Name: establishing in situ closed circuit perfusion of lower abdominal organs and hind limbs in mice
Uploaded: 2020-08-13T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice at JoVE.com

Studien stöddes av NIH-bidraget CA194058 till DS, Skaggs School of Pharmacy ADR seed grant program (DS); National Natural Science Foundation of China (anslag nr 31771093), projektet för internationellt samarbete av Jilin-provinsen (no.201180414085GH), grundforskningsfonderna för de centrala universiteten, programmet för JLU Science and Technology Innovative Research Team (2017TD-27, 2019TD-36).

Alla metoder som beskrivs här har godkänts av University of Colorado's Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC).
1. Förvärm perfusionssystemet
<ol><li>Förbered perfusionssystemet före operationen genom att starta ett 37 °C cirkulerande vattenbad för alla vattenmantlade komponenter (perfusatreservoar, fuktig kammare och lock) enligt bilden i figur 1A. Se till att slangen är ren och byt ut vid behov. För att begränsa perfusatvolymen, använd ...

<ol>
	<li>Ghaidan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ten+year+follow-up+of+lung+transplantations+using+initially+rejected+donor+lungs+after+reconditioning+using+ex+vivo+lung+perfusion.">Ten year follow-up of lung transplantations using initially rejected donor lungs after reconditioning using ex vivo lung perfusion.</a> Journal of Cardiothoracic Surgery. 14 (1), 125 (2019).</li><li>Kabagambe, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Ex+vivo+Hypothermic+and+Normothermic+Perfusion+for+Assessment+of+High-risk+Deceased+Donor+Human+Kidneys+for+Transplantation.">Combined Ex vivo Hypothermic and Normothermic Perfusion for Assessment of High-risk Deceased Donor Human Kidneys for Transplantation.</a> Transplantation. 103 (2), 392-400 (2019).</li><li>Knaak, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technique+of+subnormothermic+ex+vivo+liver+perfusion+for+the+storage,+assessment,+and+repair+of+marginal+liver+grafts.">Technique of subnormothermic ex vivo liver perfusion for the storage, assessment, and repair of marginal liver grafts.</a> Journal of Visualized Experiments. (90), e51419 (2014).</li><li>Hems, R., Ross, B. D., Berry, M. N., Krebs, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gluconeogenesis+in+the+perfused+rat+liver.">Gluconeogenesis in the perfused rat liver.</a> Biochemical Journal. 101 (2), 284-292 (1966).</li><li>Nielsen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin+increases+water+permeability+of+kidney+collecting+duct+by+inducing+translocation+of+aquaporin-CD+water+channels+to+plasma+membrane.">Vasopressin increases water permeability of kidney collecting duct by inducing translocation of aquaporin-CD water channels to plasma membrane.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (4), 1013-1017 (1995).</li><li>Sutherland, F. J., Hearse, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+blood+and+perfusion+fluid+perfused+heart.">The isolated blood and perfusion fluid perfused heart.</a> Pharmacological Research. 41 (6), 613-627 (2000).</li><li>Schreiter, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+perfusion+system+emulating+in+vivo+conditions+in+noncirrhotic+and+cirrhotic+human+liver.">An ex vivo perfusion system emulating in vivo conditions in noncirrhotic and cirrhotic human liver.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 342 (3), 730-741 (2012).</li><li>Sevick, E. M., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viscous+resistance+to+blood+flow+in+solid+tumors:+effect+of+hematocrit+on+intratumor+blood+viscosity.">Viscous resistance to blood flow in solid tumors: effect of hematocrit on intratumor blood viscosity.</a> Cancer Research. 49 (13), 3513-3519 (1989).</li><li>Duyverman, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+isolated+tumor+perfusion+model+in+mice.">An isolated tumor perfusion model in mice.</a> Nature Protocols. 7 (4), 749-755 (2012).</li><li>Sears, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+perfusion+of+a+tumor-containing+colon+with+monoclonal+antibody.">Ex vivo perfusion of a tumor-containing colon with monoclonal antibody.</a> J Surg Res. 31 (2), 145-150 (1981).