Name: validated lc-ms/ms panel for quantifying 11 drug-resistant tb medications in small hair samples
Uploaded: 2020-05-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Validated LC-MS/MS Panel for Quantifying 11 Drug-Resistant TB Medications in Small Hair Samples at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить профессора Кертана Дхеды, д-ра Али Эсмаила и Мариетджи Преториус из Института легких Кейптаунского университета, которые способствовали сбору образцов волос для исследования. Авторы также с благодарностью признают вклад участников этого исследования.

Все пациенты предоставили письменное информированное согласие до сбора образцов волос. Мы получили одобрение Совета по институциональному обзору от Университета Кейптауна и Калифорнийского университета в Сан-Франциско.
1. Выборка волос
<ol><li>Получить письменное инфор?...

<ol>
	<li>Kurbatova, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+poor+outcomes+among+patients+treated+for+multidrug-resistant+tuberculosis+at+DOTS-plus+projects.">Predictors of poor outcomes among patients treated for multidrug-resistant tuberculosis at DOTS-plus projects.</a> Tuberculosis (Edinb). 92, 397-403 (2012).</li><li>Dheda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology,+pathogenesis,+transmission,+diagnosis,+and+management+of+multidrug-resistant,+extensively+drug-resistant,+and+incurable+tuberculosis.">The epidemiology, pathogenesis, transmission, diagnosis, and management of multidrug-resistant, extensively drug-resistant, and incurable tuberculosis.</a> Lancet Respiratory Medicine. , (2017).</li><li>Berg, K. M., Arnsten, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+and+conceptual+challenges+in+measuring+antiretroviral+adherence.">Practical and conceptual challenges in measuring antiretroviral adherence.</a> Journal of Acquired Immunodeficiency Syndromes (JAIDS). 43, 79-87 (2006).</li><li>Kagee, A., Nel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+association+between+self-report+items+for+HIV+pill+adherence+and+biological+measures.">Assessing the association between self-report items for HIV pill adherence and biological measures.</a> AIDS Care. 24 (11), 1448-1452 (2012).</li><li>Haberer, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adherence+to+antiretroviral+prophylaxis+for+HIV+prevention:+a+substudy+cohort+within+a+clinical+trial+of+serodiscordant+couples+in+East+Africa.">Adherence to antiretroviral prophylaxis for HIV prevention: a substudy cohort within a clinical trial of serodiscordant couples in East Africa.</a> PLoS Medicine. 10 (9), 1001511 (2013).</li><li>Pullar, T., Kumar, S., Tindall, H., Feely, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+to+stop+counting+the+tablets.">Time to stop counting the tablets.</a> Clinical Pharmacology &amp; Therapeutics. 46 (2), 163-168 (1989).</li><li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+study+of+multiple+measures+of+adherence+to+HIV+protease+inhibitors.">A comparison study of multiple measures of adherence to HIV protease inhibitors.</a> Annals of Internal Medicine. 134 (10), 968-977 (2001).</li><li>Wendel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barriers+to+use+of+electronic+adherence+monitoring+in+an+HIV+clinic.">Barriers to use of electronic adherence monitoring in an HIV clinic.</a> Annals of Pharmacotherapy. 35, 1010-1101 (2001).</li><li>Ruiz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+voriconazole+plasma+concentrations+on+treatment+response+in+critically+ill+patients.">Impact of voriconazole plasma concentrations on treatment response in critically ill patients.</a> Clinical Pharmacology &amp; Therapeutic. , (2019).</li><li>Saktiawati, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+sampling+strategies+for+therapeutic+drug+monitoring+of+first-line+tuberculosis+drugs+in+patients+with+tuberculosis.">Optimal sampling strategies for therapeutic drug monitoring of first-line tuberculosis drugs in patients with tuberculosis.</a> Clinical Phamacokinetics. , (2019).</li><li>Podsadecki, T. J., Vrijens, B. C., Tousset, E. P., Rode, R. A., Hanna, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="White+coat+compliance"+limits+the+reliability+of+therapeutic+drug+monitoring+in+HIV-1-infected+patients.">"White coat compliance" limits the reliability of therapeutic drug monitoring in HIV-1-infected patients.