Name: studying neurobehavioral effects of environmental pollutants on zebrafish larvae
Uploaded: 2020-02-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Studying Neurobehavioral Effects of Environmental Pollutants on Zebrafish Larvae at JoVE.com

Yazarlar Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (21876135 ve 21876136), Çin Ulusal Büyük Bilim ve Teknoloji Projesi (2017ZX07502003-03, 2018ZX07701001-22), MOE-Şangay Vakfı tarafından mali destek için müteşekkir Çocuk Çevre Sağlığı Temel Laboratuvarı (CEH201807-5) ve İsveç Araştırma Konseyi (No. 639-2013-6913).

Protokol, Tongji Üniversitesi Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanan yönergelere uygundur.
1. Zebra balığı embriyo toplama
<ol><li>Maruz kalmadan önceki gece yumurtlama kutusuna iki çift sağlıklı yetişkin Tubingen zebra balığı koyun, seks oranını 1:1'de tutarak.</li>
	<li>Ertesi sabah gün ışığından sonra yetişkin balığı sisteme 30-60 dk geri kaldırın.</li>
	<li>Embriyoları yumurtlama kutusundan çıkarın.</li>
	<li>Embriyoları sistem suyuyla durulayın.</li...

<ol>
	<li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+neurotoxicity+of+organophosphate+flame+retardants+in+early+life+stages+of+Japanese+medaka+(Oryzias+latipes).">Developmental neurotoxicity of organophosphate flame retardants in early life stages of Japanese medaka (Oryzias latipes).</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 35 (12), 2931-2940 (2016).</li><li>Tian, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurotoxicity+induced+by+zinc+oxide+nanoparticles:+age-related+differences+and+interaction.">Neurotoxicity induced by zinc oxide nanoparticles: age-related differences and interaction.</a> Scientific Reports. 5, 16117 (2015).</li><li>Rauh, V. A., Margolis, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+review:+environmental+exposures,+neurodevelopment,+and+child+mental+health-new+paradigms+for+the+study+of+brain+and+behavioral+effects.">Research review: environmental exposures, neurodevelopment, and child mental health-new paradigms for the study of brain and behavioral effects.</a> Journal of Child Psychology and Psychiatry. 57 (7), 775-793 (2016).</li><li>Ye, B. S., Leung, A. O. W., Wong, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+association+of+environmental+toxicants+and+autism+spectrum+disorders+in+children.">The association of environmental toxicants and autism spectrum disorders in children.</a> Environmental Pollution. 227, 234-242 (2017).</li><li>Schwarzenbach, R. P., Gschwend, P. M., Imboden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Environmental Organic Chemistry. , (2016).</li><li>Akortia, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+sources,+levels,+and+toxicity+of+polybrominated+diphenyl+ethers+(PBDEs)+and+their+transformation+and+transport+in+various+environmental+compartments.">A review of sources, levels, and toxicity of polybrominated diphenyl ethers (PBDEs) and their transformation and transport in various environmental compartments.</a> Environmental Reviews. 24 (3), 253-273 (2016).</li><li>Shaw, B. J., Liddle, C. C., Windeatt, K. M., Handy, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+evaluation+of+the+fish+early-life+stage+toxicity+test+for+engineered+nanomaterials:+experimental+modifications+and+recommendations.">A critical evaluation of the fish early-life stage toxicity test for engineered nanomaterials: experimental modifications and recommendations.</a> Archives of Toxicology. 90 (9), 2077-2107 (2016).</li><li>Landrigan, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+environmental+origins+of+neurodegenerative+disease+in+later+life.">Early environmental origins of neurodegenerative disease in later life.</a> Environmental Health Perspectives. 113 (9), 1230-1233 (2005).</li><li>Xu, T., Yin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unlocking+neurobehavioral+effects+of+environmental+endocrine+disrupting+chemicals.">The unlocking neurobehavioral effects of environmental endocrine disrupting chemicals.</a> Current Opinion in Endocrine and Metabolic Research. 7, 9-13 (2019).</li><li>Panula, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulatory+neurotransmitter+systems+and+behavior:+towards+zebrafish+models+of+neurodegenerative+diseases.">Modulatory neurotransmitter systems and behavior: towards zebrafish models of neurodegenerative diseases.</a> Zebrafish. 3 (2), 235-247 (2006).</li><li>F&#233;lix, L. M., Antunes, L. M., Coimbra, A. M., Valentim, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+alterations+of+zebrafish+larvae+after+early+embryonic+exposure+to+ketamine.">Behavioral alterations of zebrafish larvae after early embryonic exposure to ketamine.