Name: establishing in situ closed circuit perfusion of lower abdominal organs and hind limbs in mice
Uploaded: 2020-08-13T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice at JoVE.com

Studien ble støttet av NIH-stipendet CA194058 til DS, Skaggs School of Pharmacy ADR frø tilskuddsprogram (DS); National Natural Science Foundation of China (Grant No. 31771093), Prosjektet for internasjonalt samarbeid i Jilin-provinsen (nr. 201180414085GH), de grunnleggende forskningsmidlene for de sentrale universitetene, programmet for JLU Science and Technology Innovative Research Team (2017TD-27, 2019TD-36).

Alle metoder som er beskrevet her har blitt godkjent av University of Colorado's Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
1. Forvarm perfusjonssystemet
<ol><li>Forbered perfusjonssystemet før operasjonen ved å starte et 37 °C sirkulerende vannbad for alle vannjakkede komponenter (perfusatreservoar, fuktig kammer og lokk) som vist i en tilpasset konfigurasjon i figur 1A. Pass på at slangen er ren og skift om nødvendig ut. For å begrense perfusat...

<ol>
	<li>Ghaidan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ten+year+follow-up+of+lung+transplantations+using+initially+rejected+donor+lungs+after+reconditioning+using+ex+vivo+lung+perfusion.">Ten year follow-up of lung transplantations using initially rejected donor lungs after reconditioning using ex vivo lung perfusion.</a> Journal of Cardiothoracic Surgery. 14 (1), 125 (2019).</li><li>Kabagambe, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Ex+vivo+Hypothermic+and+Normothermic+Perfusion+for+Assessment+of+High-risk+Deceased+Donor+Human+Kidneys+for+Transplantation.">Combined Ex vivo Hypothermic and Normothermic Perfusion for Assessment of High-risk Deceased Donor Human Kidneys for Transplantation.</a> Transplantation. 103 (2), 392-400 (2019).</li><li>Knaak, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+subnormothermic+ex+vivo+liver+perfusion+for+the+storage,+assessment,+and+repair+of+marginal+liver+grafts.">Technique of subnormothermic ex vivo liver perfusion for the storage, assessment, and repair of marginal liver grafts.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), e51419 (2014).</li><li>Hems, R., Ross, B. D., Berry, M. N., Krebs, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gluconeogenesis+in+the+perfused+rat+liver.">Gluconeogenesis in the perfused rat liver.</a> Biochemical Journal. 101 (2), 284-292 (1966).</li><li>Nielsen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin+increases+water+permeability+of+kidney+collecting+duct+by+inducing+translocation+of+aquaporin-CD+water+channels+to+plasma+membrane.">Vasopressin increases water permeability of kidney collecting duct by inducing translocation of aquaporin-CD water channels to plasma membrane.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (4), 1013-1017 (1995).</li><li>Sutherland, F. J., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+blood+and+perfusion+fluid+perfused+heart.">The isolated blood and perfusion fluid perfused heart.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).</li><li>Schreiter, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+perfusion+system+emulating+in+vivo+conditions+in+noncirrhotic+and+cirrhotic+human+liver.">An ex vivo perfusion system emulating in vivo conditions in noncirrhotic and cirrhotic human liver.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 342 (3), 730-741 (2012).</li><li>Sevick, E. M., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscous+resistance+to+blood+flow+in+solid+tumors:+effect+of+hematocrit+on+intratumor+blood+viscosity.">Viscous resistance to blood flow in solid tumors: effect of hematocrit on intratumor blood viscosity.</a> Cancer Research. 49 (13), 3513-3519 (1989).</li><li>Duyverman, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+isolated+tumor+perfusion+model+in+mice.">An isolated tumor perfusion model in mice.</a> Nature Protocols. 7 (4), 749-755 (2012).</li><li>Sears, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+perfusion+of+a+tumor-containing+colon+with+monoclonal+antibody.">Ex vivo perfusion of a tumor-containing colon with monoclonal antibody.</a> J Surg Res. 31 (2), 145-150 (1981).</li><li>Duda, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+cells+facilitate+lung+metastasis+by+bringing+their+own+soil.">Malignant cells facilitate lung metastasis by bringing their own soil.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (50), 21677-21682 (2010).</li><li>Kristjansen, P. E., Boucher, Y., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexamethasone+reduces+the+interstitial+fluid+pressure+in+a+human+colon+adenocarcinoma+xenograft.">Dexamethasone reduces the interstitial fluid pressure in a human colon adenocarcinoma xenograft.</a> Cancer Research. 53 (20), 4764-4766 (1993).</li><li>Sevick, E. M., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+resistance+to+blood+flow+in+solid+tumors+perfused+ex+vivo:+effects+of+tumor+size+and+perfusion+pressure.">Geometric resistance to blood flow in solid tumors perfused ex vivo: effects of tumor size and perfusion pressure.</a> Cancer Research. 49 (13), 3506-3512 (1989).</li><li>Zhang, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Maintenance+of+Primary+Human+Multiple+Myeloma+Cells+through+the+Optimization+of+the+Osteoblastic+Niche.">Ex vivo Maintenance of Primary Human Multiple Myeloma Cells through the Optimization of the Osteoblastic Niche.</a> PLoS One. 10 (5), (2015).</li><li>Di Buduo, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular+flow+chamber+for+engineering+bone+marrow+architecture+and+function.">Modular flow chamber for engineering bone marrow architecture and function.</a> Biomaterials. 146, 60-71 (2017).</li><li>Lokerse, W. J. M., Eggermont, A. M. M., Grull, H., Koning, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+an+isolated+limb+infusion+model+for+investigation+of+drug+delivery+kinetics+to+solid+tumors+by+thermosensitive+liposomes+and+hyperthermia.">Development and evaluation of an isolated limb infusion model for investigation of drug delivery kinetics to solid tumors by thermosensitive liposomes and hyperthermia.</a> Journal of Controlled Release. 270, 282-289 (2018).</li><li>Tietjen, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+targeting+to+the+endothelium+during+normothermic+machine+perfusion+of+human+kidneys.">Nanoparticle targeting to the endothelium during normothermic machine perfusion of human kidneys.</a> Science Translational Medicine. 9 (418), (2017).</li><li>Ternullo, S., de Weerd, L., Flaten, G. E., Holsaeter, A. M., Skalko-Basnet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+human+skin+flap+model:+A+missing+link+in+skin+penetration+studies.">The isolated perfused human skin flap model: A missing link in skin penetration studies.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 96, 334-341 (2017).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, 4986 (2008).</li><li>Hekman, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Dual-Modality+Imaging+in+Renal+Cell+Carcinoma:+An+Ex+vivo+Kidney+Perfusion+Study.">Targeted Dual-Modality Imaging in Renal Cell Carcinoma: An Ex vivo Kidney Perfusion Study.</a> Clinical Cancer Research. 22 (18), 4634-4642 (2016).</li><li>Graham, R. A., Brown, T. R., Meyer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+model+for+the+study+of+tumor+metabolism+by+nuclear+magnetic+resonance:+characterization+of+the+phosphorus-31+spectrum+of+the+isolated+perfused+Morris+hepatoma+7777.">An ex vivo model for the study of tumor metabolism by nuclear magnetic resonance: characterization of the phosphorus-31 spectrum of the isolated perfused Morris hepatoma 7777.</a> Cancer Research. 51 (3), 841-849 (1991).</li></ol>