</li><li>Duda, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+cells+facilitate+lung+metastasis+by+bringing+their+own+soil.">Malignant cells facilitate lung metastasis by bringing their own soil.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (50), 21677-21682 (2010).</li><li>Kristjansen, P. E., Boucher, Y., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexamethasone+reduces+the+interstitial+fluid+pressure+in+a+human+colon+adenocarcinoma+xenograft.">Dexamethasone reduces the interstitial fluid pressure in a human colon adenocarcinoma xenograft.</a> Cancer Research. 53 (20), 4764-4766 (1993).</li><li>Sevick, E. M., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geometric+resistance+to+blood+flow+in+solid+tumors+perfused+ex+vivo:+effects+of+tumor+size+and+perfusion+pressure.">Geometric resistance to blood flow in solid tumors perfused ex vivo: effects of tumor size and perfusion pressure.</a> Cancer Research. 49 (13), 3506-3512 (1989).</li><li>Zhang, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+Maintenance+of+Primary+Human+Multiple+Myeloma+Cells+through+the+Optimization+of+the+Osteoblastic+Niche.">Ex vivo Maintenance of Primary Human Multiple Myeloma Cells through the Optimization of the Osteoblastic Niche.</a> PLoS One. 10 (5), (2015).</li><li>Di Buduo, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular+flow+chamber+for+engineering+bone+marrow+architecture+and+function.">Modular flow chamber for engineering bone marrow architecture and function.</a> Biomaterials. 146, 60-71 (2017).</li><li>Lokerse, W. J. M., Eggermont, A. M. M., Grull, H., Koning, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+evaluation+of+an+isolated+limb+infusion+model+for+investigation+of+drug+delivery+kinetics+to+solid+tumors+by+thermosensitive+liposomes+and+hyperthermia.">Development and evaluation of an isolated limb infusion model for investigation of drug delivery kinetics to solid tumors by thermosensitive liposomes and hyperthermia.</a> Journal of Controlled Release. 270, 282-289 (2018).</li><li>Tietjen, G. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticle+targeting+to+the+endothelium+during+normothermic+machine+perfusion+of+human+kidneys.">Nanoparticle targeting to the endothelium during normothermic machine perfusion of human kidneys.</a> Science Translational Medicine. 9 (418), (2017).</li><li>Ternullo, S., de Weerd, L., Flaten, G. E., Holsaeter, A. M., Skalko-Basnet, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolated+perfused+human+skin+flap+model:+A+missing+link+in+skin+penetration+studies.">The isolated perfused human skin flap model: A missing link in skin penetration studies.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 96, 334-341 (2017).</li><li>Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematoxylin+and+eosin+staining+of+tissue+and+cell+sections.">Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2008, 4986 (2008).</li><li>Hekman, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+Dual-Modality+Imaging+in+Renal+Cell+Carcinoma:+An+Ex+vivo+Kidney+Perfusion+Study.">Targeted Dual-Modality Imaging in Renal Cell Carcinoma: An Ex vivo Kidney Perfusion Study.</a> Clinical Cancer Research. 22 (18), 4634-4642 (2016).</li><li>Graham, R. A., Brown, T. R., Meyer, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ex+vivo+model+for+the+study+of+tumor+metabolism+by+nuclear+magnetic+resonance:+characterization+of+the+phosphorus-31+spectrum+of+the+isolated+perfused+Morris+hepatoma+7777.">An ex vivo model for the study of tumor metabolism by nuclear magnetic resonance: characterization of the phosphorus-31 spectrum of the isolated perfused Morris hepatoma 7777.</a> Cancer Research. 51 (3), 841-849 (1991).</li></ol>

Den beskrivna kretsen kan användas för att undersöka olika forskningsfrågor, till exempel rollen av olika serumkomponenter och vävnadsbarriärer vid läkemedelsleverans, eller immun- och stamcellshandel. Olika drug delivery-system (t.ex. liposomer och nanopartiklar) kan läggas till perfusatet för att förstå de fysiologiska och biokemiska faktorernas roll vid leverans. Varaktigheten av perfusion kan variera, beroende på vävnaden studerade, vetenskapliga mål, och sammansättningen av perfusate. Vi presenterar h...

