Name: delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model
Uploaded: 2020-06-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

Forfatterne anerkjenner Ann Anu Kurian for hennes hjelp med dette manuskriptet. Dette arbeidet ble finansiert av et kardiologi oppstartsstipend tildelt Zangi-laboratoriet og også av NIH-stipendet R01 HL142768-01

Alle dyreprosedyrer som er skissert her, er godkjent av Icahn School of Medicine ved Mount Sinai Institutional Care and Use Committee.
1. Syntese av modRNA
MERK: Detaljene i modRNA syntese finnes i Kondrat et al.13.
<ol><li>Bestill plasmidmalene (Tabell over materialer) og generer et rent PCR-produkt som skal brukes som mRNA-mal.</li>
	<li>Forbered modRNAs ved transkripsjon in vitro med en tilpasset ribonucleoside blanding ...

<ol>
	<li>Muruve, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+innate+immune+response+to+adenovirus+vectors.">The innate immune response to adenovirus vectors.</a> Human Gene Therapy. 15 (12), 1157-1166 (2004).</li><li>Donsante, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observed+incidence+of+tumorigenesis+in+long-term+rodent+studies+of+rAAV+vectors.">Observed incidence of tumorigenesis in long-term rodent studies of rAAV vectors.</a> Gene Therapy. 8 (17), 1343-1346 (2001).</li><li>Calcedo, R., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+Immune+Response+to+AAV.">Humoral Immune Response to AAV.</a> Frontiers in Immunology. 4, 341 (2013).</li><li>Diebold, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleic+acid+agonists+for+Toll-like+receptor+7+are+defined+by+the+presence+of+uridine+ribonucleotides.">Nucleic acid agonists for Toll-like receptor 7 are defined by the presence of uridine ribonucleotides.</a> European Journal of Immunology. 36 (12), 3256-3267 (2006).</li><li>Magadum, A., Kaur, K., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA-Based+Protein+Replacement+Therapy+for+the+Heart.">mRNA-Based Protein Replacement Therapy for the Heart.</a> Molecular Therapy. 27 (4), 785-793 (2019).</li><li>Kariko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+of+pseudouridine+into+mRNA+yields+superior+nonimmunogenic+vector+with+increased+translational+capacity+and+biological+stability.">Incorporation of pseudouridine into mRNA yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability.</a> Molecular Therapy. 16 (11), 1833-1840 (2008).</li><li>Hadas, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Modified+mRNA+In+Vitro+Synthesis+Protocol+for+Heart+Gene+Therapy.">Optimizing Modified mRNA In Vitro Synthesis Protocol for Heart Gene Therapy.</a> Molecular Therapy- Methods and Clinical Development. 14, 300-305 (2019).</li><li>Sultana, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Cardiac+Delivery+of+Modified+mRNA.">Optimizing Cardiac Delivery of Modified mRNA.</a> Molecular Therapy. 25 (6), 1306-1315 (2017).</li><li>Zangi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+mRNA+directs+the+fate+of+heart+progenitor+cells+and+induces+vascular+regeneration+after+myocardial+infarction.">Modified mRNA directs the fate of heart progenitor cells and induces vascular regeneration after myocardial infarction.</a> Nature Biotechnology. 31 (10), 898-907 (2013).</li><li>Carlsson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purified+VEGF-A+mRNA+Improves+Cardiac+Function+after+Intracardiac+Injection+1+Week+Post-myocardial+Infarction+in+Swine.">Purified VEGF-A mRNA Improves Cardiac Function after Intracardiac Injection 1 Week Post-myocardial Infarction in Swine.</a> Molecular Therapy Methods Clinical Development. 9, 330-346 (2018).</li><li>Huang, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+chemically+modified+mRNA-based+delivery+of+cytoprotective+factor+promotes+early+cardiomyocyte+survival+post-acute+myocardial+infarction.">Synthetic chemically modified mRNA-based delivery of cytoprotective factor promotes early cardiomyocyte survival post-acute myocardial infarction.</a> Molecular Pharmaceutics. 12 (3), 991-996 (2015).</li><li>Magadum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+of+a+Single+N-Glycosylation+Site+in+Human+FSTL+1+Induces+Cardiomyocyte+Proliferation+and+Cardiac+Regeneration.">Ablation of a Single N-Glycosylation Site in Human FSTL 1 Induces Cardiomyocyte Proliferation and Cardiac Regeneration.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 13, 133-143 (2018).</li><li>Kondrat, J., Sultana, N., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Modified+mRNA+for+Myocardial+Delivery.">Synthesis of Modified mRNA for Myocardial Delivery.</a> Methods in Molecular Biology. 1521, 127-138 (2017).</li><li>Gan, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intradermal+delivery+of+modified+mRNA+encoding+VEGF-A+in+patients+with+type+2+diabetes.">Intradermal delivery of modified mRNA encoding VEGF-A in patients with type 2 diabetes.</a> Nature Communication. 10 (1), 871 (2019).</li></ol>

