Name: validated lc-ms/ms panel for quantifying 11 drug-resistant tb medications in small hair samples
Uploaded: 2020-05-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Validated LC-MS/MS Panel for Quantifying 11 Drug-Resistant TB Medications in Small Hair Samples at JoVE.com

Yazarlar Profesör Keertan Dheda, Dr Ali Esmail ve Marietjie Pretorius University of Cape Town Akciğer Enstitüsü olan çalışma için saç örnekleri nin toplama kolaylaştırdı teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar daha minnetle bu çalışmanın katılımcıların katkılarını kabul.

Tüm hastalar saç örneği toplamadan önce yazılı bilgilendirilmiş onam verilmiştir. Cape Town Üniversitesi ve San Francisco California Üniversitesi'nden Kurumsal İnceleme Kurulu onayı aldık.
1. Saç örneklemesi
<ol><li>Yazılı bilgilendirilmiş onay alın.</li>
	<li>Mümkün olduğunca kafa derisi yakın oksipital bölgeden yaklaşık 20-30 kafa derisi saç telleri kesmek için temiz makas kullanın.</li>
	<li>Yönü belirtmek için saçın distal tarafının etrafına bant yer...

<ol>
	<li>Kurbatova, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictors+of+poor+outcomes+among+patients+treated+for+multidrug-resistant+tuberculosis+at+DOTS-plus+projects.">Predictors of poor outcomes among patients treated for multidrug-resistant tuberculosis at DOTS-plus projects.</a> Tuberculosis (Edinb). 92, 397-403 (2012).</li><li>Dheda, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology,+pathogenesis,+transmission,+diagnosis,+and+management+of+multidrug-resistant,+extensively+drug-resistant,+and+incurable+tuberculosis.">The epidemiology, pathogenesis, transmission, diagnosis, and management of multidrug-resistant, extensively drug-resistant, and incurable tuberculosis.</a> Lancet Respiratory Medicine. , (2017).</li><li>Berg, K. M., Arnsten, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Practical+and+conceptual+challenges+in+measuring+antiretroviral+adherence.">Practical and conceptual challenges in measuring antiretroviral adherence.</a> Journal of Acquired Immunodeficiency Syndromes (JAIDS). 43, 79-87 (2006).</li><li>Kagee, A., Nel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+association+between+self-report+items+for+HIV+pill+adherence+and+biological+measures.">Assessing the association between self-report items for HIV pill adherence and biological measures.</a> AIDS Care. 24 (11), 1448-1452 (2012).</li><li>Haberer, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adherence+to+antiretroviral+prophylaxis+for+HIV+prevention:+a+substudy+cohort+within+a+clinical+trial+of+serodiscordant+couples+in+East+Africa.">Adherence to antiretroviral prophylaxis for HIV prevention: a substudy cohort within a clinical trial of serodiscordant couples in East Africa.</a> PLoS Medicine. 10 (9), 1001511 (2013).</li><li>Pullar, T., Kumar, S., Tindall, H., Feely, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+to+stop+counting+the+tablets.">Time to stop counting the tablets.</a> Clinical Pharmacology &amp; Therapeutics. 46 (2), 163-168 (1989).</li><li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+study+of+multiple+measures+of+adherence+to+HIV+protease+inhibitors.">A comparison study of multiple measures of adherence to HIV protease inhibitors.</a> Annals of Internal Medicine. 134 (10), 968-977 (2001).</li><li>Wendel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Barriers+to+use+of+electronic+adherence+monitoring+in+an+HIV+clinic.">Barriers to use of electronic adherence monitoring in an HIV clinic.</a> Annals of Pharmacotherapy. 35, 1010-1101 (2001).</li><li>Ruiz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+voriconazole+plasma+concentrations+on+treatment+response+in+critically+ill+patients.">Impact of voriconazole plasma concentrations on treatment response in critically ill patients.</a> Clinical Pharmacology &amp; Therapeutic. , (2019).</li><li>Saktiawati, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+sampling+strategies+for+therapeutic+drug+monitoring+of+first-line+tuberculosis+drugs+in+patients+with+tuberculosis.">Optimal sampling strategies for therapeutic drug monitoring of first-line tuberculosis drugs in patients with tuberculosis.