Name: measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry
Uploaded: 2020-05-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

PROTOKOLÜn optimizasyonuna ve doğrulanmasına katkıda bulunan TÜM URCACyt üyelerine, akış sitometri teknik platformuna, İmmünoloji Anabilim Dalı personeline ve İç Hastalıkları ve Geriatri Anabilim Dalı personeline teşekkür ederiz. Bu çalışma Reims Üniversitesi Hastaneleri (hibe numarası AOL11UF9156) tarafından finanse edilmiştir.

İnsan kanı toplama ve işleme protokolü bölgesel etik komitesi (CPP Est II) tarafından gözden geçirildi ve onaylandı ve protokol numarası 2011-A00594-37'dir. Aşağıdaki protokolinsan kanının işlenmesini açıkladığı için, biyolojik tehlikeli maddelerin atılması na yönelik kurumsal kurallara uyulmalıdır. Laboratuvar önlükleri ve eldivenler gibi laboratuvar güvenlik ekipmanları giyilmelidir.
1. Eritrosit yıkama
NOT: İşlemden bir gün önce,...

Eritrosit CR1 (CR1/E) yoğunluğunu belirlemek için çeşitli teknikler mevcuttur. Kullanılan ilk teknikler anti-CR1 antikorları31 ile kırmızı kan hücrelerinin agglutinasyonu ve C3b32ile kaplanmış eritrosit varlığında rozet oluşumudur. Bu temel teknikler hızla radiolabeled anti-CR1 antikorlar kullanılarak immünboyama yöntemleri ile değiştirildi1,33. Ayrıca enzime bağlı immünosorbent tsay (ELIS...

