Name: validated lc-ms/ms panel for quantifying 11 drug-resistant tb medications in small hair samples
Uploaded: 2020-05-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Validated LC-MS/MS Panel for Quantifying 11 Drug-Resistant TB Medications in Small Hair Samples at JoVE.com

המחברים רוצים להודות לפרופסור Keertan Dheda, ד ר עלי Esmail, ו מאריטג'יאה פרטוריוס באוניברסיטת קייפ טאון המכון לריאות שהקל על אוסף דגימות שיער למחקר. המחברים מכירים בהכרת העבודה את התרומות של המשתתפים במחקר.

כל המטופלים סיפקו הסכמה מושכלת בכתב לפני איסוף דגימת שיער. הצלחנו לקבל אישור מוסדי מועצת המנהלים מאוניברסיטת קייפטאון ואוניברסיטת קליפורניה, סן פרנסיסקו.
1. דגימת שיער
<ol><li>קבל הסכמה מושכלת בכתב.</li>
	<li>השימוש מספריים נקיים לחתוך כ 20-30 קווצות שיער הקרקפת מהאזור העורף קרוב לק...

<ol>
	<li>Kurbatova, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+poor+outcomes+among+patients+treated+for+multidrug-resistant+tuberculosis+at+DOTS-plus+projects.">Predictors of poor outcomes among patients treated for multidrug-resistant tuberculosis at DOTS-plus projects.</a> Tuberculosis (Edinb). 92, 397-403 (2012).</li><li>Dheda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology,+pathogenesis,+transmission,+diagnosis,+and+management+of+multidrug-resistant,+extensively+drug-resistant,+and+incurable+tuberculosis.">The epidemiology, pathogenesis, transmission, diagnosis, and management of multidrug-resistant, extensively drug-resistant, and incurable tuberculosis.</a> Lancet Respiratory Medicine. , (2017).</li><li>Berg, K. M., Arnsten, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+and+conceptual+challenges+in+measuring+antiretroviral+adherence.">Practical and conceptual challenges in measuring antiretroviral adherence.</a> Journal of Acquired Immunodeficiency Syndromes (JAIDS). 43, 79-87 (2006).</li><li>Kagee, A., Nel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+association+between+self-report+items+for+HIV+pill+adherence+and+biological+measures.">Assessing the association between self-report items for HIV pill adherence and biological measures.</a> AIDS Care. 24 (11), 1448-1452 (2012).</li><li>Haberer, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adherence+to+antiretroviral+prophylaxis+for+HIV+prevention:+a+substudy+cohort+within+a+clinical+trial+of+serodiscordant+couples+in+East+Africa.">Adherence to antiretroviral prophylaxis for HIV prevention: a substudy cohort within a clinical trial of serodiscordant couples in East Africa.</a> PLoS Medicine. 10 (9), 1001511 (2013).</li><li>Pullar, T., Kumar, S., Tindall, H., Feely, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+to+stop+counting+the+tablets.">Time to stop counting the tablets.</a> Clinical Pharmacology &amp; Therapeutics. 46 (2), 163-168 (1989).</li><li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+study+of+multiple+measures+of+adherence+to+HIV+protease+inhibitors.">A comparison study of multiple measures of adherence to HIV protease inhibitors.</a> Annals of Internal Medicine. 134 (10), 968-977 (2001).</li><li>Wendel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barriers+to+use+of+electronic+adherence+monitoring+in+an+HIV+clinic.">Barriers to use of electronic adherence monitoring in an HIV clinic.</a> Annals of Pharmacotherapy. 35, 1010-1101 (2001).</li><li>Ruiz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+voriconazole+plasma+concentrations+on+treatment+response+in+critically+ill+patients.">Impact of voriconazole plasma concentrations on treatment response in critically ill patients.</a> Clinical Pharmacology &amp; Therapeutic. , (2019).</li><li>Saktiawati, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+sampling+strategies+for+therapeutic+drug+monitoring+of+first-line+tuberculosis+drugs+in+patients+with+tuberculosis.">Optimal sampling strategies for therapeutic drug monitoring of first-line tuberculosis drugs in patients with tuberculosis.</a> Clinical Phamacokinetics. , (2019).</li><li>Podsadecki, T. J., Vrijens, B. C., Tousset, E. P., Rode, R. A., Hanna, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="White+coat+compliance"+limits+the+reliability+of+therapeutic+drug+monitoring+in+HIV-1-infected+patients.">"White coat compliance" limits the reliability of therapeutic drug monitoring in HIV-1-infected patients.