Name: delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model
Uploaded: 2020-06-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

Os autores reconhecem Ann Anu Kurian por sua ajuda com este manuscrito. Este trabalho foi financiado por uma bolsa de iniciação em cardiologia concedida ao laboratório Zangi e também pela concessão do NIH R01 HL142768-01

Todos os procedimentos animais aqui descritos foram aprovados pela Escola de Medicina Icahn no Comitê de Cuidados Institucionais e De Uso do Monte Sinai.
1. Síntese de modRNA
NOTA: Os detalhes da síntese modRNA podem ser encontrados em Kondrat et al.13.
<ol><li>Peça os modelos plasmídeos(Tabela de Materiais)e gere um produto PCR limpo para usar como modelo mRNA.</li>
	<li>Prepare os modRNAs por transcrição in vitro c...

<ol>
	<li>Muruve, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+innate+immune+response+to+adenovirus+vectors.">The innate immune response to adenovirus vectors.</a> Human Gene Therapy. 15 (12), 1157-1166 (2004).</li><li>Donsante, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observed+incidence+of+tumorigenesis+in+long-term+rodent+studies+of+rAAV+vectors.">Observed incidence of tumorigenesis in long-term rodent studies of rAAV vectors.</a> Gene Therapy. 8 (17), 1343-1346 (2001).</li><li>Calcedo, R., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+Immune+Response+to+AAV.">Humoral Immune Response to AAV.</a> Frontiers in Immunology. 4, 341 (2013).</li><li>Diebold, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleic+acid+agonists+for+Toll-like+receptor+7+are+defined+by+the+presence+of+uridine+ribonucleotides.">Nucleic acid agonists for Toll-like receptor 7 are defined by the presence of uridine ribonucleotides.</a> European Journal of Immunology. 36 (12), 3256-3267 (2006).</li><li>Magadum, A., Kaur, K., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA-Based+Protein+Replacement+Therapy+for+the+Heart.">mRNA-Based Protein Replacement Therapy for the Heart.</a> Molecular Therapy. 27 (4), 785-793 (2019).</li><li>Kariko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+of+pseudouridine+into+mRNA+yields+superior+nonimmunogenic+vector+with+increased+translational+capacity+and+biological+stability.">Incorporation of pseudouridine into mRNA yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability.</a> Molecular Therapy. 16 (11), 1833-1840 (2008).</li><li>Hadas, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Modified+mRNA+In+Vitro+Synthesis+Protocol+for+Heart+Gene+Therapy.">Optimizing Modified mRNA In Vitro Synthesis Protocol for Heart Gene Therapy.</a> Molecular Therapy- Methods and Clinical Development. 14, 300-305 (2019).</li><li>Sultana, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Cardiac+Delivery+of+Modified+mRNA.">Optimizing Cardiac Delivery of Modified mRNA.</a> Molecular Therapy. 25 (6), 1306-1315 (2017).</li><li>Zangi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+mRNA+directs+the+fate+of+heart+progenitor+cells+and+induces+vascular+regeneration+after+myocardial+infarction.">Modified mRNA directs the fate of heart progenitor cells and induces vascular regeneration after myocardial infarction.</a> Nature Biotechnology. 31 (10), 898-907 (2013).</li><li>Carlsson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purified+VEGF-A+mRNA+Improves+Cardiac+Function+after+Intracardiac+Injection+1+Week+Post-myocardial+Infarction+in+Swine.">Purified VEGF-A mRNA Improves Cardiac Function after Intracardiac Injection 1 Week Post-myocardial Infarction in Swine.</a> Molecular Therapy Methods Clinical Development. 9, 330-346 (2018).</li><li>Huang, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+chemically+modified+mRNA-based+delivery+of+cytoprotective+factor+promotes+early+cardiomyocyte+survival+post-acute+myocardial+infarction.">Synthetic chemically modified mRNA-based delivery of cytoprotective factor promotes early cardiomyocyte survival post-acute myocardial infarction.</a> Molecular Pharmaceutics. 12 (3), 991-996 (2015).</li><li>Magadum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+of+a+Single+N-Glycosylation+Site+in+Human+FSTL+1+Induces+Cardiomyocyte+Proliferation+and+Cardiac+Regeneration.">Ablation of a Single N-Glycosylation Site in Human FSTL 1 Induces Cardiomyocyte Proliferation and Cardiac Regeneration.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 13, 133-143 (2018).</li><li>Kondrat, J., Sultana, N., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Modified+mRNA+for+Myocardial+Delivery.">Synthesis of Modified mRNA for Myocardial Delivery.</a> Methods in Molecular Biology. 1521, 127-138 (2017).</li><li>Gan, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intradermal+delivery+of+modified+mRNA+encoding+VEGF-A+in+patients+with+type+2+diabetes.">Intradermal delivery of modified mRNA encoding VEGF-A in patients with type 2 diabetes.</a> Nature Communication. 10 (1), 871 (2019).</li></ol>

