Name: delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model
Uploaded: 2020-06-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

Forfatterne anerkender Ann Anu Kurian for hendes hjælp med dette manuskript. Dette arbejde blev finansieret af et kardiologiudstartstilskud til Zangi-laboratoriet og også nih-tilskud R01 HL142768-01

Alle animalske procedurer, der er skitseret her, er blevet godkendt af Icahn School of Medicine på Mount Sinai Institutional Care and Use Committee.
1. Syntese af modRNA
BEMÆRK: Detaljerne i modRNA syntese kan findes i Kondrat et al.13.
<ol><li>Bestil plasmid skabeloner (Tabel over materialer) og generere en ren PCR produkt til brug som mRNA skabelon.</li>
	<li>Forbered modRNAs ved transskription in vitro med en tilpasset...

<ol>
	<li>Muruve, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+innate+immune+response+to+adenovirus+vectors.">The innate immune response to adenovirus vectors.</a> Human Gene Therapy. 15 (12), 1157-1166 (2004).</li><li>Donsante, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observed+incidence+of+tumorigenesis+in+long-term+rodent+studies+of+rAAV+vectors.">Observed incidence of tumorigenesis in long-term rodent studies of rAAV vectors.</a> Gene Therapy. 8 (17), 1343-1346 (2001).</li><li>Calcedo, R., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+Immune+Response+to+AAV.">Humoral Immune Response to AAV.</a> Frontiers in Immunology. 4, 341 (2013).</li><li>Diebold, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleic+acid+agonists+for+Toll-like+receptor+7+are+defined+by+the+presence+of+uridine+ribonucleotides.">Nucleic acid agonists for Toll-like receptor 7 are defined by the presence of uridine ribonucleotides.</a> European Journal of Immunology. 36 (12), 3256-3267 (2006).</li><li>Magadum, A., Kaur, K., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA-Based+Protein+Replacement+Therapy+for+the+Heart.">mRNA-Based Protein Replacement Therapy for the Heart.</a> Molecular Therapy. 27 (4), 785-793 (2019).</li><li>Kariko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+of+pseudouridine+into+mRNA+yields+superior+nonimmunogenic+vector+with+increased+translational+capacity+and+biological+stability.">Incorporation of pseudouridine into mRNA yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability.</a> Molecular Therapy. 16 (11), 1833-1840 (2008).</li><li>Hadas, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Modified+mRNA+In+Vitro+Synthesis+Protocol+for+Heart+Gene+Therapy.">Optimizing Modified mRNA In Vitro Synthesis Protocol for Heart Gene Therapy.</a> Molecular Therapy- Methods and Clinical Development. 14, 300-305 (2019).</li><li>Sultana, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Cardiac+Delivery+of+Modified+mRNA.">Optimizing Cardiac Delivery of Modified mRNA.</a> Molecular Therapy. 25 (6), 1306-1315 (2017).</li><li>Zangi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+mRNA+directs+the+fate+of+heart+progenitor+cells+and+induces+vascular+regeneration+after+myocardial+infarction.">Modified mRNA directs the fate of heart progenitor cells and induces vascular regeneration after myocardial infarction.</a> Nature Biotechnology. 31 (10), 898-907 (2013).</li><li>Carlsson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purified+VEGF-A+mRNA+Improves+Cardiac+Function+after+Intracardiac+Injection+1+Week+Post-myocardial+Infarction+in+Swine.">Purified VEGF-A mRNA Improves Cardiac Function after Intracardiac Injection 1 Week Post-myocardial Infarction in Swine.</a> Molecular Therapy Methods Clinical Development. 9, 330-346 (2018).</li><li>Huang, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+chemically+modified+mRNA-based+delivery+of+cytoprotective+factor+promotes+early+cardiomyocyte+survival+post-acute+myocardial+infarction.">Synthetic chemically modified mRNA-based delivery of cytoprotective factor promotes early cardiomyocyte survival post-acute myocardial infarction.</a> Molecular Pharmaceutics. 12 (3), 991-996 (2015).</li><li>Magadum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+of+a+Single+N-Glycosylation+Site+in+Human+FSTL+1+Induces+Cardiomyocyte+Proliferation+and+Cardiac+Regeneration.">Ablation of a Single N-Glycosylation Site in Human FSTL 1 Induces Cardiomyocyte Proliferation and Cardiac Regeneration.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 13, 133-143 (2018).</li><li>Kondrat, J., Sultana, N., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Modified+mRNA+for+Myocardial+Delivery.">Synthesis of Modified mRNA for Myocardial Delivery.</a> Methods in Molecular Biology. 1521, 127-138 (2017).</li><li>Gan, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intradermal+delivery+of+modified+mRNA+encoding+VEGF-A+in+patients+with+type+2+diabetes.">Intradermal delivery of modified mRNA encoding VEGF-A in patients with type 2 diabetes.</a> Nature Communication. 10 (1), 871 (2019).</li></ol>

