Name: studying neurobehavioral effects of environmental pollutants on zebrafish larvae
Uploaded: 2020-02-05T15:00:00
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저자는 중국 국립 자연 과학 재단 (21876135 및 21876136), 중국의 국가 주요 과학 기술 프로젝트 (2017ZX07502003-03, 2018ZX077010101-22), MOE-상하이 재단의 재정 지원에 감사드립니다. 어린이 환경 보건의 주요 실험실 (CEH201807-5), 스웨덴 연구위원회 (번호 639-2013-6913).

이 프로토콜은 동지대학교 동물윤리위원회의 승인을 받은 지침에 따른 것입니다.
1. 제브라피쉬 배아 수집
<ol><li>노출 전날 밤에 건강한 성인 튜빙겐 제브라피시 2쌍을 산란상자에 넣고 성비를 1:1로 유지합니다.</li>
	<li>다음날 아침 일광 후 30-60 분 시스템에 다시 성인 물고기를 제거합니다.</li>
	<li>산란 상자에서 배아를 제거합니다.</li>
	<li>배아를 시스템 물로 헹구고 있습?...

<ol>
	<li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+neurotoxicity+of+organophosphate+flame+retardants+in+early+life+stages+of+Japanese+medaka+(Oryzias+latipes).">Developmental neurotoxicity of organophosphate flame retardants in early life stages of Japanese medaka (Oryzias latipes).</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (12), 2931-2940 (2016).</li><li>Tian, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotoxicity+induced+by+zinc+oxide+nanoparticles:+age-related+differences+and+interaction.">Neurotoxicity induced by zinc oxide nanoparticles: age-related differences and interaction.</a> Scientific Reports. 5, 16117 (2015).</li><li>Rauh, V. A., Margolis, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+review:+environmental+exposures,+neurodevelopment,+and+child+mental+health-new+paradigms+for+the+study+of+brain+and+behavioral+effects.">Research review: environmental exposures, neurodevelopment, and child mental health-new paradigms for the study of brain and behavioral effects.</a> Journal of Child Psychology and Psychiatry. 57 (7), 775-793 (2016).</li><li>Ye, B. S., Leung, A. O. W., Wong, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+association+of+environmental+toxicants+and+autism+spectrum+disorders+in+children.">The association of environmental toxicants and autism spectrum disorders in children.</a> Environmental Pollution. 227, 234-242 (2017).</li><li>Schwarzenbach, R. P., Gschwend, P. M., Imboden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Environmental Organic Chemistry. , (2016).</li><li>Akortia, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+sources,+levels,+and+toxicity+of+polybrominated+diphenyl+ethers+(PBDEs)+and+their+transformation+and+transport+in+various+environmental+compartments.">A review of sources, levels, and toxicity of polybrominated diphenyl ethers (PBDEs) and their transformation and transport in various environmental compartments.</a> Environmental Reviews. 24 (3), 253-273 (2016).</li><li>Shaw, B. J., Liddle, C. C., Windeatt, K. M., Handy, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+evaluation+of+the+fish+early-life+stage+toxicity+test+for+engineered+nanomaterials:+experimental+modifications+and+recommendations.">A critical evaluation of the fish early-life stage toxicity test for engineered nanomaterials: experimental modifications and recommendations.</a> Archives of Toxicology. 90 (9), 2077-2107 (2016).</li><li>Landrigan, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+environmental+origins+of+neurodegenerative+disease+in+later+life.">Early environmental origins of neurodegenerative disease in later life.</a> Environmental Health Perspectives. 113 (9), 1230-1233 (2005).</li><li>Xu, T., Yin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unlocking+neurobehavioral+effects+of+environmental+endocrine+disrupting+chemicals.">The unlocking neurobehavioral effects of environmental endocrine disrupting chemicals.</a> Current Opinion in Endocrine and Metabolic Research. 7, 9-13 (2019).</li><li>Panula, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulatory+neurotransmitter+systems+and+behavior:+towards+zebrafish+models+of+neurodegenerative+diseases.">Modulatory neurotransmitter systems and behavior: towards zebrafish models of neurodegenerative diseases.</a> Zebrafish. 3 (2), 235-247 (2006).</li><li>F&#233;lix, L. M., Antunes, L. M., Coimbra, A. M., Valentim, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+alterations+of+zebrafish+larvae+after+early+embryonic+exposure+to+ketamine.">Behavioral alterations of zebrafish larvae after early embryonic exposure to ketamine.</a> Psychopharmacology. 234 (4), 549-558 (2017).</li><li>Bailey, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+behavioral+effects+following+early+life+exposure+to+retinoic+acid+or+valproic+acid+in+zebrafish.">Persistent behavioral effects following early life exposure to retinoic acid or valproic acid in zebrafish.