Name: parallel interrogation of &#946;-arrestin2 recruitment for ligand screening on a gpcr-wide scale using presto-tango assay
Uploaded: 2020-03-10T14:30:00
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この研究は、カナダ保健研究所(CIHR助成金#MOP142219)によって支援されました。

1. 一次スクリーニング:細胞培養およびプレートシード
<ol><li>ポリL-リジン(PLL)コーティングされたプレートを調製するために、電子マルチチャネルピペットまたは試薬ディスペンサーを使用して白または黒の384ウェル光学底板のPLLの20 μg/mLストック溶液の20 μL/ウェルを分配する。プレートを室温で0.5~2時間インキュベートします。 注: 黒い 384 ウェル プレートを使用する場合は、白いプレ...

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	<li>Liapakis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+G-protein+coupled+receptor+family:+actors+with+many+faces.">The G-protein coupled receptor family: actors with many faces.</a> Current pharmaceutical design. 18 (2), 175-185 (2012).</li><li>Pierce, K. L., Premont, R. T., Lefkowitz, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seven-transmembrane+receptors.">Seven-transmembrane receptors.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 3 (9), 639-650 (2002).</li><li>Kroeze, W. K., Sheffler, D. J., Roth, B. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tet+B+or+not+tet+B:+advances+in+tetracycline-inducible+gene+expression.">Tet B or not tet B: advances in tetracycline-inducible gene expression.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (3), 797-799 (1999).</li><li>Roche, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+Virtual+Screening+Method+for+Identification+of+"Frequent+Hitters"+in+Compound+Libraries.">Development of a Virtual Screening Method for Identification of "Frequent Hitters" in Compound Libraries.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 45 (1), 137-142 (2002).</li></ol>

立体構造の動的GPCRsは、信号伝達の大国です。これらのヘプタケリカル受容体の結合ポケットの物理化学的性質と、それらの生理学的関連性は、GPCRリガンドスクリーニングツールの必要性を強調している。上記のように、PRESTOタンゴアッセイは迅速で敏感でユーザーフレンドリーであり、医薬品開発に適しています。このアッセイはアゴニスト誘導活性化を測定するだけでなく、アンタゴニ?...

