekommenderar avstånd ut rören under cellen och antikropp distribution, och att åtföljas av en cytometrisk specialist under den första analysen om möjligt. Visuell demonstration av immunfärgning och densitetskvantifiering genom flödescytometri är avgörande för att förstå hur man korrekt ställer in analysparametrarna.Innan analysen påbörjas, tillsätt 250 mikroliter natrium EDTA anticoagulerat helblod från blodlagringsrör i ett 50 milliliter koniskt rör som innehåller 20 milliliter av fyra grader Celsius PBS-BSA. Blanda rörinnehållet genom mild inversion och snurra cellerna genom centrifugeringen. Använd en pipett på 10 milliliter för att kassera supernatanten och försiktigt resuspend pelleten i restvolymen av lösningen.Tillsätt 20 milliliter kall PBS-BSA och centrifug cellerna igen. I slutet av centrifugeringen, placera röret i ett rack, placeras på is och överföra åtta mikroliter av de tvättade erytrocyter i en 50 milliliter tub som innehåller tre milliliter PBS-BSA. Blanda sedan erytrocyterna försiktigt genom att snurra för att få en homogen cell suspension.För erytrocytimfärgning, överför försiktigt 100 mikroliter av de utspädda erytrocyterna till enskilda 1,5 milliliterrör och samla de röda blodkropparna genom centrifuger. Efter att supernatanterna kasserats, tillsätt försiktigt 20 mikroliter av en 0,5 mikrogram per mikroliterkoncentration av biotinylerad anti-CR1 J3D3-antikropp i PBS-BSA, direkt till varje pellet. Lägg till 20 mikroliter PBS-BSA-buffert ensam till de negativa kontrollcellerna med skonsam blandning och inkubera proverna i 45 minuter vid fyra grader Celsius.Vid slutet av inkubationen, tvätta proverna två gånger med 750 mikroliter färska PBS-BSA per rör, per tvätt. Efter den andra tvätten, tillsätt 20 mikroliter av en en till 10 utspädning av streptavidin phycoerythrin i PBS-BSA till varje rör med skonsam blandning, och inkubera proverna i 45 minuter vid fyra grader Celsius. Vid slutet av inkubationen, tvätta proverna två gånger, som visats.Efter den andra tvätten, fixera varje cellprov pellet med 450 mikroliter av fixering buffert under virvelning, innan överföring av varje prov i enskilda fem milliliter runda bottenrör för upp till 48 timmars lagring vid fyra grader Celsius. För att analysera de immunsede erytrocyterna för flödescytometri, klicka på den nya experimentknappen i flödescytometern och byta namn på det nya experimentet. Välj framåt scatter, sidospridd och PE i fönstret för inställningar för cytometer.I det öppna experimentet väljer du inställningar för inställningar för cytometerinställningar och skapa ett globalt kalkylblad, med hjälp av de grå rutorna och hårkorset som vägledning för optimering. När alla parametrar har ställts in, ladda den obefläckade styrröret på cytometern och köra förvärvet, optimera framåt och sidan scatter spänningar för att eliminera skräp och för att säkerställa att befolkningen av intresse är på skala. Därefter rita en port runt de röda blodkropparna på framåt kontra sidan scatter tomt och visa den röda blodcellpopulationen i pricken tomten av PE fluorescens.Om de positiva populationerna är på skala, ladda det färgade kontrollröret på cytometern och kör förvärvet. Om du vill registrera och analysera prover, lasta av det färgade provet och skapa en framåt kontra sida scatter plot och en PE fluorescens histogram på en ny global kalkylblad. Ladda det första provet på cytometern, kör förvärvet och rita en röd blodkroppsgrind runt erytrocyterna i framåt kontra sidospärttom.Visa den röda blodkroppspopulationen i PE fluorescens histogram och under fliken statistik, välj medelvärdet för PE fluorescens parametrar på röda blodkroppar populationer. I instrumentpanelen för anskaffning väljer du alla händelser i stoppa gate och 10, 000 händelser som ska registreras och klicka på postdata. När händelseregistreringen har slutförts, ta bort röret från cytometern.De globala kalkylbladsriterna ska se ut som illustrerat. Flow cytometric analys av immunsed erytrocyter från tre ämnen av kända CR1 tätheter möjliggör mätning av medelvärdet fluorescens intensitet av märkningen för varje ämne. Plottning av en kurva med hjälp av värden för ämnet med den kända densiteten hos erytrocyt CR1 gör att dessa data kan rapporteras som en funktion av medelvärdet fluorescensintensiteten.Jämförelse av regressionslinjen som följer av denna kurva till värdena för medelvärdet fluorescens intensiteten hos de andra ämnena möjliggör bestämning av deras CR1 erytrocyt densitet. Var försiktig så att erytrocyterna och antikropparna fördelas på rätt sätt, så de experimenterade provens kalibreringskurvor på den negativa kontrollen ligger inom cellens cellometerinställningars räckvidd. Det är möjligt att anpassa denna procedur för att mäta andra densitet cellulära receptorer, helt enkelt genom att ändra den primära antikroppen och / eller anpassa förstärkningsskikten.Närhelst du hanterar blod finns det risk för patogenkontaminering. Se därför till att använda god laboratoriepraxis och att bära lämplig personlig skyddsutrustning.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

Mätning av 50% Hemolytisk Komplement (CH 50) Aktivitet av serum

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Mätning Calpain aktivitet inom fast och levande celler med flödescytometri

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Mänskliga In Vitro Suppression som screeningmetod för erkännande av en tidig staten Immune obalans

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Encelliga Analys av Bacillus subtilis Biofilmer Använda fluorescensmikroskopi och flödescytometri

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Measuring Attachment and Internalization of Influenza A Virus in A549 Cells by Flow Cytometry

Mätning Attachment och Internalisering av influensa A-virus i A549-celler genom flödescytometri

Attachment to target cells followed by internalization are the very first steps of the life cycle of influenza A virus (IAV). We provide here a detailed ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fluorescensaktiverad cellsortering för Rening av Plasmacytoid dendritiska celler från benmärg från mus

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Bedöma Retinal mikrogliaceller fagocytos<em&gt; In Vivo</em&gt; Med hjälp av en flödescytometri-baserad analys

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Mätning av T-cell alloreaktivitet Använda Imaging Flow Cytometry

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolering och In Vitro kultur av murina och mänskliga alveolära makrofager

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Beredning av hela benmärgen för Masscytometri analys av neutrofila-Lineage celler

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...