</a> HIV Clinical Trials. 9 (4), 238-246 (2008).</li><li>Cuypers, E., Flanagan, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+interpretation+of+hair+analysis+for+drugs+and+drug+metabolites.">The interpretation of hair analysis for drugs and drug metabolites.</a> Clinical Toxicology. 56 (2), 90-100 (2018).</li><li>Knitz, P., Villain, M., Crimele, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+analysis+for+drug+detection.">Hair analysis for drug detection.</a> Therapeutic Drug Monitoring. 28 (3), 442-446 (2006).</li><li>Barroso, M., Gallardo, E., Vleira, D. N., Lopez-Rivadulla, M., Queiroz, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair:+a+complementary+source+of+bioanalytical+information+in+forensic+toxicology.">Hair: a complementary source of bioanalytical information in forensic toxicology.</a> Bioanalysis. 3 (1), 67-79 (2011).</li><li>Gandhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atazanavir+concentration+in+hair+is+the+strongest+predictor+of+outcomes+on+antiretroviral+therapy.">Atazanavir concentration in hair is the strongest predictor of outcomes on antiretroviral therapy.</a> Clinical Infectious Diseases. 52 (10), 1267-1275 (2011).</li><li>Koss, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+concentrations+of+antiretrovirals+predict+viral+suppression+in+HIV-infected+pregnant+and+breastfeeding+Ugandan+women.">Hair concentrations of antiretrovirals predict viral suppression in HIV-infected pregnant and breastfeeding Ugandan women.</a> AIDS. 29 (7), 825-830 (2015).</li><li>Pintye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+Report:+Lopinavir+Hair+Concentrations+Are+the+Strongest+Predictor+of+Viremia+in+HIV-Infected+Asian+Children+and+Adolescents+on+Second-Line+Antiretroviral+Therapy.">Brief Report: Lopinavir Hair Concentrations Are the Strongest Predictor of Viremia in HIV-Infected Asian Children and Adolescents on Second-Line Antiretroviral Therapy.</a> Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes (JAIDS). 76 (4), 367-371 (2017).</li><li>Baxi, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nevirapine+Concentration+in+Hair+Samples+Is+a+Strong+Predictor+of+Virologic+Suppression+in+a+Prospective+Cohort+of+HIV-Infected+Patients.">Nevirapine Concentration in Hair Samples Is a Strong Predictor of Virologic Suppression in a Prospective Cohort of HIV-Infected Patients.</a> PLoS One. 10 (6), 0129100 (2015).</li><li>Gandhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiretroviral+concentrations+in+hair+strongly+predict+virologic+response+in+a+large+HIV+treatment-naive+clinical+trial.">Antiretroviral concentrations in hair strongly predict virologic response in a large HIV treatment-naive clinical trial.</a> Clinical Infectious Diseases. 5, 1044-1047 (2019).</li><li>Gerona, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+analysis+of+11+medications+for+drug+resistant+TB+in+small+hair+samples+to+quantify+adherence+and+exposure+using+a+validate+LC-MS/MS+panel.">Simultaneous analysis of 11 medications for drug resistant TB in small hair samples to quantify adherence and exposure using a validate LC-MS/MS panel.</a> Journal of Chromatography B. 1125, 121729 (2019).</li><li>Metcalfe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+anti-tuberculosis+drug+concentration+in+hair+and+treatment+outcomes+in+MDR-+and+XDR-TB.">Association of anti-tuberculosis drug concentration in hair and treatment outcomes in MDR- and XDR-TB.</a> European Respriatory Journal Open Research. 5 (2), (2019).</li><li>Metcalfe, J. Z., O'Donnell, M. R., Bangsberg, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+Beyond+Directly+Observed+Therapy+for+Tuberculosis.">Moving Beyond Directly Observed Therapy for Tuberculosis.</a> PLoS Medicine. 12 (9), 1001877 (2015).</li></ol>

אנו מדווחים כאן פרוטוקול עבור השיטה שפיתחנו ואומת עבור כימות 11 נגד שחפת תרופות מנוצל בטיפול של DR-TB דגימות שיער קטנות באמצעות LC-MS/MS. אין שיטה אחרת עבור כימות אלה 11 תרופות בשיער פותחה בעבר, מאומת ופורסם. השיטה שלנו יכולה לכמת תת-ננו רמות של תרופות רק 20-30 קווצות שיער של כ 3 סנטימטרים (cm) אורך (~ 2 מ"?...