</a> Clinical Phamacokinetics. , (2019).</li><li>Podsadecki, T. J., Vrijens, B. C., Tousset, E. P., Rode, R. A., Hanna, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="White+coat+compliance"+limits+the+reliability+of+therapeutic+drug+monitoring+in+HIV-1-infected+patients.">"White coat compliance" limits the reliability of therapeutic drug monitoring in HIV-1-infected patients.</a> HIV Clinical Trials. 9 (4), 238-246 (2008).</li><li>Cuypers, E., Flanagan, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+interpretation+of+hair+analysis+for+drugs+and+drug+metabolites.">The interpretation of hair analysis for drugs and drug metabolites.</a> Clinical Toxicology. 56 (2), 90-100 (2018).</li><li>Knitz, P., Villain, M., Crimele, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+analysis+for+drug+detection.">Hair analysis for drug detection.</a> Therapeutic Drug Monitoring. 28 (3), 442-446 (2006).</li><li>Barroso, M., Gallardo, E., Vleira, D. N., Lopez-Rivadulla, M., Queiroz, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair:+a+complementary+source+of+bioanalytical+information+in+forensic+toxicology.">Hair: a complementary source of bioanalytical information in forensic toxicology.</a> Bioanalysis. 3 (1), 67-79 (2011).</li><li>Gandhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atazanavir+concentration+in+hair+is+the+strongest+predictor+of+outcomes+on+antiretroviral+therapy.">Atazanavir concentration in hair is the strongest predictor of outcomes on antiretroviral therapy.</a> Clinical Infectious Diseases. 52 (10), 1267-1275 (2011).</li><li>Koss, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+concentrations+of+antiretrovirals+predict+viral+suppression+in+HIV-infected+pregnant+and+breastfeeding+Ugandan+women.">Hair concentrations of antiretrovirals predict viral suppression in HIV-infected pregnant and breastfeeding Ugandan women.</a> AIDS. 29 (7), 825-830 (2015).</li><li>Pintye, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brief+Report:+Lopinavir+Hair+Concentrations+Are+the+Strongest+Predictor+of+Viremia+in+HIV-Infected+Asian+Children+and+Adolescents+on+Second-Line+Antiretroviral+Therapy.">Brief Report: Lopinavir Hair Concentrations Are the Strongest Predictor of Viremia in HIV-Infected Asian Children and Adolescents on Second-Line Antiretroviral Therapy.</a> Journal of Acquired Immune Deficiency Syndromes (JAIDS). 76 (4), 367-371 (2017).</li><li>Baxi, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nevirapine+Concentration+in+Hair+Samples+Is+a+Strong+Predictor+of+Virologic+Suppression+in+a+Prospective+Cohort+of+HIV-Infected+Patients.">Nevirapine Concentration in Hair Samples Is a Strong Predictor of Virologic Suppression in a Prospective Cohort of HIV-Infected Patients.</a> PLoS One. 10 (6), 0129100 (2015).</li><li>Gandhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiretroviral+concentrations+in+hair+strongly+predict+virologic+response+in+a+large+HIV+treatment-naive+clinical+trial.">Antiretroviral concentrations in hair strongly predict virologic response in a large HIV treatment-naive clinical trial.</a> Clinical Infectious Diseases. 5, 1044-1047 (2019).</li><li>Gerona, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+analysis+of+11+medications+for+drug+resistant+TB+in+small+hair+samples+to+quantify+adherence+and+exposure+using+a+validate+LC-MS/MS+panel.">Simultaneous analysis of 11 medications for drug resistant TB in small hair samples to quantify adherence and exposure using a validate LC-MS/MS panel.</a> Journal of Chromatography B. 1125, 121729 (2019).</li><li>Metcalfe, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+anti-tuberculosis+drug+concentration+in+hair+and+treatment+outcomes+in+MDR-+and+XDR-TB.">Association of anti-tuberculosis drug concentration in hair and treatment outcomes in MDR- and XDR-TB.</a> European Respriatory Journal Open Research. 5 (2), (2019).</li><li>Metcalfe, J. Z., O'Donnell, M. R., Bangsberg, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+Beyond+Directly+Observed+Therapy+for+Tuberculosis.">Moving Beyond Directly Observed Therapy for Tuberculosis.</a> PLoS Medicine. 12 (9), 1001877 (2015).</li></ol>