Den beskrevne kretsen kan brukes til å undersøke ulike forskningsspørsmål, for eksempel rollen til ulike serumkomponenter og vevsbarrierer i legemiddellevering, eller immun- og stamcellehandel. Ulike legemiddelleveringssystemer (f.eks. liposomer og nanopartikler) kan legges til perfusatet for å forstå rollen som fysiologiske og biokjemiske faktorer i levering. Varigheten av perfusjon kan variere, avhengig av vevet som er studert, vitenskapelige mål og sammensetningen av perfusat. Vi presenterer her resultatene av ...

Isolert organperfusjon ble opprinnelig utviklet for å studere organfysiologi fortransplantasjon 1,,2,,3, og aktivert forståelse av organers funksjoner uten forstyrrelser fra andre kroppssystemer. For eksempel var isolert nyre- og hjerteperfusjon utrolig nyttig i å forstå grunnleggende prinsipper for hemodynamikk og effekter av vasoaktive midler, mens leverperfusjon var viktig for å forstå metabolsk funksjon, inkludert stoffskifte i sunt og sykt vev4,5,6,7. I tillegg var perfusjonsstudier avgjørende for å forstå levedyktighet og funksjon av organer beregnet for transplantasjon. I Kreftforskningsforsker har isolert tumorperfusjon blitt beskrevet av flere grupper som bruker mus, rotte og nyoppdaget menneskelig vev8,9. I noen isolert tumorperfusjon ble svulsten implantert i eggstokkfettputen for å tvinge veksten av svulst som leverer blodkar fra mesenterien10. Jain-gruppen utførte banebrytende studier ved hjelp av isolert perfusjon av kolonadenokarsinomer for å forstå tumorhemodynamikk og metastase8,,11,,12,13. Andre innovative konstruerte ex vivo oppsett inkluderer en 96-brønn plate-basert perfusjon enhet for å kultur den primære menneskelige multippel myelomceller14 og en modulær flytkammer for engineering benmargsarkitektur og funksjon forskning15.
I tillegg til fysiologi- og patologistudier har organperfusjon blitt brukt til å studere de grunnleggende prinsippene for legemiddellevering. Dermed beskrev en gruppe isolert rottelemperfusjon og studerte akkumulering av liposomer i implanterte sarkomer16, mens en annen gruppe utførte dissekert human nyreperfusjon for å studere endotelmålretting av nanopartikler17. Ternullo et al. brukte en isolert perfused menneskelig hudklaff som en nær-in vivo hud narkotika penetrasjon modell18.
Til tross for disse fremskrittene i perfusjon av store organer og vev, har det ikke vært noen rapporter om in situ perfusjonsmodeller hos mus som: a) bypass clearance organer som lever, milt og nyrer; b) inkluderer bekkenorganer, hud, muskel, reproduktive organer (hos hann), blære, prostata og benmarg. På grunn av den lille størrelsen på disse organene og den forsynende vaskulaturen, har ex vivo cannulation og etablering av en perfusjonskrets ikke vært mulig. Musen er den viktigste dyremodellen innen kreft- og immunologiforskning, og legemiddellevering. Evnen til å perfuse små museorganer ville tillate interessante spørsmål om legemiddellevering til disse organene, inkludert til svulster implantert i bekkenet (blære, prostata, eggstokk, benmarg), som skal besvares, samt studier av grunnleggende fysiologi og immunologi av sykdommer i disse organene. For å løse denne mangelen utviklet vi en in situ perfusjonskrets hos mus som potensielt kan unngå vevsskade og er mye bedre egnet for funksjonell forskning enn isolert organperfusjon.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1073px;" width="1071">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3.5x-90x stereo zoom microscope on boom stand with LED light</td>
			<td>Amscope</td>
			<td>SKU: SM-3BZ-80S</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Carbon dioxide, USP</td>
			<td>Airgas healthcare</td>
			<td style="width:135px;">19087-5283</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:191px;">NIKON</td>
			<td style="width:135px;">ECLIPSE Ti2</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Disposable Sterile Cautery Pen with High Temp</td>
			<td style="width:191px;">FIAB</td>
			<td style="width:135px;">F7244</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Moist chamber bubble trap (part 6 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">733692</td>
			<td style="width:313px;">Customized as the perfisate container; also enabled constant pressure perfusion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Moist chamber cover with quartz window (part 3 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">733524</td>
			<td style="width:313px;">keep the chamber&#39;s temperature</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Moist chamber with metal tube heat exchanger</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">732901</td>
			<td style="width:313px;">Water-jacketed moist chamber with lid to maintain perfusate and mouse temperature</td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:55px;width:435px;">Olsen-Hegar needle holders with suture cutters</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">125014</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:435px;">Oxygen compressed, USP</td>