</a> Neurotoxicology. 52, 23-33 (2016).</li><li>Richendrfer, H., Cr&#233;ton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+High-throughput+Behavioral+Analyses+in+Zebrafish+Larvae.">Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae.</a> Journal of Visualized Experiments. (77), e50622 (2013).</li><li>Best, J. D., Alderton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+An+in+vivo+model+for+the+study+of+neurological+diseases.">Zebrafish: An in vivo model for the study of neurological diseases.</a> Neuropsychiatric Disease &amp; Treatment. 4 (3), 567-576 (2008).</li><li>Yuhei, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+systems+toxicology+model+for+developmental+neurotoxicity+testing.">Zebrafish as a systems toxicology model for developmental neurotoxicity testing.</a> Congenital Anomalies. 55 (1), 1-16 (2015).</li><li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TBBPA+induces+developmental+toxicity,+oxidative+stress,+and+apoptosis+in+embryos+and+zebrafish+larvae+(Danio+rerio).">TBBPA induces developmental toxicity, oxidative stress, and apoptosis in embryos and zebrafish larvae (Danio rerio).</a> Environmental Toxicology. 31 (10), 1241-1249 (2016).</li><li>Chakraborty, C., Sharma, A. R., Sharma, G., Lee, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+A+complete+animal+model+to+enumerate+the+nanoparticle+toxicity.">Zebrafish: A complete animal model to enumerate the nanoparticle toxicity.</a> Journal of Nanobiotechnology. 14 (1), 65 (2016).</li><li>Wehmas, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+metal+oxide+nanoparticle+toxicity+using+embryonic+zebrafish.">Comparative metal oxide nanoparticle toxicity using embryonic zebrafish.</a> Toxicology Reports. 2, 702-715 (2015).</li><li>Cavalieri, V., Spinelli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+epigenetics+in+zebrafish.">Environmental epigenetics in zebrafish.</a> Epigenetics &amp; Chromatin. 10 (1), 46 (2017).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+three+different+embryonic+exposure+modes+of+2,+2?,+4,+4?-tetrabromodiphenyl+ether+on+the+path+angle+and+social+activity+of+zebrafish+larvae.">Effects of three different embryonic exposure modes of 2, 2?, 4, 4?-tetrabromodiphenyl ether on the path angle and social activity of zebrafish larvae.</a> Chemosphere. 169, 542-549 (2017).</li><li>Zhao, J., Xu, T., Yin, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+activity+changes+on+zebrafish+larvae+with+different+2,+2?,+4,+4?-tetrabromodiphenyl+ether+(PBDE-47)+embryonic+exposure+modes.">Locomotor activity changes on zebrafish larvae with different 2, 2?, 4, 4?-tetrabromodiphenyl ether (PBDE-47) embryonic exposure modes.</a> Chemosphere. 94, 53-61 (2014).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobehavioral+effects+of+two+metabolites+of+BDE-47+(6-OH-BDE-47+and+6-MeO-BDE-47)+on+zebrafish+larvae.">Neurobehavioral effects of two metabolites of BDE-47 (6-OH-BDE-47 and 6-MeO-BDE-47) on zebrafish larvae.</a> Chemosphere. 200, 30-35 (2018).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chlorine+contents+and+chain+lengths+influence+the+neurobehavioral+effects+of+commercial+chlorinated+paraffins+on+zebrafish+larvae.">The chlorine contents and chain lengths influence the neurobehavioral effects of commercial chlorinated paraffins on zebrafish larvae.</a> Journal of Hazardous Materials. 377, 172-178 (2019).</li><li>Schmitt, C., McManus, M., Kumar, N., Awoyemi, O., Crago, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analyses+of+the+neurobehavioral,+molecular,+and+enzymatic+effects+of+organophosphates+on+embryo-larval+zebrafish+(Danio+rerio).">Comparative analyses of the neurobehavioral, molecular, and enzymatic effects of organophosphates on embryo-larval zebrafish (Danio rerio).</a> Neurotoxicology and Teratology. 73, 67-75 (2019).</li><li>Li, X., Kong, H., Ji, X., Gao, Y., Jin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+behavioral+phenomics+applied+for+phenotyping+aquatic+neurotoxicity+induced+by+lead+contaminants+of+environmentally+relevant+level.">Zebrafish behavioral phenomics applied for phenotyping aquatic neurotoxicity induced by lead contaminants of environmentally relevant level.</a> Chemosphere. 224, 445-454 (2019).