Gタンパク質共役受容体(GPCRs)は、膜貫通タンパク質の最大かつ最も多様なファミリーを構成し、細胞とその環境間の通信インターフェースとして動作する1。GPCRsの多様性は、神経伝達物質からヌクレオチド、ペプチドから光子、および多くのリガンドの多様な配列を検出する能力と、細胞増殖、移動、分化、アポトーシス、細胞焼成などに関与する多数の下流シグナル伝達カスケードを調節する能力によって強調される。彼らの普遍性と多くの生理学的プロセスへの関与を考慮すると、この受容体ファミリーは、現在入手可能な処方薬の3分の1以上がGPCRs4を標的としているという事実によって示される、最も治療上の重要さである。しかし、これらの既存の治療法は、スーパーファミリーの小さなサブセット(推定10%)のみを標的とし、多くのGPCRsの薬理学は未解明のままである。さらに、100以上のGPCRsが、内因性リガンド5と一致していないとして、孤児受容体として存在する。したがって、GPCRリガンドスクリーニングは、リード発見と最適化への道を開き、おそらく臨床試験段階に道を開くため、脱ファン化と医薬品開発において重要です。
GPCRリガンドスクリーニング法は、従来、Gタンパク質依存性またはGタンパク質独立性機能アッセイ6の2つのカテゴリーのうちの1つに分類されている。GPCRシグナル伝達は、Gαサブユニット7に結合したGDPに対するGTPの交換によって活性化されるヘテロトリメリックGタンパク質(Gαβγ)によって調節される。活性化された受容体からのシグナルは、cAMP、カルシウム、DAG、およびIP3などの二次メッセンジャーを介してGタンパク質によって伝達され、下流エフェクター8で下流シグナル伝達を媒介する。Gタンパク質シグナル伝達の機能的な結果の性質は、受容体活性化を反映する細胞ベースのアッセイを作成するために利用されてきました。Gタンパク質シグナル伝達における近位(直接)または遠位(間接)事象を測定するこれらの方法は、GPCRリガンドスクリーニングに最も頻繁に使用され、主に脱孤児化研究6で採用されている。GPCR媒介Gタンパク質活性化を直接測定するアッセイの例としては、[35S]GTPγS結合アッセイが挙げられる。 Gαサブユニットに対する放射標識および非加水分解性GTPアナログと、Förster/生物発光共鳴エネルギー伝達(FRET/BRET、それぞれ)プローブとGPCR-GαおよびGα/Gγ相互作用を測定し、9年、10年にわたってより多くの牽引力を得ている。遠位イベントを監視するアッセイは、GPCRプロファイリングに最も一般的に使用されるツールです。例えば、cAMPおよびIP1/3アッセイは、Gタンパク質依存性二次メッセンジャーの細胞内蓄積を測定する一方で、[Ca2+]Gタンパク質活性化に関与する特異的応答要素を含むフラックスおよびレポーターアッセイ(CRE、NFAT-RE、SRE、SRF-RE)シグナルカスケード11をさらに下流の事象を調べる。前述のアッセイのほとんどはハイスループットレベルで実行できますが、 かなり敏感であり、特定のアッセイ固有の利点を誇る(例えば、GTPγS結合の場合の完全/部分的なアゴニスト、中立的アンタゴニストおよび逆アゴニスト間の差別、または[Ca2+]およびIP1/3)6などの生細胞上のアッセイ機能性6は、残念ながら既存のG依存性タンパク質方法は存在しない。これは主に、複数のGタンパク質サブファミリーがGPCBにネイティブに結合し、いくつかのカスケードでシグナル伝達を行い、オーファンGPDRで未知のGタンパク質結合を生じるためです。この問題を軽減するために、アッセイは、cAMPのような単一の共通シグナル伝達リードアウトを介して無差別Gタンパク質結合を強制するために開発された、およびCa2+、それらのほとんどは低スループット12であるが。
GPCRのライフサイクルの重要な側面は、Gタンパク質依存性シグナル伝達の終結であり、Gタンパク質の解離を誘導するβ-アスタミンの募集を通じて大部分が起こり、最終的にはクラトリンコーティングされた内在化を標的とする受容体を脱感作する。β-アレスティンの最もユビキタスに発現されるアイソフォームは、非視覚的β-アレスティン1およびβ-アレスティン2であり、また、それぞれ14のアレスティン-2及びアレスティン-3と示される。GPCRリガンドスクリーニングに新たな次元を追加するGタンパク質独立細胞ベースアッセイを入力してください。受容体の密売、標識のない全細胞、およびβ-アレプチンの募集アッセイは、すべて注目すべき例である。GPCR人身売買アッセイは、フルオロフォア標識リガンドまたは受容体15を標的とする共内在化抗体を採用する一方、ラベルフリーの全細胞アッセイは、リガンド結合によって誘導される細胞変化を電気信号または光学信号16などの定量可能な出力に変換するバイオセンサーを使用する。特に、典型的なGPCR-β-アレッシン相互作用は、機能アッセイ17のレパートリーにおける魅力的なツールとしてβ-アレッシン募集アッセイをファッションする。タンゴシステムは、わずか10年前にバルネアらによって最初に開発され、 3つの外因性遺伝要素の導入を伴う:β-arrestin2とタバコエッチウイルスプロテアーゼ(TEVp)からなるタンパク質融合、タバコエッチングを介してGPCRにつながれるテトラサイクリントランス活性化因子(tTA) ウイルスプロテアーゼ切断部位(TEVcs)と、逮捕を促進するためにV2バソプレシン受容体(V2尾)のC末語からの配列が先行し、その転写が誘発されるレポータールシメラーゼ遺伝子tTA転写因子は核への転座、β-アレプチン2募集後の膜アンカーから解放される(図1)18。GPCR活性化およびβ-arrestin2募集の定量的測定値は、その後、発光のための読み取りによって決定することができる。顕著な違いは、受容体の密売およびラベルフリーの全細胞法は比較的低いスループットであるが、タンゴは、標的受容体に特異的な選択的読み出しおよびシグナル統合による感受性を含むいくつかの利点を有し、これはより大きなスケール18でのリガンドスクリーニングに適した候補となる。
これらの戦略的特徴を考慮して、KroezeらはPRESTOタンゴ(パラレル受容体オーム発現および転写出力タンゴによるスクリーニング)を開発し、タンゴアプローチを使用して薬物可能GPCR-omeを並列かつ同時にプロファイルするハイスループットオープンソースプラットフォーム19を開発した。ほぼすべてのGPDRにβ-arrestin2の「無差別」募集を利用して、PRESTO-Tangoは細胞ベースの機能的アッセイの面で初めてのものである。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>384 Well Optical Bottom Plates, Polystyrene Polymer Base, Cell Culture Treated, BLACK, with lid, Sterile</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>12-566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>384 Well Optical Bottom Plates, Polystyrene Polymer Base, Cell Culture Treated, White, with lid, Sterile</td>
			<td>NUNC</td>
			<td>12-566-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>384 Well Round Bottom, Polypropylene, Non-Treated, Blue, non-sterile, without lid</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12-565-390</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>450-115-EL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin, sodium salt</td>
			<td>GoldBio</td>
			<td>LUCNA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM with L-Glutamine, 4.5g/L Glucose and Sodium Pyruvate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Xplorer, 12-channel, variable, 15&#8211;300 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>4861000155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Xplorer, 12-channel, variable, 5&#8211;100 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>4861000139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrix Platemate 2x3</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>801-10001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroBeta 1450 Wallac</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin-Streptomycin</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>450-201-EL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-Lysine hydrobromide</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>P2636-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roth Lab PRESTO-Tango GPCR Kit</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>Kit #1000000068</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