CR1 (kompleman reseptör tip 1, CD35) eritrositler1,B lenfositler2, monosit hücreler, bazı T hücreleri, foliküler dendritik hücreler3, fetal astrositler4ve glomerüler podositler5gibi birçok hücre tipinin yüzeyinde bulunan 200 kDa transmembran glikoproteindir. CR1 onun ligands C3b müdahale, C4b, C3bi6,7,8,9, ilk kompleman bileşeni bir alt birim, C1q10 ve MBL (mannan bağlayıcı lektin)11 kompleman aktivasyonunu inhibe ve humoral ve hücresel immün yanıt katılır.
Primatlar, insanlar da dahil olmak üzere, eritrosit CR1 karaciğer ve dalak bağışıklık komplekslerinin taşınması nda yer almaktadır, kan arındırmak ve deri veya böbrekler gibi savunmasız dokularda birikimini önlemek için12,13,14. Bağışıklık kompleksleri ve eritrositler arasındaki immün yapışı olgusu CR1 moleküllerinin sayısına bağlıdır15. İnsanlarda CR1/E'nin ortalama yoğunluğu sadece 500'dür (yani eritrosit başına 500 CR1 molekülü). Bu yoğunluk bir bireyden diğerine (100-1.200 CR1/E) ve aynı bireyde bir eritrositten diğerine değişir. "Null" fenotip bazı bireyler az ifade 20 CR1/E16.
CR1/E'nin yoğunluğu, CR1*117,18için gen kodlamasının intron 27'sinde bir nokta mutasyonuna bağlı iki eş-dominant otozomal alel tarafından düzenlenir. Bu mutasyon HindIII enzimi için ek bir kısıtlama alanı üretir. Bu durumda HindIII ile sindirim sonrası elde edilen kısıtlama parçaları CR1 güçlü bir ifade bağlı alel için 7.4 kb (H: yüksek alel) ve alel düşük CR1 ekspresyonu (L: düşük alel) bağlı alel için 6.9 kb. Bu bağlantı Kafkaslar ve Asyalılar bulunur ama Afrika kökenliinsanlarda 19.
Eritrosit CR1'in ekspresyon düzeyi, ekson 13 kodlama SCR 10 (I643T) ve ekson 19 kodlama SCR16 (Q981H) ile nokta nükleotit mutasyonlarının varlığı ile de ilişkilidir. Homozigot 643I/981Q'da yüksek, homozigot 643T/981H bireylerde düşüktür20. Böylece, "düşük" bireyler 150 CR1/E, "orta" bireyler 500 CR1/E, "yüksek" bireyler ise 1.000 CR1/E civarında ifade eder.
Bu eritrosit yoğunluğu polimorfizmine ek olarak CR1, farklı boyutlardaki dört allotipe karşılık gelen bir uzunluk polimorfizmi ile karakterizedir: CR1*1 (190 kDa), CR1*2 (220 kDa), CR1*3 (160 kDa) ve CR1*4 (250 kDa)21 ve kan grubu KN22'yekarşılık gelen bir antijenik polimorfizm .
CR1/E yoğunluğu bilinen üç denek kullanarak CR1/E'nin yoğunluğunu belirlemek için akış sitometrisine dayalı yöntemimizi sintometriye dayanarak sintometrisi, düşük yoğunluklu bir seviye (180 CR1/E), orta yoğunlukseviyesi (646 CR1/E) ve yüksek yoğunluklu bir seviye (966 CR1/E) ifade ederek, akış sitometresi kullanarak anti-CR1 immünoboyalamadan sonra eritrositveya kırmızı kan hücrelerinin (RBC) ortalama floresan yoğunluğunu (MFI) ölçmek kolaydır. Daha sonra CR1/E yoğunluğunun bir fonksiyonu olarak MFI'yi temsil eden standart bir çizgi çizilebilir. CR1/E yoğunluğu bilinmemektedir deneklerin MFI ölçümü ve bu standart çizgi ile karşılaştırılması, bireylerin CR1/E yoğunluğunu belirlemek mümkündür. Bu teknik laboratuvarda uzun yıllardır kullanılmaktadır ve sistemik lupus eritematosus (SLE)23, Edinsel immün yetmezlik sendromu (AIDS)24, sıtma25, ve son zamanlarda Alzheimer hastalığı (AD)26,27 gibi birçok patolojide eritrosit CR1 ekspresyonunda bir azalma tespitetmemizisağlamıştır . Anti-trombotik ilaçlar28'de olduğu gibi CR1'i eritrositlerle çifte hedefleyen ilaçların geliştirilmesi, CR1/E yoğunluğunun değerlendirilmesi ve CR1'i ölçmek için sağlam bir tekniğin kullanılabilirliği gerektirmektedir.
Sunulan protokol tek tekçalışır. Belirli ticari olarak kullanılabilen 96 kuyu plakası kullanan birçok kişide CR1/E'nin yoğunluğunu belirlemek için uyarlanabilir (Bkz. Malzeme Tablosu). Bu amaçla, herhangi bir 96 iyi plaka bizim yöntem adapte etmek kolaydır. Her örnek için eritrositlerin hücre süspansiyonu (0.5 x 106–1 x 10 6 eritrosit) kuyu başına dağıtılır.6 Her kuyu için, ilk birincil anti-CR1 antikor eklenir, sonra streptavidin PE, ikincil anti-streptavidin antikor, ve yine streptavidin PE, bizim yöntem aynı seyreltme kullanarak, ancak hacimleri adapte ve orantılılık saygı.
Cr1 için ölçülecek deneklerin ve deneklerden alınan kan örnekleri aynı anda çekilmeli, buzdolabında 4 °C'de saklanmalı ve 4 °C'de (buz ve/veya buzdolabında) kullanılmalıdır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:752px;" width="753">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1000E Barrier Tip</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">2079E</td>
			<td style="width:179px;">sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">1-100 &#181;L Bevelled, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1120-1840</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Biotinylated anti-CR1 monoclonal antibody (J3D3)</td>
			<td style="width:239px;">Home production of non-commercial monoclonal antibody, courtesy of Dr J. Cook</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Blouse</td>
			<td style="width:239px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>protection</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Bovin serum albumin (7,5%)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">15260037</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Centrifuge</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">11176917</td>
			<td>centrifugation</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Clean Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340345</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Comorack-96</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">944060P</td>
			<td>rack</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Cytometer Setup &#38; Tracking Beads Kit</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">655051</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Formaldehyde solution 36.5 %</td>
			<td style="width:239px;">Sigma Aldrich, F-38070 Saint Quentin Fallavier, France</td>
			<td style="width:119px;">F8775-25ML</td>
			<td>Fixation</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">10 &#181;L Graduated, filter tip</td>
			<td style="width:239px;">Starlab GmbH, D-22926 Ahrenburg, Germany</td>
			<td style="width:119px;">S1121-3810</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">LSRFORTESSA Flow Cytometer</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">647788</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Microman Capillary Pistons</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">067494</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micronic 1.40 mL round bottom tubes</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">MP32051</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Micropipette Microman - type M25 -</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">066379</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Phosphate buffered Saline (PBS)</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td style="width:119px;">10010031</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Pipette PS 325 mm, 10 mL</td>
			<td style="width:239px;">Dominique DUTSCHER SAS, F-67172 Brumath</td>
			<td style="width:119px;">391952</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">powder-free Nitrile Exam gloves</td>
			<td style="width:239px;">Medline Industries, Inc, Mundelein, IL 60060, USA</td>
			<td style="width:119px;">486802</td>
			<td>sample protection</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 0,5-10 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000024</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Reference 2 pipette, 20-100 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000059</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="57">
			<td height="57" style="height:57px;width:216px;">Reference 2 pipette, 100-1000 &#181;L</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">4920000083</td>
			<td>sample pipetting</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Rinse Solution</td>
			<td style="width:239px;">BD, F-38801 Le Pont de Claix, France</td>
			<td style="width:119px;">340346</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="55">
			<td height="55" style="height:55px;">Round bottom tube</td>
			<td style="width:239px;">Sarstedt, F-70150 Marnay, France</td>
			<td style="width:119px;">55.1579</td>
			<td>cytometry</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Safe-Lock Tubes, 1.5 mL</td>
			<td style="width:239px;">Eppendorf France SAS, F-78360 Montesson, France</td>
			<td style="width:119px;">0030120086</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">streptavidin R-PE</td>
			<td style="width:239px;">Tebu Bio, F-78612 Le Perray-en-Yvelines, France</td>
			<td style="width:119px;">AS-60669</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="47">
			<td height="47" style="height:47px;width:216px;">Tapered Centrifuge Tubes 50 mL</td>
			<td style="width:239px;">Thermo Fischer Scientific , F-67403 Illkirch, France</td>
			<td>10203001</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vector anti streptavidin biotin</td>
			<td style="width:239px;">Eurobio Ingen, F-91953 Les Ulis, France</td>
			<td style="width:119px;">BA-0500</td>
			<td>immunostaining</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Vortex-Genie 2</td>
			<td style="width:239px;">Scientific Industries, Inc, Bohemia, NY 111716, USA</td>
			<td style="width:119px;">SI-0236</td>
			<td>mix</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring erythrocyte complement receptor 1 using flow cytometry

