Name: delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model
Uploaded: 2020-06-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

Författarna erkänner Ann Anu Kurian för hennes hjälp med detta manuskript. Detta arbete finansierades av ett kardiologistartsbidrag som beviljats Zangilaboratoriet och även av NIH-stipendiet R01 HL142768-01

Alla djurförsök som beskrivs här har godkänts av Icahn School of Medicine på Mount Sinai Institutionsvård och användning kommittén.
1. Syntes av modRNA
OBS: Detaljerna i modRNA syntes finns i Kondrat et al.13.
<ol><li>Beställ plasmidmallarna (Tabell över material) och generera en ren PCR-produkt som ska användas som mRNA-mall.</li>
	<li>Förbered modRNAs genom transkription in vitro med en anpassad ribonucleoside...

<ol>
	<li>Muruve, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+innate+immune+response+to+adenovirus+vectors.">The innate immune response to adenovirus vectors.</a> Human Gene Therapy. 15 (12), 1157-1166 (2004).</li><li>Donsante, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observed+incidence+of+tumorigenesis+in+long-term+rodent+studies+of+rAAV+vectors.">Observed incidence of tumorigenesis in long-term rodent studies of rAAV vectors.</a> Gene Therapy. 8 (17), 1343-1346 (2001).</li><li>Calcedo, R., Wilson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+Immune+Response+to+AAV.">Humoral Immune Response to AAV.</a> Frontiers in Immunology. 4, 341 (2013).</li><li>Diebold, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleic+acid+agonists+for+Toll-like+receptor+7+are+defined+by+the+presence+of+uridine+ribonucleotides.">Nucleic acid agonists for Toll-like receptor 7 are defined by the presence of uridine ribonucleotides.</a> European Journal of Immunology. 36 (12), 3256-3267 (2006).</li><li>Magadum, A., Kaur, K., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mRNA-Based+Protein+Replacement+Therapy+for+the+Heart.">mRNA-Based Protein Replacement Therapy for the Heart.</a> Molecular Therapy. 27 (4), 785-793 (2019).</li><li>Kariko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+of+pseudouridine+into+mRNA+yields+superior+nonimmunogenic+vector+with+increased+translational+capacity+and+biological+stability.">Incorporation of pseudouridine into mRNA yields superior nonimmunogenic vector with increased translational capacity and biological stability.</a> Molecular Therapy. 16 (11), 1833-1840 (2008).</li><li>Hadas, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Modified+mRNA+In+Vitro+Synthesis+Protocol+for+Heart+Gene+Therapy.">Optimizing Modified mRNA In Vitro Synthesis Protocol for Heart Gene Therapy.</a> Molecular Therapy- Methods and Clinical Development. 14, 300-305 (2019).</li><li>Sultana, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+Cardiac+Delivery+of+Modified+mRNA.">Optimizing Cardiac Delivery of Modified mRNA.</a> Molecular Therapy. 25 (6), 1306-1315 (2017).</li><li>Zangi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+mRNA+directs+the+fate+of+heart+progenitor+cells+and+induces+vascular+regeneration+after+myocardial+infarction.">Modified mRNA directs the fate of heart progenitor cells and induces vascular regeneration after myocardial infarction.</a> Nature Biotechnology. 31 (10), 898-907 (2013).</li><li>Carlsson, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purified+VEGF-A+mRNA+Improves+Cardiac+Function+after+Intracardiac+Injection+1+Week+Post-myocardial+Infarction+in+Swine.">Purified VEGF-A mRNA Improves Cardiac Function after Intracardiac Injection 1 Week Post-myocardial Infarction in Swine.</a> Molecular Therapy Methods Clinical Development. 9, 330-346 (2018).</li><li>Huang, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+chemically+modified+mRNA-based+delivery+of+cytoprotective+factor+promotes+early+cardiomyocyte+survival+post-acute+myocardial+infarction.">Synthetic chemically modified mRNA-based delivery of cytoprotective factor promotes early cardiomyocyte survival post-acute myocardial infarction.</a> Molecular Pharmaceutics. 12 (3), 991-996 (2015).</li><li>Magadum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ablation+of+a+Single+N-Glycosylation+Site+in+Human+FSTL+1+Induces+Cardiomyocyte+Proliferation+and+Cardiac+Regeneration.">Ablation of a Single N-Glycosylation Site in Human FSTL 1 Induces Cardiomyocyte Proliferation and Cardiac Regeneration.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 13, 133-143 (2018).</li><li>Kondrat, J., Sultana, N., Zangi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Modified+mRNA+for+Myocardial+Delivery.">Synthesis of Modified mRNA for Myocardial Delivery.</a> Methods in Molecular Biology. 1521, 127-138 (2017).</li><li>Gan, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intradermal+delivery+of+modified+mRNA+encoding+VEGF-A+in+patients+with+type+2+diabetes.">Intradermal delivery of modified mRNA encoding VEGF-A in patients with type 2 diabetes.</a> Nature Communication. 10 (1), 871 (2019).</li></ol>

