Name: delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model
Uploaded: 2020-06-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

يعترف المؤلفان بـ آن أنو كوريان لمساعدتها في هذه المخطوطة. تم تمويل هذا العمل من خلال منحة بدء أمراض القلب التي قدمت لمختبر زنجي وكذلك من قبل المعاهد القومية للصحة منحة R01 HL142768-01

وقد تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية المبينة هنا من قبل كلية إيكان للطب في لجنة الرعاية والاستخدام المؤسسية في جبل سيناء.
1. توليفة من وزارة الدفاع
ملاحظة: يمكن الاطلاع على تفاصيل توليف MODRNA في كوندرات وآخرون13.
<ol><li>طلب القوالب plasmid(ج...

<ol>
	<li>Muruve, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+innate+immune+response+to+adenovirus+vectors.">The innate immune response to adenovirus vectors.</a> Human Gene Therapy. 15 (12), 1157-1166 (2004).</li><li>Donsante, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observed+incidence+of+tumorigenesis+in+long-term+rodent+studies+of+rAAV+vectors.">Observed incidence of tumorigenesis in long-term rodent studies of rAAV vectors.</a> Gene Therapy. 8 (17), 1343-1346 (2001).</li><li>Calcedo, R., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+Immune+Response+to+AAV.">Humoral Immune Response to AAV.</a> Frontiers in Immunology. 4, 341 (2013).</li><li>Diebold, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleic+acid+agonists+for+Toll-like+receptor+7+are+defined+by+the+presence+of+uridine+ribonucleotides.">Nucleic acid agonists for Toll-like receptor 7 are defined by the presence of uridine ribonucleotides.</a> European Journal of Immunology. 36 (12), 3256-3267 (2006).</li><li>Magadum, A., Kaur, K., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA-Based+Protein+Replacement+Therapy+for+the+Heart.">mRNA-Based Protein Replacement Therapy for the Heart.</a> Molecular Therapy. 27 (4), 785-793 (2019).</li><li>Kariko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+of+pseudouridine+into+mRNA+yields+superior+nonimmunogenic+vector+with+increased+translational+capacity+and+biological+stability.">Incorporation of pseudouridine into mRNA yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability.</a> Molecular Therapy. 16 (11), 1833-1840 (2008).</li><li>Hadas, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Modified+mRNA+In+Vitro+Synthesis+Protocol+for+Heart+Gene+Therapy.">Optimizing Modified mRNA In Vitro Synthesis Protocol for Heart Gene Therapy.</a> Molecular Therapy- Methods and Clinical Development. 14, 300-305 (2019).</li><li>Sultana, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Cardiac+Delivery+of+Modified+mRNA.">Optimizing Cardiac Delivery of Modified mRNA.</a> Molecular Therapy. 25 (6), 1306-1315 (2017).</li><li>Zangi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+mRNA+directs+the+fate+of+heart+progenitor+cells+and+induces+vascular+regeneration+after+myocardial+infarction.">Modified mRNA directs the fate of heart progenitor cells and induces vascular regeneration after myocardial infarction.</a> Nature Biotechnology. 31 (10), 898-907 (2013).</li><li>Carlsson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purified+VEGF-A+mRNA+Improves+Cardiac+Function+after+Intracardiac+Injection+1+Week+Post-myocardial+Infarction+in+Swine.">Purified VEGF-A mRNA Improves Cardiac Function after Intracardiac Injection 1 Week Post-myocardial Infarction in Swine.</a> Molecular Therapy Methods Clinical Development. 9, 330-346 (2018).</li><li>Huang, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+chemically+modified+mRNA-based+delivery+of+cytoprotective+factor+promotes+early+cardiomyocyte+survival+post-acute+myocardial+infarction.">Synthetic chemically modified mRNA-based delivery of cytoprotective factor promotes early cardiomyocyte survival post-acute myocardial infarction.</a> Molecular Pharmaceutics. 12 (3), 991-996 (2015).</li><li>Magadum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+of+a+Single+N-Glycosylation+Site+in+Human+FSTL+1+Induces+Cardiomyocyte+Proliferation+and+Cardiac+Regeneration.">Ablation of a Single N-Glycosylation Site in Human FSTL 1 Induces Cardiomyocyte Proliferation and Cardiac Regeneration.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 13, 133-143 (2018).</li><li>Kondrat, J., Sultana, N., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Modified+mRNA+for+Myocardial+Delivery.">Synthesis of Modified mRNA for Myocardial Delivery.</a> Methods in Molecular Biology. 1521, 127-138 (2017).</li><li>Gan, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intradermal+delivery+of+modified+mRNA+encoding+VEGF-A+in+patients+with+type+2+diabetes.">Intradermal delivery of modified mRNA encoding VEGF-A in patients with type 2 diabetes.</a> Nature Communication. 10 (1), 871 (2019).</li></ol>