Genterapi har vist et enormt potensial til å redusere behandlingen av hjertesykdom betydelig. Tradisjonelle verktøy som brukes i de første kliniske studiene for behandling av HF har imidlertid vist begrenset suksess og er forbundet med alvorlige bivirkninger. Modifisert RNA presenterer en nonviral genlevering som kontinuerlig blir populært som et genoverføringsverktøy i hjertet. ModRNA krever ingen kjernefysisk lokalisering av gener for oversettelse, og tilbyr dermed et effektivt og raskt uttrykk for proteinet. Vid...

Genterapi er et kraftig verktøy som involverer levering av nukleinsyrer for behandling, kur eller forebygging av menneskelige sykdommer. Til tross for fremgangen i diagnostiske og terapeutiske tilnærminger for hjertesykdom, har det vært begrenset suksess i levering av gener i hjerteinfarkt (MI) og hjertesvikt (HF). Så enkelt som prosessen med genterapi ser ut, er det en markert kompleks tilnærming med tanke på de mange faktorene som må optimaliseres før du bruker et bestemt leveringskjøretøy. Den riktige leveringsvektoren skal være ikke-immunogen, effektiv og stabil inne i menneskekroppen. Arbeidet på dette feltet har generert to typer leveringssystemer: viral eller ikke-viral. De mye brukte virussystemene, inkludert genoverføring av adenovirus, retrovirus, lentivirus eller adeno-assosiert virus, har vist eksepsjonell transduksjonskapasitet. Imidlertid er deres bruk i klinikker begrenset på grunn av den sterke immunresponsen indusert1, risiko for tumorigenesis2, eller tilstedeværelsen av nøytraliserende antistoffer3, som alle forblir et stort hinder for bred og effektiv anvendelse av virale vektorer i menneskelig genterapi. På den annen side, til tross for deres imponerende uttrykksmønster, viser levering av naken plasmid DNA en lav transfection effektivitet, mens mRNA overføring presenterer høy immunogenitet og mottakelighet for nedbrytning av RNase4.
Med den omfattende forskningen innen mRNA har modRNA blitt et attraktivt verktøy for levering av gener til hjertet og ulike andre organer på grunn av sine mange fordeler fremfor tradisjonelle vektorer5. Fullstendig utskifting av uridin med naturlig forekommende pseudouridin resulterer i mer robust og forbigående proteinuttrykk, med minimal induksjon av medfødt immunrespons og risiko for genomisk integrasjon6. Nylig etablerte protokoller bruker en optimalisert mengde anti-omvendt cap analog (ARCA) som ytterligere forbedrer proteinoversettelsen ved å øke stabiliteten og transabiliteten til den syntetiske mRNA7.
Tidligere rapporter har vist uttrykk for ulike reporter eller funksjonelle gener levert av modRNA i gnager myokardiet etter MI. Med modRNA-applikasjoner har betydelige områder av myokardiet, inkludert både kardiomyocytter og ikke-kardiomyocytter, blitt vellykket transfisert post-hjerteskade8 for å indusere angiogenese9,,10,hjertecelleoverlevelse11, og kardiomyocyteproliferasjon12. En enkelt administrasjon av modRNA kodet for mutert menneskelig follistatin-lignende 1 induserer spredning av mus voksen CMs og øker hjertefunksjonen betydelig, reduserer arrstørrelse, og øker kapillærtetthet 4 uker etter MI12. En nyere studie rapporterte forbedret hjertefunksjon etter MI med anvendelse av VEGFA modRNA i en svinemodell10.
Dermed, med økt popularitet av modRNA i hjertefeltet, er det viktig å utvikle og optimalisere en protokoll for levering av modRNA til hjertet post-MI. Her er en protokoll som beskriver utarbeidelse og levering av renset og optimalisert modRNA i en biokompatibel citrate-saltvann formulering som gir robust, stabilt proteinuttrykk uten å stimulere noen immunrespons. Metoden som vises i denne protokollen og videoen demonstrerer standard kirurgisk prosedyre av en mus MI ved permanent ligation av venstre fremre synkende arterie (LAD), etterfulgt av tre sted intracardiac injeksjoner av modRNA. Målet for dette papiret er å klart definere en svært nøyaktig og reproduserbar metode for modRNA levering til murine myokardiet for å gjøre modRNA søknad allment tilgjengelig for hjertegenterapi.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antarctic Phosphatase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0289L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-reverse cap analog, 30-O-Mem7G(50) ppp(50)G</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-7003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescense imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>IVIS100 charge-coupled device imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt retractors</td>
			<td>FST</td>
			<td>18200-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac tropnin I</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>47003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytidine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual Anesthesia System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Adson</td>
			<td>FST</td>
			<td>91106-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Dumont #7</td>
			<td>FST</td>
			<td>91197-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In vitro transcription kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>5X MEGAscript T7 Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intubation cannula</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Megaclear kit</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-4279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N1-methylpseudouridine-5-triphosphate</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop Spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen hegar needle holder with suture scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid templates</td>
			<td>GeneArt, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14200-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y433H</td>
			<td>5.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y432H</td>
			<td>6.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>7733G</td>
			<td>7.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 DNase enzyme</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape station</td>
			<td>Aligent</td>
			<td>4200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription clean up kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1908</td>
			<td>Megaclear</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-4 centrifugal filters 10k</td>
			<td>Amicon</td>
			<td>UFC801096</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model