			<td>Airgas healthcare</td>
			<td style="width:135px;">C2649150AE06</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Roller pump (part 4 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">730113</td>
			<td style="width:313px;">deliver perfusate to cannula in the moist chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCP plugsys servo control F/Perfusion (part 1 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">732806</td>
			<td style="width:313px;">control the purfusion speed</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silicone pad</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Silicone tubing set (arrows in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus (TYGON)</td>
			<td style="width:135px;">733456</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Student standard pattern forceps</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">91100-12</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">14001-14</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Table for moist chamber</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">734198</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Thermocirculator (part 2 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">724927</td>
			<td style="width:313px;">circulating water bath for all water-jacketed components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Three-way stopcock (part 5 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Cole-Palmer</td>
			<td style="width:135px;">30600-02</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Veterinary anesthesia machine</td>
			<td style="width:191px;">Highland</td>
			<td style="width:135px;">HME109</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">19-G BD PrecisionGlide needle</td>
			<td style="width:191px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">305186</td>
			<td style="width:313px;">For immobilizing the Insyte Autoguard Winged needle and scratching the cortical bone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-0 silk sutures</td>
			<td style="width:191px;">Keebomed-Hopemedical</td>
			<td style="width:135px;">427411</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-0 silk sutures</td>
			<td style="width:191px;">Keebomed-Hopemedical</td>
			<td style="width:135px;">427401</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Filter (0.2 &#181;m)</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher</td>
			<td>42225-CA</td>
			<td style="width:313px;">Filter for 5% BSA-RINGER&#8217;S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Permanent marker</td>
			<td style="width:191px;">Staedtler</td>
			<td style="width:135px;">342-9</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe (10 mL)</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">14-823-2E</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe (60 mL)</td>
			<td style="width:191px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">309653</td>
			<td style="width:313px;">Filter for 5% BSA-RINGER&#8217;S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:435px;">1% Evans blue ( w/v ) in phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.5)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma</td>
			<td style="width:135px;">314-13-6</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% buffered formalin</td>
			<td>velleyvet</td>
			<td style="width:135px;">36692</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BALB/c mice ( 8-10 weeks old )</td>
			<td style="width:191px;">Charles River</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Baxter Viaflex lactate Ringer&#39;s solution</td>
			<td style="width:191px;">EMRN Medical Supplies Inc.</td>
			<td style="width:135px;">JB2324</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Bovine serum albumin</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>11021-037</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate glue</td>
			<td style="width:191px;">Krazy Glue</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DyLight-649-lectin</td>
			<td style="width:191px;">Vector Laboratories,Inc.</td>
			<td style="width:135px;">ZB1214</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol (70% (vol/vol))</td>
			<td style="width:191px;">Pharmco</td>
			<td style="width:135px;">111000190</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Hoechst33342</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:135px;">H3570</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Isoflurane</td>
			<td>Piramal Enterprises Limited</td>
			<td style="width:135px;">66794-017-25</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:191px;">Gibco</td>
			<td style="width:135px;">10010023</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing in situ closed circuit perfusion of lower abdominal organs and hind limbs in mice