Genterapi har visat en enorm potential att avsevärt främja behandling av hjärtsjukdom. Emellertid, traditionella verktyg som används i de inledande kliniska prövningarna för behandling av HF har visat begränsad framgång och är associerade med allvarliga biverkningar. Modifierad RNA presenterar en icke-viral genleverans som ständigt ökar i popularitet som ett genöverföringsverktyg i hjärtat. ModRNA kräver ingen kärnlokalisering av gener för översättning, och erbjuder därmed ett effektivt och snabbt utt...

Genterapi är ett kraftfullt verktyg som innebär leverans av nukleinsyror för behandling, botemedel eller förebyggande av mänskliga sjukdomar. Trots framstegen i diagnostiska och terapeutiska metoder för hjärtsjukdomar, det har varit begränsad framgång i leveransen av gener i hjärtinfarkt (MI) och hjärtsvikt (HF). Så enkelt som processen för genterapi verkar, är det ett markant komplext tillvägagångssätt med tanke på de många faktorer som måste optimeras innan du använder ett visst leveransfordon. Rätt leveransvektor bör vara icke-immunogen, effektiv och stabil inuti människokroppen. Insatser på detta område har genererat två typer av leveranssystem: viral eller icke-viral. De allmänt använda virussystemen, inklusive genöverföring av adenovirus, retrovirus, lentivirus eller adeno-associerade virus, har visat exceptionell transduktionskapacitet. Emellertid, deras användning på kliniker är begränsad på grund av det starka immunsvaret inducerad1, risk för tumorigenesis2, eller förekomsten av neutraliserande antikroppar3, som alla förblir ett stort hinder för bred och effektiv tillämpning av viral vektorer i mänskliga genterapi. Å andra sidan, trots deras imponerande uttryck mönster, leverans av nakna plasmid DNA visar en låg transfection effektivitet, medan mRNA överföring presenterar hög immunogenicitet och känslighet för nedbrytning av RNase4.
Med den omfattande forskningen inom mRNA har modRNA blivit ett attraktivt verktyg för leverans av gener till hjärtat och olika andra organ på grund av dess många fördelar jämfört med traditionella vektorer5. Fullständig ersättning av uridin med naturligt förekommande pseudouridin resulterar i mer robust och övergående proteinuttryck, med minimal induktion av medfödd immunsvar och risk för genomisk integration6. Nyligen etablerade protokoll använder en optimerad mängd anti-reverse cap analog (ARCA) som ytterligare förbättrar proteinöversättningen genom att öka stabiliteten och transabilityen hos den syntetiska mRNA7.
Tidigare rapporter har visat uttryck för olika reporter eller funktionella gener levereras av modRNA i gnagare hjärtmuskeln efter MI. Med modRNA applikationer, betydande områden av hjärtmuskeln, inklusive både kardiomyocyter och noncardiomyocytes, har framgångsrikt transfected post-hjärt skada8 att inducera angiogenes9,10, hjärtcell överlevnad11, och kardiomyocyte spridning12. En enda administrering av modRNA kodade för muterade mänskliga follistatin-liknande 1 inducerar spridningen av mus vuxna CMs och avsevärt ökar hjärtfunktion, minskar ärr storlek, och ökar kapillärdensitet 4 veckor efter MI12. En nyare studie rapporterade förbättrad hjärtfunktion efter MI med tillämpning av VEGFA modRNA i en svin modell10.
Således, med den ökade populariteten av modRNA i hjärtfältet, är det viktigt att utveckla och optimera ett protokoll för leverans av modRNA till hjärtat post-MI. Herein är ett protokoll som beskriver beredning och leverans av renad och optimerad modRNA i en biokompatibel citrat-saltlösning formulering som ger robust, stabilt protein uttryck utan att stimulera något immunsvar. Den metod som visas i detta protokoll och video visar standard kirurgiska ingrepp av en mus MI av permanent ligering av den vänstra främre fallande gatan (LAD), följt av tre plats intracardiac injektioner av modRNA. Syftet med detta dokument är att tydligt definiera en mycket exakt och reproducerbar metod för modRNA leverans till murine hjärtmuskeln för att göra modRNA ansökan allmänt tillgänglig för hjärt genterapi.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antarctic Phosphatase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0289L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-reverse cap analog, 30-O-Mem7G(50) ppp(50)G</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-7003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioluminescense imaging system</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>124262</td>
			<td>IVIS100 charge-coupled device imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blunt retractors</td>
			<td>FST</td>
			<td>18200-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac tropnin I</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>47003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytidine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual Anesthesia System</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>75-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Adson</td>
			<td>FST</td>
			<td>91106-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps- Dumont #7</td>
			<td>FST</td>
			<td>91197-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guanosine triphosphate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In vitro transcription kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>5X MEGAscript T7 Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intubation cannula</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Megaclear kit</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse ventilator</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>73-4279</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N1-methylpseudouridine-5-triphosphate</td>
			<td>TriLink Biotechnologies</td>
			<td>N-1081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoDrop Spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olsen hegar needle holder with suture scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>12002-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid templates</td>
			<td>GeneArt, Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14200-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y433H</td>
			<td>5.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>Y432H</td>
			<td>6.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>7733G</td>
			<td>7.00</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T7 DNase enzyme</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AMB13345</td>
			<td>Included in Megascript kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tape station</td>
			<td>Aligent</td>
			<td>4200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription clean up kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM1908</td>
			<td>Megaclear</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-4 centrifugal filters 10k</td>
			<td>Amicon</td>
			<td>UFC801096</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