Burada, LC-MS/MS kullanılarak küçük saç örneklerinde DR-TB tedavisinde kullanılan 11 anti-TB ilaçlarının ölçülmesi için geliştirdiğimiz ve doğruladığımız yöntemin protokolünü rapor ediyoruz. Saçta bu 11 ilaç ölçmek için başka bir yöntem daha önce geliştirilmiş, doğrulanmış ve yayınlanmıştır. Yöntemimiz yaklaşık 3 santimetre (cm) uzunluğunda (~2 mg) sadece 20-30 saç teli ilaçların alt nanogram düzeylerini ölçebilir ve zaten22doğrulanmıştır . İ...

Yirmi birinci yüzyılda, ilaca dirençli Tüberküloz (DR-TB) zaten zayıf ulusal Tüberküloz kontrol programları için gelişen bir felaket, teyit durumlarda sadece son 5 yıl içinde iki katına ile, tüm ölümlerin yaklaşık üçte biri için muhasebe küresel antimikrobiyal direnç ile ilgili1,2. DR-TB'nin başarılı tedavisi, geleneksel olarak ilaca duyarlı tüberküloz tedavisinden daha uzun ve daha toksik ikinci basamak rejimlere ihtiyaç dalmıştır. Ayrıca, DR-TB olan hastalar genellikle başlangıçta direnç ortaya çıkmasına katkıda bağlılık için önemli önceden varolan zorluklar var3.
Viral yüklertedaviizlemek için kullanılabilir HIV enfeksiyonu aksine, Tüberküloz tedavi yanıtı vekil uç noktaları gecikmiş ve bireysel düzeyde güvenilmez4. Subterapötik anti-TB ilaç konsantrasyonu ve tedavi başarısızlığının önemli bir belirleyicisi olan hasta bağlılığının izlenmesi de zordur. Kendi kendine bildirilen bağlılık geri çağırma önyargı ve istek sağlayıcıları5,,6lütfen muzdarip. Hap sayıları ve ilaç olay izleme sistemleri (MEMS) daha objektifolabilir 7 ama gerçek ilaç tüketimi ölçmek yok8,9,10. Biyomatrises ilaç düzeyleri hem bağlılık ve farmakokinetik veri sağlayabilir. Bu nedenle, plazma ilaç düzeyleri yaygın terapötik ilaç izleme kullanılır11,12. Ancak, ilaç bağlılığı izleme bağlamında, plazma düzeyleri kısa süreli maruziyeti temsil eder ve uygun bağlılık referans aralığı belirlenirken hastalar arası ve hastalar arası önemli değişkenlikle sınırlıdır. "Beyaz ceket" etkileri, nerede bağlılık klinik veya çalışma ziyaretleri öncesinde geliştirir, daha doğru ilaç yapışma desenleri sağlamak için plazma düzeylerinin yeteneğini zorlaştırır13.
Saç uzun vadeli ilaç maruziyeti ölçebilirsiniz alternatif bir biyomatrik olduğunu14,15. Birçok ilaç ve endojen metabolitleri saç büyüdükçe sistemik dolaşımdan saç protein matris içine dahil. Bu dinamik süreç saç büyüme sırasında devam ederken, saç matris yatırılan ilaç miktarı dolaşımda ilacın sürekli varlığına bağlıdır, saç ilaç alımının mükemmel bir zamansal okuma yapma. Bir biyomatris olarak Saç kolayca depolama ve sevkiyat için soğuk zincir için kana göre gerek kalmadan toplanan ek avantajı vardır. Ayrıca, saç alanında ek fizibilite avantajları sağlayan, biyolojik olmayan tehlikelidir.
Saç ilaç düzeyleri uzun adli uygulamalarda kullanılmıştır16. Son on yılda, saç antiretroviral (ARV) düzeyleri HIV tedavisi ve önleme de uyuşturucu bağlılığını değerlendirmede yarar göstermiştir, hangi grubumuzun katkıda bulunmuştur. Saçarv,düzeyleri HIV enfeksiyonu17,,18,19,,20,,21tedavi sonuçlarının en güçlü bağımsız belirleyicileri olduğu gösterilmiştir. DR-TB hastalarının saç düzeylerinin tedavi sonucunu tahmin etmede aynı faydaya sahip olup olmadığını belirlemek için, küçük saç örneklerinde 11 DR-TB ilaçlarını analiz etmek için bir yöntem geliştirmek ve doğrulamak için LC-MS/MS kullandık. Testperformansının ilk değerlendirmesi olarak, Dr-TB'li hastaların batı cape, Güney Afrika22'dedoğrudan gözlenen tedavi (DOT) alan bir kolaylık örneğinde DR-TB ilaç düzeylerini ölçtük.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:755px;" width="755">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">2 mL injection vials</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">5182-0716</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">250 uL injection vial inserts</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">5181-8872</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bead ruptor 24</td>
			<td style="width:211px;">OMNI International</td>
			<td style="width:161px;">19001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Bead ruptor tubes (2 mL bead kit, 2.8mm ceramic, 2 mL microtubes)</td>
			<td style="width:211px;">OMNI International</td>
			<td style="width:161px;">19628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bedaquiline</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">B119550</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Bedaquiline-d6</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">B119552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Clofazimine</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>C324300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Clofazimine-d7</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>C324302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Disposable lime glass culture tubes</td>
			<td style="width:211px;">VWR</td>