Isolerade organ perfusion utvecklades ursprungligen för att studera organfysiologi för transplantation1,2,3,och möjliggjorde förståelse av funktioner i organ utan störningar från andra kroppssystem. Till exempel, isolerade njure och hjärta perfusion var oerhört användbart för att förstå grundläggande principer för hemodynamik och effekter av vasoaktiva medel, medan leverperfusion var viktigt att förstå den metaboliska funktionen, inklusive läkemedelsmetabolism i friska och sjuka vävnad4,5,6,7. Dessutom var perfusionsstudier avgörande för att förstå livskraft och funktion hos organ avsedda för transplantation. I Cancer Researchearch, isolerade tumör perfusion har beskrivits av flera grupper med hjälp av mus, råtta, och nyligen resected mänskliga vävnader8,9. I vissa isolerade tumör perfusion, tumören implanterades i äggstocken fett pad att tvinga tillväxten av tumör levererar blodkärl från mesenteri artär10. Jain gruppen utfört banbrytande studier med isolerad perfusion av kolon adenokarcinom att förstå tumör hemodynamik och metastasering8,11,12,13. Andra innovativa konstruerade ex vivo-inställningar inkluderar en 96-väl plåtbaserad perfusionsenhet för att odla de primära mänskliga multipelt myelomcellerna14 och en modulär flödeskammare för ingenjörskonsterad benmärgsarkitektur och funktionsforskning15.
Förutom fysiologi och patologi studier, organ perfusion har använts för att studera de grundläggande principerna för läkemedelstillförsel. Således beskrev en grupp isolerade råtta lem perfusion och studerade ansamling av liposomer i implanterade sarkom16, medan en annan grupp utförs dissekeras mänskliga njurperfusion att studera endotel inriktning av nanopartiklar17. Ternullo et al. använde en isolerad perfunderad mänsklig hudflik som en nära-till-in vivo hud drog penetration modell18.
Trots dessa framsteg i perfusion av stora organ och vävnader, det har inte förekommit några rapporter om in situ perfusion modeller hos möss som: a) kringgå clearance organ såsom lever, mjälte och njurar; b) inkluderar bäckenorgan, hud, muskler, reproduktionsorgan (hos män), urinblåsa, prostata och benmärg. På grund av dessa organs ringa storlek och den tillförsel vasculature, ex vivo cannulation och etablering av en perfusion krets har inte varit möjligt. Musen är den viktigaste djurmodellen inom cancer- och immunologiforskning och läkemedelsleverans. Förmågan att granska små musorgan skulle tillåta intressanta frågor om läkemedelsleverans till dessa organ, inklusive till tumörer implanteras i bäckenet (urinblåsan, prostata, äggstock, benmärg), som skall besvaras, samt studier av grundläggande fysiologi och immunologi av sjukdomar i dessa organ. För att åtgärda denna brist utvecklade vi en in situ perfusion krets hos möss som potentiellt kan undvika vävnadsskada och är mycket bättre lämpad för funktionell forskning än isolerade organ perfusion.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1073px;" width="1071">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">3.5x-90x stereo zoom microscope on boom stand with LED light</td>
			<td>Amscope</td>
			<td>SKU: SM-3BZ-80S</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Carbon dioxide, USP</td>
			<td>Airgas healthcare</td>
			<td style="width:135px;">19087-5283</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Confocal microscope</td>
			<td style="width:191px;">NIKON</td>
			<td style="width:135px;">ECLIPSE Ti2</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Disposable Sterile Cautery Pen with High Temp</td>
			<td style="width:191px;">FIAB</td>
			<td style="width:135px;">F7244</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Moist chamber bubble trap (part 6 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">733692</td>
			<td style="width:313px;">Customized as the perfisate container; also enabled constant pressure perfusion</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Moist chamber cover with quartz window (part 3 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">733524</td>
			<td style="width:313px;">keep the chamber&#39;s temperature</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Moist chamber with metal tube heat exchanger</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">732901</td>
			<td style="width:313px;">Water-jacketed moist chamber with lid to maintain perfusate and mouse temperature</td>
		</tr>
		<tr height="54">
			<td height="54" style="height:55px;width:435px;">Olsen-Hegar needle holders with suture cutters</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">125014</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="28">
			<td height="28" style="height:28px;width:435px;">Oxygen compressed, USP</td>
			<td>Airgas healthcare</td>
			<td style="width:135px;">C2649150AE06</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Roller pump (part 4 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">730113</td>