A terapia genética tem mostrado um enorme potencial para avançar significativamente no tratamento de doenças cardíacas. No entanto, as ferramentas tradicionais empregadas nos ensaios clínicos iniciais para o tratamento de HF têm mostrado sucesso limitado e estão associadas a efeitos colaterais graves. O RNA modificado apresenta uma entrega genética não-viral que está continuamente ganhando popularidade como uma ferramenta de transferência genética no coração. ModRNA não requer localização nuclear de gene...

A terapia genética é uma poderosa ferramenta que envolve a entrega de ácidos nucleicos para o tratamento, cura ou prevenção de doenças humanas. Apesar do progresso nas abordagens diagnósticas e terapêuticas para doenças cardíacas, houve sucesso limitado na entrega de genes no infarto do miocárdio (MI) e insuficiência cardíaca (HF). Por mais simples que o processo de terapia genética pareça, é uma abordagem marcadamente complexa considerando os muitos fatores que precisam ser otimizados antes de empregar um determinado veículo de entrega. O vetor de parto correto deve ser não-imunogênico, eficiente e estável dentro do corpo humano. Os esforços nesse campo geraram dois tipos de sistemas de entrega: viral ou não viral. Os sistemas virais amplamente utilizados, incluindo transferência de genes por adenovírus, retrovírus, lentivírus ou vírus associado ao adeno, mostraram uma capacidade de transdução excepcional. No entanto, seu uso em clínicas é limitado devido à forte resposta imune induzida1, risco de tumorigênese2, ou a presença de anticorpos neutralizantes3, todos os quais permanecem um grande obstáculo para a aplicação ampla e eficaz de vetores virais na terapia genética humana. Por outro lado, apesar de seu impressionante padrão de expressão, a entrega de DNA plasmídeo nu exibe uma baixa eficiência de transfecção, enquanto a transferência de mRNA apresenta alta imunogenicidade e suscetibilidade à degradação pelo RNase4.
Com a extensa pesquisa no campo do mRNA, o modRNA tornou-se uma ferramenta atraente para a entrega de genes ao coração e a vários outros órgãos devido às suas inúmeras vantagens sobre os vetores tradicionais5. A substituição completa do urido por pseudouridina de ocorrência natural resulta em expressão proteica mais robusta e transitória, com indução mínima de resposta imune inata e risco de integração genômica6. Protocolos recentemente estabelecidos utilizam uma quantidade otimizada de analógico de tampa antiverré (ARCA) que aumenta ainda mais a tradução proteica aumentando a estabilidade e transabilidade do mRNA7sintético .
Relatórios anteriores mostraram a expressão de vários genes repórteres ou funcionais entregues por modRNA no miocárdio roedor após MI. Com aplicações de modRNA, áreas significativas do miocárdio, incluindo tanto cardiomiócitos quanto nãocardiomiócitos, foram transfectadas com sucesso lesão pós-cardíaca8 para induzir angiogênese9,,10, sobrevivência de células cardíacas11e proliferação de cardiomiócitos12. Uma única administração de modRNA codificada para follistatina humana mutada 1 induz a proliferação de CMs adultos de camundongos e aumenta significativamente a função cardíaca, diminui o tamanho da cicatriz e aumenta a densidade capilar 4 semanas após o MI12. Um estudo mais recente relatou melhora da função cardíaca após o MI com a aplicação de modRNA VEGFA em um modelo de suíno10.
Assim, com o aumento da popularidade do modRNA no campo cardíaco, é essencial desenvolver e otimizar um protocolo para a entrega de modRNA ao coração pós-MI. Aqui é um protocolo que descreve a preparação e a entrega de modRNA purificado e otimizado em uma formulação citrato-salina biocompatível que fornece expressão proteica robusta e estável sem estimular qualquer resposta imune. O método mostrado neste protocolo e vídeo demonstra o procedimento cirúrgico padrão de um MI de camundongos por ligadura permanente da artéria descendente anterior esquerda (LAD), seguido por três injeções intracardiac de local de modRNA. O objetivo deste artigo é definir claramente um método altamente preciso e reprodutível de entrega de modRNA ao miocárdio murine para tornar a aplicação de modRNA amplamente acessível para terapia genética cardíaca.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antarctic Phosphatase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0289L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-reverse cap analog, 30-O-Mem7G(50) ppp(50)G</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-7003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescense imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>IVIS100 charge-coupled device imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt retractors</td>
			<td>FST</td>
			<td>18200-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac tropnin I</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>47003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytidine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual Anesthesia System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Adson</td>
			<td>FST</td>
			<td>91106-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Dumont #7</td>
			<td>FST</td>
			<td>91197-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In vitro transcription kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>5X MEGAscript T7 Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intubation cannula</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Megaclear kit</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-4279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N1-methylpseudouridine-5-triphosphate</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop Spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen hegar needle holder with suture scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid templates</td>
			<td>GeneArt, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14200-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y433H</td>
			<td>5.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y432H</td>
			<td>6.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>7733G</td>
			<td>7.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 DNase enzyme</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape station</td>
			<td>Aligent</td>
			<td>4200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription clean up kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1908</td>
			<td>Megaclear</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-4 centrifugal filters 10k</td>
			<td>Amicon</td>
			<td>UFC801096</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model