CR1 (CD35, C3b/C4b için Kompleman Reseptör tip 1) aktivasyonu tamamlayan, bağışıklık komplekslerini taşıyan ve humoral ve hücresel immün yanıtlara katılan yaklaşık 200 kDa'lık yüksek molekül ağırlıklı membran glikoproteindir. CR1 eritrositler de dahil olmak üzere birçok hücre tipinin yüzeyinde bulunur ve uzunluk, yapı (Knops veya KN, kan grubu) ve yoğunluk polimorfizmleri sergiler. Eritrosit başına CR1 (CR1/E) başına ortalama yoğunluk eritrosit başına 500 moleküldür. Bu yoğunluk bir bireyden diğerine (100-1.200 CR1/E) ve aynı bireyde bir eritrositten diğerine değişir. Burada cr1/E'nin yoğunluğunu ölçmek için sağlam bir akış sitometrisi yöntemi sitometri sitometri sitometri sitometri sitometri sitometrisi, düşük yoğunluklu olarak ifade eden denekler de dahil olmak üzere, güçlendirici bir immünboyama sistemi yardımıyla sitometri yöntemi ni sintometri sitometrisi sitometrisi sitometrisi sitometri sitometrisi sitometrisi sitometrisi sitometris Bu yöntem, Alzheimer hastalığı (AD), sistemik lupus eritematosus (SLE), AIDS veya sıtma gibi hastalıklarda CR1 eritrosit ekspresyonunun alçaltıcılığını göstermemizi sağlamıştır.

CR1 yoğunluğu bilinen üç deneğin eritrositleri ("düşük" özne [180 CR1/E], "orta" konu [646 CR1/E], ve "yüksek" konu [966 CR1/E]) ve CR1 yoğunluğu nun belirlenmesi gereken iki deneğin eritrositleri, fikotorin flukromoru kullanarak bir anti-CR1 antikor ile birleştirilmiş bir anti-CR1 antikor ile immünosiye edildi. Başlangıçta, düşük-yüksek aralıktaki deneklerin CR1 yoğunluğu radiolabeled antikorlar kullanılarak Scatchard yöntemi29 ile belirlendi. Belirlenen standartlar (d...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry at JoVE.com

Measuring Erythrocyte Complement Receptor 1 Using Flow Cytometry

Bu yöntemin amacı, eritrosit CR1 yoğunluğu bilinen üç denek ile karşılaştırarak herhangi bir deneğin eritrositlerinde CR1 yoğunluğunu belirlemektir. Yöntem, deneklerin eritrositlerinin phycoerythrin (PE) kullanılarak güçlendirilmiş bir sisteme bağlı bir anti-CR1 monoklonal antikor ile immünoboya dan sonra akış sitometrisini kullanır.

