Name: studying neurobehavioral effects of environmental pollutants on zebrafish larvae
Uploaded: 2020-02-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Studying Neurobehavioral Effects of Environmental Pollutants on Zebrafish Larvae at JoVE.com

Авторы благодарны за финансовую поддержку со стороны Национального фонда естественных наук Китая (21876135 и 21876136), Национального крупного научно-технического проекта Китая (2017-X07502003-03, 2018-X07701001-22), Фонда МЧС-Шанхай Ключевая лаборатория охраны окружающей среды детей (CEH201807-5) и Шведский научно-исследовательский совет (No 639-2013-6913).

Протокол соответствует руководящим принципам, утвержденным Комитетом по этике животных Университета Тонджи.
1. Сбор эмбрионов зебрафиш
<ol><li>Положите две пары здоровых взрослых тюбингена зебрафиш в ящик для нереста в ночь перед воздействием, сохраняя соотношение полов ...

<ol>
	<li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+neurotoxicity+of+organophosphate+flame+retardants+in+early+life+stages+of+Japanese+medaka+(Oryzias+latipes).">Developmental neurotoxicity of organophosphate flame retardants in early life stages of Japanese medaka (Oryzias latipes).</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (12), 2931-2940 (2016).</li><li>Tian, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotoxicity+induced+by+zinc+oxide+nanoparticles:+age-related+differences+and+interaction.">Neurotoxicity induced by zinc oxide nanoparticles: age-related differences and interaction.</a> Scientific Reports. 5, 16117 (2015).</li><li>Rauh, V. A., Margolis, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+review:+environmental+exposures,+neurodevelopment,+and+child+mental+health-new+paradigms+for+the+study+of+brain+and+behavioral+effects.">Research review: environmental exposures, neurodevelopment, and child mental health-new paradigms for the study of brain and behavioral effects.</a> Journal of Child Psychology and Psychiatry. 57 (7), 775-793 (2016).</li><li>Ye, B. S., Leung, A. O. W., Wong, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+association+of+environmental+toxicants+and+autism+spectrum+disorders+in+children.">The association of environmental toxicants and autism spectrum disorders in children.</a> Environmental Pollution. 227, 234-242 (2017).</li><li>Schwarzenbach, R. P., Gschwend, P. M., Imboden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Environmental Organic Chemistry. , (2016).</li><li>Akortia, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+sources,+levels,+and+toxicity+of+polybrominated+diphenyl+ethers+(PBDEs)+and+their+transformation+and+transport+in+various+environmental+compartments.">A review of sources, levels, and toxicity of polybrominated diphenyl ethers (PBDEs) and their transformation and transport in various environmental compartments.</a> Environmental Reviews. 24 (3), 253-273 (2016).</li><li>Shaw, B. J., Liddle, C. C., Windeatt, K. M., Handy, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+evaluation+of+the+fish+early-life+stage+toxicity+test+for+engineered+nanomaterials:+experimental+modifications+and+recommendations.">A critical evaluation of the fish early-life stage toxicity test for engineered nanomaterials: experimental modifications and recommendations.</a> Archives of Toxicology. 90 (9), 2077-2107 (2016).</li><li>Landrigan, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+environmental+origins+of+neurodegenerative+disease+in+later+life.">Early environmental origins of neurodegenerative disease in later life.</a> Environmental Health Perspectives. 113 (9), 1230-1233 (2005).</li><li>Xu, T., Yin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unlocking+neurobehavioral+effects+of+environmental+endocrine+disrupting+chemicals.">The unlocking neurobehavioral effects of environmental endocrine disrupting chemicals.</a> Current Opinion in Endocrine and Metabolic Research. 7, 9-13 (2019).</li><li>Panula, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulatory+neurotransmitter+systems+and+behavior:+towards+zebrafish+models+of+neurodegenerative+diseases.">Modulatory neurotransmitter systems and behavior: towards zebrafish models of neurodegenerative diseases.</a> Zebrafish. 3 (2), 235-247 (2006).</li><li>F&#233;lix, L. M., Antunes, L. M., Coimbra, A. M., Valentim, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+alterations+of+zebrafish+larvae+after+early+embryonic+exposure+to+ketamine.">Behavioral alterations of zebrafish larvae after early embryonic exposure to ketamine.</a> Psychopharmacology. 