</a> HIV Clinical Trials. 9 (4), 238-246 (2008).</li><li>Cuypers, E., Flanagan, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+interpretation+of+hair+analysis+for+drugs+and+drug+metabolites.">The interpretation of hair analysis for drugs and drug metabolites.</a> Clinical Toxicology. 56 (2), 90-100 (2018).</li><li>Knitz, P., Villain, M., Crimele, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+analysis+for+drug+detection.">Hair analysis for drug detection.</a> Therapeutic Drug Monitoring. 28 (3), 442-446 (2006).</li><li>Barroso, M., Gallardo, E., Vleira, D. N., Lopez-Rivadulla, M., Queiroz, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair:+a+complementary+source+of+bioanalytical+information+in+forensic+toxicology.">Hair: a complementary source of bioanalytical information in forensic toxicology.</a> Bioanalysis. 3 (1), 67-79 (2011).</li><li>Gandhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atazanavir+concentration+in+hair+is+the+strongest+predictor+of+outcomes+on+antiretroviral+therapy.">Atazanavir concentration in hair is the strongest predictor of outcomes on antiretroviral therapy.</a> Clinical Infectious Diseases. 52 (10), 1267-1275 (2011).</li><li>Koss, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+concentrations+of+antiretrovirals+predict+viral+suppression+in+HIV-infected+pregnant+and+breastfeeding+Ugandan+women.">Hair concentrations of antiretrovirals predict viral suppression in HIV-infected pregnant and breastfeeding Ugandan women.</a> AIDS. 29 (7), 825-830 (2015).</li><li>Pintye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+Report:+Lopinavir+Hair+Concentrations+Are+the+Strongest+Predictor+of+Viremia+in+HIV-Infected+Asian+Children+and+Adolescents+on+Second-Line+Antiretroviral+Therapy.">Brief Report: Lopinavir Hair Concentrations Are the Strongest Predictor of Viremia in HIV-Infected Asian Children and Adolescents on Second-Line Antiretroviral Therapy.</a> Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes (JAIDS). 76 (4), 367-371 (2017).</li><li>Baxi, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nevirapine+Concentration+in+Hair+Samples+Is+a+Strong+Predictor+of+Virologic+Suppression+in+a+Prospective+Cohort+of+HIV-Infected+Patients.">Nevirapine Concentration in Hair Samples Is a Strong Predictor of Virologic Suppression in a Prospective Cohort of HIV-Infected Patients.</a> PLoS One. 10 (6), 0129100 (2015).</li><li>Gandhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiretroviral+concentrations+in+hair+strongly+predict+virologic+response+in+a+large+HIV+treatment-naive+clinical+trial.">Antiretroviral concentrations in hair strongly predict virologic response in a large HIV treatment-naive clinical trial.</a> Clinical Infectious Diseases. 5, 1044-1047 (2019).</li><li>Gerona, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+analysis+of+11+medications+for+drug+resistant+TB+in+small+hair+samples+to+quantify+adherence+and+exposure+using+a+validate+LC-MS/MS+panel.">Simultaneous analysis of 11 medications for drug resistant TB in small hair samples to quantify adherence and exposure using a validate LC-MS/MS panel.</a> Journal of Chromatography B. 1125, 121729 (2019).</li><li>Metcalfe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+anti-tuberculosis+drug+concentration+in+hair+and+treatment+outcomes+in+MDR-+and+XDR-TB.">Association of anti-tuberculosis drug concentration in hair and treatment outcomes in MDR- and XDR-TB.</a> European Respriatory Journal Open Research. 5 (2), (2019).</li><li>Metcalfe, J. Z., O'Donnell, M. R., Bangsberg, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+Beyond+Directly+Observed+Therapy+for+Tuberculosis.">Moving Beyond Directly Observed Therapy for Tuberculosis.</a> PLoS Medicine. 12 (9), 1001877 (2015).</li></ol>

Мы сообщаем здесь протокол для метода мы разработали и подтвердили для количественной оценки 11 противотуберкулезных препаратов, используемых в лечении DR-Tb в небольших образцах волос с помощью LC-MS/MS. Ни один другой метод количественной оценки этих 11 препаратов в волосах не был ранее раз...

