Name: establishing in situ closed circuit perfusion of lower abdominal organs and hind limbs in mice
Uploaded: 2020-08-13T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice at JoVE.com

وقد دعمت الدراسة من قبل منحة المعاهد القومية للصحة CA194058 لDS، سكاغز مدرسة الصيدلة ADR برنامج المنح البذور (DS)؛ المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (منحة رقم 31771093)، مشروع التعاون الدولي لمقاطعة جيلين (No.201180414085GH)، صناديق البحوث الأساسية للجامعات المركزية، برنامج فريق البحوث المبتكرة للعلوم والتكنولوجيا JLU (2017TD-27، 2019TD-36).

وقد تمت الموافقة على جميع الأساليب المذكورة هنا من قبل لجنة رعاية الحيوانات المؤسسية في جامعة كولورادو (IACUC).
1. قبل-- تسخين نظام الضخ
<ol><li>إعداد نظام التسريب قبل الجراحة عن طريق بدء 37 درجة مئوية تعميم حمام المياه لجميع مكونات الماء سترة (خزان perfusate، غرفة رطبة، وغطاء) كما هو مب?...

<ol>
	<li>Ghaidan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ten+year+follow-up+of+lung+transplantations+using+initially+rejected+donor+lungs+after+reconditioning+using+ex+vivo+lung+perfusion.">Ten year follow-up of lung transplantations using initially rejected donor lungs after reconditioning using ex vivo lung perfusion.</a> Journal of Cardiothoracic Surgery. 14 (1), 125 (2019).</li><li>Kabagambe, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Ex+vivo+Hypothermic+and+Normothermic+Perfusion+for+Assessment+of+High-risk+Deceased+Donor+Human+Kidneys+for+Transplantation.">Combined Ex vivo Hypothermic and Normothermic Perfusion for Assessment of High-risk Deceased Donor Human Kidneys for Transplantation.</a> Transplantation. 103 (2), 392-400 (2019).</li><li>Knaak, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+subnormothermic+ex+vivo+liver+perfusion+for+the+storage,+assessment,+and+repair+of+marginal+liver+grafts.">Technique of subnormothermic ex vivo liver perfusion for the storage, assessment, and repair of marginal liver grafts.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), e51419 (2014).</li><li>Hems, R., Ross, B. D., Berry, M. N., Krebs, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gluconeogenesis+in+the+perfused+rat+liver.">Gluconeogenesis in the perfused rat liver.</a> Biochemical Journal. 101 (2), 284-292 (1966).</li><li>Nielsen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin+increases+water+permeability+of+kidney+collecting+duct+by+inducing+translocation+of+aquaporin-CD+water+channels+to+plasma+membrane.">Vasopressin increases water permeability of kidney collecting duct by inducing translocation of aquaporin-CD water channels to plasma membrane.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (4), 1013-1017 (1995).</li><li>Sutherland, F. J., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+blood+and+perfusion+fluid+perfused+heart.">The isolated blood and perfusion fluid perfused heart.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).</li><li>Schreiter, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+perfusion+system+emulating+in+vivo+conditions+in+noncirrhotic+and+cirrhotic+human+liver.">An ex vivo perfusion system emulating in vivo conditions in noncirrhotic and cirrhotic human liver.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 342 (3), 730-741 (2012).</li><li>Sevick, E. M., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscous+resistance+to+blood+flow+in+solid+tumors:+effect+of+hematocrit+on+intratumor+blood+viscosity.">Viscous resistance to blood flow in solid tumors: effect of hematocrit on intratumor blood viscosity.</a> Cancer Research. 49 (13), 3513-3519 (1989).</li><li>Duyverman, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+isolated+tumor+perfusion+model+in+mice.">An isolated tumor perfusion model in mice.</a> Nature Protocols. 7 (4), 749-755 (2012).</li><li>Sears, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+perfusion+of+a+tumor-containing+colon+with+monoclonal+antibody.">Ex vivo perfusion of a tumor-containing colon with monoclonal antibody.