234 (4), 549-558 (2017).</li><li>Bailey, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+behavioral+effects+following+early+life+exposure+to+retinoic+acid+or+valproic+acid+in+zebrafish.">Persistent behavioral effects following early life exposure to retinoic acid or valproic acid in zebrafish.</a> Neurotoxicology. 52, 23-33 (2016).</li><li>Richendrfer, H., Cr&#233;ton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+High-throughput+Behavioral+Analyses+in+Zebrafish+Larvae.">Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae.</a> Journal of Visualized Experiments. (77), e50622 (2013).</li><li>Best, J. D., Alderton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+An+in+vivo+model+for+the+study+of+neurological+diseases.">Zebrafish: An in vivo model for the study of neurological diseases.</a> Neuropsychiatric Disease &amp; Treatment. 4 (3), 567-576 (2008).</li><li>Yuhei, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+systems+toxicology+model+for+developmental+neurotoxicity+testing.">Zebrafish as a systems toxicology model for developmental neurotoxicity testing.</a> Congenital Anomalies. 55 (1), 1-16 (2015).</li><li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TBBPA+induces+developmental+toxicity,+oxidative+stress,+and+apoptosis+in+embryos+and+zebrafish+larvae+(Danio+rerio).">TBBPA induces developmental toxicity, oxidative stress, and apoptosis in embryos and zebrafish larvae (Danio rerio).</a> Environmental Toxicology. 31 (10), 1241-1249 (2016).</li><li>Chakraborty, C., Sharma, A. R., Sharma, G., Lee, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+A+complete+animal+model+to+enumerate+the+nanoparticle+toxicity.">Zebrafish: A complete animal model to enumerate the nanoparticle toxicity.</a> Journal of Nanobiotechnology. 14 (1), 65 (2016).</li><li>Wehmas, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+metal+oxide+nanoparticle+toxicity+using+embryonic+zebrafish.">Comparative metal oxide nanoparticle toxicity using embryonic zebrafish.</a> Toxicology Reports. 2, 702-715 (2015).</li><li>Cavalieri, V., Spinelli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+epigenetics+in+zebrafish.">Environmental epigenetics in zebrafish.</a> Epigenetics &amp; Chromatin. 10 (1), 46 (2017).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+three+different+embryonic+exposure+modes+of+2,+2?,+4,+4?-tetrabromodiphenyl+ether+on+the+path+angle+and+social+activity+of+zebrafish+larvae.">Effects of three different embryonic exposure modes of 2, 2?, 4, 4?-tetrabromodiphenyl ether on the path angle and social activity of zebrafish larvae.</a> Chemosphere. 169, 542-549 (2017).</li><li>Zhao, J., Xu, T., Yin, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+activity+changes+on+zebrafish+larvae+with+different+2,+2?,+4,+4?-tetrabromodiphenyl+ether+(PBDE-47)+embryonic+exposure+modes.">Locomotor activity changes on zebrafish larvae with different 2, 2?, 4, 4?-tetrabromodiphenyl ether (PBDE-47) embryonic exposure modes.</a> Chemosphere. 94, 53-61 (2014).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobehavioral+effects+of+two+metabolites+of+BDE-47+(6-OH-BDE-47+and+6-MeO-BDE-47)+on+zebrafish+larvae.">Neurobehavioral effects of two metabolites of BDE-47 (6-OH-BDE-47 and 6-MeO-BDE-47) on zebrafish larvae.</a> Chemosphere. 200, 30-35 (2018).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chlorine+contents+and+chain+lengths+influence+the+neurobehavioral+effects+of+commercial+chlorinated+paraffins+on+zebrafish+larvae.">The chlorine contents and chain lengths influence the neurobehavioral effects of commercial chlorinated paraffins on zebrafish larvae.</a> Journal of Hazardous Materials. 377, 172-178 (2019).</li><li>Schmitt, C., McManus, M., Kumar, N., Awoyemi, O., Crago, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analyses+of+the+neurobehavioral,+molecular,+and+enzymatic+effects+of+organophosphates+on+embryo-larval+zebrafish+(Danio+rerio).">Comparative analyses of the neurobehavioral, molecular, and enzymatic effects of organophosphates on embryo-larval zebrafish (Danio rerio).</a> Neurotoxicology and Teratology. 73, 67-75 (2019).</li><li>Li, X., Kong, H., Ji, X., Gao, Y., Jin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+behavioral+phenomics+applied+for+phenotyping+aquatic+neurotoxicity+induced+by+lead+contaminants+of+environmentally+relevant+level.">Zebrafish behavioral phenomics applied for phenotyping aquatic neurotoxicity induced by lead contaminants of environmentally relevant level.</a> Chemosphere. 224, 445-454 (2019).