Name: microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species
Uploaded: 2020-02-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals Ã¢Ë†' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species at

Dette arbejde understøttes af NIH R00 HD032636.

1. Farvning med det første antistof
<ol><li>Devoks og rehydrere FFPE glider med 5 min tildelt hver af følgende trin: xylen eller tilsvarende reagenser 3x, 100% ethanol 2x, 95% ethanol 1x, 70% ethanol 1x, 50% ethanol 1x, og destilleret vand 2x. BEMÆRK: Slides bør forblive fugtige startende fra denne rehydrering trin, indtil montering i det sidste trin.</li>
	<li>For valgfri antigenudtagning skal diasene anbringes i 275 ml kogende natriumcitratopløsning (10 mM, pH = 6,0) i 8 min. For at holde opløsningen kogende...

<ol>
	<li>Lewis Carl, S. A., Gillete-Ferguson, I., Ferguson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+indirect+immunofluorescence+procedure+for+staining+the+same+cryosection+with+two+mouse+monoclonal+primary+antibodies.">An indirect immunofluorescence procedure for staining the same cryosection with two mouse monoclonal primary antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 41 (8), 1273-1278 (1993).</li><li>Lan, H. Y., Mu, W., Nikolic-Paterson, D. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+simple,+reliable,+and+sensitive+method+for+multiple+immunoenzyme+staining:+use+of+microwave+oven+heating+to+block+antibody+crossreactivity+and+retrieve+antigens.">A novel, simple, reliable, and sensitive method for multiple immunoenzyme staining: use of microwave oven heating to block antibody crossreactivity and retrieve antigens.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (1), 97-102 (1995).</li><li>Tornehave, D., Hougaard, D. M., Larsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microwaving+for+double+indirect+immunofluorescence+with+primary+antibodies+from+the+same+species+and+for+staining+of+mouse+tissues+with+mouse+monoclonal+antibodies.">Microwaving for double indirect immunofluorescence with primary antibodies from the same species and for staining of mouse tissues with mouse monoclonal antibodies.</a> Histochemistry and Cell Biology. 113 (1), 19-23 (2000).</li><li>Kim, M., Soontornniyomkij, V., Ji, B., Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=System-wide+immunohistochemical+analysis+of+protein+co-localization.">System-wide immunohistochemical analysis of protein co-localization.</a> PLoS One. 7 (2), e32043 (2012).</li><li>Bolognesi, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+Staining+by+Sequential+Immunostaining+and+Antibody+Removal+on+Routine+Tissue+Sections.">Multiplex Staining by Sequential Immunostaining and Antibody Removal on Routine Tissue Sections.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 65 (8), 431-444 (2017).</li><li>Toth, Z. E., Mezey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+visualization+of+multiple+antigens+with+tyramide+signal+amplification+using+antibodies+from+the+same+species.">Simultaneous visualization of multiple antigens with tyramide signal amplification using antibodies from the same species.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 55 (6), 545-554 (2007).</li><li>Buchwalow, I., Samoilova, V., Boecker, W., Tiemann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+immunolabeling+with+antibodies+from+the+same+host+species+in+combination+with+tyramide+signal+amplification.">Multiple immunolabeling with antibodies from the same host species in combination with tyramide signal amplification.</a> Acta Histochemica. 120 (5), 405-411 (2018).</li><li>Bauer, M., Schilling, N., Spanel-Borowski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitation+of+microwave+treatment+for+double+immunolabelling+with+antibodies+of+the+same+species+and+isotype.">Limitation of microwave treatment for double immunolabelling with antibodies of the same species and isotype.</a> Histochemistry and Cell Biology. 116 (3), 227-232 (2001).</li><li>Pirici, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+elution+method+for+multiple+immunohistochemistry+on+primary+antibodies+raised+in+the+same+species+and+of+the+same+subtype.">Antibody elution method for multiple immunohistochemistry on primary antibodies raised in the same species and of the same subtype.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (6), 567-575 (2009).</li><li>Glass, G., Papin, J. A., Mandell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIMPLE:+a+sequential+immunoperoxidase+labeling+and+erasing+method.">SIMPLE: a sequential immunoperoxidase labeling and erasing method.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (10), 899-905 (2009).</li><li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+5-plex+fluorescent+immunohistochemistry+with+tyramide+signal+amplification+and+same+species+antibodies.">Fully automated 5-plex fluorescent immunohistochemistry with tyramide signal amplification and same species antibodies.</a> Laboratory Investigation. 97 (7), 873-885 (2017).</li><li>Paul, A., Laufer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+biotin+as+a+marker+of+adrenocortical+cells+with+steroidogenic+potential.">Endogenous biotin as a marker of adrenocortical cells with steroidogenic potential.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 336 (1-2), 133-140 (2011).</li><li>Bussolati, G., Gugliotta, P., Volante, M., Pace, M., Papotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrieved+endogenous+biotin:+a+novel+marker+and+a+potential+pitfall+in+diagnostic+immunohistochemistry.">Retrieved endogenous biotin: a novel marker and a potential pitfall in diagnostic immunohistochemistry.</a> Histopathology. 31 (5), 400-407 (1997).</li><li>Wang, H., Pevsner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+endogenous+biotin+in+various+tissues:+novel+functions+in+the+hippocampus+and+implications+for+its+use+in+avidin-biotin+technology.">Detection of endogenous biotin in various tissues: novel functions in the hippocampus and implications for its use in avidin-biotin technology.</a> Cell and Tissue Research. 296 (3), 511-516 (1999).</li></ol>