</a> J Surg Res. 31 (2), 145-150 (1981).</li><li>Duda, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+cells+facilitate+lung+metastasis+by+bringing+their+own+soil.">Malignant cells facilitate lung metastasis by bringing their own soil.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (50), 21677-21682 (2010).</li><li>Kristjansen, P. E., Boucher, Y., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexamethasone+reduces+the+interstitial+fluid+pressure+in+a+human+colon+adenocarcinoma+xenograft.">Dexamethasone reduces the interstitial fluid pressure in a human colon adenocarcinoma xenograft.</a> Cancer Research. 53 (20), 4764-4766 (1993).</li><li>Sevick, E. M., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+resistance+to+blood+flow+in+solid+tumors+perfused+ex+vivo:+effects+of+tumor+size+and+perfusion+pressure.">Geometric resistance to blood flow in solid tumors perfused ex vivo: effects of tumor size and perfusion pressure.</a> Cancer Research. 49 (13), 3506-3512 (1989).</li><li>Zhang, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Maintenance+of+Primary+Human+Multiple+Myeloma+Cells+through+the+Optimization+of+the+Osteoblastic+Niche.">Ex vivo Maintenance of Primary Human Multiple Myeloma Cells through the Optimization of the Osteoblastic Niche.</a> PLoS One. 10 (5), (2015).</li><li>Di Buduo, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular+flow+chamber+for+engineering+bone+marrow+architecture+and+function.">Modular flow chamber for engineering bone marrow architecture and function.</a> Biomaterials. 146, 60-71 (2017).</li><li>Lokerse, W. J. M., Eggermont, A. M. M., Grull, H., Koning, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+an+isolated+limb+infusion+model+for+investigation+of+drug+delivery+kinetics+to+solid+tumors+by+thermosensitive+liposomes+and+hyperthermia.">Development and evaluation of an isolated limb infusion model for investigation of drug delivery kinetics to solid tumors by thermosensitive liposomes and hyperthermia.</a> Journal of Controlled Release. 270, 282-289 (2018).</li><li>Tietjen, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+targeting+to+the+endothelium+during+normothermic+machine+perfusion+of+human+kidneys.">Nanoparticle targeting to the endothelium during normothermic machine perfusion of human kidneys.</a> Science Translational Medicine. 9 (418), (2017).</li><li>Ternullo, S., de Weerd, L., Flaten, G. E., Holsaeter, A. M., Skalko-Basnet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+human+skin+flap+model:+A+missing+link+in+skin+penetration+studies.">The isolated perfused human skin flap model: A missing link in skin penetration studies.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 96, 334-341 (2017).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, 4986 (2008).</li><li>Hekman, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Dual-Modality+Imaging+in+Renal+Cell+Carcinoma:+An+Ex+vivo+Kidney+Perfusion+Study.">Targeted Dual-Modality Imaging in Renal Cell Carcinoma: An Ex vivo Kidney Perfusion Study.</a> Clinical Cancer Research. 22 (18), 4634-4642 (2016).</li><li>Graham, R. A., Brown, T. R., Meyer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+model+for+the+study+of+tumor+metabolism+by+nuclear+magnetic+resonance:+characterization+of+the+phosphorus-31+spectrum+of+the+isolated+perfused+Morris+hepatoma+7777.">An ex vivo model for the study of tumor metabolism by nuclear magnetic resonance: characterization of the phosphorus-31 spectrum of the isolated perfused Morris hepatoma 7777.</a> Cancer Research. 51 (3), 841-849 (1991).</li></ol>

ويمكن استخدام الدائرة الموصوفة للتحقيق في مختلف المسائل البحثية، على سبيل المثال دور مكونات المصل المختلفة وحواجز الأنسجة في تسليم المخدرات، أو الاتجار بالخلايا الجذعية والمناعة. يمكن إضافة أنظمة مختلفة لتوصيل الأدوية (مثل الدهون والجسيمات النانوية) إلى الغشاء من أجل فهم دور العوامل ال...

