Name: synthesis of functionalized magnetic nanoparticles, their conjugation with the siderophore feroxamine and its evaluation for bacteria detection
Uploaded: 2020-06-16T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Synthesis of Functionalized Magnetic Nanoparticles, Their Conjugation with the Siderophore Feroxamine and its Evaluation for Bacteria Detection at JoVE.com

Yazarlar, Profesör Klaus Hantke'nin (Tübingen Üniversitesi, Almanya) bu çalışmada kullanılan Yersinia enterocolitica suşlarını nazilikle tedarik etmek için minnettarlıkla kabul ediyorlar. Bu çalışma, Avrupa Birliği'nden FEDER Programı tarafından ortaklaşa finanse edilen İspanya Araştırma Devlet Ajansı'ndan (AEI/FEDER, AB) AGL2015-63740-C2-1/2-R ve RTI2018-093634-B-C21/C22 (AEI/FEDER, AB) hibeleri ile desteklenmiştir. Santiago de Compostela Üniversitesi ve A Coruña Üniversitesi'ndeki çalışmalar da Xunta de Galiçya'dan GRC2018/018, GRC2018/039 ve ED431E 2018/03 (CICA-INIBIC stratejik grubu) hibeleri ile desteklenmiştir. Son olarak, nuria Calvo'ya bu video protokolünü seslendirme deki büyük işbirliği için teşekkür etmek istiyoruz.

NOT: Hareketsiz atmosfer koşullarında yapılan reaksiyonlar için tüm cam eşyalar daha önce 65 °C'de bir fırında kurutulmuş, kauçuk septumla kapatılmış ve üç kez argon ile temizlenmiş.
1. Feroksanin ile konjuge manyetik nano taneciklerin sentezi
<ol><li>Fe3O4 manyetik nano partiküllerin (MNP) sentezi<ol>
<li>20 mL cam şişeye 0,5 g Fe(acac)3 ekleyin ve 10 mL benzyl alkolü ile karıştırın.</li>
		<li>Bu karışımı 2 dakika sonicate, son...

