Name: delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model
Uploaded: 2020-06-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

저자들은 앤 아누 쿠리안이 이 원고에 도움을 주었습니다. 이 작품은 잔기 연구소에 수여 심장 창업 보조금에 의해 지원되었다 또한 NIH 보조금 R01 HL142768-01에 의해

여기에 설명 된 모든 동물 절차는 마운트 시나이 기관 관리 및 사용위원회에서 Icahn 의과 대학에 의해 승인되었습니다.
1. modRNA의 합성
참고 : modRNA 합성의 세부 사항은 콘드라트 외13에서찾을 수 있습니다.
<ol><li>플라스미드 템플릿(재료표)을주문하고 mRNA 템플릿으로 사용할 깨끗한 PCR 제품을 생성합니다.</li>
	<li>다음과 같?...

<ol>
	<li>Muruve, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+innate+immune+response+to+adenovirus+vectors.">The innate immune response to adenovirus vectors.</a> Human Gene Therapy. 15 (12), 1157-1166 (2004).</li><li>Donsante, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observed+incidence+of+tumorigenesis+in+long-term+rodent+studies+of+rAAV+vectors.">Observed incidence of tumorigenesis in long-term rodent studies of rAAV vectors.</a> Gene Therapy. 8 (17), 1343-1346 (2001).</li><li>Calcedo, R., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+Immune+Response+to+AAV.">Humoral Immune Response to AAV.</a> Frontiers in Immunology. 4, 341 (2013).</li><li>Diebold, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleic+acid+agonists+for+Toll-like+receptor+7+are+defined+by+the+presence+of+uridine+ribonucleotides.">Nucleic acid agonists for Toll-like receptor 7 are defined by the presence of uridine ribonucleotides.</a> European Journal of Immunology. 36 (12), 3256-3267 (2006).</li><li>Magadum, A., Kaur, K., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA-Based+Protein+Replacement+Therapy+for+the+Heart.">mRNA-Based Protein Replacement Therapy for the Heart.</a> Molecular Therapy. 27 (4), 785-793 (2019).</li><li>Kariko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+of+pseudouridine+into+mRNA+yields+superior+nonimmunogenic+vector+with+increased+translational+capacity+and+biological+stability.">Incorporation of pseudouridine into mRNA yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability.</a> Molecular Therapy. 16 (11), 1833-1840 (2008).</li><li>Hadas, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Modified+mRNA+In+Vitro+Synthesis+Protocol+for+Heart+Gene+Therapy.">Optimizing Modified mRNA In Vitro Synthesis Protocol for Heart Gene Therapy.</a> Molecular Therapy- Methods and Clinical Development. 14, 300-305 (2019).</li><li>Sultana, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Cardiac+Delivery+of+Modified+mRNA.">Optimizing Cardiac Delivery of Modified mRNA.</a> Molecular Therapy. 25 (6), 1306-1315 (2017).</li><li>Zangi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+mRNA+directs+the+fate+of+heart+progenitor+cells+and+induces+vascular+regeneration+after+myocardial+infarction.">Modified mRNA directs the fate of heart progenitor cells and induces vascular regeneration after myocardial infarction.</a> Nature Biotechnology. 31 (10), 898-907 (2013).</li><li>Carlsson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purified+VEGF-A+mRNA+Improves+Cardiac+Function+after+Intracardiac+Injection+1+Week+Post-myocardial+Infarction+in+Swine.">Purified VEGF-A mRNA Improves Cardiac Function after Intracardiac Injection 1 Week Post-myocardial Infarction in Swine.</a> Molecular Therapy Methods Clinical Development. 9, 330-346 (2018).</li><li>Huang, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+chemically+modified+mRNA-based+delivery+of+cytoprotective+factor+promotes+early+cardiomyocyte+survival+post-acute+myocardial+infarction.">Synthetic chemically modified mRNA-based delivery of cytoprotective factor promotes early cardiomyocyte survival post-acute myocardial infarction.</a> Molecular Pharmaceutics. 12 (3), 991-996 (2015).</li><li>Magadum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+of+a+Single+N-Glycosylation+Site+in+Human+FSTL+1+Induces+Cardiomyocyte+Proliferation+and+Cardiac+Regeneration.">Ablation of a Single N-Glycosylation Site in Human FSTL 1 Induces Cardiomyocyte Proliferation and Cardiac Regeneration.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 13, 133-143 (2018).</li><li>Kondrat, J., Sultana, N., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Modified+mRNA+for+Myocardial+Delivery.">Synthesis of Modified mRNA for Myocardial Delivery.</a> Methods in Molecular Biology. 1521, 127-138 (2017).</li><li>Gan, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intradermal+delivery+of+modified+mRNA+encoding+VEGF-A+in+patients+with+type+2+diabetes.">Intradermal delivery of modified mRNA encoding VEGF-A in patients with type 2 diabetes.</a> Nature Communication. 10 (1), 871 (2019).</li></ol>