			<td style="width:161px;">60825-425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethambutol</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>E889800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethambutol-d4</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>E889802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethionamide</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">E890420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethionamide-d5</td>
			<td style="width:211px;">ClearSynth</td>
			<td>CS-O-06597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formic acid</td>
			<td style="width:211px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:161px;">F0507-100mL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:23px;width:216px;">Glass bottles</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:161px;">1395-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hot Shaker</td>
			<td style="width:211px;">Bellco Glass Inc</td>
			<td style="width:161px;">7746-32110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">Infinity 1260</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC grade acetonitrile</td>
			<td style="width:211px;">Honeywell</td>
			<td style="width:161px;">015-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC grade methanol</td>
			<td style="width:211px;">Honeywell</td>
			<td style="width:161px;">230-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">HPLC grade water</td>
			<td style="width:211px;">Aqua Solutions Inc</td>
			<td style="width:161px;">W1089-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isoniazid</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">I821450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Isoniazid-d4</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>I821452</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">LC column, Synergi 2.5 um Polar RP 100 A 100 x 2 mm</td>
			<td style="width:211px;">Phenomenex</td>
			<td style="width:161px;">00D-4371-B0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">LC guard cartridge</td>
			<td style="width:211px;">Phenomenex</td>
			<td style="width:161px;">AJ0-8788</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">LC guard cartridge holder</td>
			<td style="width:211px;">Phenomenex</td>
			<td style="width:161px;">AJ0-9000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">LC-MS/MS quantitation software</td>
			<td style="width:211px;">Sciex</td>
			<td style="width:161px;">Multiquant 2.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Levofloxacin</td>
			<td style="width:211px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td dir="LTR">1362103-200MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Levofloxacin-d8</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">L360002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Linezolid</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">L466500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Linezolid-d3</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>L466502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Micro centrifuge tubes</td>
			<td style="width:211px;">E&#38;K Scientific</td>
			<td style="width:161px;">695554</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Moxifloxacin</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>M745000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Moxifloxacin-13C, d3</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">M745003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MS/MS</td>
			<td style="width:211px;">Sciex</td>
			<td style="width:161px;">Triple Quad 5500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">OPC 14714</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>O667600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pretomanid (PA-824)</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td style="width:161px;">P122500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Prothionamide</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>P839100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Prothionamide-d5</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td>P839102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pyrazinamide</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">P840600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pyrazinamide-15N, d3</td>
			<td style="width:211px;">Toronto Research Chemicals</td>
			<td dir="LTR">P840602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Septum caps for injection vials</td>
			<td style="width:211px;">Agilent Technologies</td>
			<td style="width:161px;">5185-5862</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Turbovap LV evaporator</td>
			<td style="width:211px;">Biotage</td>
			<td style="width:161px;">103198/11</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