<ol>
	<li>Pan, Y., Du, X., Zhao, F., Xu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+nanoparticles+for+the+manipulation+of+proteins+and+cells.">Magnetic nanoparticles for the manipulation of proteins and cells.</a> Chemical Society Reviews. 41 (7), 2912-2942 (2012).</li><li>Zheng, T., Nolan, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Siderophore-based+detection+of+Fe(III)+and+microbial+pathogens.">Siderophore-based detection of Fe(III) and microbial pathogens.</a> Metallomics. 4, 866-880 (2012).</li><li>Hider, R. C., Kong, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemistry+and+biology+of+siderophores.">Chemistry and biology of siderophores.</a> Natural Product Reports. 27 (5), 637-657 (2010).</li><li>Sandy, M., Butler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+Iron+Acquisition:+Marine+and+Terrestrial+Siderophores.">Microbial Iron Acquisition: Marine and Terrestrial Siderophores.</a> Chemical Reviews. 109 (10), 4580-4595 (2010).</li><li>Pinna, N., Grancharov, S., Beato, P., Bonville, P., Antonietti, M., Niederberger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetite+Nanocrystals+:+Nonaqueous+Synthesis,+Characterization.">Magnetite Nanocrystals : Nonaqueous Synthesis, Characterization.</a> Chemistry of Materials. 17 (15), 3044-3049 (2005).</li><li>Li, Y. S., Church, J. S., Woodhead, A. L., Moussa, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+characterization+of+silica+coated+iron+oxide+magnetic+nano-particles.">Preparation and characterization of silica coated iron oxide magnetic nano-particles.</a> Spectrochimica Acta - Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy. 76 (5), 484-489 (2010).</li><li>Chen, J. P., Yang, P. C., Ma, Y. H., Tu, S. J., Lu, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+delivery+of+tissue+plasminogen+activator+by+binding+to+silica-coated+magnetic+nanoparticle.">Targeted delivery of tissue plasminogen activator by binding to silica-coated magnetic nanoparticle.</a> International Journal of Nanomedicine. 7, 5137-5149 (2012).</li><li>El-Boubbou, K., Gruden, C., Huang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Magnetic+glyco-nanoparticles:+a+unique+tool+for+rapid+pathogen+detection,+decontamination,+and+strain+differentiation.">Magnetic glyco-nanoparticles: a unique tool for rapid pathogen detection, decontamination, and strain differentiation.</a> Journal of the American Chemical Society. 129 (44), 13392-13393 (2007).</li><li>Mart&#237;nez-Matamoros, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+functionalized+magnetic+nanoparticles+conjugated+with+feroxamine+and+their+evaluation+for+pathogen+detection.">Preparation of functionalized magnetic nanoparticles conjugated with feroxamine and their evaluation for pathogen detection.</a> RSC Advances. 9 (24), 13533-13542 (2019).</li><li>Cozar, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+and+surface-enhanced+Raman+study+of+desferrioxamine+B+and+its+Fe(III)+complex,+ferrioxamine+B.">Raman and surface-enhanced Raman study of desferrioxamine B and its Fe(III) complex, ferrioxamine B.</a> Journal of Molecular Structure. 788 (1-3), 1-6 (2006).</li><li>Shebanova, O. N., Lazor, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+a-C:H+and+oxygen-containing+Si:C:H+films+by+Raman+spectroscopy+and+XPS.">Characterisation of a-C:H and oxygen-containing Si:C:H films by Raman spectroscopy and XPS.</a> Journal of Solid State Chemistry. 174 (4), 424-430 (2003).</li><li>Gonz&#225;lez, P., Serra, J., Liste, S., Chiussi, S., Le&#243;n, B., P&#233;rez-Amor, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+spectroscopic+study+of+bioactive+silica+based+glasses.">Raman spectroscopic study of bioactive silica based glasses.</a> Journal of Non-Crystalline Solids. 320 (12), 92-99 (2003).</li><li>Veres, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+a-C:H+and+oxygen-containing+Si:C:H+films+by+Raman+spectroscopy+and+XPS.">Characterisation of a-C:H and oxygen-containing Si:C:H films by Raman spectroscopy and XPS.</a> Diamond and Related Materials. 14 (3-7), 1051-1056 (2005).</li><li>You, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+investigation+of+Si-C+covalent+bonding+of+single+carbon+nanotube+grown+on+silicon+substrate.">Visualization and investigation of Si-C covalent bonding of single carbon nanotube grown on silicon substrate.</a> Applied Physics Letters. 93 (10), 103111-103113 (2008).</li><li>Graf, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=XPS+and+NEXAFS+studies+of+aliphatic+and+aromatic+amine+species+on+functionalized+surfaces.">XPS and NEXAFS studies of aliphatic and aromatic amine species on functionalized surfaces.</a> Surface Science. 603 (18), 2849-2860 (2009).</li><li>Michaeli, W., Blomfield, C. J., Short, R. D., Jones, F. R., Alexander, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+study+of+HMDSO/O2+plasma+deposits+using+a+high-sensitivity+and+-energy+resolution+XPS+instrument:+curve+fitting+of+the+Si+2p+core+level.">A study of HMDSO/O2 plasma deposits using a high-sensitivity and -energy resolution XPS instrument: curve fitting of the Si 2p core level.</a> Applied Surface Science. 137 (1-4), 179-183 (2002).</li><li>Liana, A. E., Marquis, C. P., Gunawan, C., Gooding, J. J., Amal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T4+bacteriophage+conjugated+magnetic+particles+for+E.+coli+capturing:+Influence+of+bacteriophage+loading,+temperature+and+tryptone.">T4 bacteriophage conjugated magnetic particles for E. coli capturing: Influence of bacteriophage loading, temperature and tryptone.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 151, 47-57 (2017).</li><li>Fang, W., Han, C., Zhang, H., Wei, W., Liu, R., Shen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+amino-functionalized+magnetic+nanoparticles+for+enhancement+of+bacterial+capture+efficiency.">Preparation of amino-functionalized magnetic nanoparticles for enhancement of bacterial capture efficiency.</a> RSC Advances. 6, 67875-67882 (2016).</li><li>Zhan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+removal+of+pathogenic+bacteria+and+viruses+by+multifunctional+amine-modified+magnetic+nanoparticles.">Efficient removal of pathogenic bacteria and viruses by multifunctional amine-modified magnetic nanoparticles.</a> Journal of Hazardous Materials. 274, 115-123 (2014).</li></ol>

Bu protokol, kovalent bağ ile manyetik nano tanecikleri ve siderofor feroktamin arasında bir konjuge sentezini açıklar. Manyetit sentezi pinna ve ark.5 tarafından bildirilen protokol kullanılarak yapıldı ve sulu sistemlerde korozyon manyetik çekirdek korumak için silika kaplama takip, toplama en aza indirmek ve fonksiyonelleştirme için uygun bir yüzey sağlamak için6. Silika kaplama işlemi değiştirildi. Li ve ark.6tarafından bildiri...