تم تطوير إفراز الأعضاء المعزول في الأصل لدراسة فسيولوجيا الأعضاء1،2،3، ومكّن من فهم وظائف الأعضاء دون تدخل من أنظمة الجسم الأخرى. على سبيل المثال ، كان قلب الكلى والقلب المعزول مفيدًا للغاية في فهم المبادئ الأساسية للديناميكا الدموية وآثار العوامل النشطة ، في حين أن ضخ الكبد كان مهمًا لفهم وظيفة التمثيل الغذائي ، بما في ذلك استقلاب الدواء في الأنسجة الصحيةوالمريضة 4،5،6،7. وبالإضافة إلى ذلك، كانت دراسات التسريب حاسمة في فهم جدوى ووظيفة الأعضاء المعدة للزراعة. في أبحاث السرطان، وقد وصفت القذف الورم معزولة من قبل عدة مجموعات باستخدام الفأرة, الفئران, والأنسجة البشرية الطازجة8,9. في بعض البويضات الورم المعزولة ، تم زرع الورم في وسادة الدهون المبيضة لفرض نمو الورم الذي يزود الأوعية الدموية من الشريان الميكرونري10. قامت مجموعة جاين بإجراء دراسات رائدة باستخدام الضخ المعزول من سرطان القولون لفهم ديناميات الدم والتشائلالورم 8,11,12,13. وتشمل غيرها من الاجهزة الهندسة الهندسية السابقة vivo 96-well لوحة المستندة إلى جهاز القذف لثقافة الإنسان الأساسي خلايا المايلوما المتعددة14 وغرفة تدفق وحدات لهندسة نخاع العظام الهندسة والبحوث وظيفة15.
بالإضافة إلى علم وظائف الأعضاء والدراسات علم الأمراض، وقد استخدمت فيرف الجهاز لدراسة المبادئ الأساسية لتسليم المخدرات. وهكذا، وصفت إحدى المجموعات نزف أطراف الفئران المعزولة ودرست تراكم الليبوسومات في الساركوما المزروعة16، في حين قامت مجموعة أخرى بتشريح ضخ الكلى البشري لدراسة الاستهداف البطانية للجسيمات النانوية17. Ternullo وآخرون تستخدم معزولة رفرف الجلد البشري الم perfused باعتبارها قريبة في الجسم الحي الجلد المخدرات الإختراق نموذج18.
وعلى الرغم من هذه التطورات في تخبط الأعضاء والأنسجة الكبيرة، لم تكن هناك تقارير عن نماذج التسريب في الموقع في الفئران التي: أ) تجاوز أعضاء إزالة مثل الكبد والطحال والكلى; ب) تشمل أعضاء الحوض والجلد والعضلات والأعضاء التناسلية (في الذكور) والمثانة والبروستاتا ونخاع العظام. نظرا لصغر حجم هذه الأجهزة وتوريد الأوعية الدموية، السابقين فيتبل vivo وإنشاء دائرة القذف لم يكن ممكنا. الماوس هو النموذج الحيواني الأكثر أهمية في أبحاث السرطان وعلم المناعة، وتسليم الأدوية. القدرة على اغراء أجهزة الماوس الصغيرة من شأنه أن يسمح أسئلة مثيرة للاهتمام بشأن تسليم المخدرات لهذه الأجهزة، بما في ذلك للأورام المزروعة في الحوض (المثانة، البروستاتا، المبيض، نخاع العظام)، إلى أن تتم الإجابة، فضلا عن دراسات علم وظائف الأعضاء الأساسية والمناعة من أمراض هذه الأجهزة. لمعالجة هذا النقص، طورنا دائرة التسريب في الموقع في الفئران التي يمكن أن تجنب إصابة الأنسجة، وأكثر ملاءمة للبحوث الوظيفية من الضخ العضو المعزول.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1073px;" width="1071">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3.5x-90x stereo zoom microscope on boom stand with LED light</td>
			<td>Amscope</td>
			<td>SKU: SM-3BZ-80S</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Carbon dioxide, USP</td>
			<td>Airgas healthcare</td>
			<td style="width:135px;">19087-5283</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:191px;">NIKON</td>
			<td style="width:135px;">ECLIPSE Ti2</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Disposable Sterile Cautery Pen with High Temp</td>
			<td style="width:191px;">FIAB</td>
			<td style="width:135px;">F7244</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Moist chamber bubble trap (part 6 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">733692</td>
			<td style="width:313px;">Customized as the perfisate container; also enabled constant pressure perfusion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Moist chamber cover with quartz window (part 3 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">733524</td>
			<td style="width:313px;">keep the chamber&#39;s temperature</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Moist chamber with metal tube heat exchanger</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">732901</td>
			<td style="width:313px;">Water-jacketed moist chamber with lid to maintain perfusate and mouse temperature</td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:55px;width:435px;">Olsen-Hegar needle holders with suture cutters</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">125014</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:435px;">Oxygen compressed, USP</td>
			<td>Airgas healthcare</td>
			<td style="width:135px;">C2649150AE06</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Roller pump (part 4 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">730113</td>
			<td style="width:313px;">deliver perfusate to cannula in the moist chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCP plugsys servo control F/Perfusion (part 1 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">732806</td>