Hjerteinfarkt (MI) er en ledende årsak til sykelighet og dødelighet i den vestlige verden. I det siste tiåret har genterapi blitt et lovende behandlingsalternativ for hjertesykdom, på grunn av effektiviteten og eksepsjonelle terapeutiske effekter. I et forsøk på å reparere det skadede vevet etter MI har ulike studier brukt DNA-basert eller viral genterapi, men har møtt betydelige hindringer på grunn av det dårlige og ukontrollerte uttrykket av de leverte genene, ødemet, arytmien og hjertehypertrofi. Syntetisk modifisert mRNA (modRNA) presenterer en ny genterapi tilnærming som tilbyr høy, forbigående, trygg, nonimmunogen, og kontrollert mRNA levering til hjertevevet uten risiko for genomisk integrasjon. På grunn av disse bemerkelsesverdige egenskapene kombinert med sin klokkeformede farmakokinetikk i hjertet, har modRNA blitt en attraktiv tilnærming for behandling av hjertesykdom. Men for å øke effektiviteten in vivo, må en konsekvent og pålitelig leveringsmetode følges. Derfor, for å maksimere modRNA levering effektivitet og gi konsistens i modRNA bruk for in vivo applikasjoner, en optimalisert metode for forberedelse og levering av modRNA intracardiac injeksjon i en mus MI-modell presenteres. Denne protokollen vil gjøre modRNA levering mer tilgjengelig for grunnleggende og translasjonell forskning.

Åtte til ti uker gamle mus ble bedøvet med isofluran og intubert. Etter at dyret var under anestesi, ble venstre thoraxregion barbert og sterilisert med etanol, og hjertet ble utsatt for LAD ligation. Venstre koronararterie ble okkludert ved å knytte suturen under arterien (diagramrepresentasjon Figur 1A). Etter et vellykket infarkt (indikert ved paling av venstre ventrikulær fri vegg), ble en direkte injeksjon av 100 μg Luc eller Cre modRNA oppløst i sukrose citratbuffer levert direkt...

Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model

Denne protokollen presenterer en enkel og sammenhengende måte å midlertidig oppreisning et gen av interesse ved hjelp av modRNA etter hjerteinfarkt hos mus.

Levering av modifisert mRNA i en hjerteinfarkt mus modell

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality in the Western world. In the past decade, gene therapy has become a promising ...

Modifisert RNA er en ny metode for genoverføring til hjertet, og andre organer. Denne protokollen vil gi nøyaktig tilnærming til å levere ønskede gener forbigående til hjertet, post hjerteinfarkt. Denne metoden er ikke begrenset til hjerteinfarkt, men kan også brukes på iskemi reperfusion, og tverrgående aorta innsnevring modeller.Modifisert RNA brukes i flere kliniske studier hos mennesker. Det er imidlertid ingen standardisert protokoll for gen overført til hjertet ved hjelp av denne metoden. Visuell demonstrasjon vil gjøre det mulig for forskere å injisere modifisert RNA på riktig måte på passende steder i hjertet.Demonstrere procedule vil være Ajit Magadum, en postdoktor, og Elena Chepurko en dyreveileder fra vårt laboratorium. Basert på konsentrasjonen av tidligere forberedt på modRNA, beregne volumet av modRNA som trengs for en 100 mikrogram injeksjon. Gjør like store mengder sukrose og citrate løsninger.Legg deretter til det beregnede volumet av modRNA, og nok saltvannsløsning for å bringe injeksjonsvolumet til 60 mikroliter. Etter å ha bedøvet dyret, plasser det ventral side opp, med munnen vendt mot eksperimentereren. Deretter for å opprettholde en åpen luftvei ved å utføre intratrakeal intubasjon, trekk forsiktig ut tungen.Juster vinkelen på nakken for å rette opp intubasjonsbanen, og skyv inn intubasjonsmetulaten. Vær oppmerksom på musens thoraxbevegelse for å bekrefte at begge lungene mottar oksygen. Respirasjonsfrekvensen skal være ca. 120 åndedrag per minutt.For å starte LAD ligation, snu musen forsiktig på sin høyre side. løft huden, og utfør en venstresidet thoracotomi mellom tredje og fjerde ribbein. Åpne thoraxen forsiktig, uten å berøre lungene med skarpe gjenstander.Plasser retractors i snittet for å holde thoraxhulen åpen, noe som gir et klart syn på hjertet. Deretter flytter du lungene til kanten av snittet, og fjerner den delen av perikardseken som dekker hjertet. Nøye identifisere LAD, et dypt lys rødt fartøy, som ligger mellom lungearterien og venstre auricle.Ligate den proksimale LAD med en enkelt silke sutur. Bruk en insulinsprøyte til å levere totalt 60 mikroliter av modRNA-løsningen til hjertet. Injiser 20 mikroliter intramuskulært, på tre forskjellige steder.Ett sted på hver side av ligation og en i toppen av hjertet. Den beste måten å injisere den modifiserte RNA på de riktige stedene, er å observere misfarging av vevet under mikroskopet, etter okklusjon av LAD. Også når injisert, ikke gå for dypt inn i vevet for å nå hjertekamrene i sirkulasjonen.Lukk thorax snittet i lag. Første gangs bruk var 6-0 silke som løp suturer for å tilpasse ribbeina. Bruk deretter 5-0 silke kjører suturer for å lukke huden.For gjenopprettingsfasen, fjern kanylen, og la spontan pusting. Plasser dyret på en varmepute til det gjenvinner bevisstheten. Ikke la dyret stå uten tilsyn før det er helt våkent.For å håndtere postsurgisk smerte, injiser buprenorfin subkutant med 12 timers intervaller i tre dager. Ved en dose på 0,1 milligram per kilo kroppsvekt. 24 timer etter LAD-ligation og injeksjon av luciferase modRNA i CFW-mus, ble transinfeksjon validert ved å se etter luciferaseproteinuttrykk ved hjelp av et bioluminescensavbildningssystem.Luciferasesignalet kan tydelig oppdages i bilder som sammenligner kontrollmus, til mus injisert med luciferase modRNA. Kvantifisering av luciferasesignalet viser signifikant høyere proteinuttrykk hos behandlede mus enn i kontrollmus. Cre modRNA-uttrykket ble validert ved å sjekke oversettelsen og biodistribusjonen i transgene ROSA26 mTmG-mus.24 timer etter kirurgi og cre modRNA injeksjon, kunst ble løst og behandlet for immunstaining med kardiomyocytt markør, hjerte troponin I, og kjerner markør DAPI. Vellykket cre uttrykk var tydelig på grunn av utseendet på grønne fargede kardiomyocytter. Et sammenslått bilde viser cre aktiverte celler rundt de to synlige injeksjonsstedene.Blå er kjernefysisk flekk DAPI. Modifisert RNA-plattform kan levere en enkelt gen- eller genkombinasjoner i forskjellige organer. Og dermed kan brukes til terapeutiske formål, for eksempel korrigere genetiske lidelser, eller aktivere gunstige mekanismer i kroppen.Den unike farmakokinetikken til modifisert RNA gjør det mulig for oss å evaluere genfunksjonen umiddelbart etter injeksjonen. Dette gjør det mulig for forskere å målrette signalveier, som endres i de første timene av infarkt.