delivery of modified mrna in a myocardial infarction mouse model

Hjärtinfarkt (MI) är en ledande orsak till sjuklighet och dödlighet i västvärlden. Under det senaste årtiondet har genterapi blivit ett lovande behandlingsalternativ för hjärtsjukdomar, på grund av dess effektivitet och exceptionella terapeutiska effekter. I ett försök att reparera den skadade vävnaden efter MI, olika studier har använt DNA-baserade eller viral genterapi men har ställts inför betydande hinder på grund av de fattiga och okontrollerade uttryck av de levererade gener, ödem, arytmi och hjärt hypertrofi. Syntetisk modifierad mRNA (modRNA) presenterar en ny genterapi metod som erbjuder hög, övergående, säker, nonimmunogenic, och kontrollerad mRNA leverans till hjärtvävnaden utan risk för genomisk integration. På grund av dessa anmärkningsvärda egenskaper i kombination med dess klockformade farmakokinetik i hjärtat, modRNA har blivit en attraktiv metod för behandling av hjärtsjukdomar. För att öka dess effektivitet in vivo måste dock en konsekvent och tillförlitlig leveransmetod följas. Därför, för att maximera modRNA leverans effektivitet och avkastning konsekvens i modRNA användning för in vivo applikationer, en optimerad metod för beredning och leverans av modRNA intracardiac injektion i en mus MI modell presenteras. Detta protokoll kommer att göra modRNA-leverans mer tillgänglig för grundläggande och translationell forskning.

Åtta till tio veckor gamla möss var sövda med isofluran och intubated. Efter djuret var under anestesi, var den vänstra bröst regionen rakade och steriliserade med etanol, och hjärtat exponerades för LAD ligering. Den vänstra kranskärlen var ockluderas genom att fast knyta suturen under artären (diagram representation Figur 1A). Efter en lyckad hjärtinfarkt (indikerad av paling av den vänstra ventrikulära fria väggen), en direkt injektion av 100 μg Luc eller Cre modRNA upplös...

Watch this Scientific Journal Video about Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model at JoVE.com

Delivery of Modified mRNA in a Myocardial Infarction Mouse Model

Detta protokoll presenterar ett enkelt och sammanhängande sätt att övergående upregulate en gen av intresse med modRNA efter hjärtinfarkt hos möss.

