Name: delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model
Uploaded: 2020-06-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

Los autores reconocen a Ann Anu Kurian por su ayuda con este manuscrito. Este trabajo fue financiado por una beca de puesta en marcha de cardiología otorgada al laboratorio Zangi y también por la subvención DE NIH R01 HL142768-01

Todos los procedimientos con animales descritos aquí han sido aprobados por la Escuela de Medicina de Icahn en el Comité de Cuidado y Uso Institucional del Monte Sinaí.
1. Síntesis de modRNA
NOTA: Los detalles de la síntesis de modRNA se pueden encontrar en Kondrat et al.13.
<ol><li>Pida las plantillas de plásmido(Tabla de materiales)y genere un producto PCR limpio para utilizarlo como plantilla de ARNm.</li>
	<li>Pre...

<ol>
	<li>Muruve, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+innate+immune+response+to+adenovirus+vectors.">The innate immune response to adenovirus vectors.</a> Human Gene Therapy. 15 (12), 1157-1166 (2004).</li><li>Donsante, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observed+incidence+of+tumorigenesis+in+long-term+rodent+studies+of+rAAV+vectors.">Observed incidence of tumorigenesis in long-term rodent studies of rAAV vectors.</a> Gene Therapy. 8 (17), 1343-1346 (2001).</li><li>Calcedo, R., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+Immune+Response+to+AAV.">Humoral Immune Response to AAV.</a> Frontiers in Immunology. 4, 341 (2013).</li><li>Diebold, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleic+acid+agonists+for+Toll-like+receptor+7+are+defined+by+the+presence+of+uridine+ribonucleotides.">Nucleic acid agonists for Toll-like receptor 7 are defined by the presence of uridine ribonucleotides.</a> European Journal of Immunology. 36 (12), 3256-3267 (2006).</li><li>Magadum, A., Kaur, K., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA-Based+Protein+Replacement+Therapy+for+the+Heart.">mRNA-Based Protein Replacement Therapy for the Heart.</a> Molecular Therapy. 27 (4), 785-793 (2019).</li><li>Kariko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+of+pseudouridine+into+mRNA+yields+superior+nonimmunogenic+vector+with+increased+translational+capacity+and+biological+stability.">Incorporation of pseudouridine into mRNA yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability.</a> Molecular Therapy. 16 (11), 1833-1840 (2008).</li><li>Hadas, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Modified+mRNA+In+Vitro+Synthesis+Protocol+for+Heart+Gene+Therapy.">Optimizing Modified mRNA In Vitro Synthesis Protocol for Heart Gene Therapy.</a> Molecular Therapy- Methods and Clinical Development. 14, 300-305 (2019).</li><li>Sultana, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Cardiac+Delivery+of+Modified+mRNA.">Optimizing Cardiac Delivery of Modified mRNA.</a> Molecular Therapy. 25 (6), 1306-1315 (2017).</li><li>Zangi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+mRNA+directs+the+fate+of+heart+progenitor+cells+and+induces+vascular+regeneration+after+myocardial+infarction.">Modified mRNA directs the fate of heart progenitor cells and induces vascular regeneration after myocardial infarction.</a> Nature Biotechnology. 31 (10), 898-907 (2013).</li><li>Carlsson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purified+VEGF-A+mRNA+Improves+Cardiac+Function+after+Intracardiac+Injection+1+Week+Post-myocardial+Infarction+in+Swine.">Purified VEGF-A mRNA Improves Cardiac Function after Intracardiac Injection 1 Week Post-myocardial Infarction in Swine.</a> Molecular Therapy Methods Clinical Development. 9, 330-346 (2018).</li><li>Huang, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+chemically+modified+mRNA-based+delivery+of+cytoprotective+factor+promotes+early+cardiomyocyte+survival+post-acute+myocardial+infarction.">Synthetic chemically modified mRNA-based delivery of cytoprotective factor promotes early cardiomyocyte survival post-acute myocardial infarction.</a> Molecular Pharmaceutics. 12 (3), 991-996 (2015).</li><li>Magadum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+of+a+Single+N-Glycosylation+Site+in+Human+FSTL+1+Induces+Cardiomyocyte+Proliferation+and+Cardiac+Regeneration.">Ablation of a Single N-Glycosylation Site in Human FSTL 1 Induces Cardiomyocyte Proliferation and Cardiac Regeneration.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 13, 133-143 (2018).</li><li>Kondrat, J., Sultana, N., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Modified+mRNA+for+Myocardial+Delivery.">Synthesis of Modified mRNA for Myocardial Delivery.</a> Methods in Molecular Biology. 1521, 127-138 (2017).</li><li>Gan, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intradermal+delivery+of+modified+mRNA+encoding+VEGF-A+in+patients+with+type+2+diabetes.">Intradermal delivery of modified mRNA encoding VEGF-A in patients with type 2 diabetes.</a> Nature Communication. 10 (1), 871 (2019).</li></ol>