В XXI веке лекарственно-устойчивый ТБ (ДР-ТБ) является развивающейся катастрофой для и без того слабых национальных программ борьбы с туберкулезом, причем только за последние 5 лет число подтвержденных случаев заболевания удвоилось, что составляет почти треть всех случаев смерти, связанных с устойчивостью к противомикробным препаратам во всем мире1,2. Успешное лечение Д-ТБ обычно требует более длительных и более токсичных схем второй линии, чем лечение тБ, чувствительного к наркотикам. Кроме того, пациенты с DR-ТБ часто имеют значительные ранее существовавшие проблемы с соблюдением, что способствовало появлению резистентности первоначально3.
В отличие от ВИЧ-инфекции, где вирусные нагрузки могут быть использованы для мониторинга лечения, суррогатные конечные точки лечения при ТБ задерживаются и ненадежны на индивидуальном уровне4. Мониторинг приверженности пациента, важный предиктор субтерапевтической концентрации противотуберкулезных препаратов и неудачи лечения, также является сложной задачей. Самостоятельно сообщил и совпадение соблюдения страдает от отзыва предвзятости и желание угодить поставщикам5,6. Таблетки рассчитывает и лекарства системы мониторинга событий (MEMS) может быть более объективным7, но не измеряют фактическое потребление наркотиков8,9,10. Уровни лекарственных средств в биоматрисах могут обеспечить как присоединение, так и фармакокинетические данные. Таким образом, уровни плазмы наркотиков обычно используются в терапевтических мониторинга наркотиков11,12. Однако в контексте мониторинга соблюдения лекарственных средств уровни плазмы представляют собой кратковременное воздействие и ограничены значительной внутри- и межпациентной изменчивостью при определении соответствующего диапазона ссылки на присоединение. Эффекты "белого пальто", когда присоединение улучшается до посещения клиники или исследования, еще больше осложняет способность уровней плазмы обеспечивать точные модели пристыковки препарата13.
Волосы является альтернативной биоматрицы, которые могут измерять долгосрочное воздействие наркотиков14,15. Многие препараты и эндогенные метаболиты включаются в матрицу белка волос из системного кровообращения по мере роста волос. Поскольку этот динамичный процесс продолжается во время роста волос, количество препарата, отложенного в матрице волос, зависит от непрерывного присутствия препарата в обращении, что делает волосы отличным временным считыванием препарата. Волосы как биоматрицы имеет дополнительное преимущество легко собираться без необходимости холодной цепи для хранения и отгрузки по сравнению с кровью. Кроме того, волосы не являются биоопасными, что обеспечивает дополнительные преимущества осуществимости в этой области.
Уровни волос наркотиков уже давно используются в судебно-медицинской экспертизы16. За последнее десятилетие уровни антиретровирусной (АРВ) волос продемонстрировали полезность в оценке приверженности препаратам в лечении и профилактике ВИЧ, в которые внесла вклад наша группа. Уровни АРВ волос оказались самыми сильными независимыми предикторами исходов лечения при ВИЧ-инфекции17,,18,,19,,20,,21. Чтобы определить, будут ли уровень волос больных Д-БД-ТБ иметь такую же полезность в прогнозировании результатов лечения, мы использовали LC-MS/MS для разработки и проверки метода анализа 11 препаратов DR-TB в небольших образцах волос. В качестве первоначальной оценки эффективности анализ, мы измерили уровни DR-TB наркотиков в удобной выборке пациентов с DR-TB, получающих непосредственно наблюдаемую терапию (DOT) в Западной Капской провинции, южная Африка22.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:755px;" width="755">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2 mL injection vials</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">5182-0716</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">250 uL injection vial inserts</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">5181-8872</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bead ruptor 24</td>
			<td style="width:211px;">OMNI International</td>
			<td style="width:161px;">19001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Bead ruptor tubes (2 mL bead kit, 2.8mm ceramic, 2 mL microtubes)</td>
			<td style="width:211px;">OMNI International</td>
			<td style="width:161px;">19628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bedaquiline</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">B119550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bedaquiline-d6</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">B119552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Clofazimine</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>C324300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Clofazimine-d7</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>C324302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Disposable lime glass culture tubes</td>
			<td style="width:211px;">VWR</td>
			<td style="width:161px;">60825-425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethambutol</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>E889800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethambutol-d4</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>E889802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethionamide</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">E890420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethionamide-d5</td>
			<td style="width:211px;">ClearSynth</td>
			<td>CS-O-06597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formic acid</td>
			<td style="width:211px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:161px;">F0507-100mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:216px;">Glass bottles</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:161px;">1395-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hot Shaker</td>
			<td style="width:211px;">Bellco Glass Inc</td>
			<td style="width:161px;">7746-32110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">Infinity 1260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC grade acetonitrile</td>
			<td style="width:211px;">Honeywell</td>
			<td style="width:161px;">015-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC grade methanol</td>
			<td style="width:211px;">Honeywell</td>
			<td style="width:161px;">230-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC grade water</td>
			<td style="width:211px;">Aqua Solutions Inc</td>
			<td style="width:161px;">W1089-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isoniazid</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">I821450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isoniazid-d4</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>I821452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">LC column, Synergi 2.5 um Polar RP 100 A 100 x 2 mm</td>
			<td style="width:211px;">Phenomenex</td>
			<td style="width:161px;">00D-4371-B0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">LC guard cartridge</td>
			<td style="width:211px;">Phenomenex</td>
			<td style="width:161px;">AJ0-8788</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">LC guard cartridge holder</td>
			<td style="width:211px;">Phenomenex</td>
			<td style="width:161px;">AJ0-9000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">LC-MS/MS quantitation software</td>
			<td style="width:211px;">Sciex</td>
			<td style="width:161px;">Multiquant 2.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Levofloxacin</td>
			<td style="width:211px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td dir="LTR">1362103-200MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Levofloxacin-d8</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">L360002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Linezolid</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">L466500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Linezolid-d3</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>L466502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro centrifuge tubes</td>
			<td style="width:211px;">E&#38;K Scientific</td>
			<td style="width:161px;">695554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Moxifloxacin</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>M745000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Moxifloxacin-13C, d3</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">M745003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MS/MS</td>
			<td style="width:211px;">Sciex</td>
			<td style="width:161px;">Triple Quad 5500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">OPC 14714</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>O667600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pretomanid (PA-824)</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td style="width:161px;">P122500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Prothionamide</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>P839100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Prothionamide-d5</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>P839102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pyrazinamide</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">P840600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pyrazinamide-15N, d3</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">P840602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Septum caps for injection vials</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">5185-5862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Turbovap LV evaporator</td>
			<td style="width:211px;">Biotage</td>
			<td style="width:161px;">103198/11</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