במאה העשרים ואחת, עמיד בפני תרופות tb (ד ר-TB) הוא אסון מתפתח עבור תוכניות שליטה הלאומי חלש כבר שחפת, עם המקרים אישר הכפלת בעבר 5 שנים בלבד, חשבונאות כמעט שליש ממקרי המוות הקשורים להתנגדות מיקרוביאלית גלובלית1,2. הטיפול המוצלח של DR-TB נדרש בדרך הנדרשת יותר ויותר רעיל קו השני משטרי מאשר טיפול עבור התרופה רגיש TB. יתר על כן, חולים עם DR-TB לעתים קרובות יש אתגרים משמעותיים מראש קיימים לדבקות, אשר תרמו הופעתה של התנגדות בתחילה3.
בניגוד לזיהום HIV שבו נטען ויראלי ניתן להשתמש כדי לפקח על הטיפול, נקודות קצה פונדקאית של תגובת הטיפול בשחפת מתעכב ולא אמין על רמה הפרט4. מעקב הקפדה על המטופל, מנבא חשוב של ריכוז תרופות נגד שחפת וכישלון הטיפול, הוא גם מאתגר. הדבקות מדווחת בעצמו סובלת מאחזור הטיה והרצון לספק את הספקים5,6. ספירות הגלולה ותרופות מערכות ניטור אירועים (mems) יכול להיות אובייקטיבי יותר7 אך לא למדוד את צריכת התרופה בפועל8,9,10. רמות התרופות ב-ביואטריסס יכולות לספק גם נתונים הניתנים לדבקות ולשני הפרמקוקינטיים. לכן, רמות התרופות פלזמה משמשות בדרך כלל בניטור תרופות טיפולית11,12. עם זאת, בהקשר של ניטור הדבקות בסמים, רמות הפלזמה מייצגות חשיפה לטווח קצר ומוגבלות על-ידי שינויים משמעותיים בפנים ובבין המטופלים בעת קביעת טווח התייחסות מתאים לדבקות. אפקטים של "מעיל לבן", כאשר הדבקות משתפרת לפני ביקורי מרפאה או לימודים, מסבך עוד יותר את יכולתם של רמות פלזמה לספק דפוסי הדבקות בסמים מדויקים13.
שיער הוא ביומטריקס אלטרנטיבי שיכול למדוד לטווח ארוך14חשיפהלסמים 14,15. תרופות רבות חילוף החומרים האנדוגניים לשלב לתוך מטריצת חלבון השיער מן המחזור מערכתית כמו שיער צומח. כאשר תהליך דינמי זה נמשך במהלך צמיחת השיער, כמות התרופה שהופקדו במטריקס שיער תלוי בנוכחות רציפה של התרופה במחזור, הפיכת שיער בדיקה טמפורלית מעולה של צריכת התרופה. שיער כמו ביומטריקס יתרון נוסף של להיות נאסף בקלות ללא צורך שרשרת קר לאחסון ומשלוח בהשוואה לדם. כמו-כן, השיער אינו ביולוגי, המספק יתרונות נוספים של היתכנות בתחום.
רמות הסמים בשיער שימשו זמן רב ביישומים משפטיים16. במהלך העשור האחרון, השיער תרופתי (arv) רמות הפגינו השירות בהערכת דבקות התרופה ב-HIV טיפול ומניעה, אשר הקבוצה שלנו תרמו. רמות arv בשיער הוכחו להיות החזק ביותר הפרמנטורים עצמאיים של תוצאות הטיפול בנגיף HIV17,18,19,20,21. כדי לקבוע אם רמות השיער של חולים DR-TB יהיה שירות זהה בניבוי תוצאת הטיפול, השתמשנו LC-MS/MS כדי לפתח ולאמת שיטה לניתוח 11 התרופות DR-TB בדגימות שיער קטן. כהערכה ראשונית של ביצועי הטיפול, אנו מודדים DR-TB רמות התרופות במדגם הנוחות של חולים עם DR-TB מקבל טיפול ישיר (DOT) בקייפ המערבי, דרום אפריקה22.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:755px;" width="755">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2 mL injection vials</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">5182-0716</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">250 uL injection vial inserts</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">5181-8872</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bead ruptor 24</td>
			<td style="width:211px;">OMNI International</td>
			<td style="width:161px;">19001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Bead ruptor tubes (2 mL bead kit, 2.8mm ceramic, 2 mL microtubes)</td>
			<td style="width:211px;">OMNI International</td>
			<td style="width:161px;">19628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bedaquiline</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">B119550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bedaquiline-d6</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">B119552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Clofazimine</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>C324300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Clofazimine-d7</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>C324302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Disposable lime glass culture tubes</td>
			<td style="width:211px;">VWR</td>
			<td style="width:161px;">60825-425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethambutol</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>E889800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethambutol-d4</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>E889802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethionamide</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">E890420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethionamide-d5</td>
			<td style="width:211px;">ClearSynth</td>
			<td>CS-O-06597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formic acid</td>
			<td style="width:211px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:161px;">F0507-100mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:216px;">Glass bottles</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:161px;">1395-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hot Shaker</td>
			<td style="width:211px;">Bellco Glass Inc</td>
			<td style="width:161px;">7746-32110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">Infinity 1260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC grade acetonitrile</td>
			<td style="width:211px;">Honeywell</td>
			<td style="width:161px;">015-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC grade methanol</td>
			<td style="width:211px;">Honeywell</td>
			<td style="width:161px;">230-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC grade water</td>
			<td style="width:211px;">Aqua Solutions Inc</td>
			<td style="width:161px;">W1089-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isoniazid</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">I821450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isoniazid-d4</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>I821452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">LC column, Synergi 2.5 um Polar RP 100 A 100 x 2 mm</td>
			<td style="width:211px;">Phenomenex</td>
			<td style="width:161px;">00D-4371-B0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">LC guard cartridge</td>
			<td style="width:211px;">Phenomenex</td>
			<td style="width:161px;">AJ0-8788</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">LC guard cartridge holder</td>
			<td style="width:211px;">Phenomenex</td>
			<td style="width:161px;">AJ0-9000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">LC-MS/MS quantitation software</td>
			<td style="width:211px;">Sciex</td>
			<td style="width:161px;">Multiquant 2.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Levofloxacin</td>
			<td style="width:211px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td dir="LTR">1362103-200MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Levofloxacin-d8</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">L360002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Linezolid</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">L466500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Linezolid-d3</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>L466502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro centrifuge tubes</td>
			<td style="width:211px;">E&#38;K Scientific</td>
			<td style="width:161px;">695554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Moxifloxacin</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>M745000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Moxifloxacin-13C, d3</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">M745003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MS/MS</td>
			<td style="width:211px;">Sciex</td>
			<td style="width:161px;">Triple Quad 5500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">OPC 14714</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>O667600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pretomanid (PA-824)</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td style="width:161px;">P122500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Prothionamide</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>P839100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Prothionamide-d5</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>P839102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pyrazinamide</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">P840600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pyrazinamide-15N, d3</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">P840602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Septum caps for injection vials</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">5185-5862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Turbovap LV evaporator</td>
			<td style="width:211px;">Biotage</td>
			<td style="width:161px;">103198/11</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