Research

JoVE Journal

Genetics

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Måle mRNA nivåer Over tid under gjær S. cerevisiae Hypoxic svaret

Complex changes in gene expression typically mediate a large portion of a cellular response. Each gene may change expression with unique kinetics as the ...

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Effektiv produksjon og identifikasjon av CRISPR/Cas9-generert Gene Knockouts i modellsystem Danio rerio

Characterization of the clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system of Streptococcus pyogenes has enabled the development ...

Biotin-based Pulldown Assay to Validate mRNA Targets of Cellular miRNAs

Biotin-baserte Pulldown analysen å validere mRNA mål av mobilnettet miRNAs

MicroRNAs (miRNAs) are a class of small noncoding RNAs that post-transcriptionally regulate cellular gene expression. MiRNAs bind to the 3&#39; ...

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Kvantitativ analyse av Alternative Pre-mRNA skjøting i musen hjernen inndelinger ved hjelp av RNA i Situ hybridisering analysen

Alternative splicing (AS) occurs in more than 90% of human genes. The expression pattern of an alternatively spliced exon is often regulated in a cell ...

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

Bruker Ustilago maydis som en trojansk hest for i Situ levering av mais proteiner

Inspired by Homer&#180;s Trojan horse myth, we engineered the maize pathogen Ustilago maydis to deliver secreted proteins into the maize apoplast ...

Using In Vitro and In-cell SHAPE to Investigate Small Molecule Induced Pre-mRNA Structural Changes

Bruke i Vitro og i celle form å undersøke små molekyl indusert Pre-mRNA strukturelle endringer

In the process of drug development of RNA-targeting small molecules, elucidating the structural changes upon their interactions with target RNA sequences ...

Sequencing of mRNA from Whole Blood using Nanopore Sequencing

Sekvensering av mRNA fra hele Blood bruke Nanopore sekvensering

Sequencing in remote locations and resource-poor settings presents unique challenges. Nanopore sequencing can be successfully used under such conditions, ...

A Non-random Mouse Model for Pharmacological Reactivation of Mecp2 on the Inactive X Chromosome

En ikke-tilfeldig Mouse modell for farmakologisk reaktivering av Mecp2 på inaktiv X-kromosom

X chromosome inactivation (XCI) is the random silencing of one X chromosome in females to achieve gene dosage balance between the sexes. As a result, all ...

Navigating MARRVEL, a Web-Based Tool that Integrates Human Genomics and Model Organism Genetics Information

Navigering MARRVEL, en Web-basert verktøy som integrerer Human Genomics og modell organisme genetikk informasjon

Through whole-exome/genome sequencing, human geneticists identify rare variants that segregate with disease phenotypes. To assess if a specific variant is ...

The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior

Bruk av mus melke tumor celler i en in vitro Invasion analysen som et mål på kreftfremkallende Cell Behavior

The in vitro invasion assay uses a protein-rich matrix in a Boyden chamber to measure the ability of cultured cells to pass through the matrix and a ...