وقد أظهرت العلاج الجيني إمكانات هائلة لدفع كبير في علاج أمراض القلب. ومع ذلك, الأدوات التقليدية المستخدمة في التجارب السريرية الأولية لعلاج HF أظهرت نجاحا محدودا وترتبط بآثار جانبية شديدة. الحمض النووي الريبي المعدل يقدم تسليم الجينات غير الفيروسية التي تكتسب شعبية باستمرار كأداة نقل الج...

العلاج الجيني هو أداة قوية تنطوي على تقديم الأحماض النووية لعلاج, علاج, أو الوقاية من الأمراض البشرية. على الرغم من التقدم المحرز في الأساليب التشخيصية والعلاجية لأمراض القلب، كان هناك نجاح محدود في توصيل الجينات في احتشاء عضلة القلب (MI) وفشل القلب (HF). كما واضحة كما يبدو عملية العلاج الجيني، بل هو نهج معقد بشكل ملحوظ بالنظر إلى العديد من العوامل التي تحتاج إلى تحسين قبل استخدام وسيلة تسليم معينة. يجب أن يكون ناقل التسليم الصحيح غير مناعيًا وفعالًا ومستقرًا داخل جسم الإنسان. وقد أدت الجهود المبذولة في هذا المجال إلى توليد نوعين من نظم الإيصال: الفيروسية أو غير الفيروسية. وقد أظهرت النظم الفيروسية المستخدمة على نطاق واسع، بما في ذلك نقل الجينات عن طريق الفيروس الغدي، أو الفيروس الرجعي، أو فيروس العدس، أو الفيروس المرتبط بالغدد الهضمية، قدرة تحويلية استثنائية. ومع ذلك، يقتصر استخدامها في العيادات بسبب استجابة المناعة القوية الناجمة1، خطر ورميجانيس2، أو وجود الأجسام المضادة تحييد3، وكلها لا تزال عقبة رئيسية أمام تطبيق واسع وفعال من ناقلات الفيروسية في العلاج الجيني البشري. من ناحية أخرى ، على الرغم من نمط التعبير المثير للإعجاب ، فإن تسليم الحمض النووي البلازمي العاري يعرض كفاءة منخفضة في نقل الحيوانات ، في حين أن نقل مرنا يقدم درجة عالية من المناعة وقابلية التدهور بواسطة RNase4.
مع البحث المكثف في مجال مررنا، أصبحت وزارة الدفاع الأمريكية أداة جذابة لتوصيل الجينات إلى القلب والأعضاء الأخرى المختلفة نظراً لمزاياها العديدة على ناقلات5التقليدية . الاستبدال الكامل للريدين مع نتائج الزائفة التي تحدث بشكل طبيعي في تعبير بروتين أكثر قوة وعابرة ، مع الحد الأدنى من الحث على الاستجابة المناعية الفطرية وخطر الاندماج الجينومي6. بروتوكولات المنشأة مؤخرا استخدام كمية الأمثل من مكافحة عكس الغطاء التناظرية (ARCA) أن يعزز أكثر من ترجمة البروتين عن طريق زيادة استقرار وtransability من الحمض النووي الاصطناعية7.
وقد أظهرت التقارير السابقة التعبير عن مختلف المراسلين أو الجينات الوظيفية التي ألقاها MODRNA في عضلة القلب القوارض بعد MI. مع تطبيقات MODRNA, مناطق كبيرة من عضلة القلب, بما في ذلك كل من cardiomyocytes و noncardiomyocytes, وقد تم بنجاح نقل العدوى بعد إصابة القلب8 للحث على تولد الأوعية9,10, بقاء الخلايا القلبية11, وdydmyocyte تكاثر12. A إدارة واحدة من MODRNA ترميز لحور البصيلاتاتين البشرية مثل 1 يدفع انتشار الماوس الكبار CMs ويزيد بشكل كبير وظيفة القلب، ويقلل من حجم ندبة، ويزيد من كثافة الشعيرات الدموية 4 أسابيع بعد MI12. وأفادت دراسة أكثر حداثة تحسين وظيفة القلب بعد MI مع تطبيق VEGFA MODRNA في نموذج الخنازير10.
وهكذا، مع زيادة شعبية وزارة الدفاع في مجال القلب، فمن الضروري لتطوير وتحسين بروتوكول لتسليم MODRNA إلى القلب بعد MI. هنا هو بروتوكول يصف إعداد وتسليم modRNA المنقى والمحسن في صياغة السيترات المالحة القابلة للتكفو الحيوي التي توفر قوية، تعبير البروتين مستقرة دون تحفيز أي استجابة مناعية. الطريقة الموضحة في هذا البروتوكول والفيديو يوضح الإجراء الجراحي القياسي للفأر MI عن طريق الربط الدائم للشريان الخلفي السفلي الأيسر (LAD) ، يليه ثلاثة حقن داخل القلب من مودرنا. والهدف من هذه الورقة هو تحديد واضح طريقة دقيقة للغاية وقابلة للاستنساخ من تسليم مودرنا إلى عضلة القلب مورين لجعل تطبيق MODRNA يمكن الوصول إليها على نطاق واسع للعلاج الجيني القلبي.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antarctic Phosphatase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0289L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-reverse cap analog, 30-O-Mem7G(50) ppp(50)G</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-7003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescense imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>IVIS100 charge-coupled device imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt retractors</td>
			<td>FST</td>
			<td>18200-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac tropnin I</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>47003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytidine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual Anesthesia System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Adson</td>
			<td>FST</td>
			<td>91106-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Dumont #7</td>
			<td>FST</td>
			<td>91197-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In vitro transcription kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>5X MEGAscript T7 Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intubation cannula</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Megaclear kit</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-4279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N1-methylpseudouridine-5-triphosphate</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop Spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen hegar needle holder with suture scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid templates</td>
			<td>GeneArt, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14200-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y433H</td>
			<td>5.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y432H</td>
			<td>6.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>7733G</td>
			<td>7.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 DNase enzyme</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape station</td>
			<td>Aligent</td>
			<td>4200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription clean up kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1908</td>
			<td>Megaclear</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-4 centrifugal filters 10k</td>
			<td>Amicon</td>
			<td>UFC801096</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model