validated lc-ms/ms panel for quantifying 11 drug-resistant tb medications in small hair samples

Лекарственно-туберкулезный (ДР-ТБ) представляет собой растущую угрозу для общественного здравоохранения, и оценка уровней терапевтических препаратов может иметь важные клинические преимущества. Уровни плазменных препаратов являются текущей оценки золотого стандарта, но требуют флеботомии и холодной цепи, и захватить только совсем недавнее соблюдение. Наш метод использует волосы, матрицу, которая легко собирается и отражает долгосрочное соблюдение, для тестирования на 11 противотуберкулезных препаратов. Предыдущая работа нашей группы показывает, что уровень антиретровирусных препаратов в волосах связан с исходами ВИЧ. Наш метод лечения препаратов Д-БД-ТБ использует 2 мг волос (3 см, проксимальных к корню), которые измельчаются и извлекаются в метанол. Образцы анализируются с помощью одного метода LC-MS/MS, количественно опрометив111 препаратов за 16 мин. Более низкие пределы количественной оценки (ЛЛО) для 11 препаратов варьируются от 0,01 нг/мг до 1 нг/мг. Присутствие препарата подтверждается сравнением соотношений двух переходов масс-спектрометрии. Образцы количественно с использованием области соотношение препарата к deuterated, 15N-, или 13C-помечены наркотиков изотополог. Мы использовали кривую калибровки в диапазоне от 0,001-100 нг/мг. Применение метода к удобному образцу образцов волос, собранных у пациентов с ДБ-ТБ при непосредственно наблюдаемой терапии (ДОТ), показало уровень препарата в волосах в линейном динамическом диапазоне девяти из одиннадцати препаратов (изониазид, пиразинамид, этамбутол, линезолид, левофлоксацин, моксифоксикацин, клоназимин, лобэк, претоманид). Ни один пациент не был на протионамид, и измеренные уровни для этионамид были близки к его LLO (с дальнейшей работой вместо изучения пригодности метаболита этионамид для мониторинга воздействия). Подводя итог, мы описываем разработку мульти-аналитовой панели для препаратов д-р-ТБ в волосах как метод терапевтического мониторинга лекарственных средств во время лечения лекарственно-устойчивого ТБ.

Иллюстрация хроматограммы с подтвержденными уровнями всех 11 препаратов ПРОТИВТ-ТБ показана на рисунке 1. Время удержания для каждого аналита может меняться при использовании различных инструментов и столбцов, поэтому точное время удержания должно определяться индиви...

Watch this Scientific Journal Video about Validated LC-MS/MS Panel for Quantifying 11 Drug-Resistant TB Medications in Small Hair Samples at JoVE.com

Validated LC-MS/MS Panel for Quantifying 11 Drug-Resistant TB Medications in Small Hair Samples

Современные методы анализа приверженности пациентов сложным режимам лекарственно-туберкулезного (ДР-ТБ) могут быть неточными и ресурсоемкими. Наш метод анализирует волосы, легко собранную и хранящуюся матрицу, на концентрации 11 препаратов DR-TB. Используя LC-MS/MS, мы можем определить уровни субнанограммы наркотиков, которые могут быть использованы, чтобы лучше понять соблюдение препарата.

Проверенная lc-MS/MS Panel для количественной оценки 11 лекарствоустойчивых противотуберкулезных препаратов в малых образцах волос

Drug resistant-tuberculosis (DR-TB) is a growing public health threat, and assessment of therapeutic drug levels may have important clinical benefits. ...