validated lc-ms/ms panel for quantifying 11 drug-resistant tb medications in small hair samples

Ilaca dirençli tüberküloz (DR-TB) giderek büyüyen bir halk sağlığı tehdididir ve terapötik ilaç düzeylerinin değerlendirilmesi önemli klinik yararları olabilir. Plazma ilaç düzeyleri mevcut altın standart değerlendirme, ancak flebotomi ve soğuk zincir gerektirir, ve sadece çok yakın bağlılık yakalamak. Yöntemimiz saç kullanır, kolayca toplanan ve uzun vadeli bağlılık yansıtıcı bir matris, 11 anti-TB ilaçlar için test etmek. Grubumuz tarafından önceki çalışma saç antiretroviral ilaç düzeyleri HIV sonuçları ile ilişkili olduğunu göstermektedir. DR-TB ilaçlar için yöntemimiz 2 mg saç (kök için 3 cm proksimal), hangi pulverize ve metanol ayıklanır kullanır. Numuneler tek bir LC-MS/MS yöntemi ile analiz edilir ve 16 dk'lık bir çalışmada 11 ilaç ölçülür. 11 ilaç için daha düşük nicelik sınırları (LLOQs) 0.01 ng/mg ile 1 ng/mg arasında değişmektedir. İki kütle spektrometresi geçişinin oranları karşılaştırılarak ilaç varlığı doğrulanır. Örnekler, ilacın deuterated, 15N-veya 13C etiketli ilaç isotopolog için alan oranı kullanılarak ölçülür. 0.001-100 ng/mg arasında değişen bir kalibrasyon eğrisi kullandık. Dr-TB hastalarından doğrudan gözlenen tedavi (DOT) üzerine toplanan saç örneklerinden alınan kolaylık örneğine yöntemin uygulanması, on bir ilacın dokuzu (izoniazid, pyrazinamide, ethambutol, linezolid, levofloksasin, moksifloksasin, clofazimin, bedaquiline, pretomanid) lineer dinamik aralığında saçtaki ilaç düzeylerini göstermiştir. Hiçbir hasta protionamide değildi ve etionamid için ölçülen düzeyler LLOQ'ya yakındı (daha fazla çalışma yerine etionamid'in metabolitinin maruziyeti izlemek için uygunluğu nun incelenmesi). Özetle, saçlarda DR-TB ilaçları için çok analit panelinin geliştirilmesini ilaca dirençli tüberküloz tedavisi sırasında terapötik ilaç izleme tekniği olarak tanımlıyoruz.

11DR-TB ilacının tümünün doğrulanmış düzeylerine sahip bir kromatogram ın bir örneği Şekil 1'de gösterilmiştir. Her analyte için bekletme süresi farklı araçlar ve sütunlar kullanırken değişebilir, bu nedenle tam bekletme süresi ayrı ayrı belirlenmelidir.
Kalibratörlerden birinde belirli bir ilaç için çıkarılan Iyon Kromatogramları (EICs), (DR-TB ilaç referans standartları ile çivilenmiş boş saç örneği) ...