Akış Sitometrisinin Kullanılmasında Eritrosit Kompleman Reseptörü 1 Ölçümü

CR1 (CD35, Complement Receptor type 1 for C3b/C4b) is a high molecular weight membrane glycoprotein of about 200 kDa that controls complement activation, ...

Bu protokol ilgi hücresel reseptör üzerinde antijenik sitelerin sayısını ölçmek için kullanılabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı, düşük yoğunlukta ifade edilen reseptörler için bile sağlam sonuçlar üretmesidir. Bu yöntem CR1 eritrosit ekspresyonunun azaltılmasının değerlendirilmesini sağlar ve bu alzheimer, sistemik lupus eritematosus, AIDS ve sıtma gibi.Bu protokol hücre reseptör yoğunluğunun herhangi bir analizi için yararlıdır ve aynı zamanda floresan mikroskobu ile hücre reseptör ekspresyonu çalışmasına uygulanabilir. Hücre ve antikor dağılımı sırasında tüplerin aralıklarını ve mümkünse ilk analizsırasında bir sitometrik uzman eşliğinde olmamızı öneririz. Akış sitometrisi ile immünboyama ve yoğunluk niceliğinin görsel gösterimi, analiz parametrelerinin nasıl doğru ayarlanıncayakadar ının anlaşılması açısından önemlidir.Analize başlamadan önce, kan depolama tüplerinden 250 mikrolitre sodyum EDTA antikoagüle tam kan ekleyin ve 20 mililitrelik dört derece Santigrat PBS-BSA içeren 50 mililitrelik konik bir tüpe yerleştirin. Tüp içeriğini nazik bir şekilde ters çevirerek karıştırın ve hücreleri santrifüj le döndürün. Supernatant atmak ve dikkatle çözelti kalıntı hacminde pelet askıya almak için 10 mililitrelik pipet kullanın.20 mililitre soğuk PBS-BSA ekleyin ve hücreleri tekrar santrifüj edin. Santrifüjsonunda, tüpü buzüzerine yerleştirilen bir rafa yerleştirin ve yıkanmış eritrositlerin sekiz mikrolitresini pbs-BSA'nın üç mililitresini içeren 50 mililitrelik bir tüpe aktarın. Daha sonra homojen bir hücre süspansiyonu elde etmek için yavaşça dönerek eritrositleri karıştırın.Eritrosit immünostaining için, dikkatle bireysel 1.5 mililitre tüpler içine seyreltilmiş eritrositlerin 100 mikrolitre transfer ve santrifüj ile kırmızı kan hücreleri toplamak. Supernatants attıktan sonra, dikkatle her pelet doğrudan, PBS-BSA biyotinylated anti-CR1 J3D3 antikor mikrolitre konsantrasyonu başına 0,5 mikrogram 20 mikrolitre ekleyin. 20 mikrolitre PBS-BSA tamponu tek başına negatif kontrol hücrelerine nazik karıştırma ile ekleyin ve dört santigrat derecede 45 dakika boyunca örnekleri kuluçkaya yatırın.Kuluçka sonunda, numuneleri tüp başına 750 mikrolitre taze PBS-BSA ile iki kez yıkayın. İkinci yıkamadan sonra, PBS-BSA'daki streptavidin phycoerythrin'in 1 ila 10 seyreltmesinin 20 mikrolitresini nazik karıştırma yla her tüpe ekleyin ve numuneleri 45 dakika boyunca 45 derece santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Kuluçka sonunda, örnekleri gösterildiği gibi iki kez yıkayın.İkinci yıkamadan sonra, her bir hücre numunesi peletini girdap sırasında 450 mikrolitre fiksasyon tamponu yla sabitleyerek, her numuneyi dört santigrat derecede 48 saate kadar ayrı beş mililitrelik yuvarlak alt tüplere aktarın. Akış sitometrisi için immünosirositleri analiz etmek için akış sitometresinde yeni deney düğmesini tıklayın ve yeni deneyin adını yeniden adlandırın. Sitometre ayarları penceresinde ileri dağılım, yan dağılım ve PE'yi seçin.Açık denemede, sitometre ayarları uygulama ayarlarını seçin ve optimizasyona rehberlik etmek için gri kutuları ve çapraz kılları kullanarak genel bir çalışma sayfası oluşturun. Tüm parametreler ayarlandığında, lekesiz kontrol tüpünü sitometreye yükleyin ve enkazı ortadan kaldırmak ve ilgi popülasyonunun ölçekte olmasını sağlamak için ileri ve yan dağılım gerilimlerini optimize ederek satın almayı çalıştırın. Daha sonra, ileri karşı yan dağılım arsa kırmızı kan hücreleri etrafında bir kapı çizmek ve PE floresan nokta arsa kırmızı kan hücresi popülasyonu görüntülemek.Pozitif popülasyonlar ölçekteyse, lekeli kontrol tüpünü sitometreye yükleyin ve edinimi çalıştırın. Örnekleri kaydetmek ve analiz etmek için, lekeli örneği boşaltın ve yeni bir küresel çalışma sayfasında ileriye karşı yan dağılım çizimi ve PE floresan histogramı oluşturun. İlk örneği sitometreye yükleyin, ediniyi çalıştırın ve ileri ve yan dağılım çiziminde eritrositlerin etrafına kırmızı kan hücresi kapısı çizin.PE floresan histogramında ve istatistik sekmesi altında kırmızı kan hücresi popülasyonunu görüntüleyin, kırmızı kan hücresi popülasyonlarında PE floresan parametrelerinin ortalamasını seçin. Satınalma panosunda, kayıt için durdurma kapısındaki tüm olayları ve kaydetmek için 10.000 olayı seçin ve verileri tıklatın. Olay kaydı tamamlandığında, tüpü sitometreden çıkarın.Genel çalışma sayfası çizimleri resimli olarak görünmelidir. Bilinen CR1 yoğunluklarının üç deneğinden immünostained eritrositlerin akış sitometrik analizi, her bir denek için etiketlemenin ortalama floresan yoğunluğunun ölçülmesine olanak sağlar. Eritrosit CR1'in bilinen yoğunluğu ile öznedeğerlerini kullanarak bir eğri çizmek, bu verilerin ortalama floresan yoğunluğunun bir fonksiyonu olarak raporlanmasına olanak tanır.Bu eğriden kaynaklanan regresyon çizgisinin diğer deneklerin ortalama floresan yoğunluğu değerleri ile karşılaştırılması CR1 eritrosit yoğunluğunun belirlenmesine olanak sağlar. Eritrositlerin ve antikorların düzgün bir şekilde dağıtıldıklarına dikkat edin, böylece negatif kontrol üzerinde denenen numunelerin kalibrasyon eğrileri sitometre ayarlarının menzili içinde dir. Bu prosedürü, sadece birincil antikor değiştirerek ve/veya amplifikasyon tabakalarını uyarlayarak diğer yoğunluklu hücresel reseptörleri ölçmek için uyarlamak mümkündür.Ne zaman kan la ilgileniyorsanız, patojen kontaminasyon riski vardır. Bu nedenle, iyi laboratuvar uygulamaları kullanmak ve uygun kişisel koruyucu ekipman giymek emin olun.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Measuring the 50% Haemolytic Complement CH50 Activity of Serum