</li><li>Leuthold, D., Klu&#776;ver, N., Altenburger, R., Busch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+environmentally+relevant+neuroactive+chemicals+specifically+be+detected+with+the+locomotor+response+test+in+zebrafish+embryos?.">Can environmentally relevant neuroactive chemicals specifically be detected with the locomotor response test in zebrafish embryos?.</a> Environmental Science &amp; Technology. 53 (1), 482-493 (2018).</li><li>Kinch, C. D., Ibhazehiebo, K., Jeong, J. H., Habibi, H. R., Kurrasch, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+exposure+to+bisphenol+A+and+replacement+bisphenol+S+induces+precocious+hypothalamic+neurogenesis+in+embryonic+zebrafish.">Low-dose exposure to bisphenol A and replacement bisphenol S induces precocious hypothalamic neurogenesis in embryonic zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (5), 1475-1480 (2015).</li><li>Javed, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+amyloid+beta+toxicity+in+zebrafish+with+a+chaperone-gold+nanoparticle+dual+strategy.">Inhibition of amyloid beta toxicity in zebrafish with a chaperone-gold nanoparticle dual strategy.</a> Nature Communications. 10 (1), 1-14 (2019).</li><li>Green, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+high-throughput+neurophenotyping+of+zebrafish+social+behavior.">Automated high-throughput neurophenotyping of zebrafish social behavior.</a> Journal of Neuroscience Methods. 210 (2), 266-271 (2012).</li><li>Tytell, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hydrodynamics+of+eel+swimming+II.+Effect+of+swimming+speed.">The hydrodynamics of eel swimming II. Effect of swimming speed.</a> Journal of Experimental Biology. 207 (19), 3265-3279 (2004).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> The Zebrafish Book. 4, (2000).</li><li>Ying, L., Jiang, L., Bo, P., Yong, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teratogenic+effects+of+embryonic+exposure+to+pretilachlor+on+the+larvae+of+zebrafish.">Teratogenic effects of embryonic exposure to pretilachlor on the larvae of zebrafish.</a> Journal of Agro-Environment Science. 36 (3), 481-486 (2017).</li><li>Macphail, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotion+in+larval+zebrafish:+Influence+of+time+of+day,+lighting+and+ethanol.">Locomotion in larval zebrafish: Influence of time of day, lighting and ethanol.</a> Neurotoxicology. 30 (1), 52-58 (2009).</li><li>Kais, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DMSO+modifies+the+permeability+of+the+zebrafish+(Danio+rerio)+chorion-implications+for+the+fish+embryo+test+(FET).">DMSO modifies the permeability of the zebrafish (Danio rerio) chorion-implications for the fish embryo test (FET).</a> Aquatic Toxicology. 140, 229-238 (2013).</li><li>Truong, L., Harper, S. L., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drug Safety Evaluation. , 271-279 (2011).</li><li>Peeters, B. W., Moeskops, M., Veenvliet, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Color+preference+in+Danio+rerio:+effects+of+age+and+anxiolytic+treatments.">Color preference in Danio rerio: effects of age and anxiolytic treatments.</a> Zebrafish. 13 (4), 330-334 (2016).</li><li>Barba-Escobedo, P. A., Gould, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+social+preferences+of+lone+zebrafish+in+a+novel+environment:+strain+and+anxiolytic+effects.">Visual social preferences of lone zebrafish in a novel environment: strain and anxiolytic effects.</a> Genes, Brain and Behavior. 11 (3), 366-373 (2012).</li><li>Blaser, R., Penalosa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimuli+affecting+zebrafish+(Danio+rerio)+behavior+in+the+light/dark+preference+test.">Stimuli affecting zebrafish (Danio rerio) behavior in the light/dark preference test.</a> Physiology &amp; Behavior. 104 (5), 831-837 (2011).</li><li>Blaser, R. E., Rosemberg, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measures+of+anxiety+in+zebrafish+(Danio+rerio):+dissociation+of+black/white+preference+and+novel+tank+test.">Measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio): dissociation of black/white preference and novel tank test.</a> PloS One. 7 (5), e36931 (2012).</li><li>Weichert, F. G., Floeter, C., Artmann, A. S. M., Kammann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+ecotoxicity+of+potentially+neurotoxic+substances-Evaluation+of+a+behavioural+parameter+in+the+embryogenesis+of+Danio+rerio.">Assessing the ecotoxicity of potentially neurotoxic substances-Evaluation of a behavioural parameter in the embryogenesis of Danio rerio.</a> Chemosphere. 186, 43-50 (2017).</li></ol>