parallel interrogation of &#946;-arrestin2 recruitment for ligand screening on a gpcr-wide scale using presto-tango assay

細胞シグナル伝達経路の範囲の最大かつ最も汎用性の高い遺伝子スーパーファミリーおよびメディエーターとして、Gタンパク質共役受容体(GPCRs)は製薬業界にとって最も有望な標的の1つである。Ergoは、創薬やGPCR薬理学と成果を操作するための遠隔操作ツールを表すため、GPCRリガンドスクリーニングアッセイの設計、実施、最適化が重要です。これまで、Gタンパク質依存アッセイは、リガンド誘導事象を検出し、二次メッセンジャーの生成を定量化するこの分野を代表して行っていました。しかし、機能的選択性の出現以来、他のいくつかのGタンパク質非依存経路およびGタンパク質依存アッセイに関連する限界に対する意識の向上と同様に、代替の作成に向けてより大きな推進があるGPCRリガンドスクリーニングアッセイ。この取り組みに向けて、我々は、そのような資源の1つであるPRESTOタンゴプラットフォーム、ヒトGPCR-omeの並列かつ同時の尋問を可能にするルシファーゼレポーターベースのシステムの適用について述べている。技術的にも経済的にも実現不可能。Gタンパク質独立型β-arrestin2採用アッセイに基づいて、GPDRにおけるβ-arrestin2媒介性人身売買およびシグナリングの普遍性により、PRESTO-TANGOは約100人を含む約300の非嗅覚ヒトGPCRsを研究するための適当なツールとなる孤児受容体。PRESTOタンゴの感度と堅牢性は、既知の薬物の新しいGPCR標的を発見したり、孤児受容体の新しいリガンドを発見するために使用される複合ライブラリを使用して、一次ハイスループットスクリーンに適しています。

本明細書で提示されたPRESTOタンゴプロトコルを用いて、クロマフィン顆粒(CG)抽出物を168の非嗅覚GPCR標的に対してスクリーニングし、その大半は孤児受容体である。上記の抽出物のプロファイリングは、選択された受容体におけるβ-arrestin2動員を調べることによって、Barneaららによって設計された原理に基づいて行われた(図1)。目的のGPCRのプラスミドc...