Leverans av modifierad mRNA i en hjärtinfarkt Mus modell

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality in the Western world. In the past decade, gene therapy has become a promising ...

Modifierat RNA är en ny metod för genöverföring till hjärtat, och andra organ. Detta protokoll kommer att ge korrekt metod för att leverera önskade gener övergående till hjärtat, efter hjärtinfarkt. Denna metod är inte begränsad till hjärtinfarkt, men kan också tillämpas på ischemi reperfusion, och tvärgående aortaförträngningsmodeller.Modifierat RNA används i flera kliniska prövningar på människa. Det finns dock inget standardiserat protokoll för gen som överförs till hjärtat med denna metod. Visuell demonstration kommer att göra det möjligt för forskare att korrekt injicera modifierat RNA på lämpliga platser i hjärtat.Demonstrerar prodovan kommer att Ajit Magadum, en postdoktor, och Elena Chepurko ett djur handledare från vårt laboratorium. Baserat på koncentrationen av den tidigare beredda vid modRNA, beräkna volymen av modRNA som behövs för en 100 mikrogram injektion. Gör lika stora volymer sackaros och citratlösningar.Lägg sedan den beräknade volymen av modRNA, och tillräckligt saltlösning för att få injektionsvolymen till 60 mikroliter. Efter sövning djuret, placera den ventrala sidan upp, med munnen vänd mot experimentören. Sedan för att upprätthålla en öppen luftväg genom att utföra intratrakeal intubation, försiktigt dra ut tungan.Justera vinkeln på halsen för att räta ut intubationsbanan, och tryck in intubationskanylen. Observera musens bröströrelse för att verifiera att båda lungorna får syre. Andningsfrekvensen bör vara cirka 120 andetag per minut.För att börja LAD-ligeringen, vrid musen försiktigt på dess högra sida. lyfta huden, och utföra en vänstersidig thorakotomi mellan tredje och fjärde revben. Öppna bröstkorgen försiktigt, utan att vidröra lungorna med några vassa föremål.Placera upprullningsdon i snittet för att hålla brösthålan öppen, vilket ger en klar bild av hjärtat. Därefter flyttar lungorna till kanten av snittet, och ta bort den del av perikardialsäcken som täcker hjärtat. Identifiera försiktigt LAD, ett djupt ljusrött kärl, som ligger mellan lungartären och den vänstra auricle.Ligate den proximala LAD med en enda siden sutur. Med hjälp av en insulinspruta, leverera totalt 60 mikroliter av modRNA-lösningen till hjärtat. Injicera 20 mikroliter intramuskulärt, på tre olika platser.En plats på varje sida av ligering och en i spetsen av hjärtat. Det bästa sättet att injicera det modifierade RNA på rätt platser, är att observera missfärgningen av vävnaden under mikroskop, efter ocklusion av LAD. Även när injiceras, inte gå för djupt in i vävnaden för att nå hjärtat kamrarna i cirkulationen.Stäng bröstansionen i lager. Första användningen var 6-0 siden rinnande suturer för att anpassa revbenen. Använd sedan 5-0 siden rinnande suturer för att stänga huden.För återhämtningsfasen, ta bort kanylen, och tillåta spontan andning. Placera djuret på en värmedyna tills det återfår medvetandet. Lämna inte djuret utan uppsikt förrän det är helt vaket.För att hantera postkirurgisk smärta, injicera buprenorfin subkutant med 12 timmars intervall i tre dagar. Vid en dos av 0,1 milligram per kilo kroppsvikt. 24 timmar efter LAD-ligering och injektion av luciferasmodRNA i CFW-möss validerades transfektion genom kontroll av luciferasproteinuttryck med hjälp av ett bioluminescensbildsystem.Luciferassignalen kan tydligt detekteras i bilder som jämför kontrollmöss, till möss som injiceras med luciferasmodERA. Kvantifiering av luciferassignalen visar signifikant högre proteinuttryck hos behandlade möss än hos kontrollmöss. Cre modRNA uttryck validerades genom att kontrollera dess översättning och bio distribution i transgena ROSA26 mTmG möss.24 timmar efter kirurgi och cre modRNA injektion, var konst fast och bearbetas för immunfärgning med kardiomyocyte markör, hjärt troponin I och kärnor markör DAPI. Framgångsrika cre uttryck var uppenbart på grund av utseendet på gröna färgade kardiomyocyter. En sammanslagen bild visar cre aktiverade celler runt de två synliga injektionsställen.Blå är den nukleära fläcken DAPI. Modifierad RNA-plattform kan leverera en enda gen eller genkombinationer i olika organ. Och därmed kan användas för terapeutiska ändamål, såsom att korrigera genetiska sjukdomar, eller aktivera nyttiga mekanismer i kroppen.Den unika farmakokinetiken hos modifierat RNA gör det möjligt för oss att utvärdera genfunktionen omedelbart efter dess injektion. Detta gör det möjligt för forskare att rikta signalvägar, som ändras under de första timmarna av infarkt.