			<td style="width:313px;">deliver perfusate to cannula in the moist chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SCP plugsys servo control F/Perfusion (part 1 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">732806</td>
			<td style="width:313px;">control the purfusion speed</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Silicone pad</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Silicone tubing set (arrows in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus (TYGON)</td>
			<td style="width:135px;">733456</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Student standard pattern forceps</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">91100-12</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools (FST)</td>
			<td style="width:135px;">14001-14</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Table for moist chamber</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">734198</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Thermocirculator (part 2 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:135px;">724927</td>
			<td style="width:313px;">circulating water bath for all water-jacketed components</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Three-way stopcock (part 5 in Figure 1)</td>
			<td style="width:191px;">Cole-Palmer</td>
			<td style="width:135px;">30600-02</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Veterinary anesthesia machine</td>
			<td style="width:191px;">Highland</td>
			<td style="width:135px;">HME109</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;">19-G BD PrecisionGlide needle</td>
			<td style="width:191px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">305186</td>
			<td style="width:313px;">For immobilizing the Insyte Autoguard Winged needle and scratching the cortical bone</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4-0 silk sutures</td>
			<td style="width:191px;">Keebomed-Hopemedical</td>
			<td style="width:135px;">427411</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6-0 silk sutures</td>
			<td style="width:191px;">Keebomed-Hopemedical</td>
			<td style="width:135px;">427401</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Filter (0.2 &#181;m)</td>
			<td style="width:191px;">ThermoFisher</td>
			<td>42225-CA</td>
			<td style="width:313px;">Filter for 5% BSA-RINGER&#8217;S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Permanent marker</td>
			<td style="width:191px;">Staedtler</td>
			<td style="width:135px;">342-9</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe (10 mL)</td>
			<td style="width:191px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:135px;">14-823-2E</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Syringe (60 mL)</td>
			<td style="width:191px;">BD</td>
			<td style="width:135px;">309653</td>
			<td style="width:313px;">Filter for 5% BSA-RINGER&#8217;S</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:435px;">1% Evans blue ( w/v ) in phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.5)</td>
			<td style="width:191px;">Sigma</td>
			<td style="width:135px;">314-13-6</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10% buffered formalin</td>
			<td>velleyvet</td>
			<td style="width:135px;">36692</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BALB/c mice ( 8-10 weeks old )</td>
			<td style="width:191px;">Charles River</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">Baxter Viaflex lactate Ringer&#39;s solution</td>
			<td style="width:191px;">EMRN Medical Supplies Inc.</td>
			<td style="width:135px;">JB2324</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Bovine serum albumin</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>11021-037</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate glue</td>
			<td style="width:191px;">Krazy Glue</td>
			<td style="width:135px;"></td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DyLight-649-lectin</td>
			<td style="width:191px;">Vector Laboratories,Inc.</td>
			<td style="width:135px;">ZB1214</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol (70% (vol/vol))</td>
			<td style="width:191px;">Pharmco</td>
			<td style="width:135px;">111000190</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Hoechst33342</td>
			<td style="width:191px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:135px;">H3570</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Isoflurane</td>
			<td>Piramal Enterprises Limited</td>
			<td style="width:135px;">66794-017-25</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:435px;">Phosphate buffered saline</td>
			<td style="width:191px;">Gibco</td>
			<td style="width:135px;">10010023</td>
			<td style="width:313px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishing in situ closed circuit perfusion of lower abdominal organs and hind limbs in mice

