Name: establishing in situ closed circuit perfusion of lower abdominal organs and hind limbs in mice
Uploaded: 2020-08-13T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice at JoVE.com

Исследование было поддержано NIH грант CA194058 DS, Skaggs школа фармации ADR программы субсидирования семян (DS); Национальный фонд естественных наук Китая (Грант No 317771093), Проект международного сотрудничества провинции Цзилинь (No.20180414085Г), Фонд фундаментальных исследований для центральных университетов, Программа для JLU Science and Technology Innovative Research Team (2017TD-27, 2019TD-36).

Все методы, описанные здесь, были одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Университета Колорадо (IACUC).
1. Предварительное нагревание системы перфузии
<ol><li>Подготовьте систему перфузии перед операцией, начав циркулирующую водяную ванну с 37...

<ol>
	<li>Ghaidan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ten+year+follow-up+of+lung+transplantations+using+initially+rejected+donor+lungs+after+reconditioning+using+ex+vivo+lung+perfusion.">Ten year follow-up of lung transplantations using initially rejected donor lungs after reconditioning using ex vivo lung perfusion.</a> Journal of Cardiothoracic Surgery. 14 (1), 125 (2019).</li><li>Kabagambe, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Ex+vivo+Hypothermic+and+Normothermic+Perfusion+for+Assessment+of+High-risk+Deceased+Donor+Human+Kidneys+for+Transplantation.">Combined Ex vivo Hypothermic and Normothermic Perfusion for Assessment of High-risk Deceased Donor Human Kidneys for Transplantation.</a> Transplantation. 103 (2), 392-400 (2019).</li><li>Knaak, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+subnormothermic+ex+vivo+liver+perfusion+for+the+storage,+assessment,+and+repair+of+marginal+liver+grafts.">Technique of subnormothermic ex vivo liver perfusion for the storage, assessment, and repair of marginal liver grafts.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), e51419 (2014).</li><li>Hems, R., Ross, B. D., Berry, M. N., Krebs, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gluconeogenesis+in+the+perfused+rat+liver.">Gluconeogenesis in the perfused rat liver.</a> Biochemical Journal. 101 (2), 284-292 (1966).</li><li>Nielsen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin+increases+water+permeability+of+kidney+collecting+duct+by+inducing+translocation+of+aquaporin-CD+water+channels+to+plasma+membrane.">Vasopressin increases water permeability of kidney collecting duct by inducing translocation of aquaporin-CD water channels to plasma membrane.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (4), 1013-1017 (1995).</li><li>Sutherland, F. J., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+blood+and+perfusion+fluid+perfused+heart.">The isolated blood and perfusion fluid perfused heart.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).</li><li>Schreiter, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+perfusion+system+emulating+in+vivo+conditions+in+noncirrhotic+and+cirrhotic+human+liver.">An ex vivo perfusion system emulating in vivo conditions in noncirrhotic and cirrhotic human liver.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 342 (3), 730-741 (2012).</li><li>Sevick, E. M., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscous+resistance+to+blood+flow+in+solid+tumors:+effect+of+hematocrit+on+intratumor+blood+viscosity.">Viscous resistance to blood flow in solid tumors: effect of hematocrit on intratumor blood viscosity.</a> Cancer Research. 49 (13), 3513-3519 (1989).</li><li>Duyverman, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+isolated+tumor+perfusion+model+in+mice.">An isolated tumor perfusion model in mice.</a> Nature Protocols. 7 (4), 749-755 (2012).</li><li>Sears, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+perfusion+of+a+tumor-containing+colon+with+monoclonal+antibody.">Ex vivo perfusion of a tumor-containing colon with monoclonal antibody.</a> J Surg Res. 31 (2), 145-150 (1981).</li><li>Duda, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+cells+facilitate+lung+metastasis+by+bringing+their+own+soil.">Malignant cells facilitate lung metastasis by bringing their own soil.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (50), 21677-21682 (2010).</li><li>Kristjansen, P. E., Boucher, Y., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexamethasone+reduces+the+interstitial+fluid+pressure+in+a+human+colon+adenocarcinoma+xenograft.">Dexamethasone reduces the interstitial fluid pressure in a human colon adenocarcinoma xenograft.</a> Cancer Research. 53 (20), 4764-4766 (1993).</li><li>Sevick, E. M., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+resistance+to+blood+flow+in+solid+tumors+perfused+ex+vivo:+effects+of+tumor+size+and+perfusion+pressure.">Geometric resistance to blood flow in solid tumors perfused ex vivo: effects of tumor size and perfusion pressure.</a> Cancer Research. 49 (13), 3506-3512 (1989).</li><li>Zhang, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Maintenance+of+Primary+Human+Multiple+Myeloma+Cells+through+the+Optimization+of+the+Osteoblastic+Niche.">Ex vivo Maintenance of Primary Human Multiple Myeloma Cells through the Optimization of the Osteoblastic Niche.</a> PLoS One. 10 (5), (2015).</li><li>Di Buduo, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular+flow+chamber+for+engineering+bone+marrow+architecture+and+function.">Modular flow chamber for engineering bone marrow architecture and function.</a> Biomaterials. 146, 60-71 (2017).</li><li>Lokerse, W. J. M., Eggermont, A. M. M., Grull, H., Koning, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+an+isolated+limb+infusion+model+for+investigation+of+drug+delivery+kinetics+to+solid+tumors+by+thermosensitive+liposomes+and+hyperthermia.">Development and evaluation of an isolated limb infusion model for investigation of drug delivery kinetics to solid tumors by thermosensitive liposomes and hyperthermia.</a> Journal of Controlled Release. 270, 282-289 (2018).</li><li>Tietjen, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+targeting+to+the+endothelium+during+normothermic+machine+perfusion+of+human+kidneys.">Nanoparticle targeting to the endothelium during normothermic machine perfusion of human kidneys.</a> Science Translational Medicine. 9 (418), (2017).</li><li>Ternullo, S., de Weerd, L., Flaten, G. E., Holsaeter, A. M., Skalko-Basnet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+human+skin+flap+model:+A+missing+link+in+skin+penetration+studies.">The isolated perfused human skin flap model: A missing link in skin penetration studies.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 96, 334-341 (2017).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, 4986 (2008).</li><li>Hekman, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Dual-Modality+Imaging+in+Renal+Cell+Carcinoma:+An+Ex+vivo+Kidney+Perfusion+Study.">Targeted Dual-Modality Imaging in Renal Cell Carcinoma: An Ex vivo Kidney Perfusion Study.</a> Clinical Cancer Research. 22 (18), 4634-4642 (2016).</li><li>Graham, R. A., Brown, T. R., Meyer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+model+for+the+study+of+tumor+metabolism+by+nuclear+magnetic+resonance:+characterization+of+the+phosphorus-31+spectrum+of+the+isolated+perfused+Morris+hepatoma+7777.">An ex vivo model for the study of tumor metabolism by nuclear magnetic resonance: characterization of the phosphorus-31 spectrum of the isolated perfused Morris hepatoma 7777.</a> Cancer Research. 51 (3), 841-849 (1991).</li></ol>