Ölçüm% 50 Hemolitik Kompleman (CH 50</subSerum) Faaliyet

The complement system is a group of proteins that when activated lead to target cell lysis and facilitates phagocytosis through opsonisation. Individual ...

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Sabit ve Yaşam Hücreler Sitometrisi ile Calpain Aktivitesi Ölçme

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Insan In Vitro Bağışıklık Dengesizlik Erken Devlet Tanıma Tarama Aracı Olarak Bastırılması

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

Tek hücreli Analizi Bacillus subtilis</emFloresan Mikroskobu ve Akım Sitometri Kullanma> Biyofilmler

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Measuring Attachment and Internalization of Influenza A Virus in A549 Cells by Flow Cytometry

Akış Sitometrisi ile A549 Hücreleri Eklenti ve içselleştirilmesi Gribi bir virüs Ölçme

Attachment to target cells followed by internalization are the very first steps of the life cycle of influenza A virus (IAV). We provide here a detailed ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Fare kemik iliğinden plazmasitoid dendritik hücreleri Saflaştırılması floresans ile aktive edilen hücre sınıflandırma

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Assessing Retinal Microglial Phagocytic Function In Vivo Using a Flow Cytometry-based Assay

Retina Mikroglial Fagositik Fonksiyonu değerlendirilmesi<em&gt; İn Vivo</em&gt; A Akış Sitometri bazlı analiz kullamlarak

Microglia are the tissue resident macrophages of the central nervous system (CNS) and they perform a variety of functions that support CNS homeostasis, ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Görüntüleme Akım Sitometri Kullanımı T Hücresi alloreaktivitesini Ölçümü

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Yalıtım ve fare ve insan alveoler makrofajlar Vitro kültürü

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Nötrofil kütle sitometri analizi için tüm kemik Iliği hazırlanması-Lineage hücreler

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...