Эта работа обеспечивает подробный экспериментальный протокол для оценки нейротоксичности загрязняющих веществ окружающей среды с использованием личинок зебры. Зебрафиш проходит через этот процесс от эмбрионов до личинок в период экспозиции, что означает, что хороший уход за эмбрион...

В последние годы все больше и больше загрязнителей окружающей среды были доказаны нейротоксические1,2,3,4. Однако оценка нейротоксичности in vivo после воздействия загрязнителей окружающей среды не так проста, как оценка эндокринных нарушений или токсичности развития. Кроме того, раннее воздействие загрязняющих веществ, особенно в экологически значимых дозах, привлекает все большее внимание в исследованиях токсичности5,6,7,8.
Зебрафиш в настоящее время устанавливается в качестве модели животных, пригодных для нейротоксичности исследований во время раннего развития после воздействия экологических загрязнителей. Зебрафиши являются позвоночными, которые развиваются быстрее, чем другие виды после оплодотворения. Личинки не нужно кормить, потому что питательные вещества в хорионе достаточно для поддержания их в течение 7 дней послеоплодизации (dpf)9. Larvae выйти из хора на 2 dpf и развивать поведение, такие как плавание иповорот,который можно наблюдать, отслеживается, количественно, и анализируются автоматически с помощью инструментов поведения10,11,12,13, начиная с 3-4 dpf14,15,16,17,18. Кроме того, высокопроизводительные тесты также могут быть реализованы с помощью поведенческих инструментов. Таким образом, личинки зебры являются выдающейся моделью для нейроповеденческого исследования загрязнителей окружающей среды19. Здесь протокол предлагается с использованием высокой пропускной способностью мониторинга для изучения нейроповеденческой токсичности загрязнителей окружающей среды на личинках зебры под легкими стимулами.
Наша лаборатория изучила нейроповеденческую токсичность 2,2',4,4'-тетрабромодифенил эфир (BDE-47)20,21, 6'-Гидрокси / Метокси-2,2',4,4'-tetra Bromodiiphenyl ether (6-OH/MeO-BDE-47)22, дека-броминированный дифениловый эфир (БДЭ-209), свинец и коммерческие хлорированные парафины23 с использованием представленного протокола. Многие лаборатории также используют протокол для изучения нейроповеденческих эффектов других загрязнителей на личинок или взрослых рыб24,25,26,27. Этот нейроповеденческий протокол был использован, чтобы помочь обеспечить механистической поддержки, показывающие, что низкие дозы воздействия бисфенола А и замены бисфенола S индуцированных преждевременного гипоталамического нейрогенеза в эмбриональных зебрафиш27. Кроме того, некоторые исследователи оптимизировали протокол для проведения соответствующих исследований. Недавнее исследование исключило токсичность бета-амилоида (АЗ) в простой модели зебры с высокой пропускной способностью с использованием наночастиц золота с покрытием казеина (Cas AuNPs). Он показал, что «Cas AuNPs в системном циркуляции трансумтризировался через гематоэнцефалический барьер личинок зебры и поглощенных внутримозговых АЗ42, вызывая токсичность в неспецифической, сопровождающей, как образом, которая была поддержана поведенческой патологией28.
Локомотив, угол пути и социальная активность являются тремя нейроповеденческими индикаторами, используемыми для изучения нейротоксических эффектов личинок зебры после воздействия загрязняющих веществ в представленном протоколе. Локомотив измеряется расстоянием плавания личинок и может быть поврежден после воздействия загрязняющих веществ. Угол пути и социальная активность более тесно связаны с функцией мозга и центральной нервной системы29. Угол наклона относится к углу пути движения животных относительно направления плавания30. В системе установлены восемь угловых классов от 180 -180. Для упрощения сравнения, шесть классов в конечном исходе определяются как обычные повороты (-10 "0", 0 "10", средние повороты (-10 "-90", "10" (90) и отзывчивые повороты (-180 "-90", "90" (180) в соответствии с нашими предыдущими исследованиями21,22. Двухрыбная социальная активность является основополагающей для группового поведения; здесь расстояние злт; 0.5 cm между 2 личинками действительными определено как социальный контакт.
Представленный здесь протокол демонстрирует четкий процесс изучения нейроповеденческого воздействия на личинки зебры и дает возможность выявить нейротоксичность различных веществ или загрязняющих веществ. Протокол принесет пользу исследователям, заинтересованным в изучении нейротоксичности загрязнителей окружающей среды.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>48-well-microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td>Embyros housing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well-microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3471</td>
			<td>Embyros housing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BDE-47</td>
			<td>AccuStandard</td>
			<td>5436-43-1</td>
			<td>Pollutant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td>Cosolvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX 16</td>
			<td>Observation instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3120000267</td>
			<td>Transfer solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrabox</td>
			<td>Viewpoint</td>
			<td>ZebraBox</td>
			<td>Behavior instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrafish</td>
			<td>Shanghai FishBio Co., Ltd.</td>
			<td>Tubingen</td>
			<td>Zebrafish supplier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZebraLab</td>
			<td>Viewpoint</td>
			<td>ZebraLab</td>
			<td>Behavior software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