</li><li>Leuthold, D., Klu&#776;ver, N., Altenburger, R., Busch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+environmentally+relevant+neuroactive+chemicals+specifically+be+detected+with+the+locomotor+response+test+in+zebrafish+embryos?.">Can environmentally relevant neuroactive chemicals specifically be detected with the locomotor response test in zebrafish embryos?.</a> Environmental Science &amp; Technology. 53 (1), 482-493 (2018).</li><li>Kinch, C. D., Ibhazehiebo, K., Jeong, J. H., Habibi, H. R., Kurrasch, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+exposure+to+bisphenol+A+and+replacement+bisphenol+S+induces+precocious+hypothalamic+neurogenesis+in+embryonic+zebrafish.">Low-dose exposure to bisphenol A and replacement bisphenol S induces precocious hypothalamic neurogenesis in embryonic zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (5), 1475-1480 (2015).</li><li>Javed, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+amyloid+beta+toxicity+in+zebrafish+with+a+chaperone-gold+nanoparticle+dual+strategy.">Inhibition of amyloid beta toxicity in zebrafish with a chaperone-gold nanoparticle dual strategy.</a> Nature Communications. 10 (1), 1-14 (2019).</li><li>Green, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+high-throughput+neurophenotyping+of+zebrafish+social+behavior.">Automated high-throughput neurophenotyping of zebrafish social behavior.</a> Journal of Neuroscience Methods. 210 (2), 266-271 (2012).</li><li>Tytell, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hydrodynamics+of+eel+swimming+II.+Effect+of+swimming+speed.">The hydrodynamics of eel swimming II. Effect of swimming speed.</a> Journal of Experimental Biology. 207 (19), 3265-3279 (2004).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> The Zebrafish Book. 4, (2000).</li><li>Ying, L., Jiang, L., Bo, P., Yong, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teratogenic+effects+of+embryonic+exposure+to+pretilachlor+on+the+larvae+of+zebrafish.">Teratogenic effects of embryonic exposure to pretilachlor on the larvae of zebrafish.</a> Journal of Agro-Environment Science. 36 (3), 481-486 (2017).</li><li>Macphail, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotion+in+larval+zebrafish:+Influence+of+time+of+day,+lighting+and+ethanol.">Locomotion in larval zebrafish: Influence of time of day, lighting and ethanol.</a> Neurotoxicology. 30 (1), 52-58 (2009).</li><li>Kais, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DMSO+modifies+the+permeability+of+the+zebrafish+(Danio+rerio)+chorion-implications+for+the+fish+embryo+test+(FET).">DMSO modifies the permeability of the zebrafish (Danio rerio) chorion-implications for the fish embryo test (FET).</a> Aquatic Toxicology. 140, 229-238 (2013).</li><li>Truong, L., Harper, S. L., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drug Safety Evaluation. , 271-279 (2011).</li><li>Peeters, B. W., Moeskops, M., Veenvliet, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Color+preference+in+Danio+rerio:+effects+of+age+and+anxiolytic+treatments.">Color preference in Danio rerio: effects of age and anxiolytic treatments.</a> Zebrafish. 13 (4), 330-334 (2016).</li><li>Barba-Escobedo, P. A., Gould, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+social+preferences+of+lone+zebrafish+in+a+novel+environment:+strain+and+anxiolytic+effects.">Visual social preferences of lone zebrafish in a novel environment: strain and anxiolytic effects.</a> Genes, Brain and Behavior. 11 (3), 366-373 (2012).</li><li>Blaser, R., Penalosa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimuli+affecting+zebrafish+(Danio+rerio)+behavior+in+the+light/dark+preference+test.">Stimuli affecting zebrafish (Danio rerio) behavior in the light/dark preference test.</a> Physiology &amp; Behavior. 104 (5), 831-837 (2011).</li><li>Blaser, R. E., Rosemberg, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measures+of+anxiety+in+zebrafish+(Danio+rerio):+dissociation+of+black/white+preference+and+novel+tank+test.">Measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio): dissociation of black/white preference and novel tank test.</a> PloS One. 7 (5), e36931 (2012).</li><li>Weichert, F. G., Floeter, C., Artmann, A. S. M., Kammann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+ecotoxicity+of+potentially+neurotoxic+substances-Evaluation+of+a+behavioural+parameter+in+the+embryogenesis+of+Danio+rerio.">Assessing the ecotoxicity of potentially neurotoxic substances-Evaluation of a behavioural parameter in the embryogenesis of Danio rerio.</a> Chemosphere. 186, 43-50 (2017).</li></ol>