</a> Psychopharmacology. 234 (4), 549-558 (2017).</li><li>Bailey, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+behavioral+effects+following+early+life+exposure+to+retinoic+acid+or+valproic+acid+in+zebrafish.">Persistent behavioral effects following early life exposure to retinoic acid or valproic acid in zebrafish.</a> Neurotoxicology. 52, 23-33 (2016).</li><li>Richendrfer, H., Cr&#233;ton, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+High-throughput+Behavioral+Analyses+in+Zebrafish+Larvae.">Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae.</a> Journal of Visualized Experiments. (77), e50622 (2013).</li><li>Best, J. D., Alderton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+An+in+vivo+model+for+the+study+of+neurological+diseases.">Zebrafish: An in vivo model for the study of neurological diseases.</a> Neuropsychiatric Disease &amp; Treatment. 4 (3), 567-576 (2008).</li><li>Yuhei, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+systems+toxicology+model+for+developmental+neurotoxicity+testing.">Zebrafish as a systems toxicology model for developmental neurotoxicity testing.</a> Congenital Anomalies. 55 (1), 1-16 (2015).</li><li>Wu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TBBPA+induces+developmental+toxicity,+oxidative+stress,+and+apoptosis+in+embryos+and+zebrafish+larvae+(Danio+rerio).">TBBPA induces developmental toxicity, oxidative stress, and apoptosis in embryos and zebrafish larvae (Danio rerio).</a> Environmental Toxicology. 31 (10), 1241-1249 (2016).</li><li>Chakraborty, C., Sharma, A. R., Sharma, G., Lee, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+A+complete+animal+model+to+enumerate+the+nanoparticle+toxicity.">Zebrafish: A complete animal model to enumerate the nanoparticle toxicity.</a> Journal of Nanobiotechnology. 14 (1), 65 (2016).</li><li>Wehmas, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+metal+oxide+nanoparticle+toxicity+using+embryonic+zebrafish.">Comparative metal oxide nanoparticle toxicity using embryonic zebrafish.</a> Toxicology Reports. 2, 702-715 (2015).</li><li>Cavalieri, V., Spinelli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+epigenetics+in+zebrafish.">Environmental epigenetics in zebrafish.</a> Epigenetics &amp; Chromatin. 10 (1), 46 (2017).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+three+different+embryonic+exposure+modes+of+2,+2?,+4,+4?-tetrabromodiphenyl+ether+on+the+path+angle+and+social+activity+of+zebrafish+larvae.">Effects of three different embryonic exposure modes of 2, 2?, 4, 4?-tetrabromodiphenyl ether on the path angle and social activity of zebrafish larvae.</a> Chemosphere. 169, 542-549 (2017).</li><li>Zhao, J., Xu, T., Yin, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotor+activity+changes+on+zebrafish+larvae+with+different+2,+2?,+4,+4?-tetrabromodiphenyl+ether+(PBDE-47)+embryonic+exposure+modes.">Locomotor activity changes on zebrafish larvae with different 2, 2?, 4, 4?-tetrabromodiphenyl ether (PBDE-47) embryonic exposure modes.</a> Chemosphere. 94, 53-61 (2014).</li><li>Zhang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobehavioral+effects+of+two+metabolites+of+BDE-47+(6-OH-BDE-47+and+6-MeO-BDE-47)+on+zebrafish+larvae.">Neurobehavioral effects of two metabolites of BDE-47 (6-OH-BDE-47 and 6-MeO-BDE-47) on zebrafish larvae.</a> Chemosphere. 200, 30-35 (2018).</li><li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chlorine+contents+and+chain+lengths+influence+the+neurobehavioral+effects+of+commercial+chlorinated+paraffins+on+zebrafish+larvae.">The chlorine contents and chain lengths influence the neurobehavioral effects of commercial chlorinated paraffins on zebrafish larvae.</a> Journal of Hazardous Materials. 377, 172-178 (2019).</li><li>Schmitt, C., McManus, M., Kumar, N., Awoyemi, O., Crago, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analyses+of+the+neurobehavioral,+molecular,+and+enzymatic+effects+of+organophosphates+on+embryo-larval+zebrafish+(Danio+rerio).">Comparative analyses of the neurobehavioral, molecular, and enzymatic effects of organophosphates on embryo-larval zebrafish (Danio rerio).</a> Neurotoxicology and Teratology. 73, 67-75 (2019).</li><li>Li, X., Kong, H., Ji, X., Gao, Y., Jin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+behavioral+phenomics+applied+for+phenotyping+aquatic+neurotoxicity+induced+by+lead+contaminants+of+environmentally+relevant+level.">Zebrafish behavioral phenomics applied for phenotyping aquatic neurotoxicity induced by lead contaminants of environmentally relevant level.</a> Chemosphere. 224, 445-454 (2019).