studying neurobehavioral effects of environmental pollutants on zebrafish larvae

В последние годы все больше и больше загрязнителей окружающей среды оказались нейротоксическими, особенно на ранних стадиях развития организмов. Личинки зебрафиш являются выдающейся моделью для нейроповеденческого исследования загрязнителей окружающей среды. Здесь предусмотрен подробный экспериментальный протокол для оценки нейротоксичности загрязняющих веществ окружающей среды с использованием личинок зебры, включая сбор эмбрионов, процесс воздействия, нейроповеденческие показатели, процесс испытаний и анализа данных. Кроме того, для обеспечения успеха ассссы обсуждаются культурная среда, процесс экспозиции и экспериментальные условия. Протокол был использован в разработке психопатических препаратов, исследования экологических нейротоксических загрязнителей, и может быть оптимизирован, чтобы сделать соответствующие исследования или быть полезным для механистических исследований. Протокол демонстрирует четкий процесс работы для изучения нейроповеденческого воздействия на личинки зебры и может выявить эффекты различных нейротоксических веществ или загрязняющих веществ.

Здесь мы описываем протокол для изучения нейроповеденческих эффектов загрязнителей окружающей среды с использованием личинок зебры под световыми стимулами. Во введении определяются тесты на передвижение, угол наклона и социальную активность. Приведение микроплит ?...

Watch this Scientific Journal Video about Studying Neurobehavioral Effects of Environmental Pollutants on Zebrafish Larvae at JoVE.com

Studying Neurobehavioral Effects of Environmental Pollutants on Zebrafish Larvae

Подробный экспериментальный протокол представлен в этой работе для оценки нейроповеденческой токсичности загрязнителей окружающей среды с использованием модели личинок зебры, включая процесс воздействия и тесты на нейроповеденческие показатели.

Изучение нейроповеденческих воздействий экологических загрязнителей на личинки зебрафиш

Recent years more and more environmental pollutants have been proved neurotoxic, especially at the early development stages of organisms. Zebrafish larvae ...