Приверженность пациентов является очень сложной задачей, и метаболизм наркотиков может варьироваться от человека к человеку, поэтому объективное измерение уровня наркотиков может оказаться важным в предотвращении появления резистентности во время лечения туберкулеза. Если бы соблюдение можно было более точно и легко количественно оценить, то медицинские работники могли бы разработать план лечения, который ограничил бы развитие лекарственной устойчивости. Мы разработали первую многопрофильную панель масс-спектрометрии для нескольких препаратов против туберкулеза в небольших образцах волос в одном анализе.Наша мультимедикаментозная панель требует только одного образца на два миллиграмма на пациента и не использует ни твердого этапа экстракции, ни фильтрации, чтобы предотвратить потерю объема образца. Объективные показатели воздействия наркотиков, измеренные на ранних стадиях курса лечения, потенциально могут предупредить врачей о проблемах с отдельными препаратами в схеме лечения. Образцы волос должны быть распылены в день анализа для точного измерения уровня концентрации препарата.Для получения образцов волос, после получения письменного информированного согласия, получить материалы готовы в том числе тонкая этикетка, два участника этикетки, ножницы, развернул кусок алюминиевой фольги, спиртовой салфетки и полиэтиленовый пакет. Протрите лезвия ножницами чистой с спиртовой салфеткой. Перейти к задней части головы и поднять верхнюю часть волос с помощью зажима для волос при желании.Соберите 30 прядей волос с задней части головы и изолировать эту миху рукой. Возьмите ножницы вниз к коже головы и вырезать эту волосы. Аккуратно поместите эту волосы на алюминиевую фольгу.Положите тонкую этикетку на дистальный конец волосы thatch, лентой его надежно алюминиевой фольги. Дистальный конец является стороной дальше от кожи головы. Сложите над куском алюминиевой фольги на верхней части волосы thatch и положить участника этикетку на верхней части алюминиевой фольги.Поместите сложенный над куском алюминиевой фольги в полиэтиленовый пакет и положить другой участник этикетки на верхней части полиэтиленового пакета. Для извлечения препарата из образцов волос, весят два миллиграмма каждого образца волос в индивидуально помечены бисером трубки и два миллиграмма чистого образца волос в каждом из 16 дополнительных шариковых трубок. После взвешивания поместите все шариковые трубки в гомогенизатор бисерной мельницы и гомогенизируйте образцы со скоростью 6,95 метра в секунду в течение двух 30-секундных циклов с 15-секундным периодом отдыха между каждым циклом.После второй гомогенизации добавьте 500 микролитров соответствующей внутренней стандартной смеси к каждому образцу и добавьте 500 микролитров метанола в матричную пустую трубку. Спайк калибровки кривой трубки с соответствующим объемом эталонной стандартной смеси в соответствии с таблицей и место все трубы в 37 градусов водяной бане с нежной тряски в течение двух часов. В конце инкубации перенесите супернатант из каждой шариковой трубки в новые маркированные микроцентрифуговые трубки и добавьте 500 микролитров метанола в бисерные трубки.Вихрь бисерных трубок и передачи метанола мыть соответствующие микроцентрифуг трубки. Центрифуга образцов и тщательно перенести supernatants в новые трубки, не нарушая волос гранулы. Выпарить жидкость в трубках до сухости при 32 градусах по Цельсию и восстановить образцы с 200 микролитров жидкой хроматографии высокого давления класса воды с 1% кремовой кислоты.