이 작업은 제브라피시 유충을 사용하여 환경 오염 물질의 신경 독성을 평가하기 위한 상세한 실험 프로토콜을 제공합니다. Zebrafish는 노출 기간 동안 배아에서 유충으로 과정을 거치므로 배아와 유충을 잘 돌보는 것이 필수적입니다. 배아와 애벌레의 발달에 영향을 미치는 모든 것이 최종 결과에 영향을 미칠 수 있습니다. 여기서 배양 환경, 노출 과정 및 실험 조건은 전체 분석의 성공을 보장하기...

최근 몇 년 동안 점점 더 많은 환경 오염 물질이 신경 독성1,2,3,4로입증되었습니다. 그러나, 환경 오염 물질에 노출 된 후 생체 내에서 신경 독성의 평가는 내분비 중단 또는 발달 독성만큼 쉽지 않다. 또한, 오염 물질에 대한 조기 노출, 특히 환경 관련 용량에서, 독성 연구에서 증가 관심을 끌고있다5,6,7,8.
Zebrafish는 환경 오염 물질에 노출 된 후 초기 개발 중에 신경 독성 연구에 적합한 동물 모델로 설립되고 있습니다. 얼룩말물고기는 수정 후 다른 종보다 빠르게 발달하는 척추동물입니다. 유충은 융모의 영양소가 7일 동안 유지하기에 충분하기 때문에 먹이를 줄 필요가 없다(dpf)9. 유충은 ~2 dpf에서 융모에서 나오고3-4 dpf14, 15,16, 17,18에서시작하여 행동 계기10,11,12,13을 사용하여 관찰, 추적, 정량화 및 분석할 수 있는 수영 및 선회등의 행동을 개발한다. 또한 동작 계측기에서도 높은 처리량 테스트를 실현할 수 있습니다. 따라서, 제브라피쉬 유충은 환경오염물질19의신경행동연구에 뛰어난 모델이다. 여기서, 프로토콜은 빛 자극하에 제브라피시 유충에 대한 환경 오염 물질의 신경 행동 독성을 연구하기 위해 높은 처리량 모니터링을 사용하여 제공됩니다.
우리 실험실은 2,2',4,4'-테트라 브로 모디 페닐 에테르 (BDE-47)20,21,6'-Hydroxy / 메톡시 -2,2', 4,4'-te의 신경 행동 독성을 연구했습니다. 트라브로모모디페닐 에테르(6-OH/MeO-BDE-47)22,데카 브롬화 디페닐 에테르(BDE-209), 납, 및 상업적 염소처리된 파라핀(23)을 제시된 프로토콜을 사용한다. 많은 실험실은 또한 애벌레 또는 성인 물고기에 다른 오염 물질의 신경 행동 효과를 연구하기 위해 프로토콜을 사용24,25,26,27. 이러한 신경행동 프로토콜은 비스페놀 A및 치환비스페놀 S에 저용량 노출이 배아제브라피시(27)에서조기 시상하부 신경발생을 유도한다는 것을 보여주는 기계적 지원을 제공하는 데 사용되었다. 또한 일부 연구자들은 해당 연구를 수행하기 위해 프로토콜을 최적화했습니다. 최근 연구는 카제인 코팅 금 나노 입자 (βCas AuNPs)를 사용하여 쉽게, 높은 처리량 제브라피시 모델에서 아밀로이드 베타 (Aβ)의 독성을 제거했다. βCas AuNPs는 제브라피쉬 유충및 격리된 내측 Aβ42의 혈액-뇌 장벽을 가로질러 전이되는 전신 순환에서 βCas AuNPs가 행동병리학28에의해 지지된 비특이적, 샤페론 유사 방식으로 독성을 유도하는 것으로 나타났다.
운동, 경로 각도 및 사회 활동은 제시된 프로토콜에서 오염물질에 노출된 후 제브라피시 유충의 신경 독성 효과를 연구하는 데 사용되는 세 가지 신경 행동 지표이다. 운동은 유충의 수영 거리에 의해 측정되고 오염 물질에 노출 된 후 손상 될 수 있습니다. 경로 각도 및 사회 활동은 뇌및 중추신경계(29)의기능과 더 밀접하게 관련되어 있다. 경로 각도는 수영방향(30)을기준으로 동물 운동 경로의 각도를 의미한다. ~-180°~+180°의 8개의 각도 클래스가 시스템에 설정되어 있습니다. 비교를 단순화하기 위해 최종 결과의 6 개 클래스는 일상적인 회전 (-10 ° ~ ~ 0 ° ~ + 10 °), 평균 회전 (-10 ° ~ ~ - 90 ° , + 90 ° ), 응답 회전 (-180 ° ~ ~ - 90 °, +90 ° ~ + 180 °)으로 정의됩니다22. 두 물고기 사회 활동은 그룹 shoaling 행동의 기본; 여기서 유효한 두 애벌레 사이의 거리 (0.5 cm)는 사회적 접촉으로 정의됩니다.
여기에 제시된 프로토콜은 제브라피시 유충에 대한 신경 행동 효과를 연구하기 위한 명확한 과정을 보여주고 다양한 물질 또는 오염 물질의 신경 독성 효과를 밝히는 방법을 제공합니다. 이 프로토콜은 환경 오염 물질의 신경 독성을 연구하는 데 관심이있는 연구자에게 도움이 될 것입니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>48-well-microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td>Embyros housing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well-microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3471</td>
			<td>Embyros housing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BDE-47</td>
			<td>AccuStandard</td>
			<td>5436-43-1</td>
			<td>Pollutant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td>Cosolvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX 16</td>
			<td>Observation instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3120000267</td>
			<td>Transfer solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrabox</td>
			<td>Viewpoint</td>
			<td>ZebraBox</td>
			<td>Behavior instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrafish</td>
			<td>Shanghai FishBio Co., Ltd.</td>
			<td>Tubingen</td>
			<td>Zebrafish supplier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZebraLab</td>
			<td>Viewpoint</td>
			<td>ZebraLab</td>
			<td>Behavior software</td>
		</tr>
	</tbody>
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studying neurobehavioral effects of environmental pollutants on zebrafish larvae