احتشاء عضلة القلب (MI) هو السبب الرئيسي للمراضة والوفيات في العالم الغربي. في العقد الماضي، أصبح العلاج الجيني خيار علاج واعد لأمراض القلب، نظرا لكفاءته وآثاره العلاجية الاستثنائية. في محاولة لإصلاح الأنسجة التالفة بعد MI، استخدمت دراسات مختلفة العلاج الجيني القائم على الحمض النووي أو الفيروسية ولكن واجهت عقبات كبيرة بسبب التعبير الفقير وغير المنضبط للجينات المسلمة، وذمة، وعدم انتظام ضربات القلب، وضمور القلب. الاصطناعية تعديل مرنا (MODRNA) يقدم نهج العلاج الجيني رواية التي تقدم عالية, عابرة, آمنة, غير مناعة, والسيطرة على تسليم مرنا إلى أنسجة القلب دون أي خطر من التكامل الجينومي. بسبب هذه الخصائص الرائعة جنبا إلى جنب مع الدوائية على شكل جرس في القلب، أصبحت وزارة الدفاع الأميركية نهج جذاب لعلاج أمراض القلب. ومع ذلك، لزيادة فعاليتها في الجسم الحي، يجب اتباع طريقة تسليم متسقة وموثوقة. وبالتالي، لتحقيق أقصى قدر من كفاءة التسليم MODRNA والاتساق العائد في استخدام MODRNA في التطبيقات في مجال المعلومات الحية، يتم تقديم طريقة الأمثل لإعداد وتسليم حقن داخل القلب modRNA في نموذج MI ماوس. وهذا البروتوكول سيجعل من تسليم وزارة الدفاع الأمريكية أكثر سهولة للأبحاث الأساسية والترجمة.

تم تخدير الفئران التي يبلغ عمرها ثمانية إلى عشرة أسابيع باستخدام الأيزوفلوران والمخاتنة. بعد أن كان الحيوان تحت التخدير، تم حلق المنطقة الصدرية اليسرى وتعقيمها بالإيثانول، وتعرض القلب لأربطة LAD. تم انسداد الشريان التاجي الأيسر من قبل عقدة بحزم خياطة تحت الشريان (الرسم البياني <strong class="xfig"...

Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model

يقدم هذا البروتوكول طريقة بسيطة ومتماسكة لتشفير جين من الاهتمام بشكل عابر باستخدام modRNA بعد احتشاء عضلة القلب في الفئران.

تسليم مرنا معدلة في نموذج الماوس احتشاء مايدق

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality in the Western world. In the past decade, gene therapy has become a promising ...