Ex vivo perfusion är ett viktigt fysiologiskt verktyg för att studera funktionen hos isolerade organ (t.ex. lever, njurar). Samtidigt, på grund av den lilla storleken på musorgan, ex vivo perfusion av ben, urinblåsa, hud, prostata, och reproduktiva organ är utmanande eller inte genomförbart. Här rapporterar vi för första gången en in situ underkroppperfusion krets hos möss som innehåller ovanstående vävnader, men kringgår de viktigaste clearance organ (njure, lever och mjälte). Kretsen är etablerad genom kanylerande buken stora kroppspulsådern och sämre vena cava ovanför höftartären och ven och cauterizing perifera blodkärl. Perfusion utförs via en peristaltisk pump med perfusat flöde bibehålls i upp till 2 h. In situ färgning med fluorescerande lektin och Hoechst lösning bekräftade att microvasculature var framgångsrikt perfused. Denna mus modell kan vara ett mycket användbart verktyg för att studera patologiska processer samt mekanismer för läkemedelstillförsel, migration / metastasering av cirkulerande tumörceller till/ från tumör, och interaktioner av immunsystemet med perfunderade organ och vävnader.

Vi sätter upp en sluten krets perfusion system genom cannulation av buken stora kroppspulsåder och sämre vena cava av 8-10 veckor gamla möss samtidigt som volymen av perfusion buffert mindre än 10 ml. Figur 3A visar konfokala bilder efter perfusing vävnader med Ringer lösning som innehåller Hoechst 33342 och DyLight 649-lectin. Muskel, benmärg, testikel, urinblåsa, prostata och fot hud visar effektiv nukleära och vaskulär färgning. Figur 3B visar he...

Watch this Scientific Journal Video about Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice at JoVE.com

Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice

Ett protokoll beskrivs för in situ perfusion av musens underkropp, inklusive urinblåsan, prostatan, könsorgan, ben, muskler och fot hud.

Upprättande in Situ sluten krets perfusion av nedre bukorganen och bakbenen hos möss

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small ...