validated lc-ms/ms panel for quantifying 11 drug-resistant tb medications in small hair samples

עמיד בפני סמים-שחפת (DR-TB) הוא איום בריאות הציבור הולך וגדל, והערכה של רמות תרופות טיפוליות אולי הטבות קליניות חשוב. רמות התרופה פלזמה הם הערכה התקן הזהב הנוכחי, אבל דורשים כריתת-פלבוטומיה ושרשרת קרה, וללכוד רק לאחרונה הדבקות. השיטה שלנו משתמשת שיער, מטריצה כי הוא נאסף בקלות רפלקטיבית של הדבקות לטווח ארוך, כדי לבדוק 11 נגד שחפת תרופות. העבודה הקודמת של הקבוצה שלנו מראה כי רמות התרופה תרופתי בשיער קשורים לתוצאות HIV. השיטה שלנו לתרופות DR-TB משתמשת 2 מ"ג של שיער (3 ס מ האבותיים לשורש), אשר מרוסק ומופק ב מתנול. דגימות מנותח עם שיטת LC-MS/MS יחידה, כימות 11 תרופות ב 16 דקות לרוץ. המגבלות הנמוכות יותר של כימות (יוסה) עבור 11 התרופות נעות בין 0.01 ng/mg ל-1 ng/mg. נוכחות התרופה מאושרת על ידי השוואת היחס בין שני מעברים בעלי ספקטרומטר מסה. דגימות הן כימות באמצעות יחס האזור של התרופה הדאובטים, 15N-, או 13C התווית איזוטופולוג התרופה. השתמשנו עקומת כיול החל מ-0.001-100 ng/mg. יישום השיטה למדגם נוחות של דגימות שיער שנאספו מחולים DR-TB על טיפול ישירות נצפתה (DOT) המצוין רמות הסמים בשיער בתוך טווח דינמי ליניארי של תשעה התרופות 11 (isoniazid,, מlevofloxacin, מmoxifloxacin, קלופצין. בדקווינין, פרטואיד (מחלקה) החולה לא היה על prothionamide, ואת רמות נמדד עבור ethionamide היו קרובים ל-יוסה שלה (עם עבודה נוספת במקום לבחון את ההתאמה של המטאווליט של ethionamide לניטור החשיפה). לסיכום, אנו מתארים את ההתפתחות של פאנל רב תכליתי עבור תרופות DR-TB בשיער כטכניקה עבור ניטור התרופה הטיפולית במהלך טיפול עמיד בפני תרופות נגד שחפת.