O infarto do miocárdio (MI) é uma das principais causas de morbidade e mortalidade no mundo ocidental. Na última década, a terapia genética tornou-se uma opção promissora de tratamento para doenças cardíacas, devido à sua eficiência e efeitos terapêuticos excepcionais. Em um esforço para reparar o tecido danificado pós-MI, vários estudos têm empregado terapia genética baseada em DNA ou viral, mas enfrentaram obstáculos consideráveis devido à expressão pobre e descontrolada dos genes entregues, edema, arritmia e hipertrofia cardíaca. O mRNA modificado sintético (modRNA) apresenta uma nova abordagem de terapia genética que oferece alta, transitória, segura, não imunomunogênica e entrega mRNA controlada ao tecido cardíaco sem qualquer risco de integração genômica. Devido a essas características notáveis combinadas com sua farmacocinética em forma de sino no coração, o modRNA tornou-se uma abordagem atraente para o tratamento de doenças cardíacas. No entanto, para aumentar sua eficácia in vivo, um método de entrega consistente e confiável precisa ser seguido. Assim, para maximizar a eficiência de entrega do modRNA e a consistência de rendimento no uso de modRNA para aplicações in vivo, é apresentado um método otimizado de preparação e entrega de injeção intracardiac modRNA em um modelo MI de mouse. Este protocolo tornará a entrega de modRNA mais acessível para pesquisas básicas e translacionais.

Camundongos de oito a dez semanas foram anestesiados com isoflurano e entubados. Após o animal estar sob anestesia, a região torácica esquerda foi raspada e esterilizada com etanol, e o coração foi exposto para ligadura LAD. A artéria coronária esquerda foi ocluída por amarrar firmemente a sutura sob a artéria (representação diagrama Figura 1A). Após um infarto bem sucedido (indicado pela paling da parede livre ventricular esquerda), uma injeção direta de 100 μg de Luc ou Cre ...

Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model

Este protocolo apresenta uma maneira simples e coerente de regulamentar transitoriamente um gene de interesse usando modRNA após infarto do miocárdio em camundongos.

Entrega de mRNA modificado em um modelo de mouse de infarto do miocárdio

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality in the Western world. In the past decade, gene therapy has become a promising ...

RNA modificado é um novo método para transferência de genes para o coração, e outros órgãos. Este protocolo fornecerá uma abordagem precisa de entregar genes desejados transitoriamente ao coração, após infarto do miocárdio. Este método não se limita ao infarto do miocárdio, mas também pode ser aplicado à reperfusão de isquemia e modelos de constrição aórtica transversal.O RNA modificado está sendo usado em vários ensaios clínicos em humanos. No entanto, não há um protocolo padronizado para gene transferido para o coração usando este método. A demonstração visual permitirá que os pesquisadores injetem corretamente o RNA modificado em locais apropriados do coração.Demonstrando o procedule estarão Ajit Magadum, pós-doutorando, e Elena Chepurko, supervisora de animais do nosso laboratório. Com base na concentração do previamente preparado no modRNA, calcule o volume de modRNA necessário para uma injeção de 100 microgramas. Faz volumes iguais de sacarose e soluções de citrato.Em seguida, adicione o volume calculado de modRNA, e solução salina suficiente para trazer o volume de injeção para 60 microliters. Depois de anestesiar o animal, coloque-o de lado ventral para cima, com a boca voltada para o experimentador. Em seguida, para manter uma via aérea aberta realizando intubação intratraqueal, puxe suavemente a língua.Ajuste o ângulo do pescoço para endireitar o caminho da intubação e empurre na cânula de intubação. Observe o movimento torácico do camundongo para verificar se ambos os pulmões estão recebendo oxigênio. A taxa respiratória deve ser de aproximadamente 120 respirações por minuto.Para iniciar a ligadura LAD, gire o mouse cuidadosamente para o lado direito. levantar a pele, e realizar uma toracotomia do lado esquerdo entre a terceira e quarta costelas. Abra o tórax cuidadosamente, sem tocar nos pulmões com objetos afiados.Coloque os retráteis na incisão para manter a cavidade torácica aberta, proporcionando uma visão clara do coração. Em seguida, mova os pulmões para a borda da incisão, e remova a parte do saco pericárdico que está cobrindo o coração. Identifique cuidadosamente o LAD, um vaso vermelho de luz profunda, localizado entre a artéria pulmonar e a aurícula esquerda.Ligate o LAD proximal com uma única sutura de seda. Usando uma seringa de insulina, entregue um total de 60 microliters da solução modRNA para o coração. Injete 20 microliters intramuscularmente, em três locais diferentes.Um local em cada lado da ligadura e outro no ápice do coração. A melhor maneira de injetar o RNA modificado nos locais corretos, é observar a descoloração do tecido sob microscópio, após a oclusão de LAD. Também quando injetado, não vá muito fundo no tecido para alcançar as câmaras cardíacas na circulação.Feche a incisão torácica em camadas. O primeiro uso foi 6-0 suturas de seda para adaptar as costelas. Em seguida, use suturas de seda 5-0 para fechar a pele.Para a fase de recuperação, remova a cânula e permita a respiração espontânea. Coloque o animal em uma almofada de aquecimento até que ele recupere a consciência. Não deixe o animal sozinho até que esteja totalmente acordado.Para controlar a dor pós-úrgica, injete buprenorfina subcutânea em intervalos de 12 horas por três dias. A uma dose de 0,1 miligramas por quilograma de peso corporal. 24 horas após a ligadura LAD e a injeção de modRNA de luciferase em camundongos CFW, a transfecção foi validada verificando a expressão proteica da luciferase usando um sistema de imagem de bioluminescência.O sinal de luciferase pode ser claramente detectado em imagens comparando ratos de controle, a ratos injetados com modRNA de luciferase. A quantificação do sinal de luciferase mostra expressão proteica significativamente maior em camundongos tratados do que em camundongos de controle. A expressão cre modRNA foi validada verificando sua tradução e distribuição biológica em camundongos TRANSGÊNICOs ROSA26 mTmG.24 horas após a cirurgia e injeção de cre modRNA, as artes foram fixadas e processadas para imunossaturação com marcador cardiomiocócito, troponina cardíaca I e marcador de núcleos DAPI. A expressão cre bem sucedida ficou evidente devido ao aparecimento de cardiomiócitos de cor verde. Uma imagem mesclada mostra células ativadas por cre ao redor dos dois locais de injeção visível.Azul é a mancha nuclear DAPI. A plataforma RNA modificada pode fornecer uma única combinação de genes ou genes em variedade de órgãos. E assim pode ser usado para fins terapêuticos, como corrigir distúrbios genéticos, ou ativar mecanismos benéficos no corpo.A farmacocinética única do RNA modificado nos permite avaliar a função genética imediatamente após sua injeção. Isso permite que o pesquisador direja vias de sinalização, que são alteradas nas primeiras horas de infarto.