</li><li>Leuthold, D., Klu&#776;ver, N., Altenburger, R., Busch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+environmentally+relevant+neuroactive+chemicals+specifically+be+detected+with+the+locomotor+response+test+in+zebrafish+embryos?.">Can environmentally relevant neuroactive chemicals specifically be detected with the locomotor response test in zebrafish embryos?.</a> Environmental Science &amp; Technology. 53 (1), 482-493 (2018).</li><li>Kinch, C. D., Ibhazehiebo, K., Jeong, J. H., Habibi, H. R., Kurrasch, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+exposure+to+bisphenol+A+and+replacement+bisphenol+S+induces+precocious+hypothalamic+neurogenesis+in+embryonic+zebrafish.">Low-dose exposure to bisphenol A and replacement bisphenol S induces precocious hypothalamic neurogenesis in embryonic zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (5), 1475-1480 (2015).</li><li>Javed, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+amyloid+beta+toxicity+in+zebrafish+with+a+chaperone-gold+nanoparticle+dual+strategy.">Inhibition of amyloid beta toxicity in zebrafish with a chaperone-gold nanoparticle dual strategy.</a> Nature Communications. 10 (1), 1-14 (2019).</li><li>Green, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+high-throughput+neurophenotyping+of+zebrafish+social+behavior.">Automated high-throughput neurophenotyping of zebrafish social behavior.</a> Journal of Neuroscience Methods. 210 (2), 266-271 (2012).</li><li>Tytell, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hydrodynamics+of+eel+swimming+II.+Effect+of+swimming+speed.">The hydrodynamics of eel swimming II. Effect of swimming speed.</a> Journal of Experimental Biology. 207 (19), 3265-3279 (2004).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+for+the+laboratory+use+of+zebrafish+(Danio+rerio).">A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio).</a> The Zebrafish Book. 4, (2000).</li><li>Ying, L., Jiang, L., Bo, P., Yong, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Teratogenic+effects+of+embryonic+exposure+to+pretilachlor+on+the+larvae+of+zebrafish.">Teratogenic effects of embryonic exposure to pretilachlor on the larvae of zebrafish.</a> Journal of Agro-Environment Science. 36 (3), 481-486 (2017).</li><li>Macphail, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locomotion+in+larval+zebrafish:+Influence+of+time+of+day,+lighting+and+ethanol.">Locomotion in larval zebrafish: Influence of time of day, lighting and ethanol.</a> Neurotoxicology. 30 (1), 52-58 (2009).</li><li>Kais, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DMSO+modifies+the+permeability+of+the+zebrafish+(Danio+rerio)+chorion-implications+for+the+fish+embryo+test+(FET).">DMSO modifies the permeability of the zebrafish (Danio rerio) chorion-implications for the fish embryo test (FET).</a> Aquatic Toxicology. 140, 229-238 (2013).</li><li>Truong, L., Harper, S. L., Tanguay, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drug Safety Evaluation. , 271-279 (2011).</li><li>Peeters, B. W., Moeskops, M., Veenvliet, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Color+preference+in+Danio+rerio:+effects+of+age+and+anxiolytic+treatments.">Color preference in Danio rerio: effects of age and anxiolytic treatments.</a> Zebrafish. 13 (4), 330-334 (2016).</li><li>Barba-Escobedo, P. A., Gould, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visual+social+preferences+of+lone+zebrafish+in+a+novel+environment:+strain+and+anxiolytic+effects.">Visual social preferences of lone zebrafish in a novel environment: strain and anxiolytic effects.</a> Genes, Brain and Behavior. 11 (3), 366-373 (2012).</li><li>Blaser, R., Penalosa, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimuli+affecting+zebrafish+(Danio+rerio)+behavior+in+the+light/dark+preference+test.">Stimuli affecting zebrafish (Danio rerio) behavior in the light/dark preference test.</a> Physiology &amp; Behavior. 104 (5), 831-837 (2011).</li><li>Blaser, R. E., Rosemberg, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measures+of+anxiety+in+zebrafish+(Danio+rerio):+dissociation+of+black/white+preference+and+novel+tank+test.">Measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio): dissociation of black/white preference and novel tank test.</a> PloS One. 7 (5), e36931 (2012).</li><li>Weichert, F. G., Floeter, C., Artmann, A. S. M., Kammann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+ecotoxicity+of+potentially+neurotoxic+substances-Evaluation+of+a+behavioural+parameter+in+the+embryogenesis+of+Danio+rerio.">Assessing the ecotoxicity of potentially neurotoxic substances-Evaluation of a behavioural parameter in the embryogenesis of Danio rerio.</a> Chemosphere. 186, 43-50 (2017).</li></ol>