유전자 치료는 심장 질환의 치료를 크게 발전시킬 수 있는 엄청난 잠재력을 보여주었습니다. 그러나, HF의 치료를 위한 초기 임상 시험에 채택 된 전통적인 도구는 제한된 성공을 보이고 심각한 부작용과 관련되어 있다. 변형된 RNA는 심장에서 유전자 전달 도구로 지속적으로 인기를 얻고 있는 비바이러스 유전자 전달을 제시한다. ModRNA는 번역을 위한 유전자의 핵 현지화를 요구하지 않으며, 따라?...

유전자 치료는 인간 질환의 치료, 치료 또는 예방을 위한 핵산의 전달을 포함하는 강력한 도구입니다. 심장질환에 대한 진단 및 치료 접근법의 진행에도 불구하고 심근경색(MI) 및 심부전(HF)에서 유전자전달에 있어 성공이 제한적이다. 유전자 치료의 과정이 간단해 보이는 것처럼, 특정 전달 차량을 사용하기 전에 최적화해야 하는 많은 요인을 고려하면 현저하게 복잡한 접근법입니다. 올바른 전달 벡터는 인체 내부에서 비 면역원성, 효율적이고 안정적이어야 합니다. 이 분야의 노력은 바이러스 성 또는 비 바이러스성 이라는 두 가지 유형의 배달 시스템을 생성했습니다. 아데노바이러스, 레트로바이러스, 렌티바이러스 또는 아데노 관련 바이러스에 의한 유전자 전달을 포함한 널리 사용되는 바이러스 시스템은 뛰어난 전달 능력을 보여주었습니다. 그러나, 클리닉에서의 그들의 사용은 강한 면역 반응 유도1,종양 발생2의위험, 또는 중화 항체3의존재로 인해 제한되며, 모두 인간 유전자 치료에서 바이러스 벡터의 광범위하고 효과적인 적용에 큰 장애물로 남아 있다. 한편, 이들의 인상적인 발현 패턴에도 불구하고, 벌거벗은 플라스미드 DNA의 전달은 낮은 형질 전달 효율을 표시하고, mRNA 전달은 RNase4에의한 저하에 높은 면역원성과 감수성을 제시한다.
mRNA 의 분야에서 광범위한 연구와 함께, modRNA는 전통적인 벡터5에비해 수많은 장점으로 인해 심장및 다양한 다른 장기에 유전자를 전달하는 매력적인 도구가되었다. 자연적으로 발생하는 의사 분비딘을 가진 uridine의 완전한 교체는 선천적인 면역 반응의 최소한의 유도와 게놈 통합6의리스크로, 더 강력하고 일시적인 단백질 발현을 초래합니다. 최근에 확립된 프로토콜은 합성 mRNA7의안정성과 전이를 증가시킴으로써 단백질 번역을 더욱 향상시키는 최적화된 양의 반대로 캡 아날로그(ARCA)를 사용한다.
이전 보고서는 MI 후 설치류 심근에서 modRNA에 의해 전달된 다양한 기자 또는 기능성 유전자의 발현을 보여주었다. modRNA 적용을 통해 심근세포와 비심근세포 모두를 포함한 심근증의 중요한 영역은 혈관신생9,10,심장세포 생존 11, 및,심근세포 증식(12)을12유도하기 위해 심장 후11손상(8)을 성공적으로 전염시켰다. 돌연변이된 인간 폴리스테틴에 대한 인코딩된 modRNA의 단일 투여는 마우스 성인 CM의 증식을 유도하고 심장 기능을 크게 증가시키고 흉터 크기를 감소시키고 모세혈관 밀도를 증가시키고 MI12이후 4주 후에 도포밀도를 증가시킨다. 최근 연구는 돼지 모델(10)에서VEGFA modRNA의 응용 프로그램과 MI 후 향상 된 심장 기능을보고했다.
따라서, 심장 분야에서 modRNA의 인기가 증가함에 따라, MI 이후 심장에 modRNA를 전달하기 위한 프로토콜을 개발하고 최적화하는 것이 필수적이다. 이 프로토콜 및 비디오에 도시된 방법은 왼쪽 전방 내림차순 동맥(LAD)의 영구 결찰에 의해 마우스 MI의 표준 외과 적 절차를 시연하고, modRNA의 3개의 현장 내심 주사가 뒤따릅니다. 이 논문의 목적은 모RNA 적용이 심장 유전자 치료에 널리 접근할 수 있도록 뮤린 심오카르슘에 modRNA 전달의 매우 정확하고 재현 가능한 방법을 명확하게 정의하는 것입니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antarctic Phosphatase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0289L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-reverse cap analog, 30-O-Mem7G(50) ppp(50)G</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-7003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescense imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>IVIS100 charge-coupled device imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt retractors</td>
			<td>FST</td>
			<td>18200-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac tropnin I</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>47003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytidine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual Anesthesia System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Adson</td>
			<td>FST</td>
			<td>91106-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Dumont #7</td>
			<td>FST</td>
			<td>91197-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In vitro transcription kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>5X MEGAscript T7 Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intubation cannula</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Megaclear kit</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-4279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N1-methylpseudouridine-5-triphosphate</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop Spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen hegar needle holder with suture scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid templates</td>
			<td>GeneArt, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14200-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y433H</td>
			<td>5.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y432H</td>
			<td>6.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>7733G</td>
			<td>7.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 DNase enzyme</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape station</td>
			<td>Aligent</td>
			<td>4200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription clean up kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1908</td>
			<td>Megaclear</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-4 centrifugal filters 10k</td>
			<td>Amicon</td>
			<td>UFC801096</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model