MNP kullanan bakteri algılama yöntemleri, patojenik bakteriler1tarafından MNP'ye konan antikorların, aptamerlerin, biyoproteinlerin, karbonhidratların moleküler olarak tanınmasına dayanmaktadır. Sideroforların bakterilerin dış zarındaki spesifik reseptörler tarafından tanındığı göz önünde bulundurularak, özgüllüklerini artırmak için MNP'ye de bağlanabilen2. Sideroforlar bakteriler in Fe3+ alımında yer alan küçük organik moleküllerdir3,4. Bakterilerin yakalanması ve izolasyonu için değerlendirmelerinin yanı sıra sideroforlar ve MNP arasında konjuge lerin hazırlanması henüz rapor edilmemiştir.
Küçük moleküller ile manyetik nano taneciklerin konjuge sentezinde önemli adımlardan biri küçük molekül MNP yüzeyine bağlı olduğundan emin olmak için aralarında bağ veya etkileşim türü seçimidir. Bu nedenle, manyetik nano tanecikleri ve feroksamin arasında konjuge hazırlamak için prosedür-Yersinia enterocoliticatarafından tanınan siderofor- karbodiimid kimya sıyrık tarafından siderofor kovalent bağlantı sağlamak için MNP değiştirilebilir bir yüzey üretimi ne odaklanmıştır. Düzgün bir manyetit nano tanecikleri almak için (MNP) ve çekirdekleşme ve boyut kontrolünü geliştirmek için, benzil alkol ile bir solvolysisreaksiyonusallayarak olmadan bir termal blok yapıldı 5 . Daha sonra, bir silika kaplama koruma vermek ve sulu ortamda nano tanecikleri süspansiyon istikrarını artırmak için Stöber yöntemi tarafından oluşturuldu6. Ferokramin yapısı dikkate alınarak, amin gruplarının giriş uygun nano tanecikleri üretmek için gereklidir (MNP@SiO2@NH2) siderofor ile konjuge olmak. Bu (3-aminopropil)triethoxysilane (APTES) silika modifiye nano tanecikleri yüzeyinde mevcut alkol grupları ile yoğuşma ile elde edildi (MNP@SiO2) bir sol-jel yöntemi kullanılarak7.
Buna paralel olarak, feroksamin demir (III) kompleksi sulu çözeltide demir asetil asetat ile ticari olarak kullanılabilir deferoksanin karmaşıklığı ile hazırlanmıştır. N-succinylferoxamine, bağlayıcı olarak hareket edecek süksinil grupları taşıyan, süksinik anhidrit ile feroksanin reaksiyonu ile elde edildi.
MNP@SiO 2 @NH22 ve N-succinylferoxamine arasında konjugasyon MNP@SiO vermek için2@NH@Fa kaplin reaktifler benzotriazol-1-yl-oxy-tris-(dimethyl olarak kullanılarak karbodiimid kimya ile yapılmıştır Amino)-fosfonyum hekzaflorofoffat (BOP) ve 1-hidroksibenzotriazol (HOBt) yumuşak bir temel ortamda N-succinylferoksamin8terminal asit grubunu etkinleştirmek için .
MNP'ler karakterize edildikten sonra, yabani tip (WC-A) ve feroksamin reseptörü FoxA'dan yoksun Y. enterokolitica mutantını yakalamak için çıplak ve işlevsel leştirilmiş manyetik nano partiküllerin yeteneklerini değerlendirdik (FoxA WC-A 12-8). Düz Milletvekilleri, işlevsel milletvekilleri ve eşlenik MNP@SiO2@NH@Fa her Y. enterocolitica zorlanma ile etkileşime izin verildi. Bakteri-eşlekapakları manyetik alan uygulaması ile bakteri süspansiyonundan ayrılmıştır. Ayrılmış agregalar iki kez fosfat tamponlu salin (PBS) ile durulandı, seri seyreltmehazırlamak için PBS'de yeniden askıya alındı ve daha sonra koloni sayımı için kaplandı. Bu protokol, MNP@SiO2@NH@Fa sentezinin her adımını, tüm ara maddelerin yapısal karakterizasyonunu ve eşlekap'ı ve bir bakteri yakalama testini ara maddelerle ilgili olarak eşleninin özgüllüğünü değerlendirmenin kolay bir yolu olarak gösterir. 9.000