최근 몇 년 동안 점점 더 많은 환경 오염 물질이 특히 유기체의 초기 개발 단계에서 신경 독성이 입증되었습니다. 얼룩말유충은 환경 오염 물질의 신경 행동 연구를위한 탁월한 모델입니다. 여기서, 배아의 수집, 노출 과정, 신경행동지표, 시험과정 등을 포함하는 제브라피쉬 유충을 이용한 환경오염물질의 신경독성평가를 위한 상세한 실험 프로토콜이 제공되고, 데이터 분석을 제공합니다. 또한, 배양 환경, 노출 과정 및 실험 조건은 분석의 성공을 보장하기 위해 논의된다. 이 프로토콜은 정신 병증 약물의 개발, 환경 신경 독성 오염 물질에 대한 연구에 사용되었으며, 해당 연구를 수행하거나 기계론 적 연구에 도움이되도록 최적화 될 수 있습니다. 이 프로토콜은 제브라피시 유충에 대한 신경 행동 효과를 연구하기 위한 명확한 작동 과정을 보여주며 다양한 신경 독성 물질 이나 오염 물질의 효과를 밝힐 수 있습니다.

여기서, 우리는 빛 자극하에 제브라피쉬 유충을 사용하여 환경 오염 물질의 신경 행동 효과를 연구하기위한 프로토콜을 설명합니다. 운동, 경로 각도 및 사회 활동 테스트는 소개에 정의되어 있습니다. 운동 및 경로 각도 테스트에서 마이크로 플레이트의 설정과 소프트웨어의 이미지는 다음과 같습니다. 또한, 우리 자신의 연구 결과는 예로 제시된다. 2개의 연구 결과는 BD...

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Studying Neurobehavioral Effects of Environmental Pollutants on Zebrafish Larvae

이 논문에서는 제브라피쉬 유충 모델을 이용한 환경 오염물질의 신경행동 독성 평가를 위한 상세한 실험 프로토콜이 제시되며, 여기에는 노출 과정과 신경행동 지표에 대한 테스트가 포함된다.

제브라피시 유충에 대한 환경 오염물질의 신경행동 효과 연구

Recent years more and more environmental pollutants have been proved neurotoxic, especially at the early development stages of organisms. Zebrafish larvae ...