심근 경색 (MI)은 서방 세계에서 이환율과 사망률의 주요 원인입니다. 지난 10 년 동안, 유전자 치료는 심장 질환에 대 한 유망한 치료 옵션이 되었다, 그것의 효율성 및 뛰어난 치료 효과 때문에. 손상된 조직 포스트 MI를 복구하기 위한 노력의 일환으로, 각종 연구 결과는 DNA 기지를 둔 바이러스성 유전자 치료를 채택했습니다 그러나 전달된 유전자, 부종, 부정맥 및 심장 비대의 가난하고 통제되지 않는 발현 때문에 상당한 장애물에 직면했습니다. 합성 변형 된 mRNA (modRNA)는 게놈 통합의 위험없이 심장 조직에 높은, 일시적인, 안전, 비 면역 원성 및 제어 된 mRNA 전달을 제공하는 새로운 유전자 치료 접근법을 제시한다. 이러한 놀라운 특성으로 인해 심장에 종 모양의 약물 역학과 결합 된 modRNA는 심장 질환 치료를위한 매력적인 접근 방식이되었습니다. 그러나 생체 내에서 그 효과를 높이기 위해서는 일관되고 신뢰할 수 있는 전달 방법을 따라야 합니다. 따라서, 생체 내 용도에 대한 modRNA 사용의 modRNA 전달 효율 및 수율 일관성을 극대화하기 위해 마우스 MI 모델에서 modRNA 내심 내 주입을 제조하고 전달하는 최적화된 방법이 제시된다. 이 프로토콜은 modRNA 전달을 기본 및 번역 연구에 더 쉽게 접근할 수 있게 합니다.

8주에서 10주 된 마우스는 이소플루란으로 마취되고 삽관하였다. 동물이 마취 하에 있던 후에, 좌흉 부소 지역은 에탄올로 면도하고 살균하고, 심혼은 LAD 결찰을 위해 드러나게 했습니다. 왼쪽 관상 동맥은 동맥 아래 봉합사를 단단히 매듭시킴으로써 가려졌다(다이어그램 표현 도 1A). 성공적인 경색 후 (좌심실 자유 벽의 마비에 의해 표시), 자당 구연산 완충액에 용해 된 루?...

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Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model

이 프로토콜은 마우스에서 심근 경색 후 modRNA를 사용하여 관심 유전자를 일시적으로 조절하는 간단하고 일관된 방법을 제시합니다.

심근 경색 마우스 모델에서 수정된 mRNA의 납품

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality in the Western world. In the past decade, gene therapy has become a promising ...