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-Hydroxybenzotriazole hydrate 
			HOBT</td>
			<td>Acros</td>
			<td>300561000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,2&#8242;-Bipyridyl</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D216305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Aminopropyltriethoxysilane 99%</td>
			<td>Acros</td>
			<td>151081000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium hydroxide solution 28% NH3</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>338818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)-phosphonium hexafluorophosphate BOP Reagent</td>
			<td>Acros</td>
			<td>209800050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzyl alcohol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>822259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deferoxamine mesylate salt &#62;92,5% (TLC)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D9533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, anhydrous, 96%</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>131085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl Acetate, Extra Pure, SLR, Fisher Chemical</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iron(III) acetylacetonate 97%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth (Lennox)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>L3022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N-Diisopropylethylamine, 99.5+%, AcroSeal</td>
			<td>Acros</td>
			<td>459591000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N-Dimethylformamide, 99.8%, Extra Dry, AcroSeal</td>
			<td>Acros</td>
			<td>326871000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridine, 99.5%, Extra Dry, AcroSeal</td>
			<td>Acros</td>
			<td>339421000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sephadex LH-20</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>LH20100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Succinic anhydride &#62;99%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>239690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetraethyl orthosolicate &#62;99,0%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>86578</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

synthesis of functionalized magnetic nanoparticles, their conjugation with the siderophore feroxamine and its evaluation for bacteria detection

Bu çalışmada, manyetik nano partiküllerin sentezi, SiO ile kaplama2, amin fonksiyonelleştirme ile takip (3-aminopropil)triethoxysilane (APTES) ve deferoksamin ile konjugasyonu, Yersinia enterocoliticatarafından tanınan bir siderofor , bir bağlayıcı olarak bir süksinil moiety kullanarak açıklanmıştır.
Manyetik nano tanecikler (MNP) manyetit (Fe3O4)solvotermal yöntemle hazırlanmış ve Stöber prosesi kullanılarak SiO2 (MNP@SiO2)ile kaplanmış ve ardından APTES ile işlevselleştirme (MNP@SiO2@NH2). Daha sonra, feroksamin MNP@SiO 22@NH2 karbodiimid kaplin ile MNP@SiO 2 @NH2@Fa vermek için konjuge edildi.2 Konjuge ve ara ların morfolojisi ve özellikleri toz X-Işını kırınımı (XRD), Fourier transform kızılötesi spektroskopisi (FT-IR), Raman spektroskopisi, X-ışını fotoelektron spektroskopisi (XPS), iletim elektron mikroskobu (TEM) ve enerji dağıtıcı X-ışını (EDX) haritalama dahil olmak üzere sekiz farklı yöntemle incelendi. Bu ayrıntılı karakterizasyon eşlekap oluşumunu doğruladı. Son olarak, nano taneciklerin kapasitesini ve özgüllüğünü değerlendirmek için, yersinia enterocoliticakullanılarak bir yakalama bakteri testi nde test edildi.

Her ara ve son eşleninin morfolojisini ve özelliklerini belirlemek için kapsamlı bir yapısal karakterizasyon gerçekleştirilir. Bu amaçla konjugatın oluşumunu göstermek için XRD, FT-IR, Raman spektroskopisi, TGA, TEM, EDX haritalama ve XPS teknikleri kullanılmaktadır. X-ışını fotoelektron spektroskopisi (XPS) ile elde edilen nano partiküllerin yüzeyindeki atomların oksidasyon durumları, nanopartikül ile siderofor arasında kovalent bağların oluşumunu doğrulayan en uygun verilerdir. Bu sonuçlarl...