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Parallel Interrogation of ÃƒÅ½Ã‚Â²-Arrestin2 Recruitment for Ligand Screening on a GPCR-Wide Scale using PRESTO-Tango Assay

GPCRは、魅力的な薬剤の標的であることを考えると、GPCRリガンドスクリーニングは、リード化合物の同定や脱孤児化研究に不可欠です。これらの取り組みに向けて、TEVベースのレポーターアッセイを用いて約300 GPCRで一過性β-arrestin2募集の同時プロファイリングに使用されるオープンソースのリソースプラットフォームPRESTO-Tangoについて説明します。

β-アレプチンの並列尋問2 PRESTOタンゴアッセイを用いたGPCR規模でのリガンドスクリーニングの募集

As the largest and most versatile gene superfamily and mediators of a gamut of cellular signaling pathways, G-protein-coupled receptors (GPCRs) represent ...

プレストタンゴプラットフォームは、リガンド誘導β逮捕2募集をプロファイリングする孤児の標的を含む、ヒトゲノム内のすべての非嗅覚GPCの並列かつ同時の尋問を実行するために考案されました。プレストタンゴプラットフォームは、Gタンパク質に依存しないβ-アレプチンの採用アッセイを使用して、GPCRゲノム全体を並列アプローチでプロファイリングする唯一のオープンソースリソースです。プロセッサのデモンストレーションは、私の研究室のジュネーブ・ラローシュ・リサーチ・アソシエイトと、私の研究室で博士号を取得したマネル・ジガールです。手順を開始する前に、384の光学底板の適切な実験数の各ウェルにミリリットルポリL-リジン溶液あたり25マイクログラムの20マイクロリットルを追加し、30分〜2時間室温でプレートをインキュベートします。インキュベーションの終わりに、シンク上のプレートをフリックして余分なポリL-リジンを除去し、各井戸に40マイクロリットルの抗生物質抗ミキサイト溶液を加えます。その後、セルの播種に必要なプレートを摂氏37度でインキュベートし、残りのプレートを摂氏4度に置いて長期保存します。一次スクリーニングのためにHTLA細胞を播種するには、1皿あたり0.05%トリプシンEDTAの6ミリリットルで培養物を処理する前に、PBSの10ミリリットルでコンフルエント150ミリメートルの細胞培養物を穏やかに洗い流す。細胞が剥離すると、同量のDMEMを含む50ミリリットルの円錐管に細胞懸濁液をプールする。遠心分離により細胞を回収する。ペレットをDMEM濃度のミリリットル当たり5番目の細胞に10倍10倍に再懸濁し、プレートをシンク上でフリックして抗生物質抗ミキ酢液を除去する。プレートをタップして乾燥させ、各ウェルに45マイクロリットルの細胞を播種します。その後、プレートを摂氏37度、二酸化炭素45%を一晩置きます。トランスフェクション用の384ウェルDNAソースプレートを調製するために、各プラスミドの1ミリリットル当たり50ナノグラムの1ミリグラムを配布し、GPRCタンゴ構築物を0.1X Tris-EDTAにそれぞれ関心のあるGPRCタンゴ構築物をコードし、96ウェルプレートの各ウェルウェルに配布する。マルチチャネルピペットを使用して、図示したように、96ウェルプレートの各ウェルから1つの384ウェルDNAソースプレートの個々のウェルに手動で10マイクロリットルのDNA溶液を移動させます。次に、40マイクロリットルの0.313モル塩化カルシウム溶液をDNAソースプレートの各ウェルに移し、各ウェルの内容物を穏やかに混合します。穏やかな混合と384ウェルDNAソースプレートの各ウェルに2x HEPESバッファーの50マイクロリットルを追加します。384ウェルDNAソースプレートから播種されたHTLA細胞の各ウェルにDNAトランスフェクション混合物の10マイクロリットルを1分間転写した後、細胞培養インキュベーター内の細胞を一晩インキュベートする。