La terapia génica ha demostrado un enorme potencial para avanzar significativamente en el tratamiento de la enfermedad cardíaca. Sin embargo, herramientas tradicionales empleadas en los ensayos clínicos iniciales para el tratamiento de la IC han demostrado un éxito limitado y están asociadas con efectos secundarios graves. El ARN modificado presenta un suministro de genes no virales que está ganando popularidad continuamente como herramienta de transferencia de genes en el corazón. ModRNA no requiere localización...

La terapia génica es una poderosa herramienta que implica la administración de ácidos nucleicos para el tratamiento, cura o prevención de enfermedades humanas. A pesar de los avances en los enfoques diagnósticos y terapéuticos para las enfermedades cardíacas, ha habido un éxito limitado en la administración de genes en el infarto de miocardio (MI) y la insuficiencia cardíaca (HF). Tan sencillo como parece el proceso de la terapia génica, es un enfoque marcadamente complejo teniendo en cuenta los muchos factores que deben optimizarse antes de emplear un vehículo de entrega en particular. El vector de administración correcto debe ser no inmunogénico, eficiente y estable dentro del cuerpo humano. Los esfuerzos en este campo han generado dos tipos de sistemas de administración: viral o no viral. Los sistemas virales ampliamente utilizados, incluida la transferencia de genes por adenovirus, retrovirus, lentivirus o virus asociados al adeno, han demostrado una capacidad de transducción excepcional. Sin embargo, su uso en clínicas es limitado debido a la fuerte respuesta inmune inducida1, riesgo de tumorigenesis2, o la presencia de anticuerpos neutralizantes3, todos los cuales siguen siendo un obstáculo importante para la aplicación amplia y eficaz de vectores virales en la terapia génica humana. Por otro lado, a pesar de su impresionante patrón de expresión, la entrega de ADN plásmido desnudo muestra una baja eficiencia de transfección, mientras que la transferencia de ARNm presenta una alta inmunogenicidad y susceptibilidad a la degradación por RNase4.
Con la extensa investigación en el campo del ARNm, modRNA se ha convertido en una herramienta atractiva para la entrega de genes al corazón y varios otros órganos debido a sus numerosas ventajas sobre los vectores tradicionales5. La sustitución completa de la uridina por pseudouridina de origen natural da como resultado una expresión proteica más robusta y transitoria, con una inducción mínima de la respuesta inmunitaria innata y el riesgo de integración genómica6. Los protocolos recientemente establecidos utilizan una cantidad optimizada de análogo de tapa antirrevertida (ARCA) que mejora aún más la traducción de proteínas al aumentar la estabilidad y transabilidad del ARNm sintético7.
Informes anteriores han mostrado la expresión de varios genes reporteros o funcionales entregados por modRNA en el miocardio de roedores después de MI. Con las aplicaciones de modRNA, áreas significativas del miocardio, incluyendo tanto cardiomiocitos como nocardiomiocitos, han sido trans infectadas con éxito lesión post-cardiaca8 para inducir la angiogénesis9,10, supervivencia de células cardíacas11, y la proliferación de cardiomiocitos12. Una sola administración de modRNA codificado para la follistatina humana mutada-como 1 induce la proliferación de CM adultos de ratón y aumenta significativamente la función cardíaca, disminuye el tamaño de la cicatriz, y aumenta la densidad capilar 4 semanas después de MI12. Un estudio más reciente reportó mejor función cardíaca después de MI con la aplicación de VEGFA modRNA en un modelo de cerdo10.
Por lo tanto, con la mayor popularidad del modRNA en el campo cardíaco, es esencial desarrollar y optimizar un protocolo para la entrega de modRNA al corazón post-MI. Aquí es un protocolo que describe la preparación y entrega de modRNA purificado y optimizado en una formulación biocompatible citrato-salina que proporciona una expresión de proteína robusta y estable sin estimular ninguna respuesta inmune. El método mostrado en este protocolo y vídeo demuestra el procedimiento quirúrgico estándar de un MI de ratón por ligación permanente de la arteria descendente anterior izquierda (LAD), seguido de tres inyecciones intracardiacas del sitio de modRNA. El objetivo de este artículo es definir claramente un método altamente preciso y reproducible de administración de modRNA al miocardio murino para hacer que la aplicación modRNA sea ampliamente accesible para la terapia génica cardíaca.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antarctic Phosphatase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0289L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-reverse cap analog, 30-O-Mem7G(50) ppp(50)G</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-7003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescense imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>IVIS100 charge-coupled device imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt retractors</td>
			<td>FST</td>
			<td>18200-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac tropnin I</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>47003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytidine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual Anesthesia System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Adson</td>
			<td>FST</td>
			<td>91106-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Dumont #7</td>
			<td>FST</td>
			<td>91197-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In vitro transcription kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>5X MEGAscript T7 Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intubation cannula</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Megaclear kit</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-4279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N1-methylpseudouridine-5-triphosphate</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop Spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen hegar needle holder with suture scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid templates</td>
			<td>GeneArt, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14200-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y433H</td>
			<td>5.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y432H</td>
			<td>6.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>7733G</td>
			<td>7.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 DNase enzyme</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape station</td>
			<td>Aligent</td>
			<td>4200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription clean up kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1908</td>
			<td>Megaclear</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-4 centrifugal filters 10k</td>
			<td>Amicon</td>
			<td>UFC801096</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model