Genterapi har vist et enormt potentiale til at fremme behandlingen af hjertesygdomme betydeligt. Men, traditionelle værktøjer ansat i de første kliniske forsøg til behandling af HF har vist begrænset succes og er forbundet med alvorlige bivirkninger. Modificeret RNA præsenterer en nonviral genlevering, der konstant vinder popularitet som et genoverførselsværktøj i hjertet. ModRNA kræver ingen nuklear lokalisering af gener til oversættelse, og giver dermed et effektivt og hurtigt udtryk for proteinet. Da mRNA i...

Genterapi er et kraftfuldt værktøj, der involverer levering af nukleinsyrer til behandling, helbredelse eller forebyggelse af sygdomme hos mennesker. På trods af de fremskridt i den diagnostiske og terapeutiske tilgange til hjertesygdomme, der har været begrænset succes i leveringen af gener i myokardieinfarkt (MI) og hjertesvigt (HF). Så ligetil som processen med genterapi synes, det er en markant kompleks tilgang i betragtning af de mange faktorer, der skal optimeres, før der anvendes en bestemt levering køretøj. Den korrekte leveringsvektor skal være ikke-immunogen, effektiv og stabil inde i den menneskelige krop. Indsatsen på dette område har skabt to typer af leveringssystemer: viral eller ikke-viral. De udbredte virale systemer, herunder genoverførsel med adenovirus, retrovirus, lentivirus eller adeno-associeret virus, har vist en usædvanlig transduktionskapacitet. Men, deres anvendelse i klinikker er begrænset på grund af den stærke immunrespons induceret1, risiko for tumorigenesis2, eller tilstedeværelsen af neutraliserende antistoffer3, som alle fortsat er en stor hindring for bred og effektiv anvendelse af virale vektorer i human genterapi. På den anden side, på trods af deres imponerende udtryk mønster, levering af nøgne plasmid DNA viser en lav transfection effektivitet, mens mRNA overførsel præsenterer høj immunogenicitet og modtagelighed for nedbrydning af RNase4.
Med den omfattende forskning inden for mRNA, modRNA er blevet et attraktivt redskab til levering af gener til hjertet og forskellige andre organer på grund af sine mange fordele i forhold til traditionelle vektorer5. Fuldstændig udskiftning af uridin med naturligt forekommende pseudouridin resulterer i et mere robust og forbigående proteinudtryk med minimal induktion af medfødt immunrespons og risiko for genomisk integration6. Nyligt etablerede protokoller bruger en optimeret mængde anti-reverse cap analog (ARCA), som yderligere forbedrer proteinoversættelsen ved at øge stabiliteten og transabiliteten af den syntetiske mRNA7.
Tidligere rapporter har vist udtryk for forskellige reporter eller funktionelle gener leveret af modRNA i gnaver myokardi efter MI. Med modRNA-applikationer er væsentlige områder af myokardiet, herunder både kardiomyocytter og ikke-kardiocycykardit, blevet transficeret efter hjerteskade8 for at fremkalde angiogenese9,,10,overlevelse af hjerteceller11og kardiomyocytproliferation12. En enkelt administration af modRNA kodet til muteret human follistatin-lignende 1 inducerer spredning af mus voksne cms og øger hjertefunktionen, nedsætter arstørrelse, og øger kapillær tæthed 4 uger efter MI12. En nyere undersøgelse rapporterede forbedret hjertefunktion efter MI med anvendelse af VEGFA modRNA i en svinemodel10.
Således, med den øgede popularitet af modRNA i hjertefeltet, er det vigtigt at udvikle og optimere en protokol for levering af modRNA til hjertet post-MI. Heri er en protokol, der beskriver forberedelse og levering af renset og optimeret modRNA i en biokompatibel citrat-saltvand formulering, der giver robust, stabil protein udtryk uden at stimulere nogen immunrespons. Den metode, der er vist i denne protokol og video viser standard kirurgisk procedure for en mus MI ved permanent ligation af venstre forreste faldende arterie (LAD), efterfulgt af tre site intracardiac injektioner af modRNA. Målet for dette papir er klart at definere en meget præcis og reproducerbar metode til modRNA levering til murine myokardiet for at gøre modRNA ansøgning bredt tilgængelig for hjertegenterapi.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antarctic Phosphatase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0289L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-reverse cap analog, 30-O-Mem7G(50) ppp(50)G</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-7003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescense imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>IVIS100 charge-coupled device imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt retractors</td>
			<td>FST</td>
			<td>18200-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac tropnin I</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>47003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytidine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual Anesthesia System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Adson</td>
			<td>FST</td>
			<td>91106-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Dumont #7</td>
			<td>FST</td>
			<td>91197-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In vitro transcription kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>5X MEGAscript T7 Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intubation cannula</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Megaclear kit</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-4279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N1-methylpseudouridine-5-triphosphate</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop Spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen hegar needle holder with suture scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid templates</td>
			<td>GeneArt, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14200-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y433H</td>
			<td>5.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y432H</td>
			<td>6.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>7733G</td>
			<td>7.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 DNase enzyme</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape station</td>
			<td>Aligent</td>
			<td>4200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription clean up kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1908</td>
			<td>Megaclear</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-4 centrifugal filters 10k</td>
			<td>Amicon</td>
			<td>UFC801096</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model