翌日、トランスフェクションされた細胞培地をデカントし、細胞に直接触れないように注意して、各井戸に40マイクロリットルの飢餓培地をゆっくりと加える。次に、細胞培養インキュベーターにプレートを戻す前に、目的の化合物の20マイクロリットルの化合物を含まない交互の列に20マイクロリットルの車両バッファーを加え、交互の列に3倍の濃度で、プレートを戻します。刺激後16〜24時間後にトランスフェクションされた細胞培地をデカントし、それぞれに20マイクロリットルの新しいグロー試薬を加え、光から保護された室温で5〜20分間インキュベーションする。その後、マイクロプレート発光カウンターのプレートを、井戸あたり1秒の積分時間で読み取ります。二次スクリーニングのために、HTLA細胞を100ミリメートルの皿中に5倍10倍にして、6細胞の全細胞密度を1皿当たり11ミリメートルの完全な培地で37°Cで24時間培養する。翌日、GPCRの10マイクログラムのコンパニューDNAと500マイクロリットルのトリスEDTA塩化カルシウム溶液を渦巻きと混合し、続いて500マイクロリットルのHEPESバッファーを添加した。激しく振った後、室温で1分間溶液をインキュベートし、すぐに1ミリリットルの溶液を細胞に落とします。穏やかに揺れ、沈殿物を均等に分配し、プレートを摂氏37度で24時間置きます。翌日、蛍光セルイメージャーでトランスフェクション効率を確認します。50% を超えるトランザクションが最適です。0.05%トリプシンEDTAの3ミリリットルで細胞を取り外す前に、トランスフェクトされた細胞をversene溶液で静かにすすいする。遠心分離によって解離した細胞を収集し、飢餓培地濃度の1ミリリットル当たり5番目の細胞に4倍10〜5番目の細胞でペレットを再中断する。次に、ポリL-リジンコード384ウェルプレートの各ウェルに45マイクロリットルの細胞をシードし、少なくとも4時間細胞培養インキュベーターにプレートを入れます。半分の丸太線量曲線応答プレートを準備するには、96ウェルプレートの最後の行を除くすべてのHEPESと抗生物質抗ミキサイトを添加したHBSSの270マイクロリットルを追加し、各高低薬物溶液の30マイクロリットルを行Hのウェルに追加します。に達します。回路図を参考に、96ウェルプレートの行AからGまでの低カラム希釈液の20マイクロリットルを、高カラム希釈液の20マイクロリットルを、以前に着席した384ウェルプレートのウェルBからHまでのウェルに混ぜ合わせます。その後、最低16時間、摂氏37度でプレートをインキュベートします。刺激後16〜24時間後に、トランスフェクションされた細胞培地をデカントし、20マイクロリットルのグロー試薬を各ウェルに5〜20分間インキュベーションしてから、1回の統合時間でマイクロプレート発光カウンターのプレートを読み取る。この代表的な実験では、一次スクリーニングで尋問された168個のGPDRのうち、ドーパミン受容体D3およびオプシン5だけが潜在的な活性標的として候補となった。ドーパミン受容体D3は4.7の有意な対数2倍変化を生じ、オプシン5はわずかに低い応答を2.39で産生した。比較すると、ドーパミン受容体D2は、一次スクリーンに対する陽性対照が4.58のlog2倍変化を生じた。二次スクリーニングからの応答曲線は、クロマチン顆粒抽出物が、ドーパミン受容体D3での活性ヒットとしての妥当性を確認するクインピロールに対して、半分の最大有効濃度値で同様のシグナルウィンドウを生成することを実証した。陰性対照と同様の平坦な用量曲線は、オプシン5のために産生されたが、クロマチン顆粒抽出物の可能な標的としてこの受容体を排除した。プレストタンゴは、細胞分布の変動性、トランスフェクション効率、連続薬物希釈は複合誤差をもたらし、データの精度に影響を与える可能性があります。放射性リガンド結合法、生物発光共鳴エネルギー移動、環状AMPカルシウム、内在性の機能アッセイなどの直交的方法を用いて、リガンド受容体相互作用をさらに確認し、特徴付けることができます。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Parallel Interrogation of &#946;-Arrestin2 Recruitment for Ligand Screening on a GPCR-Wide Scale using PRESTO-Tango Assay