איור של כרומוטוגרמה עם רמות מאושרות של כל 11 התרופות DR-TB מוצג באיור 1. זמן השמירה עבור כל אנליטה יכול להשתנות בעת שימוש בכלים ובעמודות שונים, כך שזמן השמירה המדויק ייקבע בנפרד.
מחולץ יון כרומטוגרמות (EICs) עבור תרופה אחת מסוימת (isoniazid, INH) באחד הכפויי (דגימת שיער רי?...

Watch this Scientific Journal Video about Validated LC-MS/MS Panel for Quantifying 11 Drug-Resistant TB Medications in Small Hair Samples at JoVE.com

Validated LC-MS/MS Panel for Quantifying 11 Drug-Resistant TB Medications in Small Hair Samples

שיטות נוכחיות של ניתוח הדבקות של המטופלים בטיפול תרופתי מורכב-שחפת (DR-TB) משטרי יכול להיות לא מדויק ואינטנסיבי משאבים. השיטה שלנו מנתחת שיער, מטריצה בקלות שנאסף ומאוחסן, עבור ריכוזי של 11 תרופות DR-TB. באמצעות LC-MS/MS, אנחנו יכולים לקבוע את רמות התרופות תת-ננוגרמה שניתן לנצל כדי להבין טוב יותר את הדבקות בסמים.

מאומת LC-MS/MS הפאנל לכמת 11 תרופות עמידות לפני שחפת בדגימות שיער קטן

Drug resistant-tuberculosis (DR-TB) is a growing public health threat, and assessment of therapeutic drug levels may have important clinical benefits. ...