Описанная схема может быть использована для зондирования различных вопросов исследований, например, роли различных компонентов сыворотки и тканевых барьеров в доставке лекарств или торговле иммунной и стволовыми клетками. Различные системы доставки лекарств (например, липосомы и на?...

Изолированный орган перфузии был первоначально разработан для изучения физиологии органов для трансплантации1,2,3, и позволило понимание функций органов без вмешательства со стороны других систем организма. Например, изолированная перфузия почек и сердца была чрезвычайно полезна для понимания основных принципов гемодинамики и эффектов вазоактивных агентов, в то время как перфузия печени была важна для понимания метаболической функции, включая метаболизм наркотиков в здоровой и больной ткани4,,5,,6,,7. Кроме того, исследования перфузии имеют решающее значение для понимания жизнеспособности и функции органов, предназначенных для трансплантации. В Cancer Researchearch, изолированные перфузии опухоли была описана несколькими группами с помощью мыши, крысы, и свежестекованные человеческие ткани8,9. В некоторых изолированных перфузии опухоли, опухоль была имплантирована в яичников жира площадку, чтобы заставить рост опухоли, снабжающей кровеносные сосуды из мезентерии артерии10. Группа Jain выполнила новаторские исследования с использованием изолированных перфузии аденокарциномы толстой кишки, чтобы понять опухолевую гемодинамику и метастазы8,,11,,12,13. Другие инновационные инженерии ex vivo установки включают 96-ну пластины на основе перфузии устройства для культуры первичных человеческих множественных клеток миеломы14 и модульной камерой потока для инженерной архитектуры костного мозга и функции исследований15.
В дополнение к исследованиям физиологии и патологии, перфузия органов была использована для изучения основных принципов доставки лекарств. Так, одна группа описала изолированную перфузию конечностей крыс и изучила накопление липосом в имплантированных саркомах16,в то время как другая группа выполнила расчлененную перфузию почек человека для изучения эндотелиального таргетинга наночастиц17. Ternullo et al. использовали изолированный переполох кожи человека как близко к vivo модели проникновения препарата кожи18.
Несмотря на эти достижения в перфузии крупных органов и тканей, не было никаких сообщений о на месте перфузии моделей у мышей, что: а) шунтирование органов очистки, таких как печень, селезенка и почки; б) включают органы малого таза, кожу, мышцы, репродуктивные органы (у мужчин), мочевой пузырь, простату и костный мозг. Из-за небольшого размера этих органов и поставки сосудов, ex vivo каннуляция и создание перфузии цепи не представляется возможным. Мышь является наиболее важной моделью животных в исследованиях рака и иммунологии, а также в доставке лекарств. Способность взлетать маленькие органы мыши позволит ответить на интересные вопросы, касающиеся доставки лекарств в эти органы, в том числе к опухолям, имплантированных в таз (пузырь, простата, яичник, костный мозг), а также исследования фундаментальной физиологии и иммунологии заболеваний этих органов. Для решения этой проблемы мы разработали схему перфузии на мышах, которая потенциально может избежать повреждения тканей и гораздо лучше подходит для функциональных исследований, чем изолированные перфузии органов.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1073px;" width="1071">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3.5x-90x stereo zoom microscope on boom stand with LED light</td>
			<td>Amscope</td>
			<td>SKU: SM-3BZ-80S</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Carbon dioxide, USP</td>
			<td>Airgas healthcare</td>
			<td style="width:135px;">19087-5283</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:191px;">NIKON</td>
			<td style="width:135px;">ECLIPSE Ti2</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Disposable Sterile Cautery Pen with High Temp</td>
			<td style="width:191px;">FIAB</td>
			<td style="width:135px;">F7244</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Moist chamber bubble trap (part 6 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">733692</td>
			<td style="width:313px;">Customized as the perfisate container; also enabled constant pressure perfusion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Moist chamber cover with quartz window (part 3 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">733524</td>
			<td style="width:313px;">keep the chamber&#39;s temperature</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Moist chamber with metal tube heat exchanger</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">732901</td>
			<td style="width:313px;">Water-jacketed moist chamber with lid to maintain perfusate and mouse temperature</td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:55px;width:435px;">Olsen-Hegar needle holders with suture cutters</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">125014</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:435px;">Oxygen compressed, USP</td>