			<td style="width:313px;">control the purfusion speed</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silicone pad</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Silicone tubing set (arrows in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus (TYGON)</td>
			<td style="width:135px;">733456</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Student standard pattern forceps</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">91100-12</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">14001-14</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Table for moist chamber</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">734198</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Thermocirculator (part 2 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">724927</td>
			<td style="width:313px;">circulating water bath for all water-jacketed components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Three-way stopcock (part 5 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Cole-Palmer</td>
			<td style="width:135px;">30600-02</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Veterinary anesthesia machine</td>
			<td style="width:191px;">Highland</td>
			<td style="width:135px;">HME109</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">19-G BD PrecisionGlide needle</td>
			<td style="width:191px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">305186</td>
			<td style="width:313px;">For immobilizing the Insyte Autoguard Winged needle and scratching the cortical bone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-0 silk sutures</td>
			<td style="width:191px;">Keebomed-Hopemedical</td>
			<td style="width:135px;">427411</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-0 silk sutures</td>
			<td style="width:191px;">Keebomed-Hopemedical</td>
			<td style="width:135px;">427401</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Filter (0.2 &#181;m)</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher</td>
			<td>42225-CA</td>
			<td style="width:313px;">Filter for 5% BSA-RINGER&#8217;S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Permanent marker</td>
			<td style="width:191px;">Staedtler</td>
			<td style="width:135px;">342-9</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe (10 mL)</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">14-823-2E</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe (60 mL)</td>
			<td style="width:191px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">309653</td>
			<td style="width:313px;">Filter for 5% BSA-RINGER&#8217;S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:435px;">1% Evans blue ( w/v ) in phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.5)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma</td>
			<td style="width:135px;">314-13-6</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% buffered formalin</td>
			<td>velleyvet</td>
			<td style="width:135px;">36692</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BALB/c mice ( 8-10 weeks old )</td>
			<td style="width:191px;">Charles River</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Baxter Viaflex lactate Ringer&#39;s solution</td>
			<td style="width:191px;">EMRN Medical Supplies Inc.</td>
			<td style="width:135px;">JB2324</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Bovine serum albumin</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>11021-037</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate glue</td>
			<td style="width:191px;">Krazy Glue</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DyLight-649-lectin</td>
			<td style="width:191px;">Vector Laboratories,Inc.</td>
			<td style="width:135px;">ZB1214</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol (70% (vol/vol))</td>
			<td style="width:191px;">Pharmco</td>
			<td style="width:135px;">111000190</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Hoechst33342</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:135px;">H3570</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Isoflurane</td>
			<td>Piramal Enterprises Limited</td>
			<td style="width:135px;">66794-017-25</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:191px;">Gibco</td>
			<td style="width:135px;">10010023</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing in situ closed circuit perfusion of lower abdominal organs and hind limbs in mice