RNA المعدلة هي طريقة جديدة لنقل الجينات إلى القلب، والأعضاء الأخرى. هذا البروتوكول سوف توفر نهجا دقيقا لتقديم الجينات المطلوبة بشكل عابر إلى القلب، بعد احتشاء عضلة القلب. لا يقتصر هذا الأسلوب على احتشاء عضلة القلب ، ولكن يمكن تطبيقه أيضًا على إعادة حقن الإقفار ، ونماذج الانقباض الأبهري العرضية.يتم استخدام الحمض النووي الريبي المعدل في العديد من التجارب السريرية البشرية. ومع ذلك، لا يوجد بروتوكول موحد للجينات المنقولة إلى القلب باستخدام هذه الطريقة. سوف مظاهرة البصرية تمكين الباحثين لحقن بشكل صحيح الحمض النووي الريبي المعدلة في المواقع المناسبة في القلب.إثبات procedule سيكون أجيت Magadum، زميل ما بعد الدكتوراه، وإيلينا شيبوركو مشرف الحيوانات من مختبرنا. استنادا إلى تركيز التي أعدت سابقا في وزارة الدفاع، حساب حجم MODRNA اللازمة لحقن 100 ميكروغرام. يجعل وحدات متساوية من حلول السكروز والسيترات.ثم إضافة حجم محسوب من MODRNA، ومحلول ملحي يكفي لجعل حجم الحقن إلى 60 ميكرولترات. بعد تخدير الحيوان، وضعه الجانب البطني، مع فمها في مواجهة المجرب. ثم للحفاظ على مجرى الهواء المفتوح من خلال إجراء النوبات داخل منطقة التنفّاض، اسحب اللسان برفق.ضبط زاوية الرقبة لتصويب مسار النوبات، ودفع في قنية الاحتضان. مراقبة حركة الصدر من الماوس للتحقق من أن كلا الرئتين تلقي الأوكسجين. يجب أن يكون معدل التنفس حوالي 120 نفسا في الدقيقة.لبدء ربط LAD، بدوره الماوس بعناية على الجانب الأيمن. رفع الجلد ، وإجراء استئصال الصدر من الجانب الأيسر بين الأضلاع الثالثة والرابعة. افتح الصدر بعناية، دون لمس الرئتين بأية أجسام حادة.ضع الداخرات في الشق للحفاظ على تجويف الصدر مفتوحًا ، مما يوفر رؤية واضحة للقلب. بعد ذلك، قم بتحريك الرئتين إلى حافة الشق، وأزل جزء الكيس الحفّار الذي يغطي القلب. حدد بعناية LAD، وهو وعاء أحمر فاتح عميق، يقع بين الشريان الرئوي والوعاء الأيسر.Ligate LAD القريب مع خياطة حريرية واحدة. باستخدام حقنة الأنسولين، وتقديم ما مجموعه 60 ميكرولترات من محلول MODRNA إلى القلب. حقن 20 ميكروليتر داخل العضل، في ثلاثة مواقع مختلفة.موقع واحد على كل جانب من ربط واحد في قمة القلب. أفضل طريقة لحقن الحمض النووي الريبي المعدلة في المواقع الصحيحة، هو مراقبة تلون الأنسجة تحت المجهر، بعد انسداد LAD. أيضا عندما حقن، لا تذهب عميقا جدا في الأنسجة للوصول إلى غرف القلب في الدورة الدموية.أغلق الشق الصدري في الطبقات. وكان أول استخدام 6-0 الحرير تشغيل الغرز لتكييف الأضلاع. ثم استخدام 5-0 الحرير تشغيل الغرز لإغلاق الجلد.لمرحلة الانتعاش، وإزالة القنيولا، والسماح للتنفس العفوي. وضع الحيوان على وسادة التدفئة حتى يستعيد وعيه. لا تترك الحيوان دون مراقبة حتى يكون مستيقظا تماما.لإدارة الألم بعد الجراحة، حقن البوبرينورفين تحت الجلد على فترات 12 ساعة لمدة ثلاثة أيام. بجرعة 0.1 ملليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم. بعد 24 ساعة من ربط LAD وحقن luciferase modRNA في فئران CFW ، تم التحقق من صحة transfection عن طريق التحقق من تعبير بروتين luciferase باستخدام نظام تصوير الإضاءة الحيوية.يمكن الكشف عن إشارة luciferase بوضوح في الصور مقارنة الفئران التحكم، إلى الفئران حقن مع luciferase وزارة الدفاع الأمريكية. يظهر القياس الكمي لإشارة لوسيفيراز تعبيرًا بروتينيًا أعلى بكثير في الفئران المعالجة منه في الفئران الخاضعة للتحكم. تم التحقق من صحة التعبير CRE modRNA من خلال التحقق من ترجمته وتوزيعه الحيوي في فئران ROSA26 mTmG المعدلة وراثيا.بعد 24 ساعة من الجراحة وحقن مودرنا cre، تم إصلاح الفنون ومعالجتها من أجل الإصابة بالمناعة مع علامة cardiomyocyte، وتروبونين القلبي الأول، وعلامة النوى DAPI. وكان التعبير الناجح cre واضحًا بسبب ظهور كريميوسيتس ملونة خضراء. تظهر صورة مدمجة الخلايا النشطة حول موقعي الحقن المرئيين.الأزرق هو وصمة عار النووية DAPI. يمكن لمنصة الحمض النووي الريبي المعدلة تقديم جين واحد أو تركيبات جينية في مجموعة متنوعة من الأعضاء. وبالتالي يمكن استخدامها لأغراض علاجية، مثل تصحيح الاضطرابات الوراثية، أو تفعيل آليات مفيدة في الجسم.إن المستحضرات الدوائية الفريدة للرنا المعدل تمكننا من تقييم وظيفة الجينات مباشرة بعد حقنها. وهذا يمكن الباحث من استهداف مسارات الإشارات ، والتي يتم تغييرها في الساعات القليلة الأولى من الاحتشاح.