Watch this Scientific Journal Video about Validated LC-MS/MS Panel for Quantifying 11 Drug-Resistant TB Medications in Small Hair Samples at JoVE.com

Validated LC-MS/MS Panel for Quantifying 11 Drug-Resistant TB Medications in Small Hair Samples

Hastaların kompleks ilaca dirençli tüberküloz (DR-TB) rejimlerine bağlılığını analiz etme yöntemleri yanlış ve kaynak yoğun olabilir. Yöntemimiz, 11 DR-TB ilaç konsantrasyonları için kolayca toplanan ve depolanan bir matris olan saçı analiz eder. LC-MS/MS kullanarak, uyuşturucuya bağlılığı daha iyi anlamak için kullanılabilen alt nanogram ilaç düzeylerini belirleyebiliriz.

Küçük Saç Örneklerinde 11 İlaca Dirençli TB İlaçların Ölçülmesi için Doğrulanmış LC-MS/MS Paneli

Drug resistant-tuberculosis (DR-TB) is a growing public health threat, and assessment of therapeutic drug levels may have important clinical benefits. ...

Hasta bağlılığı çok zordur ve ilaç metabolizması kişiden kişiye değişebilir, bu nedenle ilaç düzeylerinin objektif ölçümü tüberküloz tedavisi sırasında direncin ortaya çıkmasını önlemede önemli olabilir. Eğer bağlılık daha doğru ve kolayca ölçülebilir, o zaman sağlık sağlayıcıları ilaç direnci gelişimini sınırlayacak bir tedavi planı geliştirebilir. Biz tek bir tahsin küçük saç örnekleri içinde birden fazla TB ilaçlar için ilk çoklu analit kütle spektrometresi paneli geliştirdik.Çoklu ilaç panelimiz hasta başına sadece bir adet iki miligramlık numune gerektirir ve numune hacminin kaybedilmesi için katı faz çıkarma veya filtreleme adımı kullanmaz. Tedavi kursunun başlarında ölçülen uyuşturucuya maruz kalmanın objektif ölçütleri, klinisyenleri tedavi rejimindeki bireysel ilaçlarla ilgili sorunlara karşı potansiyel olarak uyarabilir. Doğru bir ilaç konsantrasyonu düzeyi ölçümü için saç örnekleri analiz gününde toz haline getirilmelidir.Saç örnekleri elde etmek için, yazılı bilgilendirilmiş onay aldıktan sonra, ince bir etiket, iki katılımcı etiketleri, bir makas, alüminyum folyo, bir alkol mendil ve plastik bir torba açılmamış bir parça dahil olmak üzere malzemeleri hazır olsun. Makanın bıçaklarını alkol mendiliyle temizleyin. Başın arkasına gidin ve istenirse bir saç tokası kullanarak saç üst kısmını kaldırın.Başın arkasından 30 saç teli toplayın ve elinizle sazı izole edin. Makas aşağı kafa derisi götürün ve saç saz kesti. Dikkatle alüminyum folyo üzerinde saç saz yerleştirin.Alüminyum folyo güvenli bir şekilde bantlama, saç sazlık distal ucu üzerine ince etiket koyun. Distal uç kafa derisinden en uzak olan taraftır. Saç sazlık üstüne alüminyum folyo parçası üzerinde katlayın ve alüminyum folyo üstüne bir katılımcı etiket koymak.Plastik torba içine alüminyum folyo parçası üzerinde katlanmış yerleştirin ve plastik torba üstüne başka bir katılımcı etiketi koymak. Saç örneklerinden ilaç çıkarma için, her saç örneğinin iki miligramını ayrı ayrı etiketlenmiş boncuk tüplerine ve iki miligram boş saç örneğini de 16 ek boncuk tüpüne tadına varın. Tartarttıktan sonra, tüm boncuk tüplerini bir boncuk değirmeni homogenizer yerleştirin ve her çevrim arasında 15 saniyelik bir dinlenme süresi ile iki 30 saniyelik döngüler için saniyede 6,95 metre hızda örnekleri homojenize.İkinci homojenizasyondan sonra, her numuneye uygun iç standart karışımın 500 mikrolitresini ekleyin ve matris boş tüpüne 500 mikrolitre metanol ekleyin. Tabloya göre referans standart karışımı uygun hacmi ile kalibrasyon eğrisi tüpler Spike ve iki saat boyunca nazik sallayarak 37 derecelik su banyosu tüm tüpler yerleştirin. Kuluçka sonunda, yeni etiketli mikrosantrifüj tüpler içine her boncuk tüpü nden supernatant aktarın ve boncuk tüpleri metanol 500 mikrolitre ekleyin.Girdap boncuk tüpleri ve ilgili mikrosantrifüj tüplerme metanol yıkama aktarın. Numuneleri santrifüj edin ve saç