Watch this Scientific Journal Video about Synthesis of Functionalized Magnetic Nanoparticles, Their Conjugation with the Siderophore Feroxamine and its Evaluation for Bacteria Detection at JoVE.com

Synthesis of Functionalized Magnetic Nanoparticles, Their Conjugation with the Siderophore Feroxamine and its Evaluation for Bacteria Detection

Bu çalışma manyetik nano tanecikleri hazırlanması için protokolleri açıklar, SiO ile kaplama2, ile amin fonksiyonelleştirme takip (3-aminopropil)triethoxysilane (APTES) ve bir bağlayıcı olarak bir süksinyl moiety kullanarak deferoksamin ile çekimi. Derin bir yapısal karakterizasyon açıklaması ve tüm ara nano tanecikleri ve son konjuge için Y. enterocolitica kullanılarak yakalanan bakteri tahlilleri de ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

İşlevselleştirilmiş Manyetik Nano partiküllerin sentezi, Siderofor Feroksamin ile Konjugasyonu ve Bakteri Tespiti Için Değerlendirilmesi

In the present work, the synthesis of magnetic nanoparticles, its coating with SiO2, followed by its amine functionalization with ...

Manyetik nano partiküller, güçlü manyetik özellikleri ve yüzeylerinin kolay işlevselleştirilmesi nedeniyle analitik bilim ve nano tıp için ideal araçlardır. Burada amino fonksiyonel silika manyetik parçacıklar ve siderophore feroktamin arasında bir konjuge ilk örneği fotojenik malzeme yakalama için değerlendirme ile birlikte rapor. Sideroforlar demir partake mekanizmasında önemli bir rol oynayan küçük, organik moleküllerdir ve bakterilerin belirli dış membran reseptörleri tarafından tanınmaktadırlar.Bu video, manyetik demir nano tanecikleri hazırlamak için etkili bir protokol, adım adım görüntüler. Daha sonra, dağılma ve manyetik çekirdeği korumak için silika ile kaplandılar. Elde edilen reaktör yüzeyi amin grupları ile işlevselleştirilmiştir.Ferokramin ile konjuge manyetik nano taneciklerin sentezi. 20 mL cam şişeye 0,5 gram Fe(acac)3 ekleyin. Daha sonra 10 mL benzil alkolü ile karıştırın.Bu karışımı 2 dakika sonicate. Daha sonra, 72 saat boyunca 180 santigrat derece bir ısıtma bloğu ve ısı aktarın. Nano tanecikleri %96 etanolile durula.Ve 30 dakika santrifüj. Nano tanecikleri manyetik çekim ile süpernatant'tan neodimyum mıknatıs kullanarak ayırın. Artık çözücüyu atın.Çözücü net görünene kadar sonication ile dönüşümlü supernatant atın. 80 mililitre isopropanol'de 2 gram MNP süspansiyon hazırlayın, 4 mililitre %21 amonya, 7,5 mililitre distile su ve 0,56 mililitre TEOS ekleyin. Isı karışımı 40 derece santigrat larda 2 saat boyunca, sürekli karıştırma ile.Sonra, 1 saat sonicate. MNP'yi bir mıknatısla ayırın, süpernatant'ı atın, 30 mililitre izopropanol içinde dağıtın, amonya, distile su ve TEOS ekleyin, daha önce açıklandığı gibi aynı sırada. Isı karışımı 40 derece santigratlarda iki saat boyunca sürekli karıştırma ile.Sonra, bir saat sonicate. Tüm malzemeyi kurtarmak için manyetik karıştırma çubuğunu rahatlıkla çıkarın ve yıkayın. Supernatant atın ve sonication ile dönüşümlü, üç kez% 96 etanol ile nano tanecikleri durulayın.Oda sıcaklığında vakum altında nano tanecikleri 12 saat kurulayın. Dimethylformamide ile önceki adımdan elde edilen MNP@SIO2 500 miligramı durula. Onları sonicate ve atmak.Yuvarlak bir şişedeki parçacıkları yeniden askıya alın, manyetik bir çubukla karıştırın ve 9 mililitre APTES ekleyin. Karışımı 60 santigrat derecede 12 saat karıştırın. Supernatant atın ve sonication ile dönüşümlü, üç kez% 96 etanol ile nano tanecikleri durulayın.Deferoklamin 100 mg, mesylat tuzu ve 53.0 miligram demir asetetoltonate 5 mililitre distile su çözün. Oda sıcaklığında bir gecede karışımı karıştırın. Elde edilen ürünü bir ayırma hunisi içinde 20 mililitre etil asetat ile üç kez yıkayın.Vakum altında organik çözücü çıkarın. Ferokramin ve kırmızı katı göze sulu faz dondurun-kuru. 50 mililitre yuvarlak alt şişede 5 mililitre piridin içinde feroktamin 100 mg çözeltisine 350 miligram süksinik anhidrit ekleyin.16 saat boyunca, oda sıcaklığında, ortaya çıkan karışımı