После вихря перенесите образцы жидкости в янтарные флаконы с 250 микролитровыми вставками. Для жидкой хроматографии тандем масс-спектрометрии, сначала установите от двух до 100 миллиметров колонки с размером частиц 2,5 микрометра и 100 ангстрем пор размер с полярной endcapped etherlinked фенол бусы полностью сделаны из пористого кремнезема в колонке отсека. Подтвердите, что в колонке также установлен рекомендованный производителем охранный картридж.Копировать и вставлять составную информацию, включенную в переходы метода МЛУ-ТБ LCMS. csv файл в поле в окне масс-спецификации. В электронной таблице создайте пакетную последовательность кривой калибровки, контроля качества, образцов пациентов, кривой калибровки, контроля качества, образцов пациентов, кривой калибровки и контроля качества.Добавить растворитель пустые инъекции в начале и конце запуска, а также до и после кривой калибровки, контроля качества и образцов пациента. Затем поместите по крайней мере восемь растворителей пустые инъекции в инъекции в кривой калибровки и высокое качество контроля флакона, чтобы уменьшить analyte переноски. Когда пакеты будут завершены, откройте программное обеспечение для количественной оценки.Прокрутите переходы, чтобы убедиться, что автоматически выбранное время удержания является точным, и убедитесь, что gaussian сглаживание установлено на 1,5. Далее нажмите отображает кривую калибровки и регрессию и установите тип ожидания на один над x. Нажмите OK и проясните кривую калибровки и образцы контроля качества, чтобы гарантировать, что пакет успешно работает.Для каждого эталонного аналита квантификатора, по крайней мере две трети точек калибровки должны иметь точность в пределах 80-120%Проверить, что значение R отображается выше кривой калибровки больше, чем 0,975. Если все вышеперечисленные условия будут удовлетворены, партия прошла и образцы могут быть количественно. Нажмите Редактировать в панели инструментов и нажмите копировать всю таблицу.Затем вставьте таблицу в электронную таблицу и используйте среднее значение рассчитанной концентрации двух инъекций выборки для определения зарегистрированной концентрации каждого образца. Здесь показана иллюстрация хроматограммы с подтвержденными уровнями всех протестированных 11 лекарственно-устойчивых противотуберкулезных препаратов. На этих цифрах можно наблюдать извлеченные ионные хроматограммы для одного конкретного препарата в одном из калибровотелей.Квантификатор и квалификационные переходы используются для качественного подтверждения наличия препарата, поскольку соотношение между площадью квантификатора и областью квалификатора остается постоянным в разных образцах. Внутренний стандарт также контролируется для обеспечения нормализации каждой инъекции образца. В этом анализе была оценена удобная выборка из 15 образцов волос среди общей популяции 96 пациентов, принимающих лекарственно-устойчивые противотуберкулезные препараты в непосредственно наблюдаемых условиях терапии из Западной Капской провинции, южная Африка, для определения репрезентативных уровней лекарственно-устойчивых противотуберкулезных препаратов на самом низком и самом высоком уровнях для каждого анализа.При отсутствии твердой фазы извлечения или фильтрации шаг, заботиться при передаче супернатанта в испаряющиеся трубки. Все, что передается в трубки может в конечном итоге вводят в колонку. Как ротор шарика хищник может улететь, если не плотно привинчены или заблокированы, не забудьте дважды проверить ротор перед работой.В отличие от антиретровирусных препаратов в области ВИЧ, связь между фармакокинетикой противотуберкулезных препаратов, соблюдением и клиническими исходами остается в значительной степени неизученной. Мы предположили, что некоторые противотуберкулезные препараты не накапливаются хорошо в волосах. Ориентация на метаболиты этих препаратов может обеспечить лучшее понимание приверженности пациента.