변형된 RNA는 심장, 및 기타 장기로 유전자 전달을 위한 새로운 방법입니다. 이 프로토콜은 심장에 일시적으로 원하는 유전자를 전달하는 정확한 접근 방식을 제공 할 것입니다, 심근 경색을 게시. 이 방법은 심근 경색에 국한되지 않고 허혈 재관류 및 횡방향 대동맥 수축 모델에도 적용될 수 있습니다.변형 된 RNA는 여러 인간 임상 시험에서 사용되고 있습니다. 그러나, 이 방법을 사용하여 심장으로 옮겨진 유전자를 위한 표준화된 프로토콜은 없습니다. 시각적 데모는 연구원이 심장에 있는 적당한 사이트에 수정된 RNA를 정확하게 주입하는 가능하게 할 것입니다.절차 시연은 박사 후 동료인 아짓 마가둠과 실험실의 동물 감독자 엘레나 체푸르코가 될 것입니다. modRNA에서 이전에 제조된 의 농도에 기초하여, 100 마이크로그램 주입에 필요한 modRNA의 부피를 계산한다. 자당 및 구연산 솔루션의 동일한 볼륨을 만든다.그런 다음 계산된 양의 modRNA를 추가하고 충분한 식염수 용액을 추가하여 60 마이크로리터에 사출 볼륨을 가져옵니다. 동물을 마취한 후, 입이 실험자쪽으로 향하여 복부를 위로 올려 놓습니다. 그런 다음 내 내 삽 관을 수행하여 개방된 기도를 유지하려면 혀를 부드럽게 당깁니다.목각도를 조정하여 삽관 경로를 곧게 펴고 삽관 캐뉼라를 밀어 넣습니다. 마우스의 흉부 움직임을 관찰하여 두 폐가 산소를 받고 있는지 확인합니다. 호흡 속도는 분당 약 120 호흡이어야 합니다.LAD 결찰을 시작하려면 마우스를 오른쪽으로 조심스럽게 돌립니다. 피부를 들어 올리고 세 번째 갈비뼈와 네 번째 갈비뼈 사이에 좌측 흉부 절제술을 수행합니다. 날카로운 물체로 폐를 건드리지 않고 흉부를 조심스럽게 엽니다.흉부 구멍을 열어 두기 위해 방수에 리트랙터를 배치하여 심장의 선명한 전망을 제공합니다. 다음으로 폐를 절개 가장자리로 이동하고 심장을 덮고 있는 심근 낭의 일부를 제거합니다. 폐 동맥과 왼쪽 오리엔클 사이에 위치한 깊은 빛 빨간 배인 LAD를 주의 깊게 식별합니다.하나의 실크 봉합사와 근위 LAD를 리게이트. 인슐린 주사기를 사용하여, 심장에 modRNA 용액의 총 60 마이크로 리터를 제공합니다. 3개의 다른 사이트에, 근육질로 20 마이크로리터를 주입하십시오.결찰의 각 측면에 하나의 사이트와 마음의 정점에 하나. 올바른 부위에 수정된 RNA를 주입하는 가장 좋은 방법은 LAD의 폐색 후 현미경으로 조직의 변색을 관찰하는 것입니다. 또한 주입 할 때, 순환으로 심장 챔버에 도달하기 위해 조직에 너무 깊이 가지 마십시오.층의 흉부 절개를 닫습니다. 첫 번째 사용은 갈비뼈를 적응시키기 위해 6-0 실크 러닝 봉합사였습니다. 그런 다음 5-0 실크 러닝 봉합사를 사용하여 피부를 닫습니다.회복 단계의 경우 캐뉼라를 제거하고 자발적인 호흡을 허용하십시오. 동물을 의식을 되찾을 때까지 가열 패드에 놓습니다. 동물이 완전히 깨어날 때까지 방치하지 마십시오.수술 후 통증을 관리하려면 3 일 동안 12 시간 간격으로 buprenorphine을 피하하십시오. 체중의 킬로그램 당 0.1 밀리 그램의 복용량에서. CFW 마우스에서 LAD 결찰 및 루시파라제 모RNA의 주입 후 24시간 후, 생물 발광 이미징 시스템을 사용하여 루시파아제 단백질 발현을 검사하여 경질을 검증하였다.루시파라제 신호는 대조군 마우스를 비교하는 이미지에서 루시파아제 모RNA를 주입한 마우스에 명확하게 검출될 수 있다. 루시파라제 신호의 정량화는 대조군 마우스보다 처리된 마우스에서 훨씬 더 높은 단백질 발현을 나타낸다. Cre modRNA 발현은 형질전환 ROSA26 mTmG 마우스에서의 번역 및 바이오 분포를 확인함으로써 검증되었다.수술 후 24시간 및 cre modRNA 주사 후, 심근세포 마커, 심장 트로포닌 I 및 핵 마커 DAPI를 통해 면역염색을 위해 예술이 고정및 처리되었다. 성공적인 cre 표현은 녹색 색의 심근 세포의 모양으로 인해 분명했다. 병합된 이미지는 두 개의 눈에 보이는 사출 사이트 주위에 cre 활성 셀을 보여 주입니다.블루는 핵 얼룩 DAPI입니다. 변형된 RNA 플랫폼은 다양한 장기에서 단일 유전자 또는 유전자 조합을 제공할 수 있다. 따라서 유전 적 질환을 교정하거나 신체의 유익한 메커니즘을 활성화하는 것과 같은 치료 목적으로 사용할 수 있습니다.수정 된 RNA의 독특한 약물 동종은 우리가 주입 직후 유전자 기능을 평가 할 수 있습니다. 이것은 연구원이 경색의 처음 몇 시간에서 변경되는 신호 통로를 표적으로 하는 가능하게 합니다.