Ex vivo perfusjon er et viktig fysiologisk verktøy for å studere funksjonen av isolerte organer (f.eks lever, nyrer). Samtidig, på grunn av den lille størrelsen på museorganer, er ex vivo perfusjon av bein, blære, hud, prostata og reproduktive organer utfordrende eller ikke mulig. Her rapporterer vi for første gang en in situ underkroppsperfusjonskrets hos mus som inkluderer vevet ovenfor, men omgår de viktigste klaringsorganene (nyre, lever og milt). Kretsen er etablert ved kannulere abdominal aorta og dårligere vena cava over iliac arterie og vene og cauterizing perifere blodkar. Perfusjon utføres via en peristaltisk pumpe med perfusatstrøm opprettholdt i opptil 2 timer. In situ ging med fluorescerende lectin og Hoechst løsning bekreftet at mikrovaskulaturen ble vellykket perfundert. Denne musemodellen kan være et svært nyttig verktøy for å studere patologiske prosesser samt mekanismer for legemiddellevering, migrasjon / metastase av sirkulerende tumorceller inn i / fra svulsten, og interaksjoner av immunsystemet med perfused organer og vev.

Vi satte opp et lukket kretsperfusjonssystem gjennom kanyling av abdominal aorta og den dårligere vena cava av 8-10 uker gamle mus samtidig som volumet av perfusjonsbuffer mindre enn 10 ml. Figur 3A viser konfukale bilder etter perfusing vev med Ringers løsning som inneholder Hoechst 33342 og DyLight 649-lectin. Muskel, benmarg, testis, blære, prostata og fothud viser effektiv kjernefysisk og vaskulær farging. Figur 3B viser hematoxylin-eosin farging av orga...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice at JoVE.com

Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice

En protokoll er beskrevet for in situ perfusjon av musens underkropp, inkludert blæren, prostata, kjønnsorganer, bein, muskel og fothud.

Etablere in situ lukket krets perfusjon av nedre abdominal organer og hind lemmer i mus

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small ...