우리의 프로토콜은 제브라피시 애벌레에 대한 관심의 물질과 오염 물질의 신경 행동 효과를 연구하고 이러한 에이전트의 잠재적 인 신경 독성을 밝히기위한 명확한 과정을 제공합니다. 이 기술은 제브라피시 모델에서 신경 행동의 높은 처리량 테스트를 사용하여 수행 될 수있다. 이 방법은 제브라피시 게놈이 인간과 높은 동성애를 가지고 있기 때문에 오염 물질에 대한 잠재적 인 신경 독성을 입증하기 위해 오염 물질의 대립 - 신경 행동 효과를 평가하기 위해 적용 될 수 있으므로 화학 적 관리 및 오염 물질로 인한 공중 보건 문제에 대한 표시를 제공 할 수 있습니다.Zebrafish는 높은 처리량 검열의 이점을 가지고 있기 때문에, 이 방법은 정신성 약물 및 환경 독성학 연구의 발달에 대한 통찰력을 제공합니다. 첫 번째 실험을 공부하는 것에 대해 두려워하지 마십시오. 프로토콜을 따르는 경우 성공적인 결과를 받게 됩니다.실험을 수행하기 최소 2시간 전에 실온을 섭씨 28도로 설정하고 48웰 마이크로플레이트의 각 웰에 800마이크로리터의 노출 용액을 추가합니다. 이어서, 변형된 팁이 있는 1밀리리터 파이펫을 사용하여 200마이크로리터의 노출 용액을 운동 및 경로 각도 실험에 대비하여 마이크로플레이트의 각 웰에 하나의 애벌레를 이송한다. 사회적 행동 실험을 위한 6웰 마이크로플레이트를 준비하려면 6개의 웰 마이크로플레이트의 각 웰에 4밀리리터의 노출 용액을 추가하고 200마이크로리터의 노출 용액을 각 우물에 전달합니다.테스트를 시작하기 전에 높은 처리량 모니터링 소프트웨어 프로그램을 열고 추적 회전 경로 각도 모듈을 선택합니다. 48웰 마이크로 플레이트를 레코딩 플랫폼으로 옮기고 덮개를 아래로 당깁니다. 파일을 클릭하고 프로토콜을 생성하여 새 프로토콜생성을 시작하고 48을 위치 수 위치에 입력합니다.매개 변수, 프로토콜 매개 변수 및 시간을 클릭하여 실험 기간을 1시간 10분으로 설정하고 통합 기간을 60초로 설정합니다. 타원형 모양 도구를 사용하여 왼쪽 상단 주위에 원을 잘 그립니다. 원을 선택하고 복사, 오른쪽 상단 마크, 붙여 넣기 및 선택을 클릭합니다.마우스를 사용하여 복사된 원을 오른쪽 오른쪽으로 잘 드래그하고 복사, 오른쪽 상단 마크, 붙여넣기 및 다시 선택합니다. 그런 다음 복사된 원을 오른쪽 하단으로 잘 드래그하고 빌드 및 표시 지우기를 클릭합니다. 시스템은 자동으로 플레이트의 다른 모든 우물 위에 원을 그립니다.