السابقين فيف الكبد هو أداة فسيولوجية هامة لدراسة وظيفة الأجهزة المعزولة (مثل الكبد والكلى). في الوقت نفسه ، بسبب صغر حجم أعضاء الماوس ، فإن قذف الجسم الحي السابق للعظام والمثانة والجلد والبروستاتا والأعضاء التناسلية أمر صعب أو غير مجد. هنا، ونحن تقرير لأول مرة في الموقع دائرة التسريب الجسم السفلي في الفئران التي تشمل الأنسجة المذكورة أعلاه، ولكن يتجاوز أعضاء إزالة الرئيسية (الكلى والكبد والطحال). يتم تأسيس الدائرة عن طريق تعلية الشريان الأورطي البطني و الوريد السفلي فوق الشريان الحرقفي والوريد وتكوية الأوعية الدموية الطرفية. يتم تنفيذ perfusion عن طريق مضخة م peristaltic مع تدفق perfusate الحفاظ على لمدة تصل إلى 2 ساعة. في الموقع تلوين مع الليكتين الفلورسنت وحل Hoechst أكد أن microvasculature تم بنجاح. يمكن أن يكون هذا النموذج الماوس أداة مفيدة جدا لدراسة العمليات المرضية، فضلا عن آليات تسليم المخدرات، والهجرة / الانبثاث من الخلايا السرطانية تعميم داخل / من الورم، وتفاعلات الجهاز المناعي مع الأجهزة والأنسجة المحصنة.