Research

JoVE Journal

Genetics

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Medição de níveis de mRNA ao longo do tempo durante a levedura s. cerevisiae hipóxica resposta

Complex changes in gene expression typically mediate a large portion of a cellular response. Each gene may change expression with unique kinetics as the ...

Genética

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Produção eficiente e identificação de CRISPR/Cas9 gerado pelo Gene nocautes no sistema modelo Danio rerio

Characterization of the clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system of Streptococcus pyogenes has enabled the development ...

Biotin-based Pulldown Assay to Validate mRNA Targets of Cellular miRNAs

Pulldown biotina-baseado do ensaio para validar mRNA miRNAs alvos de celular

MicroRNAs (miRNAs) are a class of small noncoding RNAs that post-transcriptionally regulate cellular gene expression. MiRNAs bind to the 3&#39; ...

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Análise quantitativa de alternativo Pre-mRNA emendar nas seções de cérebro de rato usando o RNA In Situ da hibridação do ensaio

Alternative splicing (AS) occurs in more than 90% of human genes. The expression pattern of an alternatively spliced exon is often regulated in a cell ...

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

Usando o Ustilago maydis como um cavalo de Troia para em Situ entrega de milho proteínas

Inspired by Homer&#180;s Trojan horse myth, we engineered the maize pathogen Ustilago maydis to deliver secreted proteins into the maize apoplast ...

Using In Vitro and In-cell SHAPE to Investigate Small Molecule Induced Pre-mRNA Structural Changes

Usando em forma de Vitro e na célula para investigar a pequena molécula induzida por alterações estruturais Pre-mRNA

In the process of drug development of RNA-targeting small molecules, elucidating the structural changes upon their interactions with target RNA sequences ...

Sequencing of mRNA from Whole Blood using Nanopore Sequencing

Sequenciamento de mRNA de sangue total usando sequenciamento de nanoporos

Sequencing in remote locations and resource-poor settings presents unique challenges. Nanopore sequencing can be successfully used under such conditions, ...

A Non-random Mouse Model for Pharmacological Reactivation of Mecp2 on the Inactive X Chromosome

Um modelo de camundongo não aleatório para reativação farmacológica de Mecp2 no cromossomo X inativo

X chromosome inactivation (XCI) is the random silencing of one X chromosome in females to achieve gene dosage balance between the sexes. As a result, all ...

Navigating MARRVEL, a Web-Based Tool that Integrates Human Genomics and Model Organism Genetics Information

Navegando no MARRVEL, uma ferramenta Web que integra informações da genômica humana e genética de organismos modelo

Through whole-exome/genome sequencing, human geneticists identify rare variants that segregate with disease phenotypes. To assess if a specific variant is ...

The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior

O uso de células tumorais do rato mamário em um ensaio de invasão in vitro como medida de comportamento de células oncogênicas

The in vitro invasion assay uses a protein-rich matrix in a Boyden chamber to measure the ability of cultured cells to pass through the matrix and a ...