Bu çalışma, zebra balığı larvaları kullanarak çevresel kirleticilerin nörotoksisitesini değerlendirmek için ayrıntılı bir deneysel protokol sağlar. Zebra balığı maruz kalma döneminde embriyolardan larvalara kadar olan süreçten geçer, bu da embriyo ve larvaların iyi bakımının şart olduğu anlamına gelir. Embriyo ve larvagelişimini etkileyen her şey nihai sonucu etkileyebilir. Burada kültür ortamı, pozlama süreci ve deneysel koşullar tüm tsay başarısını sağlamak için tartışılmı...

Son yıllarda daha fazla çevresel kirleticiler nörotoksik kanıtlanmıştır1,2,3,4. Ancak, çevresel kirleticilere maruz kaldıktan sonra vivo nörotoksisite nin değerlendirilmesi endokrin bozulma veya gelişimsel toksisite kadar kolay değildir. Buna ek olarak, kirleticilere erken maruz kalma, özellikle çevre ile ilgili dozlarda, toksisite çalışmalarında artan dikkat çekti5,6,7,8.
Zebrabalığı çevresel kirleticilere maruz kaldıktan sonra erken gelişim sırasında nörotoksisite çalışmaları için uygun bir hayvan modeli olarak kurulmuştur. Zebra balıkları döllenme sonrası diğer türlere göre daha hızlı gelişen omurgalılardır. Korriondaki besinler 7 gün postfertilizasyon (dpf)9için onları sürdürmek için yeterli olduğu için larvaların beslenmesine gerek yoktur. Larvalar chorion dan ~ 2 dpf çıkmak ve gözlemlenebilir, izlenen, niceleme ve otomatik olarak davranış aletleri10,11,12,13 3-4 dpf14,15,16,17,18kullanarak analiz olabilir yüzme ve tornalama gibi davranışlar geliştirmek . Buna ek olarak, yüksek iş letimat testleri davranış araçları ile de gerçekleştirilebilir. Böylece, zebra balığı larvaları çevresel kirleticilerin nörodavranışsal çalışma için olağanüstü bir model19. Burada, zebra balığı larvaları üzerindeki çevresel kirleticilerin nörodavranışsal toksisitesini ışık uyaranları altında incelemek için yüksek iş lenme li izleme kullanılarak bir protokol sunulmaktadır.
Laboratuvarımız 2,2',4,4'-tetrabromodiphenyl eter (BDE-47)20,21,6'-Hidroksi/Methoxy-2,2', 4,4'-tetrabromodiphenyl eter (6-OH/MeO-BDE-47)22, deca-bromlu difen eter (BDE-29), nörodavranışsal toksisitesi inceledi ve ticari klorlu parafinler23 sunulan protokol kullanılarak. Birçok laboratuvarda da larva veya yetişkin balık24,25,26,27diğer kirleticilerin nörodavranışsal etkilerini incelemek için protokolü kullanın. Bu nörodavranışsal protokol, embriyonik zebra balığında bisfenol A ve replasman bisfenol S indüklenen erken hipotalamik nörogenezi gösteren mekanistik destek sağlamak için kullanılmıştır27. Buna ek olarak, bazı araştırmacılar ilgili çalışmaları gerçekleştirmek için protokolü optimize etti. Yakın zamanda yapılan bir çalışmada kazein kaplı altın nano tanecikleri (βCas AuNPs) kullanılarak kolay, yüksek iş sahibi zebra balığı modelinde amiloid beta (Aβ) toksisitesi ortadan kaldırılmıştır. Bu βCas AuNPs sistemik dolaşımda zebrafish larvaları kan-beyin bariyeri boyunca translocated ve ayrılmış intraserebral Aβ42, nonspesifik toksisite ortaya, davranışsal patoloji tarafından desteklenen şaperon benzeri bir şekilde,28.
Lokomotion, yol açısı, ve sosyal aktivite sunulan protokolde kirleticilere maruz kaldıktan sonra zebra balığı larvalarının nörotoksisite etkilerini incelemek için kullanılan üç nörodavranışsal göstergedir. Hareket, larvaların yüzme mesafesi ile ölçülür ve kirleticilere maruz kaldıktan sonra zarar görebilir. Yol açısı ve sosyal aktivite daha yakından beyin fonksiyonu ve merkezi sinir sistemi29ile ilişkilidir. Yol açısı yüzme yönü30göre hayvan hareket yolu açısı anlamına gelir. ~-180°-~+180° arasında sekiz açı sınıfı sistemde ayarlanır. Karşılaştırmayı basitleştirmek için, nihai sonuçtaki altı sınıf rutin dönüşler (-10° ~0°, 0°~+10°), ortalama dönüşler (-10° ~-90°, +10° ~+90°) ve duyarlı dönüşler (-180° ~-90°, +90°) olaraktanımlanır. İki balıklı sosyal aktivite, grup şolama davranışının temelini oluşturmaktadır; burada < 0.5 cm'lik bir mesafe iki larva arasında geçerli sosyal temas olarak tanımlanır.
Burada sunulan protokol zebra balığı larvaları üzerinde nörodavranışsal etkileri incelemek için net bir süreç göstermektedir ve çeşitli maddeler veya kirleticilerin nörotoksisite etkilerini ortaya çıkarmak için bir yol sağlar. Protokol, çevresel kirleticilerin nörotoksisitesini incelemek isteyen araştırmacılara fayda sağlayacak.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>48-well-microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td>Embyros housing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well-microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3471</td>
			<td>Embyros housing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BDE-47</td>
			<td>AccuStandard</td>
			<td>5436-43-1</td>
			<td>Pollutant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>67-68-5</td>
			<td>Cosolvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>SZX 16</td>
			<td>Observation instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3120000267</td>
			<td>Transfer solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrabox</td>
			<td>Viewpoint</td>
			<td>ZebraBox</td>
			<td>Behavior instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zebrafish</td>
			<td>Shanghai FishBio Co., Ltd.</td>
			<td>Tubingen</td>
			<td>Zebrafish supplier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZebraLab</td>
			<td>Viewpoint</td>
			<td>ZebraLab</td>
			<td>Behavior software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