High-throughput Screening of Carbohydrate-degrading Enzymes Using Novel Insoluble Chromogenic Substrate Assay Kits

新規不溶性発色基質アッセイキットを使用した炭水化物分解酵素のハイスループットスクリーニング

Carbohydrates active enzymes (CAZymes) have multiple roles in vivo and are widely used for industrial processing in the biofuel, textile, detergent, paper ...

Time-resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen-deuterium Exchange Mass Spectrometry for Studying Protein Structure and Dynamics

時間分解エレクトロスプレーイオン化水素 - 重水素交換質量分析タンパク質の構造とダイナミクスを学ぶために

Intrinsically disordered proteins (IDPs) have long been a challenge to structural biologists due to their lack of stable secondary structure elements. ...

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

A Simple Method for High Throughput Chemical Screening in Caenorhabditis Elegans

カエノラブディティス ・ エレガンスにおけるハイスループット化合物スクリーニングのための簡単な方法

Caenorhabditis elegans is a useful organism for testing chemical effects on physiology. Whole organism small molecule screens offer significant advantages ...

Method for Efficient Refolding and Purification of Chemoreceptor Ligand Binding Domain

高効率巻き戻しと受容体リガンド結合領域の浄化法

Identification of natural ligands of chemoreceptors and structural studies aimed at elucidation of the molecular basis of the ligand specificity can be ...

Titration ELISA as a Method to Determine the Dissociation Constant of Receptor Ligand Interaction

受容体リガンドの相互作用の解離定数の決定法として elisa 法の滴定

The dissociation constant describes the interaction between two partners in the binding equilibrium and is a measure of their affinity. It is a crucial ...

Large-scale Production of Recombinant RNAs on a Circular Scaffold Using a Viroid-derived System in Escherichia coli

Large-scale Production of Recombinant RNAs on a Circular Scaffold Using a Viroid-derived System in Escherichia coli

エシェリヒア属大腸菌のウイロイド派生システムを使用して円形の足場に組換え Rna の大量生産

With increasing interest in RNA biology and the use of RNA molecules in sophisticated biotechnological applications, the methods to produce large amounts ...

Using In Vitro Fluorescence Resonance Energy Transfer to Study the Dynamics Of Protein Complexes at a Millisecond Time Scale

ミリ秒時間スケールでのタンパク質複合体のダイナミクスを調べるため体外蛍光共鳴エネルギー移動の使用

Proteins are the primary operators of biological systems, and they usually interact with other macro- or small molecules to carry out their biological ...

Kinetic Screening of Nuclease Activity using Nucleic Acid Probes

核酸プローブを用いたヌクレアーゼ活性の運動スクリーニング

Nucleases are a class of enzymes that break down nucleic acids by catalyzing the hydrolysis of the phosphodiester bonds that link the ribose sugars. ...

A Semi-High-Throughput Adaptation of the NADH-Coupled ATPase Assay for Screening Small Molecule Inhibitors

低分子阻害剤スクリーニングのためのNADH結合ATPaseアッセイの半高スループット適応

ATPase enzymes utilize the free energy stored in adenosine triphosphate to catalyze a wide variety of endergonic biochemical processes in vivo that would ...

Screening for Phytoestrogens using a Cell-based Estrogen Receptor  &#946; Reporter Assay

Screening for Phytoestrogens using a Cell-based Estrogen Receptor  ÃƒÅ½Ã‚Â² Reporter Assay

レポーターアッセイによる細胞ベースのエストロゲン受容体β使用したフィトエストロゲンのスクリーニング

Plants are a source of food for many animals, and&#160;they can produce thousands of chemicals. Some of these compounds affect physiological processes in ...