			<td>Airgas healthcare</td>
			<td style="width:135px;">C2649150AE06</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Roller pump (part 4 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">730113</td>
			<td style="width:313px;">deliver perfusate to cannula in the moist chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCP plugsys servo control F/Perfusion (part 1 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">732806</td>
			<td style="width:313px;">control the purfusion speed</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silicone pad</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Silicone tubing set (arrows in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus (TYGON)</td>
			<td style="width:135px;">733456</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Student standard pattern forceps</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">91100-12</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">14001-14</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Table for moist chamber</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">734198</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Thermocirculator (part 2 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">724927</td>
			<td style="width:313px;">circulating water bath for all water-jacketed components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Three-way stopcock (part 5 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Cole-Palmer</td>
			<td style="width:135px;">30600-02</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Veterinary anesthesia machine</td>
			<td style="width:191px;">Highland</td>
			<td style="width:135px;">HME109</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">19-G BD PrecisionGlide needle</td>
			<td style="width:191px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">305186</td>
			<td style="width:313px;">For immobilizing the Insyte Autoguard Winged needle and scratching the cortical bone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-0 silk sutures</td>
			<td style="width:191px;">Keebomed-Hopemedical</td>
			<td style="width:135px;">427411</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-0 silk sutures</td>
			<td style="width:191px;">Keebomed-Hopemedical</td>
			<td style="width:135px;">427401</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Filter (0.2 &#181;m)</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher</td>
			<td>42225-CA</td>
			<td style="width:313px;">Filter for 5% BSA-RINGER&#8217;S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Permanent marker</td>
			<td style="width:191px;">Staedtler</td>
			<td style="width:135px;">342-9</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe (10 mL)</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">14-823-2E</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe (60 mL)</td>
			<td style="width:191px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">309653</td>
			<td style="width:313px;">Filter for 5% BSA-RINGER&#8217;S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:435px;">1% Evans blue ( w/v ) in phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.5)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma</td>
			<td style="width:135px;">314-13-6</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% buffered formalin</td>
			<td>velleyvet</td>
			<td style="width:135px;">36692</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BALB/c mice ( 8-10 weeks old )</td>
			<td style="width:191px;">Charles River</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Baxter Viaflex lactate Ringer&#39;s solution</td>
			<td style="width:191px;">EMRN Medical Supplies Inc.</td>
			<td style="width:135px;">JB2324</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Bovine serum albumin</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>11021-037</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate glue</td>
			<td style="width:191px;">Krazy Glue</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DyLight-649-lectin</td>
			<td style="width:191px;">Vector Laboratories,Inc.</td>
			<td style="width:135px;">ZB1214</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol (70% (vol/vol))</td>
			<td style="width:191px;">Pharmco</td>
			<td style="width:135px;">111000190</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Hoechst33342</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:135px;">H3570</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Isoflurane</td>
			<td>Piramal Enterprises Limited</td>
			<td style="width:135px;">66794-017-25</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:191px;">Gibco</td>
			<td style="width:135px;">10010023</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing in situ closed circuit perfusion of lower abdominal organs and hind limbs in mice