El infarto de miocardio (MI) es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en el mundo occidental. En la última década, la terapia génica se ha convertido en una opción de tratamiento prometedor para las enfermedades cardíacas, debido a su eficiencia y efectos terapéuticos excepcionales. En un esfuerzo por reparar el tejido dañado después de la MI, varios estudios han empleado terapia génica viral o basada en el ADN, pero han enfrentado obstáculos considerables debido a la expresión pobre e incontrolada de los genes entregados, edema, arritmia e hipertrofia cardíaca. El ARNm modificado sintético (MODRNA) presenta un novedoso enfoque de terapia génica que ofrece un suministro de ARNm alto, transitorio, seguro, no nommunogénico y controlado al tejido cardíaco sin ningún riesgo de integración genómica. Debido a estas características notables combinadas con su farmacocinética en forma de campana en el corazón, modRNA se ha convertido en un enfoque atractivo para el tratamiento de enfermedades del corazón. Sin embargo, para aumentar su eficacia in vivo, es necesario seguir un método de entrega coherente y fiable. Por lo tanto, para maximizar la eficiencia de la entrega de modRNA y la consistencia del rendimiento en el uso de modRNA para aplicaciones in vivo, se presenta un método optimizado de preparación y entrega de la inyección intracardiaca modRNA en un modelo MI de ratón. Este protocolo hará que la entrega de modRNA sea más accesible para la investigación básica y traslacional.

Ratones de ocho a diez semanas de edad fueron anestesiados con isoflurano e intubados. Después de que el animal estaba bajo anestesia, la región torácica izquierda fue afeitada y esterilizada con etanol, y el corazón fue expuesto para la ligadura de LAD. La arteria coronaria izquierda se ocluyó anudando firmemente la sutura debajo de la arteria (representación del diagrama Figura 1A). Después de un infarto exitoso (indicado por el paling de la pared libre ventricular izquierda), se en...

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Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model

Este protocolo presenta una manera simple y coherente de regular transitoriamente un gen de interés utilizando modRNA después del infarto de miocardio en ratones.

Entrega de ARNm modificado en un modelo de ratón de infarto de miocardio

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality in the Western world. In the past decade, gene therapy has become a promising ...