Myokardieinfarkt (MI) er en førende årsag til sygelighed og dødelighed i den vestlige verden. I det seneste årti er genterapi blevet en lovende behandlingsmulighed for hjertesygdomme på grund af dens effektivitet og ekstraordinære terapeutiske virkninger. I et forsøg på at reparere det beskadigede væv post-MI, forskellige undersøgelser har ansat DNA-baseret eller viral genterapi, men har stået over for betydelige forhindringer på grund af den dårlige og ukontrollerede udtryk for de leverede gener, ødem, arytmi, og hjertehypertrofi. Syntetisk modificeret mRNA (modRNA) præsenterer en ny genterapi tilgang, der tilbyder høj, forbigående, sikker, nonimmunogen, og kontrolleret mRNA levering til hjertet væv uden risiko for genomisk integration. På grund af disse bemærkelsesværdige egenskaber kombineret med sin klokkeformede farmakokinetik i hjertet, er modRNA blevet en attraktiv tilgang til behandling af hjertesygdomme. Men for at øge dens effektivitet in vivo, en konsekvent og pålidelig leveringsmetode skal følges. Derfor, at maksimere modRNA levering effektivitet og udbytte konsistens i modRNA brug for in vivo applikationer, en optimeret metode til forberedelse og levering af modRNA intracardiac injektion i en mus MI model præsenteres. Denne protokol vil gøre behandling af modRNA mere tilgængelig for grundforskning og translationel forskning.

Otte til ti uger gamle mus blev bedøvet med isofluran og intuberet. Efter dyret var under anæstesi, venstre thorax region blev barberet og steriliseret med ethanol, og hjertet blev udsat for LAD ligation. Den venstre koronararterie blev tilstoppet ved fast knuder suturen under arterien (diagram repræsentation Figur 1A). Efter en vellykket infarkt (indikeret ved paling af venstre ventrikelfri væg) blev en direkte indsprøjtning på 100 μg Luc eller Cre modRNA opløst i saccharosecitratbu...

Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model

Denne protokol præsenterer en enkel og sammenhængende måde at forbigående upregulate et gen af interesse ved hjælp af modRNA efter myokardieinfarkt i mus.

Levering af modificeret mRNA i en myokardieinfarkt musemodel

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality in the Western world. In the past decade, gene therapy has become a promising ...

Modificeret RNA er en ny metode til genoverførsel til hjertet og andre organer. Denne protokol vil give præcis tilgang til at levere ønskede gener forbigående til hjertet, post myokardie infarkt. Denne metode er ikke begrænset til myokardie infarkt, men kan også anvendes på iskæmi reperfusion, og tværgående aorta konstriktion modeller.Modificeret RNA anvendes i flere kliniske humane forsøg. Men, der er ingen standardiseret protokol for gen overført til hjertet ved hjælp af denne metode. Visuel demonstration vil gøre det muligt for forskere at injicere modificeret RNA korrekt på passende steder i hjertet.Demonstration af procedule vil være Ajit Magadum, en postdoc stipendiat, og Elena Chepurko et dyr vejleder fra vores laboratorium. Baseret på koncentrationen af den tidligere forberedt ved modRNA, beregne mængden af modRNA er nødvendig for en 100 mikrogram injektion. Gør lige store mængder af saccharose og citratopløsninger.Derefter tilsættes den beregnede mængde modRNA, og nok saltvandsopløsning til at bringe injektionsvolumen til 60 mikroliter. Efter bedøvelse dyret, placere det ventrale side op, med munden vender mod eksperimentatoren. Derefter at opretholde en åben luftvej ved at udføre intratracheal intubation, forsigtigt trække tungen.Juster halsvinklen for at rette indpubationsvejene ud, og skub intubationskanylen ind. Overhold musens brystbevægelse for at kontrollere, at begge lunger får ilt. Respirationshastigheden skal være ca. 120 vejrtrækninger i minuttet.For at begynde LAD ligation, drej musen forsigtigt på sin højre side. løfte huden, og udføre en venstresidet thoracotomy mellem tredje og fjerde ribben. Åbn brystkassen forsigtigt, uden at røre lungerne med skarpe genstande.Placer retractors i snittet for at holde brysthulen åben, hvilket giver et klart overblik over hjertet. Dernæst flytte lungerne til kanten af snittet, og fjerne den del af pericardial sæk, der dækker hjertet. Omhyggeligt identificere LAD, en dyb lys rød fartøj, der ligger mellem lungepulsåren og venstre aurikel.Ligate den proksimale LAD med en enkelt silke sutur. Ved hjælp af en insulinsprøjte skal du levere i alt 60 mikroliter af modRNA-opløsningen til hjertet. Injicer 20 mikroliter intramuskulært på tre forskellige steder.Et sted på hver side af ligationen og et i hjertets spids. Den bedste måde at injicere den modificerede RNA i de korrekte steder, er at observere misfarvning af vævet under mikroskop, efter okklusion af LAD. Også når injiceres, ikke gå for dybt ind i vævet for at nå hjertet kamre i omløb.Luk det thorax snit i lag. Første brug var 6-0 silke kører suturer til at tilpasse ribbenene. Brug derefter 5-0 silke løbesuturer til at lukke huden.For inddrivelse fase, fjerne kanylen, og tillade spontan vejrtrækning. Placer dyret på en varmepude, indtil det genvinder bevidstheden. Lad ikke dyret være uden opsyn, før det er helt vågent.For at håndtere postkirurgiske smerter, injicere buprenorphin subkutanely med 12 timers mellemrum i tre dage. Ved en dosis på 0,1 mg/kg kropsvægt. 24 timer efter LAD ligation og injektion af luciferase modRNA i CFW mus, transinfektion blev valideret ved at kontrollere for luciferase protein udtryk ved hjælp af en bioluminescens imaging system.Luciferase-signalet kan tydeligt detekteres i billeder, der sammenligner kontrolmus, til mus, der injiceres med luciferase modRNA. Kvantificering af luciferasesignalet viser signifikant højere proteinudtryk hos behandlede mus end i kontrolmus. Cre modRNA udtryk blev valideret ved at kontrollere dens oversættelse og bio distribution i transgene ROSA26 mTmG mus.24 timer efter operation og cre modRNA injektion, kunst blev fastsat og behandlet for immunstaining med cardiomyocyte markør, hjertetroponin I, og kerner markør DAPI. Vellykket cre udtryk var tydeligt på grund af fremkomsten af grønne farvede kardiomyocytter. Et flettet billede viser cre aktiverede celler omkring de to synlige injektionssteder.Blå er den nukleare plet DAPI. Modificeret RNA-platform kan levere et enkelt gen- eller genkombinationer i forskellige organer. Og således kan bruges til terapeutiske formål, såsom at korrigere genetiske sygdomme, eller aktivere gavnlige mekanismer i kroppen.Modificerede RNA's unikke farmakokinetik gør det muligt at evaluere genfunktionen umiddelbart efter injektionen. Dette gør det muligt for forsker at målrette signalering veje, som ændres i de første par timer af infarkt.