דבקות המטופל היא מאתגרת מאוד חילוף החומרים של התרופה יכול להשתנות מאדם לאדם כך מדידה אובייקטיבית של רמות התרופה עשוי להוכיח להיות חשוב במניעת הופעתה של התנגדות במהלך טיפול ב- TB. אם דבקות יכולה להיות מדויקת יותר וקלה יותר לכמת, אז ספקי שירותי בריאות יכולים לפתח תוכנית טיפול שתגביל את הפיתוח של עמידות לתרופות. פיתחנו את פאנל ספקטרומטריית המסה הראשונה של אנלייט לטיפול בתרופות לשחפת מרובות בדגימות שיער קטנות במבחן אחד.הפאנל הרב-תרופתי שלנו דורש רק דגימה אחת של שני מיליגרם למטופל ולא משתמש בחילוץ פאזה מוצק או בשלב סינון כדי למנוע אובדן של נפח הדגימה. אמצעים אובייקטיביים של חשיפה לתרופות שנמדדו בשלב מוקדם של קורס הטיפול עלולים להתריע בפני רופאים על בעיות עם תרופות בודדות במשטר הטיפול. דגימות שיער חייב להיות מרוסק ביום הניתוח למדידת רמת ריכוז סמים מדויקת.כדי לרכוש דגימות שיער, לאחר קבלת הסכמה מדעת בכתב, הכינו חומרים הכוללים תווית דקה, שתי תוויות משתתפות, זוג מספריים, חתיכת רדיד אלומיניום, מגבון אלכוהול ושקית ניילון. לנגב את הלהבים של המספריים נקי עם לנגב אלכוהול. עבור לחלק האחורי של הראש ולהרים את החלק העליון של השיער באמצעות קליפ שיער אם תרצה.לאסוף 30 קווצות שיער מהגב של הראש ולבודד את סכך עם היד שלך. קח את המספריים אל הקרקפת וגזור את סככה של שיער. בזהירות למקם את סכך השיער על רדיד אלומיניום.שים את התווית הדקה על הקצה הדיסטלי של סכך השיער, והדבק אותו בצורה מאובטחת לרדיד האלומיניום. הקצה הדיסטלי הוא הצד הרחוק ביותר מהקרקפת. מקפלים מעל חתיכת רדיד אלומיניום על גבי סכך השיער ולשים תווית משתתף על גבי רדיד אלומיניום.מניחים את החלק המקופל מעל רדיד אלומיניום לתוך שקית הניילון ומכניסים תווית משתתפת נוספת על גבי שקית הניילון. עבור מיצוי סמים מדגימות השיער, לשקול שני מיליגרם של כל דגימת שיער לתוך צינורות חרוזים שכותרתו בנפרד ושני מיליגרם של דגימת השיער הריק לתוך כל אחד 16 צינורות חרוזים נוספים. לאחר שקילה, מניחים את כל צינורות חרוזים לתוך homogenizer טחנת חרוזים הומוגניזציה הדגימות במהירות של 6.95 מטרים לשנייה במשך שני מחזורים 30 שניות עם תקופת מנוחה של 15 שניות בין כל מחזור.לאחר ההומוגניזציה השנייה, הוסיפו 500 מיקרוליטרים של התערובת הסטנדרטית הפנימית המתאימה לכל דגימה והוסיפו 500 מיקרוליטרים של מתנול לצינור הריק של המטריצה. ספייק צינורות עקומת הכיול עם נפח המתאים של תערובת סטנדרטית התייחסות על פי השולחן ולמקום את כל הצינורות באמבט מים 37 מעלות עם רעידות עדינות במשך שעתיים. בסוף הדגירה, מעבירים את העל-טבעי מכל צינור חרוזים לצינורות מיקרוצנטריפוגה חדשים המסומנים ומוסיפים 500 מיקרוליטרים של מתנול לצינורות חרוזים.מערבולת צינורות חרוזים ולהעביר את לשטוף מתנול לצינורות microcentrifuge המתאימים. צנטריפוגה הדגימות בזהירות להעביר את supernatants לתוך צינורות חדשים מבלי להפריע כדורי השיער. להתאדות את הנוזל בצינורות כדי יובש ב 32 מעלות צלזיוס ולכונן מחדש את הדגימות עם 200 microliters של מים בדרגת כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה עם 1% חומצה פורמית.לאחר המערבולת, מעבירים את דגימות הנוזלים לבקבוקוני ענבר עם 250 מוסיף מיקרוליטר. עבור ספקטרומטריית מסת טנדם כרומטוגרפיה נוזלית, התקן תחילה עמודה של 2 עד 100 מילימטר עם גודל חלקיקים מיקרומטר 2.5 וגודל נקבוביות אנגסטרום 100 עם קדרי פנול עם קצה קוטבי עשויים לחלוטין מסיליקה נקבובית לתוך תא העמוד. ודא שבעמודה מותקנת גם מחסנית מגן מומלצת על-ידי היצרן.העתק והדבק את המידע המורכב הכלול במעברי פעולת השירות MDR-TB LCMS. csv לתוך התיבה בחלון מפרט המסה. בגיליון אלקטרוני, צור רצף אצווה של עקומת הכיול, בקרת איכות, דגימות מטופלים, עקומת כיול, בקרת איכות, דגימות מטופלים, עקומת כיול ובקרות איכות.הוסף זריקות ריקות ממס בתחילת וסוף הריצה, כמו גם לפני ואחרי עקומת הכיול, בקרת איכות ודגימות המטופל. לאחר מכן מניחים לפחות שמונה זריקות ריקות ממס בזריקות בעקומת הכיול ואת בקבוקון בקרת האיכות הגבוהה כדי להפחית את נשיאת האנליט. לאחר השלמת האצוות, פתח את תוכנת הכימות.גלול בין המעברים כדי לוודא שזמן השמירה שנבחר באופן אוטומטי מדויק ובדוק שההחלקה הגאוסיאנית מוגדרת ל- 1.5. לאחר מכן, לחץ על מציג את עקומת הכיול ואת הרגרסיה והגדר את סוג ההמתנה לאחד על x. לחץ על אישור ואמת את עקומת הכיול ואת דגימות בקרת האיכות כדי להבטיח שהאצווה הופעלה בהצלחה.עבור כל אזכור הפניה לכמת, לפחות שני שלישים מנקודות הכיול חייבים להיות בעלי דיוק בטווח של 80-120%ודא שערך R המוצג מעל עקומת הכיול גדול מ- 0.975. אם כל התנאים לעיל עומדים, האצווה עברה ואת הדגימות ניתן לכמת. לחץ על ערוך בסרגל הכלים ולחץ על העתק את הטבלה כולה.לאחר מכן הדבק את הטבלה בגיליון אלקטרוני ולהשתמש בממוצע הריכוז המחושב של שתי זריקות מדגם כדי לקבוע את הריכוז המדווח של כל מדגם. כאן מוצג איור של כרומטוגרמה עם רמות מאושרות של כל 11 תרופות שחפת עמידות לתרופות. בנתונים אלה, כרומטוגרמות יון שחולצו עבור תרופה מסוימת אחת באחד כיול ניתן לראות.המעברים מכמת ומזהה משמשים כדי לאשר באופן איכותי את נוכחותו של התרופה כמו היחס בין האזור של הכימות ואת האזור של מזהה נשאר קבוע על פני דגימות. התקן הפנימי מנוטר גם כדי להבטיח שכל הזרקת מדגם מנורמלת. בניתוח זה, מדגם נוח של 15 דגימות שיער בקרב אוכלוסיית מחקר כוללת של 96 חולים הנוטלים תרופות נגד סמים TB תחת תנאים טיפוליים שנצפו ישירות ממערב קייפ, דרום אפריקה הוערכה כדי לקבוע רמות מייצגות של תרופות נגד סמים TB על פני הרמות הנמוכות ביותר והגבוהות ביותר עבור כל analyte.בהיעדר מיצוי שלב מוצק או שלב סינון צעד, לטפל בעת העברת על טבעי לתוך צינורות האידוי. כל דבר שיועבר לצינורות יכול בסופו של דבר מוזרק לתוך העמוד. כמו הרוטור של ראפטור חרוז יכול לעוף אם לא דפק בחוזקה או נעול, הקפד לבדוק שוב את הרוטור לפני הניתוח.בניגוד antiretrovirals בתחום HIV, הקשר בין פרמקוקינטיקה תרופות TB, דבקות ותוצאות קליניות נשאר במידה רבה unstudied. שיערנו כי תרופות מסוימות נגד שחיפת אינן מצטברות היטב בשיער. מיקוד המטבוליטים של תרופות אלה עשוי לספק הבנה טובה יותר של דבקות המטופל.