studying neurobehavioral effects of environmental pollutants on zebrafish larvae

Son yıllarda daha fazla çevresel kirleticiler nörotoksik kanıtlanmıştır, organizmaların erken gelişim aşamalarında özellikle. Zebra balığı larvaları çevresel kirleticilerin nörodavranışsal çalışması için önde gelen bir modeldir. Burada, zebra balığı larvaları kullanılarak çevre kirleticilerin nörotoksisitesinin değerlendirilmesi için ayrıntılı bir deneysel protokol sağlanmaktadır, embriyoların toplanması, maruz kalma süreci, nörodavranışsal göstergeler, test süreci ve veri analizi. Ayrıca, kültür ortamı, pozlama süreci ve deneysel koşullar, tsanın başarısını sağlamak için tartışılmıştır. Protokol psikopatik ilaçların geliştirilmesinde, çevresel nörotoksik kirleticiler üzerinde araştırma da kullanılmıştır ve ilgili çalışmalar yapmak veya mekanistik çalışmalar için yararlı olmak için optimize edilebilir. Protokol zebra balığı larvaları üzerinde nörodavranışsal etkileri incelemek için net bir çalışma süreci göstermektedir ve çeşitli nörotoksik maddeler veya kirleticilerin etkilerini ortaya çıkarabilir.

Burada, insan balıkları kullanarak çevresel kirleticilerin nörodavranışsal etkilerini araştırmak için bir protokol uyguluyoruz. Girişte hareket, yol açısı ve sosyal aktivite testleri tanımlanır. Mikroplakaların hareket ve yol açısı testlerinde kurulumu ve yazılımın görüntüleri aşağıda gösterilmiştir. Ayrıca, kendi araştırma sonuçlarımız örnek olarak sunulmuştur. İki çalışma, BDE-47 ve 6-OH/MeO-BDE-47'ye maruz kaldıktan sonra hareket ve yol açıs...

Watch this Scientific Journal Video about Studying Neurobehavioral Effects of Environmental Pollutants on Zebrafish Larvae at JoVE.com

Studying Neurobehavioral Effects of Environmental Pollutants on Zebrafish Larvae

Bu makalede zebrabalığı larvaları modeli kullanılarak çevresel kirleticilerin nörodavranışsal toksisitesinin değerlendirilmesi için ayrıntılı bir deneysel protokol sunulmuştur, buna maruz kalma süreci ve nörodavranışsal göstergeler için testler de dahildir.

Çevresel Kirleticilerin Zebrabalığı Larvaları Üzerindeki Nörodavranışsal Etkilerinin İncelenmi

Recent years more and more environmental pollutants have been proved neurotoxic, especially at the early development stages of organisms. Zebrafish larvae ...