Наш протокол обеспечивает четкий процесс изучения нейробехавиоального воздействия веществ и загрязняющих веществ, представляющих интерес для личинок зебры, а также для выявления потенциальной нейротоксичности этих агентов. Техника может быть выполнена с использованием высокой пропускной способности тестирования нейробехавиоров в модели зебры. Этот метод может быть применен для оценки аллельно-нейробиоциального воздействия загрязняющих веществ, чтобы продемонстрировать потенциальную нейротоксичность на нас, людей, так как геном зебры имеет высокую гомологию с людьми, поэтому он может предоставить показания для химического управления и проблем общественного здравоохранения, вызванных загрязняющими веществами.Поскольку зебрафиш имеет преимущество высокой пропускной способности скрининга, этот метод дает представление как о развитии психотропных препаратов и экологических токсикологических исследований. Не пугайтесь изучения первого эксперимента. Если вы будете следовать протоколу, вы будете иметь успешный результат.По крайней мере за два часа до проведения эксперимента установите комнатную температуру до 28 градусов по Цельсию и добавьте 800 микролитров раствора экспозиции к каждой колодец микроплю на 48-колодец. Затем используйте одноми миллилитровую пипетку с измененным наконечником для переноса одной личинки в 200 микролитров раствора экспозиции на каждую колодец микроплюта в рамках подготовки к эксперименту с движением и углом пути. Чтобы подготовить микропластив из шести хорошо для экспериментов с социальным поведением, добавьте четыре миллилитров раствора воздействия к каждой колодец из шести микропластиров и перенесите две личинки в 200 микролитров раствора воздействия на каждую колодец.Перед началом теста откройте программу мониторинга высокой пропускной способности и выберите модуль углов пути отслеживания вращения. Перенесите микроплюжь 48-ну на записывающую платформу и стяните вниз крышку. Нажмите файл и создать протокол, чтобы начать генерацию нового протокола и ввести 48 в положение подсчета местоположения.Нажмите Параметры, Параметры протокола и Время, установите продолжительность эксперимента до одного часа и 10 минут, а период интеграции до 60 секунд. Используя инструмент эллиптической формы, нарисуйте круг вокруг верхней левой хорошо. Выберите круг и нажмите копировать, Top Right Mark, вставить и выбрать.Используйте мышь, чтобы перетащить скопированный круг в правом верхнем направлении хорошо и нажмите Копия, Top Right Mark, вставить, и выберите еще раз. Затем перетащите скопированный круг в правый нижний и нажмите Build и Clear Marks. Система автоматически нарисует круг над любой другой колодец пластины.Затем нажмите Draw Scale и нарисуйте линию калибровки на экране. Введите длину линии, установите устройство и нажмите Применить к группе. Установите цвет животного до черного и установите порог обнаружения до 16 до 18, чтобы позволить обнаружение животных, установить неактивные на небольшой скорости до 0,5 сантиметров в секунду и от мала до большой скорости до 2,5 сантиметров в секунду.Установите классы угла пути от минус 180 до плюс 180, как указано. Чтобы установить условия освещения, нажмите Параметры, Легкое вождение, использует один из 3 методов запуска ниже, и Расширенные стимулы, чтобы установить условия освещения. Нажмите Edge и установите темный период в 10 минут, а затем три цикла чередующихся 10-минутных световых и темных периодов.Затем сохраните протокол. Когда все параметры будут установлены, выключите освещение в испытательном зале и дайте личинкам акклиматизироваться в системе в течение 10 минут. В конце периода акклиматизации щелкните Experiment and Execute и создайте папку, в которой будут сохранены экспериментальные файлы.Затем введите имя результата и нажмите Фон и Начните. В конце эксперимента нажмите Experiment и Stop. Затем верните микроплюжь 48-колодец обратно в световой инкубатор для последующих экспериментов.Поскольку каждая группа может включать в себя 16 животных, система может быть использована для выполнения высоких пропускной способности испытаний передвижения и угла пути при различных условиях лечения в одной микроплюре 48-колодец. Социальную активность личинок можно проверить с помощью шести хорошо пластин. В этом репрезентативном эксперименте группа с самой высокой концентрацией БДЭ-47 продемонстрировала выраженную гипоактивность в темный период, в то время как никаких изменений в результате воздействия БДЭ-47 в периоды света не наблюдалось.Кроме того, группа высокой концентрации 6-гидрокси-БДЭ-47 выполняла меньше рутинных и средних поворотов в течение пяти дней после оплодотворения. Тем не менее, более отзывчивые повороты были вызваны в 6-methoxy-BDE47 групп воздействия. Социальная активность зебры стимулировалась хлорированным парафином-70 и короткой цепью хлорированного парафина-52б, в то время как длинноко цепной хлорированный парафин-52а сокращал продолжительность контакта личинок.Важно убедиться, что переданные личинки для теста должны иметь нормальную способность плавать и никаких пороков развития. Другие переменные, такие как цветовые предпочтения, светло-темные предпочтения, вся темнота, движения хвоста зебры, могут быть включены, чтобы ответить на дополнительные вопросы о нейровиоальной токсичности загрязнителей окружающей среды. Решения воздействия BDE-47 являются нейротоксическими и имеют потенциал эндокринных нарушений, поэтому не забудьте избежать прямого контакта с кожей.