Research

JoVE Journal

Genetics

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

قياس مستويات مرناً على مر الزمن من خلال "الاستجابة" الخميرة التاكسج S. cerevisiae

Complex changes in gene expression typically mediate a large portion of a cellular response. Each gene may change expression with unique kinetics as the ...

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

كفاءة الإنتاج وتحديد كريسبر/Cas9-المنشأة الضربة القاضية الجينات في "النظام النموذجي" دانيو rerio

Characterization of the clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system of Streptococcus pyogenes has enabled the development ...

Biotin-based Pulldown Assay to Validate mRNA Targets of Cellular miRNAs

الاعتداء على أساس البيوتين المنسدلة للتحقق من صحة مرناً ميرناس "الأهداف الخلوية"

MicroRNAs (miRNAs) are a class of small noncoding RNAs that post-transcriptionally regulate cellular gene expression. MiRNAs bind to the 3&#39; ...

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

التحليل الكمي للربط مرناً قبل البديلة في أقسام الدماغ الماوس باستخدام الحمض النووي الريبي في الموقع التهجين المقايسة

Alternative splicing (AS) occurs in more than 90% of human genes. The expression pattern of an alternatively spliced exon is often regulated in a cell ...

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

استخدام مايديس Ustilago كحصان طروادة "إيصال بروتينات الذرة في الموقع"

Inspired by Homer&#180;s Trojan horse myth, we engineered the maize pathogen Ustilago maydis to deliver secreted proteins into the maize apoplast ...

Using In Vitro and In-cell SHAPE to Investigate Small Molecule Induced Pre-mRNA Structural Changes

تستخدم في المختبر وفي خلايا الشكل للتحقيق في جزيء الصغيرة التي يسببها مرناً قبل إجراء تغييرات هيكلية

In the process of drug development of RNA-targeting small molecules, elucidating the structural changes upon their interactions with target RNA sequences ...

Sequencing of mRNA from Whole Blood using Nanopore Sequencing

تسلسل mRNA من الدم الكامل باستخدام التسلسل نانو

Sequencing in remote locations and resource-poor settings presents unique challenges. Nanopore sequencing can be successfully used under such conditions, ...

A Non-random Mouse Model for Pharmacological Reactivation of Mecp2 on the Inactive X Chromosome

نموذج ماوس غير عشوائي لأعاده تنشيط الدوائية من Mecp2 علي كروموسوم X غير نشط

X chromosome inactivation (XCI) is the random silencing of one X chromosome in females to achieve gene dosage balance between the sexes. As a result, all ...

Navigating MARRVEL, a Web-Based Tool that Integrates Human Genomics and Model Organism Genetics Information

التنقل MARRVEL، أداة على شبكة الإنترنت التي تدمج علم الجينوم البشري ونموذج معلومات علم الوراثة الكائن الحي

Through whole-exome/genome sequencing, human geneticists identify rare variants that segregate with disease phenotypes. To assess if a specific variant is ...

The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior

استخدام الخلايا السرطانية الثديية الماوس في مختبر الغزو الاختباري كمقياس لسلوك الخلايا الأنكجينية

The in vitro invasion assay uses a protein-rich matrix in a Boyden chamber to measure the ability of cultured cells to pass through the matrix and a ...