Research

JoVE Journal

Medicine

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

Протокол в течение длительного периода общей управляемой гипертермии у мышей

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Ортотопическая малого трансплантации кишечника у крыс

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Quantification of the Immunosuppressant Tacrolimus on Dried Blood Spots Using LC-MS/MS

Количественная оценка иммуносупрессором такролимуса на сухих пятен крови с использованием LC-MS / MS

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United ...

A Novel Approach for the Administration of Medications and Fluids in Emergency Scenarios and Settings

Новый подход к Администрации лекарственных средств и жидкостей в чрезвычайных ситуациях Сценарии и настройки

The available routes of administration commonly used for medications and fluids in the acute care setting are generally limited to oral, intravenous, or ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

Сетевой анализ овального электродных Recordings в устойчивых к лекарственным средствам височная эпилепсия пациентов

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

Нервосберегающая Середина-уретральная обструкция (Nemo) у самок мелких грызунов

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

Метод Количественная верхней конечности производительности в повседневной жизни при помощи акселерометров

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cystic Fibrosis Patients

Оптимизированный метод LC-MS/MS для высокой пропускной способности анализа клинических образцов Ivacaftor, его основных метаболитов и Lumacaftor в биологических жидкостях больных муковисцидозом

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening ...

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

В естественных условиях Оценка развития каллуса перелом кости Исцеление у мышей с использованием МРТ совместимое устройство остеосинтеза для мыши бедренной

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

Вкус экзамен: Краткий и проверены, тест

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...