Research

JoVE Journal

Environment

Exploring the Effects of Atmospheric Forcings on Evaporation: Experimental Integration of the Atmospheric Boundary Layer and Shallow Subsurface

Исследуя влияние атмосферных воздействий на испарение: Экспериментальная интеграция пограничного слоя атмосферы и приповерхностном слое грунта

Evaporation is directly influenced by the interactions between the atmosphere, land surface and soil subsurface. This work aims to experimentally study ...

A Flow-through Exposure System for Evaluating Suspended Sediments Effects on Aquatic Life

Проточного Система экспозиции для оценки взвешенных наносов Воздействие на водной флоры и фауны

This paper describes the Fish Larvae and Egg Exposure System (FLEES). The flow-through exposure system is used to investigate the effects of suspended ...

Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

Оценка Влияние окружающей среды химических веществ на Honey Bee развития от личности до уровня колонии

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be ...

Experimental Column Setup for Studying Anaerobic Biogeochemical Interactions Between Iron (Oxy)Hydroxides, Trace Elements, and Bacteria

Experimental Column Setup for Studying Anaerobic Biogeochemical Interactions Between Iron OxyHydroxides, Trace Elements, and Bacteria

Установка экспериментальной столбца для изучения анаэробных биогеохимических взаимодействий между гидроксидов железа (Окси), микроэлементов и бактерий

Fate and speciation of trace elements (TEs), such as arsenic (As) and mercury (Hg), in aquifers are closely related to physio-chemical conditions, such as ...

Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

Подготовка DMMTAV и DMDTAV с использованием DMAV для окружающей среды приложений: синтеза, очистки и подтверждение

Dimethylated thioarsenicals such as dimethylmonothioarsinic acid (DMMTAV) and dimethyldithioarsinic acid (DMDTAV), which are produced by the metabolic ...

Collection and Extraction of Occupational Air Samples for Analysis of Fungal DNA

Сбор и извлечения образцов профессиональных воздуха для анализа ДНК, грибковых

Traditional methods of identifying fungal exposures in occupational environments, such as culture and microscopy-based approaches, have several ...

Wastewater Irrigation Impacts on Soil Hydraulic Conductivity: Coupled Field Sampling and Laboratory Determination of Saturated Hydraulic Conductivity

Орошения воздействие сточных вод на гидравлической проводимости почвы: сочетании области выборки и лабораторного определения насыщенных гидравлической проводимости

Since the early 1960s, an alternative wastewater discharge practice at The Pennsylvania State University has been researched and its impacts monitored. ...

An Experimental Protocol for Studying Mineral Effects on Organic Hydrothermal Transformations

Экспериментальный протокол для изучения минеральных влияния на органических гидротермальных преобразования

Organic-mineral interactions are widely occurring in hydrothermal environments, such as hot springs, geysers on land, and the hydrothermal vents in the ...

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

В пробирке Поцарапать Assay для демонстрации воздействия мышьяка на миграции клеток кожи

Understanding the physiologic mechanisms of wound healing has been the focus of ongoing research for many years. This research directly translates into ...

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

Использование Elegans Caenorhabditis для изучения транс- и мульти-поколения эффекты токсичных веществ

Information about toxicities of chemicals are essential in their application and waste management. For chemicals at low concentrations, the long-term ...