Denne protokollen kan brukes til å svare på spørsmål om legemiddellevering og immuninteraksjoner i organene som er inkludert i vår krets. Denne teknikken gjør det mulig for perfusjon av organer som ikke er mulig å perfuse ved tradisjonelle ex-vivo metoder, samtidig som de unngår de viktigste clearance organene. Før operasjonen begynte, sett et sirkulerende vannbad og alle de vannjakkede komponentene, til 37 grader Celsius.Bekreft at slangen rengjøres, og bruk en boblefelle i et fuktig kammer som perfusatreservoaret for å begrense perfusatvolumet. For å utføre kateteriseringsprosedyren, bekreft mangel på respons på pedalrefleks, i en åtte til 10 uker gammel mannlig bedøvet pære se mus. Og plasser musen i liggende stilling på et styrofoam bord, med hodet klokken seks.Immobilisere dyrene lemmer med tape, og tørk magen med isopropylalkohol. Lag et T-formet snitt i magen, ved hjelp av elektrokoagulasjon for å stoppe blødninger rundt kanten av snittet. Skyv magen, jejunum og tykktarmen til høyre side av magen, for å avsløre abdominal aorta, vena cava og vanlige iliac og iliolumbar arterier og årer.Under et disseksjonsmikroskop, finn og ligater ovarie- og iliolumbararteriene og venene med 4-O silkesug. Loop to 4-O silke suturer under abdominal aorta og dårligere vena cava omtrent en centimeter over iliac arterie og vene, en millimeter fra hverandre. Deretter gjør en løs nikk i suturen nærmest iliac fartøyene.Bruk en nålholder til å justere og strekke både dårligere vena cava og abdominal aorta. Og, holde fartøyene strukket, bruk en 24-gauge bevinget skjold IV kateter for å punktere abdominal aorta. Så snart nålen trenger omtrent en millimeter inn i fartøyet, trykk inn knappen for å trekke nålekjernen, og sett kateteret omtrent fem millimeter inn i fartøyet.Sett inn et kateter fem millimeter i dårligere vena cava, på samme måte. Og bind begge suturene rundt de kateteriserte karene. Påfør deretter øyeblikkelig lim for å immobilisere kateterne til erekteren spinne a, og erstatte bukorganene.For å sette opp perfusjonssystemet, plasser musen på en silisiumpute i det vannjakkede fuktige kammeret, og immobilisere katetervingene til puten med 19-gauge nåler. Fyll arteriell kateterinntak, med forvarmet perfusjonsbuffer. Bruk hemostatiske tang, og en skrukontakt for å feste kateterinntaket til slangen, og immobilisere innløpsperfusjonsslangen med tape.Juster peristaltisk strømningshastighet til 0,6 milliliter per minutt, og hold perfusjonsutstrømningen åpen i fem til 10 minutter, for å vaske blodet ut gjennom det venøse kateteret. Noen blodpropper vil være til stede i utløpskateteret, skylle ut blodproppene med perfusatbuffer, og bruke en skrue på kontakten for å feste til enden av venekateteret til utløpsslangen for å lukke kretsen. Dekk deretter det fuktige kammeret med et forvarmet lokk i opptil to timer med perfusjon, og kontrollerer regelmessig nivået av perfusat.Her vises konfokale bilder etter perfusjon med ringeløsning som inneholder Hoechst 33342 og DyLight-649 lectin. Muskel, benmarg, testiklene, blære, prostata og fothud viser vanligvis en effektiv kjernefysisk og vaskulær farging. Hematoksylin og eosinfarging av disse vevene etter tre timer med normal denmiske perfusjonen, avslører en vellykket rødme av organene, uten tilsynelatende vevsskade.Denne modellen kan brukes til å forstå narkotikaopptaksveier, i det fysiologiske irrelevante miljøet. For eksempel, for å forstå rollen som serumkomponenter i akkumulering av legemidler. Vi bruker systemet, for å forstå mekanismen for liposom akkumulering i huden.

Research

JoVE Journal

Medicine

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Forbedret Visualisering av lungemetastaser ved Single Cell Oppløsning i Mus med Kombinert<em&gt; In-situ</em&gt; Perfusjon av lungevev og X-Gal Farging av<em&gt; LacZ</em&gt;-Merket tumorceller

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Carotisar infusjoner for farmakokinetiske og farmakodynamiske Analyse av Taxaner i Mus

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Orthotopic Hind Limb Transplantasjon i Mus

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Opprettelse av mage Adheranser i Mus

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

En lukket-brystet modell å indusere tverrgående aorta Constriction i mus

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

The Generation of Closed Femoral Fractures in Mice: A Model to Study Bone Healing

Generering av lukkede femur brudd i mus: en modell for å studere bein Healing

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

Normothermic Ex Situ hjertet perfusjon i arbeider modus: vurdering av hjertefunksjon og metabolisme

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Prekliniske modell av hind lem iskemi i diabetiker kaniner

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

Ultralyd Imaging av Thoracic og Abdominal Aorta i mus å bestemme aneurisme dimensjoner

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...