Research

JoVE Journal

Genetics

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Mäta mRNA nivåer över tid under den jäst S. cerevisiae hypoxisk svar

Complex changes in gene expression typically mediate a large portion of a cellular response. Each gene may change expression with unique kinetics as the ...

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Efficient Production and Identification of CRISPR/Cas9-generated Gene Knockouts in the Model System Danio rerio

Effektiv produktion och identifiering av CRISPR/Cas9-genererade gen Knockouts i det modellsystem Danio rerio

Characterization of the clustered, regularly interspaced, short, palindromic repeat (CRISPR) system of Streptococcus pyogenes has enabled the development ...

Biotin-based Pulldown Assay to Validate mRNA Targets of Cellular miRNAs

Biotin-baserade Pulldown Assay att validera mRNA mål av cellulära MicroRNA

MicroRNAs (miRNAs) are a class of small noncoding RNAs that post-transcriptionally regulate cellular gene expression. MiRNAs bind to the 3&#39; ...

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Quantitative Analysis of Alternative Pre-mRNA Splicing in Mouse Brain Sections Using RNA In Situ Hybridization Assay

Kvantitativ analys av alternativa Pre-mRNA Splicing i mus hjärnan sektioner med RNA In Situ hybridisering analys

Alternative splicing (AS) occurs in more than 90% of human genes. The expression pattern of an alternatively spliced exon is often regulated in a cell ...

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

Using Ustilago maydis as a Trojan Horse for In Situ Delivery of Maize Proteins

Med hjälp av Ustilago maydis som en trojansk häst för i Situ leverans av majs proteiner

Inspired by Homer&#180;s Trojan horse myth, we engineered the maize pathogen Ustilago maydis to deliver secreted proteins into the maize apoplast ...

Using In Vitro and In-cell SHAPE to Investigate Small Molecule Induced Pre-mRNA Structural Changes

Använda i Vitro och i cell form att undersöka småmolekylära inducerad Pre-mRNA strukturella förändringar

In the process of drug development of RNA-targeting small molecules, elucidating the structural changes upon their interactions with target RNA sequences ...

Sequencing of mRNA from Whole Blood using Nanopore Sequencing

Sekvensering av mRNA från helblod med Nanopore sekvensering

Sequencing in remote locations and resource-poor settings presents unique challenges. Nanopore sequencing can be successfully used under such conditions, ...

A Non-random Mouse Model for Pharmacological Reactivation of Mecp2 on the Inactive X Chromosome

En icke-slumpmässig mus modell för farmakologisk Reaktive ring av Mecp2 på inaktiva X-kromosomen

X chromosome inactivation (XCI) is the random silencing of one X chromosome in females to achieve gene dosage balance between the sexes. As a result, all ...

Navigating MARRVEL, a Web-Based Tool that Integrates Human Genomics and Model Organism Genetics Information

Navigera i MARRVEL, ett webbaserat verktyg som integrerar Human Genomics och Modellorganismens gen etik information

Through whole-exome/genome sequencing, human geneticists identify rare variants that segregate with disease phenotypes. To assess if a specific variant is ...

The Use of Mouse Mammary Tumor Cells in an In Vitro Invasion Assay as a Measure of Oncogenic Cell Behavior

Användningen av mus mammary tumörceller i en in vitro-invasion analys som ett mått på onkogena cell beteende

The in vitro invasion assay uses a protein-rich matrix in a Boyden chamber to measure the ability of cultured cells to pass through the matrix and a ...