다음으로 눈금 그리기를 클릭하고 화면에 교정 선을 그립니다. 줄의 길이를 입력하고, 단위를 설정하고, 그룹에 적용을 클릭합니다. 동물색을 검은색으로 설정하고 검출 임계값을 16내지 18로 설정하여 동물을 감지하고, 비활성을 초당 0.5cm로, 초당 2.5cm의 작은 속도로 설정합니다.경로 각도 클래스를 영하 180에서 180으로 설정합니다. 조명 조건을 설정하려면 매개 변수, 라이트 드라이빙, 아래 3가지 트리거링 방법 중 하나를 클릭하고 향상된 자극을 사용하여 조명 조건을 설정합니다. 가장자리를 클릭하고 10분의 어두운 기간을 설정하고 10분 동안 빛과 어두운 기간을 번갈아 가며 세 사이클을 설정합니다.그런 다음 프로토콜을 저장합니다. 모든 매개 변수가 설정되면 테스트룸의 조명을 거절하고 애벌레가 10분 동안 시스템에 적응할 수 있도록 합니다. 적응 기간이 끝나면 실험 및 실행을 클릭하고 실험 파일을 저장할 폴더를 만듭니다.그런 다음 결과 이름을 입력하고 배경 및 시작을 클릭합니다. 실험이 끝나면 실험을 클릭하고 중지합니다. 그런 다음 후속 실험을 위해 48웰 마이크로 플레이트를 라이트 인큐베이터로 되돌려 놓습니다.모든 그룹은 16마리의 동물을 포함할 수 있기 때문에, 시스템은 단일 48웰 마이크로플레이트에서 상이한 처리 조건 하에서 운동과 경로 각도의 높은 처리량 테스트를 수행하는 데 사용될 수 있다. 애벌레의 사회적 활동은 6웰 플레이트를 사용하여 테스트할 수 있습니다. 본 대표적인 실험에서, BDE-47의 가장 높은 농도 군은 암흑기간 동안 뚜렷한 저활성을 보였으며, BDE-47 노출로 인한 변화는 광기간 동안 관찰되지 않았다.또한, 6-하이드록시-BDE-47의 고농도 군은 5일 후 수정시 루틴및 평균 회전횟수를 줄여나하였다. 그러나, 6-메톡시-BDE47 노출 군에서 보다 반응성이 뛰어난 회전이 유도되었다. 제브라피쉬의 사회적 활동은 염소처리파라핀-70과 단사슬 염소처리 파라핀-52b에 의해 자극되었으며, 긴 사슬 염소 파라핀-52a는 애벌레의 접촉 기간을 단축시켰다.시험을 위해 옮겨진 애벌레가 정상적인 수영 능력과 기형이 없어야하는지 확인하는 것이 중요합니다. 색상 선호도, 어두운 환경 설정, 모든 어둠, 얼룩말피의 꼬리 움직임과 같은 다른 변수는 환경 오염 물질의 신경 행동 독성에 대한 추가 질문에 대답할 수 있습니다. BDE-47 노출 솔루션은 신경 독성이며 내분비 중단 가능성이 있으므로 피부와의 직접적인 접촉을 피하십시오.