Protokolümüz, maddelerin nörodavranışsal etkilerini ve zebra balığı larvaları üzerindeki ilgi kirleticilerinin incelenmesi ve bu ajanların potansiyel nörotoksisitesinin ortaya çıkması için açık bir süreç sağlamaktadır. Bu teknik, zebra balığı modelindeki nörodavranışların yüksek iş yapma testi kullanılarak gerçekleştirilebilir. Bu yöntem, biz insanlar üzerinde potansiyel nörotoksisite göstermek için kirleticilerin alel-nörodavranışsal etkilerini değerlendirmek için uygulanabilir, zebra balığı genomu insanlar ile yüksek homolojiye sahip olduğu gibi, bu nedenle kimyasal yönetim ve kirleticilerin neden olduğu halk sağlığı sorunları için endikasyonlar sağlayabilir.Zebra balığı yüksek iş elde tarama avantajına sahip olduğu için, bu yöntem hem psikotrop ilaçların gelişimi hem de çevresel toksikoloji araştırmaları hakkında bilgi sağlar. İlk deneyi incelemekten korkmayın. Protokolü izlerseniz, başarılı bir sonuç alabilirsiniz.Bir denemegerçekleştirmeden en az iki saat önce, oda sıcaklığını 28 dereceye ayarlayın ve 48 kuyulu bir mikroplakanın her kuyuya 800 mikrolitre pozlama çözeltisi ekleyin. Daha sonra, bir hareket ve yol açısı deneyi için hazırlık olarak mikroplaka her kuyuya pozlama çözeltisi 200 mikrolitre bir larva aktarmak için değiştirilmiş ucu ile bir mililitrelik pipet kullanın. Sosyal davranış deneyleri için altı kuyulu bir mikroplaka hazırlamak için, altı kuyunun her kuyusu için dört mililitre pozlama çözeltisi ekleyin ve her kuyuya 200 mikrolitre pozlama çözeltisi halinde iki larva aktarın.Teste başlamadan önce, yüksek iş iş başı izleme yazılımı programını açın ve izleme dönüşleri yol açıları modülünü seçin. 48 kuyulu mikro plakayı kayıt platformuna aktarın ve kapağı aşağı çekin. Yeni bir protokol oluşturmaya başlamak için Dosya ve Protokol Oluştur'u tıklatın ve Konum sayımı konumuna 48 girin.Parametreler, Protokol Parametreleri ve Zaman'ı tıklatın, Deneme süresini bir saat 10 dakikaya, Tümleştirme süresini ise 60 saniyeye ayarlayın. Eliptik şekil aracını kullanarak, sol üst te bir daire çizin. Daireyi seçin ve Kopyala, Sağ Üstle, Yapıştır ve Seç'i tıklatın.Kopyalanan daireyi sağ üste doğru sürüklemek için fareyi kullanın ve Kopyala, Sağ ÜstLe İşaretle, Yapıştır ve Yeniden Seç'i tıklatın. Ardından, kopyalanan daireyi sağ alta doğru sürükleyin ve Yapı ve İşaretleri Temizle'yi tıklatın. Sistem otomatik olarak plaka nın her kuyuüzerinde bir daire çizecektir.Ardından, Ölçek Çiz'i