Research

JoVE Journal

Genetics

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Måling af mRNA niveauer Over tid under gær S. cerevisiae hypoksiske svar

Complex changes in gene expression typically mediate a large portion of a cellular response. Each gene may change expression with unique kinetics as the ...

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Effektiv produktion og identifikation af CRISPR/Cas9-genereret gen Knockouts i Model System Danio rerio

Characterization of the clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system of Streptococcus pyogenes has enabled the development ...

Biotin-based Pulldown Assay to Validate mRNA Targets of Cellular miRNAs

Biotin-baserede Pulldown Assay til Valider mRNA mål af cellulære miRNAs

MicroRNAs (miRNAs) are a class of small noncoding RNAs that post-transcriptionally regulate cellular gene expression. MiRNAs bind to the 3&#39; ...

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Kvantitativ analyse af Alternative Pre-mRNA-Splicing i mus hjernen sektioner ved hjælp af RNA In Situ hybridisering Assay

Alternative splicing (AS) occurs in more than 90% of human genes. The expression pattern of an alternatively spliced exon is often regulated in a cell ...

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

Ved hjælp af Ustilago maydis som en trojansk hest for i Situ levering af majs proteiner

Inspired by Homer&#180;s Trojan horse myth, we engineered the maize pathogen Ustilago maydis to deliver secreted proteins into the maize apoplast ...

Using In Vitro and In-cell SHAPE to Investigate Small Molecule Induced Pre-mRNA Structural Changes

Ved hjælp af in Vitro og i celler form at undersøge lille molekyle induceret Pre-mRNA strukturelle ændringer

In the process of drug development of RNA-targeting small molecules, elucidating the structural changes upon their interactions with target RNA sequences ...

Sequencing of mRNA from Whole Blood using Nanopore Sequencing

Sekvensering af mRNA fra fuldblod ved hjælp af Nanopmalm sekvensering

Sequencing in remote locations and resource-poor settings presents unique challenges. Nanopore sequencing can be successfully used under such conditions, ...

A Non-random Mouse Model for Pharmacological Reactivation of Mecp2 on the Inactive X Chromosome

En ikke-tilfældig muse model for farmakologisk reaktivering af Mecp2 på inaktiv X-kromosom

X chromosome inactivation (XCI) is the random silencing of one X chromosome in females to achieve gene dosage balance between the sexes. As a result, all ...

Navigating MARRVEL, a Web-Based Tool that Integrates Human Genomics and Model Organism Genetics Information

Navigering MARRVEL, et webbaseret værktøj, der integrerer menneskelig Genomics og model organisme genetik information

Through whole-exome/genome sequencing, human geneticists identify rare variants that segregate with disease phenotypes. To assess if a specific variant is ...

The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior

Brugen af mus mammary tumor celler i en in vitro invasion analyse som et mål for Oncogenic celle adfærd

The in vitro invasion assay uses a protein-rich matrix in a Boyden chamber to measure the ability of cultured cells to pass through the matrix and a ...