Research

JoVE Journal

Genetics

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

효 모 S. cerevisiae Hypoxic 응답 하는 동안 시간이 지남에 mRNA 수준 측정

Complex changes in gene expression typically mediate a large portion of a cellular response. Each gene may change expression with unique kinetics as the ...

연구

유전학

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

효율적인 생산 및 모델 시스템 Danio rerio 에 유전자 녹아웃 식별의 CRISPR/Cas9 생성

Characterization of the clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system of Streptococcus pyogenes has enabled the development ...

Biotin-based Pulldown Assay to Validate mRNA Targets of Cellular miRNAs

Biotin 기반 풀 다운 유효성 검사 mRNA를 표적 세포 miRNAs 분석 결과

MicroRNAs (miRNAs) are a class of small noncoding RNAs that post-transcriptionally regulate cellular gene expression. MiRNAs bind to the 3&#39; ...

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

대체 사전 mRNA 접합 교 잡 시험 현장에서 RNA를 사용 하 여 마우스 뇌 섹션에서의 정량 분석

Alternative splicing (AS) occurs in more than 90% of human genes. The expression pattern of an alternatively spliced exon is often regulated in a cell ...

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

원래의 배달 옥수수 단백질에 대 한 Ustilago maydis 트로이 목마 사용 하

Inspired by Homer&#180;s Trojan horse myth, we engineered the maize pathogen Ustilago maydis to deliver secreted proteins into the maize apoplast ...

Using In Vitro and In-cell SHAPE to Investigate Small Molecule Induced Pre-mRNA Structural Changes

작은 분자 조사를 시험관 및 셀 모양을 사용 하 여 사전 mRNA 구조 변화 유도

In the process of drug development of RNA-targeting small molecules, elucidating the structural changes upon their interactions with target RNA sequences ...

Sequencing of mRNA from Whole Blood using Nanopore Sequencing

나노 포어 시퀀싱을 사용 하 여 전 혈에서 mRNA의 시퀀싱

Sequencing in remote locations and resource-poor settings presents unique challenges. Nanopore sequencing can be successfully used under such conditions, ...

A Non-random Mouse Model for Pharmacological Reactivation of Mecp2 on the Inactive X Chromosome

비활성 X 염색체에 대 한 Mecp2의 약리학 적 재 활성화를 위한 비 랜덤 마우스 모델

X chromosome inactivation (XCI) is the random silencing of one X chromosome in females to achieve gene dosage balance between the sexes. As a result, all ...

Navigating MARRVEL, a Web-Based Tool that Integrates Human Genomics and Model Organism Genetics Information

인간 유전체학 및 모델 유기체 유전학 정보를 통합하는 웹 기반 도구인 MARRVEL 탐색

Through whole-exome/genome sequencing, human geneticists identify rare variants that segregate with disease phenotypes. To assess if a specific variant is ...

The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior

종양 발생 세포 행동의 척도로 시험관 내 침략 분석에서 마우스 유방 종양 세포의 사용

The in vitro invasion assay uses a protein-rich matrix in a Boyden chamber to measure the ability of cultured cells to pass through the matrix and a ...