tıklatın ve ekranda bir kalibrasyon çizgisi çizin. Satırın uzunluğunu girin, birimi ayarlayın ve Gruba Uygula'yı tıklatın. Hayvan rengini siyaha ayarlayın ve hayvanların algılanmasına izin vermek için algılama eşiğini 16-18'e ayarlayın, etkin olmayanı saniyede 0,5 santimetreye, küçükten büyüğe saniyede 2,5 santimetreye ayarlayın.Yol açısı sınıflarını eksi 180'den artı 180'e ayarlayın. Işık koşullarını ayarlamak için Parametreler, Hafif Sürüş, Aşağıdaki 3 tetikleme yönteminden birini ve ışık koşullarını ayarlamak için geliştirilmiş uyaranları tıklatın. Kenar'ı tıklatın ve 10 dakikalık karanlık bir süre ayarlayın ve ardından 10 dakikalık açık ve karanlık periyotlar üç döngü alternatif.O zaman protokolü kaydet. Tüm parametreler ayarlandığında, test odasındaki Aydınlatmayı kapatın ve larvaların 10 dakika boyunca sistemde alışmasını bekleyin. Alışma döneminin sonunda, Deney ve Yürüt'ü tıklatın ve deney dosyalarının kaydedilen klasörü oluşturun.Ardından, sonuç adını girin ve Arka Plan ve Başlat'ı tıklatın. Denemenin sonunda, Deney ve Durdur'u tıklatın. Daha sonra sonraki deneyler için 48 kuyulu mikroplakayı ışık kuvöze geri döndürün.Her grup 16 hayvan içerebildiği için, sistem tek bir 48 kuyulu mikroplakada farklı tedavi koşulları altında hareket ve yol açısının yüksek iş yapma testlerini yapmak için kullanılabilir. Larvaların sosyal aktivitesi altı kuyulu plakalar kullanılarak test edilebilir. Bu temsili deneyde, BDE-47'nin en yüksek konsantrasyon grubu karanlık dönemde belirgin bir hipoaktivite gösterirken, ışık dönemlerinde BDE-47 maruziyetine bağlı herhangi bir değişiklik gözlenmedi.Ayrıca, 6-hidroksi-BDE-47 yüksek konsantrasyon grubu beş gün sonra döllenme daha az rutin ve ortalama döner yapıldı. Ancak 6-methoxy-BDE47 maruziyet gruplarında daha duyarlı dönüşler yapıldı. Zebra balığının sosyal aktivitesi klorlu parafin-70 ve kısa zincirli klorlu parafin-52b ile uyarılırken, uzun zincirli klorlu parafin-52a larvaların temas süresini kısalttı.Test için transfer edilen larvaların normal bir yüzme yeteneğine sahip olması ve malformasyon olmaması önemlidir. Diğer değişkenler, renk tercihi gibi, açık-koyu tercih, tüm karanlık, zebra balığı kuyruk hareketleri, çevresel kirleticilerin nörodavranışsal toksisitesi hakkında ek sorulara cevap dahil edilebilir. BDE-47 maruz kalma çözümleri nörotoksik ve endokrin bozulma potansiyeline sahip, bu yüzden cilt ile doğrudan temas önlemek için emin olun.