Detta protokoll kan användas för att svara på frågor om läkemedelsleverans och immuninteraktioner inom de organ som ingår i vår krets. Denna teknik möjliggör perfusion av organ som inte är möjligt att genomläsa av traditionella ex-vivo metoder, samtidigt som man undviker de viktigaste clearance organ. Innan operationen påbörjas, ställ in ett cirkulerande vattenbad och alla vattenmantade komponenter, till 37 grader Celsius.Bekräfta att slangen rengörs, och använd en bubbelfälla i en fuktig kammare som perfusatereservoaren för att begränsa perfusatvolymen. För att utföra kateterisering förfarandet, bekräfta en brist på svar på pedal reflex, i en åtta till 10 veckor gamla manliga sövda glödlampa se musen. Och placera musen i ryggposition på en styrofoam ombord, med huvudet klockan sex.Immobilisera djuren lemmar med tejp, och torka buken med isopropyl alkohol. Gör ett T-format snitt i buken, med hjälp av elektrokoagulering för att stoppa blödningar runt snittets kant. Tryck magen, jejunum och kolon till höger sida av buken, att avslöja buken aorta, vena cava och gemensamma iliaca och iliolumbar artärer och vener.Under en dissekering mikroskop, lokalisera och ligate äggstocks- och iliolumbar artärer och vener med 4-O silke suturer. Loop två 4-O siden suturer under buken aorta och sämre vena cava ungefär en centimeter ovanför höftartären och ven, en millimeter isär. Gör sedan en lös nick i suturen närmast iliacakärlen.Använd en nålhållare för att horisontellt anpassa och sträcka både sämre vena cava och bukaortan. Och, hålla kärlen sträckta, använd en 24-gauge bevingad sköld IV kateter för att punktera bukaortan. Så snart nålen tränger in ungefär en millimeter i kärlet, tryck ner knappen för att dra tillbaka nålkärnan och för in katetern cirka fem millimeter i kärlet.Sätt in en kateter fem millimeter i sämre vena cava, på samma sätt. Och binda båda suturerna runt de kateteriserade kärlen. Applicera sedan omedelbar lim för att immobilisera katetrarna till erector spin a, och ersätta bukorganen.För att ställa in perfusionssystemet, placera musen på en kiselplatta i den vattenmantade fuktiga kammaren och immobilisera katetervingarna till dynan med 19-gauge nålar. Fyll den arteriella kateterns inlopp, med förvarad perfusionsbuffert. Använd hemostatiska tång, och en skruv-on-kontakt för att fästa kateterns inlopp i slangen, och immobilisera inloppsperfusionsslangen med tejp.Justera peristaltiska flödet till 0,6 milliliter per minut, och hålla perfusion utflödet öppen i fem till 10 minuter, för att tvätta blodet genom venkateter. Vissa blodproppar kommer att finnas i utloppkatetern, spola ut proppar med perfusate buffert, och använda en skruv på kontakten för att fästa i slutet av venkatetern till utloppsslangen för att stänga kretsen. Täck sedan den fuktiga kammaren med ett förärmt lock i upp till två timmars perfusion, med jämna mellanrum kontroll av nivån av perfusat.Här visas konfokala bilder efter perfusion med ringarelösning innehållande Hoechst 33342 och DyLight-649 lectin. Muskeln, benmärgen, testikeln, urinblåsan, prostata och mul huden visar vanligtvis en effektiv nukleära och vaskulära färgning. Hematoxylin och eosin färgning av dessa vävnader efter tre timmar av normala thermic perfusion, avslöjar en framgångsrik spolning av organen, med några uppenbara vävnad skada.Denna modell kan användas för att förstå läkemedelsupptagsvägar, i den fysiologiska irrelevanta miljön. Till exempel, för att förstå rollen av serumkomponenter i läkemedelsansamling. Vi använder systemet, för att förstå mekanismen för liposomansamling i huden.

Research

JoVE Journal

Medicine

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Improved Visualization of Lung Metastases at Single Cell Resolution in Mice by Combined In-situ Perfusion of Lung Tissue and X-Gal Staining of lacZ-Tagged Tumor Cells

Förbättrad Visualisering av lungmetastaser på Single Cell Upplösning i möss i Kombinerade<em&gt; In-situ</em&gt; Perfusion av lungvävnad och X-gal-färgning av<em&gt; LacZ</em&gt;-Taggade tumörceller

Metastasis is the main cause of death in the majority of cancer types and consequently a main focus in cancer research. However, the detection of ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

Halspulsådern Tinkturer för farmakokinetiska och farmakodynamiska Analys av taxaner i möss

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Ex situ normotermisk Machine Perfusion av donator Lever

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Orthotopic bakbenen Transplantation i musen

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Creation of Abdominal Adhesions in Mice

Skapande av buken adhesioner hos möss

Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

En stängd-bröst modell att inducera tvärgående aorta förträngning i möss

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...

The Generation of Closed Femoral Fractures in Mice: A Model to Study Bone Healing

Generering av slutna lårbensfrakturer hos möss: en modell för att studera benläkning

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies ...

Normothermic Ex Situ Heart Perfusion in Working Mode: Assessment of Cardiac Function and Metabolism

Normothermic Ex Situ hjärtat Perfusion i arbetar läge: bedömning av hjärtfunktionen och Metabolism

The current standard method for organ preservation (cold storage, CS), exposes the heart to a period of cold ischemia that limits the safe preservation ...

Preclinical Model of Hind Limb Ischemia in Diabetic Rabbits

Prekliniska modell av hind lem ischemia i diabetiska kaniner

Peripheral vascular disease is a widespread clinical problem that affects millions of patients worldwide. A major consequence of peripheral vascular ...

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

Ultraljudsundersökningar av bröst- och bukhåla Aorta i möss att bestämma Aneurysm dimensioner

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...