Ex vivo перфузии является важным физиологическим инструментом для изучения функции изолированных органов (например, печени, почек). В то же время, из-за небольшого размера органов мыши, ex vivo перфузии кости, мочевого пузыря, кожи, простаты и репродуктивных органов является сложной или неосуществимой. Здесь мы впервые сообщаем о схеме перфузии нижней части тела у мышей, которая включает в себя вышеуказанные ткани, но обходит основные органы очистки (почки, печень и селезенка). Схема устанавливается путем канниелирования брюшной аорты и нижней полой вены над подвздошной артерией и венами и прижигания периферических кровеносных сосудов. Перфузия осуществляется через перистальтический насос с перфузионным потоком, поддерживаемым до 2 ч. На месте окрашивания флуоресцентным лектином и раствором Hoechst подтверждается, что микроваскулатура была успешно пронизана. Эта модель мыши может быть очень полезным инструментом для изучения патологических процессов, а также механизмов доставки лекарств, миграции/метастазирования циркулирующих опухолевых клеток в/из опухоли, а также взаимодействия иммунной системы с переполнимыми органами и тканями.

Мы создали замкнутую систему перфузии цепи через каннулуля брюшной аорты и нижней полой вены 8-10 недельных мышей, сохраняя при этом объем буфера перфузии менее 10 мл. Рисунок 3A показывает конфокалные изображения после перфузии тканей с раствором Ringer, содержащим Hoechst 33342 и ...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice at JoVE.com

Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice

Протокол описан для in situ перфузии нижней части тела мыши, в том числе мочевого пузыря, простаты, половых органов, кости, мышцы и стопы кожи.

Создание In Situ закрытого цепи перфузии нижних органов брюшной полости и задних конечностей у мышей

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small ...