karıştırın. Azaltılmış basınç altında piridin fazlalığı kaldırın. Metanol 3 mililitre reaksiyon ham çözünür.Metanolik çözeltiyi LH-20 sütununa aktarın ve 0,5 mL/dakika ile yakınlayın. Kırmızı fraksiyonu toplamak ve vakum altında metanol kaldırın. Durulayın 30 kuru amin fonksiyonel nano tanecikleri iki kez DMF ile ve sonicate nano tanecikleri 100 mililitreer Erlenmeyer şişesinde 30 dakika.200 miligram N-succinylferoxamine bir çözüm hazırlayın, 173 miligram Benzotriazol 1-yl-oxy-trisfonium hexaflorofosfat BOP, 46 mg 1-hidroksibenzotriazol HOBt ve 128.8 miligram N, N-diisopropiletilemin DIPEA, DMF 10 mL, bir 50 mililitre yuvarlak-alt flask. Kuru ve oksijensiz koşullarda sonication altında, DMF bir 3 mililitre daha önce durulanmış MNP@SiO2@NH2 askıya alın. Argon atmosferini kullanın.Ekleyin, dropwise, karıştırma A.Shake son karışımı karıştırmak için, bir orbital shaker kullanarak, oda sıcaklığında bir gecede. Ortaya çıkan eşleni bir mıknatıs kullanarak süspansiyondan ayırın. Y.enterocolitica suşları ile bakteriyel tetki izolasyon ve nano tanecikleri ile patojenik bakterilerin yakalanması ölçmek için.Steril tüplerde 1 mg/mL'de tüm ara nano partiküllerin süspansiyonu ve PBS'deki son eşleksiyonu hazırlayın. Luria Bertani, LB, suyu gecede 5 mL Y.entorocolitica bir kültür hazırlayın. 10 mM 2, 2-bipyridyl çözeltisi 50 mikrolitre ilave ederek 5 mL'lik demir eksikliği olan Tripfora Soya Suyu, TSB hazırlayın.Y.enterocolitica gece kültürünün 50 mikrolitre ile demir eksikliği TSB suyu 5 mililitre inoküle. 0,5 ila 0,8 od600 kadar ajitasyon ile 37 santigrat derece inkübat. Bir gecede kültür 100 mikrolitre alın ve ilk 1/10 seyreltme elde etmek için PBS 900 mikrolitre içeren bir tüp seyreltin.Daha sonra, yaklaşık mililitre başına 6 Koloni Şekillendirme Birimleri gücüne 10 bakteri hücrelerinin konsantrasyonu elde etmek için aynı prosedürü kullanarak ilk seyreltme bir 1/100 seyreltme hazırlayın. 1/100 bakteri seyreltme 1 mililitre nano tanecikleri süspansiyon ve 1 mg / mL 100 mikrolitre ekleyin. Bir mıknatıs kullanarak, bir süpernatant, dikkatli bir şekilde atmak, MNP bakteri agregaları ayırın.Ayrılmış nano tanecikleri girdap kullanarak 1 milimetreLik PBS ile iki kez durula. Eski süspansiyondan eksi 4 seyreltme gücüne 10'a kadar art arda dört adet 1/10 seyreltme hazırlayın. TS agar plakaları üzerine her seyreltme Plaka 10 mikrolitre.Epi beyaz modda bir jel dijitalleştirici ile plaka fotoğraf. Tek tek kolonilerin sayısını saymak için bir noktayı yükseltmek için uygun yazılımı kullanarak görüntüyü işleyin. Nano partiküller ve siderofor arasındaki kovalent bağın oluşumunu doğrulamak için, sentezi izlemek için FT-IR Raman spektroskopisi uygularız, her adımda yeni bir fonksiyonel grupla nasıl uyum içinde görünürlerini gözlemleriz.Morfoloji ve partikül boyutunu gözlemlemek için TEM ve SEM mikroskopisi kullanıldı. Termogravimetrik analiz organik madde eklenmesi nedeniyle kilo kaybı ölçmek için. Ve XPS, yüzeydeki atomların farklı oksidasyon durumlarını analiz etmemizi ve kovalent bağların oluşumunu doğrulamamızı sağlar.Son olarak, son eşlenik teki tüm ara ları kullanarak bakterileri yakalama yeteneğini test ettik, biyosensör olarak özelliklerini belirlemek için. Bu protokol manyetit nano taneciklerinin yüksek biyouyumluluğundan yararlanmak için tasarlandı. Silika ile kaplama dağılım geliştirir ve sulu ortamda bozulmasına karşı manyetik çekirdeği korumak.Ve ayrıca kovalent karbodiimid kimyası ile bir asit modifiye siderofor bağlamak için gerekli amin grupları ile fonksiyonelleştirmek için bir reaktif yüzey vermek. Bu durumda, N-succynilferoxamine. Eşleyoler bakteri yakalama yeteneği test edildi ve sonuç olarak, pbs bakteriyel süspansiyon sunulan hantal etkileri belirli bir etkileşimler nedeniyle ara ile önemli bir fark olmadan, kolonilerin düşük sayıda bulundu.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Microwave-assisted Intramolecular Dehydrogenative Diels-Alder Reactions for the Synthesis of Functionalized Naphthalenes/Solvatochromic Dyes