Research

JoVE Journal

Medicine

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

פרוטוקול ליפרתרמיה הארוכה משך כל גוף בעכברים

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

השתלות מעי דק orthotopic בחולדות

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Quantification of the Immunosuppressant Tacrolimus on Dried Blood Spots Using LC-MS/MS

כימות של Tacrolimus לדיכוי מערכת החיסון בכתמי דם יבש באמצעות LC-MS / MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United ...

A Novel Approach for the Administration of Medications and Fluids in Emergency Scenarios and Settings

גישה חדשנית עבור מתן תרופות ונוזלים תרחישי חירום והגדרות

The available routes of administration commonly used for medications and fluids in the acute care setting are generally limited to oral, intravenous, or ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

ניתוח רשת של הקלטות אלקטרודה foramen ovale בחולים עמידים בפני תרופות Temporal Lobe אפילפסיה

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

עצב-מקמץ חסימת אמצע שופכה (Nemo) ב הנקבה קטנה מכרסם

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

שיטה לכימות ביצוע גפיים עליונים ב Daily Life בעזרת מדי תאוצה

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cystic Fibrosis Patients

שיטת אופטימיזציה LC-MS/MS לניתוח תפוקה גבוהה של דגימות קליניות של Ivacaftor, שלה מטבוליטים העיקריים Lumacaftor של נוזלים ביולוגיים של חולי סיסטיק פיברוזיס

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening ...

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

אין ויוו הערכה של שבר פיתוח קסם במהלך עצם הריפוי בעכברים שימוש בהתקן התואם ל- MRI Osteosynthesis את העכבר אתי

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

מבחן טעימה: קצר, המאומת בדיקה

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...