Research

JoVE Journal

Environment

Exploring the Effects of Atmospheric Forcings on Evaporation: Experimental Integration of the Atmospheric Boundary Layer and Shallow Subsurface

증발에 대기 강제력의 효과를 탐구 : 대기 경계층과 얕은 표면 하의의 실험 통합

Evaporation is directly influenced by the interactions between the atmosphere, land surface and soil subsurface. This work aims to experimentally study ...

연구

환경과학

A Flow-through Exposure System for Evaluating Suspended Sediments Effects on Aquatic Life

수산 생명에 일시 중지를 평가하면 퇴적물 효과에 대한 플로우를 통해 노출 시스템

This paper describes the Fish Larvae and Egg Exposure System (FLEES). The flow-through exposure system is used to investigate the effects of suspended ...

Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

식민지 수준에 개인에서 꿀 꿀벌 개발에 대한 환경 화학 물질의 효과를 평가

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be ...

Experimental Column Setup for Studying Anaerobic Biogeochemical Interactions Between Iron (Oxy)Hydroxides, Trace Elements, and Bacteria

Experimental Column Setup for Studying Anaerobic Biogeochemical Interactions Between Iron OxyHydroxides, Trace Elements, and Bacteria

(옥 시) 철 수 산화물, 성분, 및 박테리아 혐 기성 생물 지구 화학적 상호 작용을 공부에 대 한 실험 열 설정

Fate and speciation of trace elements (TEs), such as arsenic (As) and mercury (Hg), in aquifers are closely related to physio-chemical conditions, such as ...

Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

DMMTAV 및 환경 응용 프로그램에 대 한 DMAV 를 사용 하 여 DMDTAV 의 준비: 합성, 정화, 및 확인

Dimethylated thioarsenicals such as dimethylmonothioarsinic acid (DMMTAV) and dimethyldithioarsinic acid (DMDTAV), which are produced by the metabolic ...

Collection and Extraction of Occupational Air Samples for Analysis of Fungal DNA

Traditional methods of identifying fungal exposures in occupational environments, such as culture and microscopy-based approaches, have several ...

Wastewater Irrigation Impacts on Soil Hydraulic Conductivity: Coupled Field Sampling and Laboratory Determination of Saturated Hydraulic Conductivity

토양의 유압 전도도에 폐수 관개 영향: 필드 샘플링 고 포화 된 유압 전도도의 실험실 결정

Since the early 1960s, an alternative wastewater discharge practice at The Pennsylvania State University has been researched and its impacts monitored. ...

An Experimental Protocol for Studying Mineral Effects on Organic Hydrothermal Transformations

유기 열 수 변환에 미네랄 효과 공부 하는 실험 프로토콜

Organic-mineral interactions are widely occurring in hydrothermal environments, such as hot springs, geysers on land, and the hydrothermal vents in the ...

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

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생체 외에서 피부 세포 마이그레이션에 비소의 효과 설명 하기 위해 분석 결과 스크래치

Understanding the physiologic mechanisms of wound healing has been the focus of ongoing research for many years. This research directly translates into ...

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

독성물질의 트랜스 및 다세대 효과를 연구하기 위한 예쁜꼬마선충 사용

Information about toxicities of chemicals are essential in their application and waste management. For chemicals at low concentrations, the long-term ...