El ARN modificado es un método novedoso para la transferencia de genes al corazón y a otros órganos. Este protocolo proporcionará un enfoque preciso de la entrega de genes deseados transitoriamente al corazón, después del infarto de miocardio. Este método no se limita al infarto de miocardio, sino que también se puede aplicar a la reperfusión de isquemia y a los modelos de constricción aórtica transversal.El ARN modificado se utiliza en varios ensayos clínicos en humanos. Sin embargo, no existe un protocolo estandarizado para el gen transferido al corazón utilizando este método. La demostración visual permitirá a los investigadores inyectar correctamente ARN modificado en los sitios apropiados del corazón.Demostrando el procedule estarán Ajit Magadum, un tipo postdoctoral, y Elena Chepurko, supervisora animal de nuestro laboratorio. Sobre la base de la concentración de la previamente preparada en modRNA, calcular el volumen de modRNA necesario para una inyección de 100 microgramos. Hace volúmenes iguales de soluciones de sacarosa y citrato.A continuación, agregue el volumen calculado de modRNA, y suficiente solución salina para llevar el volumen de inyección a 60 microlitros. Después de anestesiar al animal, colóquelo hacia arriba, con la boca hacia el experimentador. A continuación, para mantener una vía aérea abierta mediante la realización de intubación intratraqueal, tire suavemente de la lengua.Ajuste el ángulo del cuello para enderezar la trayectoria de intubación y empuje la cánula de intubación. Observe el movimiento torácico del ratón para verificar que ambos pulmones están recibiendo oxígeno. La frecuencia respiratoria debe ser de aproximadamente 120 respiraciones por minuto.Para comenzar la ligadura LAD, gire el ratón cuidadosamente sobre su lado derecho. levantar la piel, y realizar una toracotomía del lado izquierdo entre la tercera y la cuarta costillas. Abra el tórax con cuidado, sin tocar los pulmones con objetos afilados.Coloque los retractores en la incisión para mantener la cavidad torácica abierta, proporcionando una visión clara del corazón. A continuación, mueva los pulmones al borde de la incisión y retire la parte del saco pericárdico que está cubriendo el corazón. Identifique cuidadosamente el LAD, un vaso rojo claro, situado entre la arteria pulmonar y la aurícula izquierda.Ligar el LAD proximal con una sola sutura de seda. Con una jeringa de insulina, administre al corazón un total de 60 microlitros de la solución modRNA. Inyectar 20 microlitros por vía intramuscular, en tres sitios diferentes.Un sitio a cada lado de la ligadura y otro en el ápice del corazón. La mejor manera de inyectar el ARN modificado en los sitios correctos, es observar la decoloración del tejido bajo el microscopio, después de la oclusión de LAD. También cuando se inyecta, no vaya demasiado profundo en el tejido para llegar a las cavidades del corazón en la circulación.Cierre la incisión torácica en capas. El primer uso fue 6-0 suturas de running de seda para adaptar las costillas. A continuación, utilice suturas de running de seda 5-0 para cerrar la piel.Para la fase de recuperación, retire la cánula y permita la respiración espontánea. Coloque el animal en una almohadilla calefactora hasta que recupere la conciencia. No deje al animal desatendido hasta que esté completamente despierto.Para controlar el dolor postquirúrgico, inyecte buprenorfina por vía subcutánea a intervalos de 12 horas durante tres días. A una dosis de 0,1 miligramos por kilogramo de peso corporal. 24 horas después de la ligadura de LAD y la inyección de modRNA luciferasa en ratones CFW, la transfección se validó comprobando la expresión de la proteína luciferasa utilizando un sistema de imágenes de bioluminiscencia.La señal de luciferasa se puede detectar claramente en imágenes que comparan ratones de control, con ratones inyectados con modRNA luciferasa. La cuantificación de la señal de luciferasa muestra una expresión proteica significativamente mayor en ratones tratados que en ratones de control. La expresión de cre modRNA fue validada comprobando su traducción y biodispresión en ratones transgénicos ROSA26 mTmG.24 horas después de la cirugía y la inyección de cre modRNA, las artes se fijaron y procesaron para la inmunomancha con marcador de cardiomiocitos, troponina cardíaca I y marcador de núcleos DAPI. La expresión exitosa de la cre era evidente debido a la aparición de cardiomiocitos de color verde. Una imagen combinada muestra celdas activadas cre alrededor de los dos sitios de inyección visibles.El azul es la mancha nuclear DAPI. La plataforma de ARN modificada puede proporcionar un solo gen o combinaciones genéticas en una variedad de órganos. Y por lo tanto se puede utilizar con fines terapéuticos, tales como corregir trastornos genéticos, o la activación de mecanismos beneficiosos en el cuerpo.La farmacocinética única del ARN modificado nos permite evaluar la función génica inmediatamente después de su inyección. Esto permite al investigador apuntar a las vías de señalización, que se alteran en las primeras horas de infarto.

Research

JoVE Journal

Genetics

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Medición de los niveles de mRNA con el tiempo durante la levadura S. cerevisiae por respuesta hipóxica

Complex changes in gene expression typically mediate a large portion of a cellular response. Each gene may change expression with unique kinetics as the ...

Investigación

Genética

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Producción eficiente y genera identificación de CRISPR/Cas9 Gene Knockouts en el sistema modelo Danio rerio

Characterization of the clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system of Streptococcus pyogenes has enabled the development ...

Biotin-based Pulldown Assay to Validate mRNA Targets of Cellular miRNAs

Desplegable base de biotina de ensayo a validar mRNA miRNAs objetivos de celular

MicroRNAs (miRNAs) are a class of small noncoding RNAs that post-transcriptionally regulate cellular gene expression. MiRNAs bind to the 3&#39; ...

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Análisis cuantitativo de empalmes alternativos del Pre-mRNA en secciones de cerebro de ratón usando análisis de ARN In Situ hibridación

Alternative splicing (AS) occurs in more than 90% of human genes. The expression pattern of an alternatively spliced exon is often regulated in a cell ...

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Uso de Ustilago maydis como un caballo de Troya en Situ entrega de maíz las proteínas

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