وضعنا نظام قذف الدائرة المغلقة من خلال التكبيل من الشريان الأورطي البطني و الوريد السفلي كافا من الفئران 8-10 الأسبوع القديم مع الحفاظ على حجم التخزين المؤقت perfusion أقل من 10 مل. يظهر الشكل 3A الصور confocal بعد قذف الأنسجة مع حل رينجر التي تحتوي على Hoechst 33342 وDyLight 649-lectin. العضلات, نخاع...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice at JoVE.com

Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice

يوصف بروتوكول للضخ الموضعي للجسم السفلي للماوس ، بما في ذلك المثانة والبروستاتا والأعضاء الجنسية والعظام والعضلات وبشرة القدم.

إنشاء الدائرة المغلقة في الموقع perfusion من أعضاء البطن السفلي وأطراف هند في الفئران

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small ...

يمكن استخدام هذا البروتوكول للإجابة على أسئلة حول توصيل الأدوية والتفاعلات المناعية داخل الأعضاء المدرجة في دائرتنا. هذه التقنية تسمح لقذف الأعضاء التي لا يمكن أن تضخ بالطرق التقليدية السابقين في الجسم الحي، مع تجنب أجهزة إزالة الرئيسية. قبل البدء في الجراحة، تعيين حمام المياه المتداولة وجميع المكونات ذات السترات المائية، إلى 37 درجة مئوية.تأكد من تنظيف الأنبوب، واستخدم مصيدة فقاعة داخل غرفة رطبة كخزان مُضجر للحد من حجم الزّمن. لتنفيذ إجراء القسطرة، تأكيد عدم وجود استجابة لدواسة منعكس، في ثمانية إلى 10 أسبوع من العمر لمبة تخدير الذكور انظر الماوس. ووضع الفأر في موقف سوبين على لوحة الستايروفوم، مع الرأس في الساعة السادسة.شل حركة الحيوانات أطرافها مع الشريط، ومسح البطن مع الكحول ايزوبروبيل. إجراء شق على شكل حرف T في البطن، باستخدام التخثر الكهربائي لوقف أي نزيف حول حافة الشق. دفع المعدة، jejunum والقولون إلى الجانب الأيمن من البطن، للكشف عن الشريان الأورطي البطني، الوريدي كافا وشرايين الوريدي والأوليومبار المشتركة.تحت مجهر تشريح، وتحديد موقع وligate الشرايين والأوردة المبيض والأليوlumbar مع خياطة الحرير 4-O. حلقة اثنين 4-O خياطة الحرير تحت الشريان الأورطي البطني وسفين الكافا السفلية حوالي سنتيمتر واحد فوق الشريان الحرقفي والوريد، ملليمتر واحد على حدة. ثم جعل إيماءة فضفاضة في خياطة الأقرب إلى الأوعية الحرقفية.استخدام حامل إبرة لمحاذاة أفقيا وتمتد كل من الوريد السفلي cava والأبهر أورطيا البطن. و، والحفاظ على الأوعية امتدت، واستخدام 24 قياس مجنحة درع الرابع القسطرة لثقب الشريان الأورطي البطن. بمجرد أن تخترق الإبرة حوالي ملليمتر واحد في الوعاء ، اِكِبِس الزر لسحب قلب الإبرة ، وأدخل القسطرة حوالي خمسة ملليمترات في الوعاء.أدخل قسطرة خمسة ملليمترات في الوريد السفلي الكافا، بنفس الطريقة. وربط كل من الغرز حول الأوعية القسطرة. ثم تطبيق الغراء الفورية لشل القسطرة إلى منتصب تدور، واستبدال أعضاء البطن.لإقامة نظام التسريب، ضع الماوس على وسادة سيليكون في غرفة رطبة ذات سترة ماء، وشلّل أجنحة القسطرة إلى الوسادة بإبر قياس 19. ملء مدخل القسطرة الشريانية، مع العازلة التسخن قبل الانفعال. استخدام ملقط hemostatic، وموصل المسمار على إرفاق مدخل القسطرة إلى الأنابيب، وشل أنابيب مدخل الضخ مع الشريط.ضبط معدل التدفق ال peristaltic إلى 0.6 ملليلتر في الدقيقة الواحدة، والحفاظ على تدفق الضخ مفتوحة لمدة خمس إلى 10 دقائق، لغسل الدم من خلال القسطرة الوريدية. وسوف تكون بعض الجلطات موجودة في القسطرة منفذ، طرد الجلطات مع المخزن المؤقت perfusate، واستخدام المسمار على موصل لإرفاق إلى نهاية القسطرة الوريدية إلى أنابيب منفذ لإغلاق الدائرة. ثم تغطية غرفة رطبة مع غطاء ما قبل الدافئة لمدة تصل إلى ساعتين من الضخ، والتحقق دوريا على مستوى perfusate.هنا، يتم عرض الصور confocal بعد التسريب مع حل الرنين التي تحتوي على Hoechst 33342 و DyLight-649 الليكتان. العضلات, نخاع العظام, الخصيات, المثانة, البروستاتا وجلة القدم عادة ما يدل على وجود تلطيخ فعال النووية والأوعية الدموية. Hematoxylin وeosin تلطيخ هذه الأنسجة بعد ثلاث ساعات من القذف الحراري العادي ، يكشف عن تدفق ناجح للأعضاء ، مع عدم وجود إصابة واضحة في الأنسجة.يمكن استخدام هذا النموذج لفهم مسارات امتصاص الدواء ، في البيئة الفسيولوجية غير ذات الصلة. على سبيل المثال ، لفهم دور مكونات المصل في تراكم المخدرات. نحن نستخدم النظام، لفهم آلية تراكم الليبوسومات في الجلد.

Research

JoVE Journal

Medicine

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

تحسين التصور الانبثاث الرئة في قرار خلية واحدة في الفئران عن طريق الجمع بين<em&gt; في الوضع الطبيعي</em&gt; الإرواء من أنسجة الرئة وX-غال تلوين لل<em&gt; lacZ</em&gt; الكلمات الدلالية الخلايا السرطانية،

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

الحقن الشريان السباتي لوأضافا الدوائية وتحليل Taxanes في الفئران

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

خارج الموقع سوي الحرارة آلة الإرواء من الأكباد المانحة

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

مثلي هند الاطراف زرع في ماوس

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

إنشاء البطن التصاقات في الفئران

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

نموذج الصدر مغلقة للحث على انقباض الابهري عرضية في الفئران

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

The Generation of Closed Femoral Fractures in Mice: A Model to Study Bone Healing

جيل كسور الفخذ مغلقة في الفئران: نموذج لدراسة شفاء العظام

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

نورموثيرميك ت نضح قلب الموقع في العمل وضع: تقييم وظيفة القلب والايض

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

نموذج قبل السريرية من نقص التروية الأطراف هند في الأرانب السكري

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

التصوير بالموجات فوق الصوتية للشريان الاورطي الصدري والبطن في الفئران لتحديد أبعاد تمدد الأوعية الدموية

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...