Fonksiyonlu naftalenlerin / Solvatochromic Boyaların Sentez için Mikrodalga-destekli Moleküliçi Dehydrogenative Diels-Alder Reaksiyonları

Functionalized naphthalenes have applications in a variety of research fields ranging from the synthesis of natural or biologically active molecules to ...

Anticancer Metal Complexes: Synthesis and Cytotoxicity Evaluation by the MTT Assay

MTT deneyi ile sentez ve Sitotoksisite Değerlendirilmesi: Anticancer Metal Kompleksleri

Titanium (IV) and vanadium (V) complexes are highly potent anticancer agents. A challenge in their synthesis refers to their hydrolytic instability; ...

Amide Coupling Reaction for the Synthesis of Bispyridine-based Ligands and Their Complexation to Platinum as Dinuclear Anticancer Agents

Çekirdekli Antikanser Maddeleri olarak Platinum bispiridin tabanlı Ligandların ve kompleks Sentezlenmesi için kullanılan amid bağlantı reaksiyon

Amide coupling reactions can be used to synthesize bispyridine-based ligands for use as bridging linkers in multinuclear platinum anticancer drugs. ...

Synthesis and Characterization of Functionalized Metal-organic Frameworks

Fonksiyonlu Sentezi ve Karakterizasyonu Metal-organik Altyapıları

Metal-organic frameworks have attracted extraordinary amounts of research attention, as they are attractive candidates for numerous industrial and ...

Synthesis of Indoxyl-glycosides for Detection of Glycosidase Activities

Glikosidaz Faaliyetlerinin Belirlenmesi için indoksil-glikozitler sentezi

Indoxyl glycosides proved to be valuable and versatile tools for monitoring glycosidase activities. Indoxyls are released by enzymatic hydrolysis and are ...

A Simple Method for the Size Controlled Synthesis of Stable Oligomeric Clusters of Gold Nanoparticles under Ambient Conditions

Ortam Koşullarında Altın Nanopartiküller Kararlı Oligomerik Kümeleri Boyut Kontrollü Sentezi için Basit Bir Yöntem

Reducing dilute aqueous HAuCl4 with sodium thiocyanate (NaSCN) under alkaline conditions produces 2 to 3 nm diameter nanoparticles. Stable grape-like ...

Preparation of Stable Bicyclic Aziridinium Ions and Their Ring-Opening for the Synthesis of Azaheterocycles

Kararlı Bicyclic Aziridinium iyonları ve onların halka açılış Azaheterocycles sentezi için hazırlanması

Bicyclic aziridinium ions were generated by the removal of an appropriate leaving group through internal nucleophilic attack by nitrogen atom in the ...

Bio-inspired Polydopamine Surface Modification of Nanodiamonds and Its Reduction of Silver Nanoparticles

Nanodiamonds ve gümüş nano tanecikleri onun azaltılması biyo-ilham Polydopamine yüzey modifikasyonu

Surface functionalization of nanodiamonds (NDs) is still challenging due to the diversity of functional groups on the ND surfaces. Here, we demonstrate a ...

Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

Hedeflenen Plasmid DNA teslim için metiyonin functionalized biyouyumlu blok kopolimerler

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

Synthesis and Characterization of Amphiphilic Gold Nanoparticles

Amphiphilik altın nanopartiküller sentezi ve karakterizasyonu

Gold nanoparticles covered with a mixture of 1-octanethiol (OT) and 11-mercapto-1-undecane sulfonic acid (MUS) have been extensively studied because of ...