peletlerini bozmadan süpernatantları dikkatlice yeni tüplere aktarın. Tüplerdeki sıvıyı 32 santigrat derecede kurumaya kadar buharlaştırın ve numuneleri %1 formik asitle 200 mikrolitre yüksek basınçlı sıvı kromatografi sınıfı su ile yeniden oluşturur.Girdap tan sonra, sıvı numuneleri 250 mikrolitre lik uçlarla kehribar şişelerine aktarın. Sıvı kromatografi tandem kütle spektrometresi için, ilk olarak 2,5 mikrometre lik partikül boyutuna ve 100 angstrom gözenek boyutuna sahip, polar endcapped eter bağlı fenol boncuklar ile 2 ila 100 milimetrelik bir kolon yükleyin. Sütunun üretici tarafından önerilen koruma kartuşuna da takOlduğunu doğrulayın.MDR-TB LCMS yöntem geçişlerinde yer alan bileşik bilgileri kopyalayın ve yapıştırın. csv dosya kitle spec penceresinde kutusuna. Elektronik tabloda, kalibrasyon eğrisi, kalite kontrolleri, hasta numuneleri, kalibrasyon eğrisi, kalite kontrolleri, hasta örnekleri, kalibrasyon eğrisi ve kalite kontrollerinin toplu sırasını oluşturun.Kalibrasyon eğrisi, kalite kontrolleri ve hasta numuneleri öncesinde ve sonrasında ve çalıştırmanın başlangıcında ve sonunda solvent boş enjeksiyonlar ekleyin. Daha sonra analit taşımaazaltmak için kalibrasyon eğrisi ve yüksek kaliteli kontrol şişeenjeksiyonları en az sekiz solvent boş enjeksiyonlar yerleştirin. Toplu iş tamamlandığında, nicelik lendirme yazılımını açın.Otomatik olarak seçilen bekletme süresinin doğru olduğundan emin olmak için geçişler arasında ilerleyin ve Gaussian düzlemenin 1,5 olarak ayarlanıp düzeltilmediğinden emin olun. Ardından, kalibrasyon eğrisini ve regresyonu görüntüler ve bekleme türünü x'in üzerinde bire ayarlar. Tamam'ı tıklatın ve toplu iş başarılı bir şekilde koştu emin olmak için kalibrasyon eğrisi ve kalite kontrol örnekleri doğrulayın.Her niceleyici referans analizi için, kalibrasyon noktalarının en az üçte ikisinin %80-120 içinde bir doğruluk payına sahip olması gerekir. Yukarıdaki koşulların tümü yerine getirilirse, toplu iş geçti ve örnekler ölçülebilir. Araç çubuğunda Edit'i tıklatın ve Tüm Tabloyu Kopyala'yı tıklatın.Daha sonra tabloyu bir elektronik tabloya yapıştırın ve her numunenin bildirilen konsantrasyonunu belirlemek için iki numune enjeksiyonunun hesaplanan konsantrasyonunun ortalamasını kullanın. Burada tüm test edilen 11 ilaca dirençli TB ilaçların doğrulanmış düzeyleri ile bir kromatogram bir örnek gösterilir. Bu rakamlarda, kalibratörlerden birinde belirli bir ilaç için çıkarılan iyon kromatogramları görülebilir.Niceleyici ve niteleyici geçişleri, niceleyicinin alanı ile niteleyici alanı arasındaki oran numuneler arasında sabit kaldığı ndan ilacın varlığını nitel olarak doğrulamak için kullanılır. Her numune enjeksiyonunun normalleştirilmesini sağlamak için dahili standart da izlenir. Bu analizde, Güney Afrika'nın Western Cape kentinden doğrudan gözlenen tedavi koşulları altında ilaca dirençli tüberküloz ilaçları alan 96 hastanın toplam çalışma popülasyonu arasında 15 saç örneğinin uygun bir örneği, her bir analit için en düşük ve en yüksek düzeyde ilaca dirençli tüberküloz ilaçlarının temsili düzeylerini belirlemek için değerlendirilmiştir.Katı bir faz çıkarma veya filtreleme adımı yokluğunda, supernatant buharlaşma tüpleri içine aktarırken dikkat edin. Tüplere aktarılan her şey kolona enjekte edilebilir. Boncuk raptor rotoru sıkıca vidalı veya kilitli değilse uçabilir gibi, çalışmadan önce rotor çift kontrol ettiğinizden emin olun.HIV alanında antiretrovirallerin aksine, Tüberküloz ilaç farmakokinetiği, bağlılık ve klinik sonuçlar arasındaki ilişki büyük ölçüde incelenmemiş tir. Bazı tüberküloz ilaçlarının saçta iyi birikmediğini varsaydık. Bu ilaçların metabolitlerinin hedeflanması hasta yayı hakkında daha iyi bir anlayış sağlayabilir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