Этот протокол может быть использован для ответа на вопросы о доставке лекарств и иммунных взаимодействий в органах, включенных в нашу схему. Этот метод позволяет перфузии органов, которые не могут пронизыть традиционными методами экс-виво, избегая при этом основных органов клиренса. Перед началом операции установите циркулирующую водяную баню и все компоненты в водяной куртке до 37 градусов по Цельсию.Подтвердите, что трубки очищаются, и использовать пузырь ловушку во влажной камере, как перфусировать резервуар, чтобы ограничить объем перфусации. Для выполнения процедуры катетеризации, подтвердить отсутствие реакции на педаль рефлекс, в 8 до 10 недель мужчина анестезировал луковицу увидеть мышь. И поместите мышь в положение на спине на доске пенополистирола, с головой в шесть часов.Обездвижить конечности животных лентой и протереть живот изопропиловым спиртом. Сделайте Т-образный разрез в брюшной полости, используя электрокоагуляцию, чтобы остановить кровотечение по краю разреза. Нажмите живот, jejunum и толстой кишки на правую сторону живота, чтобы выявить брюшной аорты, полости вены и общих подвздошных и илиолумбарных артерий и вен.Под микроскопом вскрытия, найти и ligate яичников и илиолумбарных артерий и вен с 4-O шелковые швы. Петля два 4-O шелковые швы под брюшной аорты и нижней полости вены около одного сантиметра выше подвздошной артерии и вены, один миллиметр друг от друга. Затем сделайте свободный кивнуть в шве ближе всего к подвиху судов.Используйте держатель иглы, чтобы горизонтально выровнять и растянуть как нижняя вена cava и брюшной аорты. И, сохраняя сосуды растягивается, использовать 24-го калибра крылатый щит IV катетер для прокола брюшной аорты. Как только игла проникает примерно на один миллиметр в сосуд, на угнетают кнопку, чтобы втянуть ядро иглы, и вставляют катетер около пяти миллиметров в сосуд.Вставьте катетер пять миллиметров в нижняя кава вены, таким же образом. И связать оба шва вокруг катетеризованных сосудов. Затем нанесите мгновенный клей, чтобы обездвижить катетеры, чтобы возвеститель спина, и заменить органы брюшной полости.Чтобы настроить систему перфузии, поместите мышь на кремниевую площадку во влажную камеру с водяной курткой и обездвижйте крылья катетера на площадку 19-го калибра иглами. Заполните вход артериального катетера с предварительно разогретым буфером перфузии. Используйте гемостатические типсы и винтовой разъем, чтобы прикрепить вход катетера к трубе, и обездвижить вход перфузии трубки с лентой.Отрегулируйте скорость перистальтического потока до 0,6 миллилитров в минуту и держите отток перфузии открытым в течение пяти-десяти минут, чтобы вымыть кровь через венозный катетер. Некоторые сгустки будут присутствовать в розетке катетер, промыть сгустки с перфузировать буфер, и использовать винт на разъем, чтобы прикрепить к концу венозного катетера к розетке трубки, чтобы закрыть цепь. Затем накройте влажную камеру предварительно разогретой крышкой на срок до двух часов перфузии, периодически проверяя уровень перфуза.Здесь показаны конфокальные изображения после перфузии с решением звонаря, содержащим Hoechst 33342 и DyLight-649 lectin. Мышцы, костный мозг, яички, мочевой пузырь, простата и кожа стопы обычно демонстрируют эффективное ядерное и сосудистое окрашивание. Гематоксилин и эозин окрашивание этих тканей после трех часов нормальной темической перфузии, показывает успешное промывка органов, без видимых повреждений тканей.Эта модель может быть использована для понимания путей поглощения наркотиков, в физиологической нерелевантной среде. Например, понять роль компонентов сыворотки в накоплении препарата. Мы используем систему, чтобы понять механизм липосомного накопления в коже.

Research

JoVE Journal

Medicine

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Улучшена визуализация метастазов в легких на одной резолюции сотовый у мышей, комбинированные<em&gt; В месте</em&gt; Перфузии легочной ткани и X-Gal Окрашивание<em&gt; LacZ</em&gt;-Меткой опухолевых клеток

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Сонной артерии Настои для Фармакокинетические и фармакодинамические анализ Таксаны в мышах

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Экс Ситу нормотермических машина перфузии Печени доноров

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Ортотопическая задних конечностей трансплантации у мышей

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Создание спаек в брюшной полости у мышей

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

Закрыт грудь модель побудить поперечной сужение аорты у мышей

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

The Generation of Closed Femoral Fractures in Mice: A Model to Study Bone Healing

Поколение закрытых переломов бедренной мышей: модель для изучения кости Исцеление

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

Нормотермических Ex Situ сердце перфузии в рабочем режиме: оценки функции сердца и метаболизма

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Доклиническая модель иабеза Хинд конечностей у диабетических кроликов

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

УЗИ в мышей, чтобы определить размеры аневризмы грудной и брюшной аорты

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...