Research

JoVE Journal

Environment

Exploring the Effects of Atmospheric Forcings on Evaporation: Experimental Integration of the Atmospheric Boundary Layer and Shallow Subsurface

Buharlaşma Atmosferik zorlamalara Etkilerinin keşfetmek: Atmosferik Sınır Tabakası ve Sığ Yer altı Deneysel Entegrasyon

Evaporation is directly influenced by the interactions between the atmosphere, land surface and soil subsurface. This work aims to experimentally study ...

A Flow-through Exposure System for Evaluating Suspended Sediments Effects on Aquatic Life

Sucul Life Asma değerlendirmek Sedimanlar Etkileri için Flow-through Pozlama Sistemi

This paper describes the Fish Larvae and Egg Exposure System (FLEES). The flow-through exposure system is used to investigate the effects of suspended ...

Evaluating the Effect of Environmental Chemicals on Honey Bee Development from the Individual to Colony Level

Koloni Düzeyde Bireysel olan Bal Arısı Kalkınma Çevre Kimyasalların Etkisinin Değerlendirilmesi

The presence of pesticides in the beekeeping environment is one of the most serious problems that impacts the life of a honey bee. Pesticides can be ...

Experimental Column Setup for Studying Anaerobic Biogeochemical Interactions Between Iron (Oxy)Hydroxides, Trace Elements, and Bacteria

Experimental Column Setup for Studying Anaerobic Biogeochemical Interactions Between Iron OxyHydroxides, Trace Elements, and Bacteria

Demir (oksi) hidroksit, eser elementler ve bakteri anaerobik biyojeokimyasal Hofstede çalışmak için deneysel sütun Kur

Fate and speciation of trace elements (TEs), such as arsenic (As) and mercury (Hg), in aquifers are closely related to physio-chemical conditions, such as ...

Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

Preparation of DMMTAV and DMDTAV Using DMAV for Environmental Applications: Synthesis, Purification, and Confirmation

DMMTAV ve çevresel uygulamaları için DMAV kullanarak DMDTAV hazırlanması: sentez, arıtma ve onay

Dimethylated thioarsenicals such as dimethylmonothioarsinic acid (DMMTAV) and dimethyldithioarsinic acid (DMDTAV), which are produced by the metabolic ...

Collection and Extraction of Occupational Air Samples for Analysis of Fungal DNA

Toplama ve mesleki hava örnekleri çıkarma mantar DNA analizi için

Traditional methods of identifying fungal exposures in occupational environments, such as culture and microscopy-based approaches, have several ...

Wastewater Irrigation Impacts on Soil Hydraulic Conductivity: Coupled Field Sampling and Laboratory Determination of Saturated Hydraulic Conductivity

Atıksu Sulaması toprak Hidrolik iletkenlik üzerindeki etkileri: alan örnekleme ve laboratuvar doymuş Hidrolik İletkenlik Tayini

Since the early 1960s, an alternative wastewater discharge practice at The Pennsylvania State University has been researched and its impacts monitored. ...

An Experimental Protocol for Studying Mineral Effects on Organic Hydrothermal Transformations

Organik hidrotermal dönüşümler üzerinde Mineral etkileri eğitimi için deneysel bir protokol

Organic-mineral interactions are widely occurring in hydrothermal environments, such as hot springs, geysers on land, and the hydrothermal vents in the ...

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

In Vitro Scratch Assay to Demonstrate Effects of Arsenic on Skin Cell Migration

Vitro Cilt hücre göç arsenik etkilerini göstermek için tahlil kaşı

Understanding the physiologic mechanisms of wound healing has been the focus of ongoing research for many years. This research directly translates into ...

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

Using Caenorhabditis elegans for Studying Trans- and Multi-Generational Effects of Toxicants

Toxicants Trans ve çok jenerasyonel etkileri okumak için Caenorhabditis elegans kullanma

Information about toxicities of chemicals are essential in their application and waste management. For chemicals at low concentrations, the long-term ...