Farelerde Uzun Süre Whole Body Hipertermi için protokol

Hyperthermia is a general term used to define the increase in core body temperature above normal. It is often used to describe the increased core body ...

Orthotopic Small Bowel Transplantation in Rats

Sıçanlarda Ortotopik Küçük Bağırsak Nakli

Small  bowel transplantation has become an accepted clinical option for patients with  short gut syndrome and failure of parenteral nutrition ...

Quantification of the Immunosuppressant Tacrolimus on Dried Blood Spots Using LC-MS/MS

LC-MS / MS kullanarak Kurutulmuş Kan Spotlar Immünosupresan Tacrolimus Niceleme

The calcineurin inhibitor tacrolimus is the cornerstone of most immunosuppressive treatment protocols after solid organ transplantation in the United ...

A Novel Approach for the Administration of Medications and Fluids in Emergency Scenarios and Settings

Acil Senaryoları ve Ayarlar İlaçlar ve Sıvılar İdaresi Yeni Bir Yaklaşım

The available routes of administration commonly used for medications and fluids in the acute care setting are generally limited to oral, intravenous, or ...

Network Analysis of Foramen Ovale Electrode Recordings in Drug-resistant Temporal Lobe Epilepsy Patients

İlaca dirençli Temporal Lob Epilepsi Hastalarında Foramen Ovale Elektrot Kayıtları Ağ Analizi

Approximately 30% of epilepsy patients are refractory to antiepileptic drugs. In these cases, surgery is the only alternative to eliminate/control ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

Kadın Küçük Kemirgenler Sinir koruyucu Orta üretral Tıkanıklığı (Nemo)

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

Ivmeölçer kullanan Günlük Yaşamda Üst Ekstremite Performans miktarının Bir Yöntem

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cystic Fibrosis Patients

Ivacaftor, büyük metabolitleri ve Lumacaftor Kistik fibrozis hastalarının biyolojik sıvı içinde klinik örnekler yüksek üretilen iş analizi için en iyi duruma getirilmiş LC-MS/MS yöntemi

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening ...

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

Vivo Fare uyluk için bir MRI uyumlu Osteosentez aygıtı kullanma farelerde kemik iyileşme sırasında kırık Kallus gelişimi değerlendirme

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

Tat sınavı: Bir kısa ve doğrulanan Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...