Multiplex immunfarvning er nyttigt at undersøge cellulære colokalisering af to eller flere antigener. Denne udbredte teknik giver overbevisende colokalisering resultater, når primære antistoffer er konjugeret med forskellige journalister (direkte farvning). Men direkte farvning giver normalt svagere signaler i forhold til indirekte farvning, som indebærer konjugerede sekundære antistoffer til at opdage de primære antistoffer. Ved indirekte farvning afhænger et multiximmunfarvningsresultat af høj kvalitet af høj...

Ved multiplex immunfarvning, direkte farvning ved hjælp af konjugerede primære antistoffer kan give informative resultater. Uden at bruge sekundære antistoffer har den direkte farvningsmetode en lav risiko for falske colokaliseringssignaler fra antistofkrydsreaktivitet. Men, de konjugerede journalister (fluorophore, enzymer) eller biotin på den primære antistof begrænse dens fremtidige anvendelse. Alternativt giver indirekte immunfarvning normalt stærkere signaler ved hjælp af et ubøjeligt primært antistof med et mærket sekundært antistof. Ideelt set bør ukonjugerede primære antistoffer, der anvendes til multiplex immunfarvning, komme fra forskellige værtsarter for at undgå antistofkrydsreaktivitet. Den passende kombination af primære antistoffer fra forskellige værtsarter er imidlertid ikke altid tilgængelig.
Der er etableret flere metoder til at eliminere risikoen for, at det sekundære antistof reagerer med et uønsket primært antistof. En fælles metode er brugen af et F(ab) monomerisk antistof til at blokere eventuelle resterende bindende epitoper på det første primære antistofkompleks, før det farvning med det andet primære antistof1farvning . Antistof stripning, som svarer til strimlen og reprobe af en vestlig blot ark, fjerner den tidligere farvede antistof kompleks uden stripning af placeringen af påviselige reporter molekyler såsom 3,3'-diaminobenzidin tetrahydrochlorid (DAB)2 og fluorescerende tyramid deposition3. Med denne metode kan reportermolekyler i forskellige farver vise et multiplexresultat på samme dias. Multiplex-farvningen kan også opnås ved fuldstændig fjernelse af de tidligere deponerede lag af antistoffer og tilpasningen af efterfølgende erhvervede billeder fra andre antistoffer4,5. Disse metoder giver alle pålidelige resultater, selv om hver metode har sine begrænsninger og kræver enten komplicerede procedurer eller et særligt billedbehandlingssystem.
Denne protokol viser anvendelsen af en antistofstrippingmetode ved hjælp af almindeligt tilgængelige buffere. Denne protokol kan bruges til at udføre multiplex immunfluorescerende farvning på formalin-faste paraffin-embedded (FFPE) mus binyresektioner med to umærkede primære antistoffer fra samme værtsart.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-mouse</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>715-066-151</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-rabbit</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>711-066-152</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>422801</td>
			<td>2 &#956;g/mL in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ECHO</td>
			<td>Revolve 4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horseradish peroxidase-conjugated streptavidin</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-030-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven, 700W</td>
			<td>General Electric</td>
			<td>JEM3072DH1BB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-CYP2F2</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-374540</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-TH</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-25269</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>2% serum in PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-20&#945;HSD</td>
			<td>Kerafast,</td>
			<td>EB4002</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-3&#946;HSD</td>
			<td>TransGenic,</td>
			<td>KO607</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-TH</td>
			<td>NOVUS,</td>
			<td>NB300-109</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-&#946;-catenin</td>
			<td>Abcam,</td>
			<td>ab32572</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin Horseradish Peroxidase (SA-HRP)</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-303-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Cy3 Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT704B001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Fluorescein Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT701001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species

Immunfarvning er meget udbredt i biomedicinsk forskning for at vise cellulære udtryk mønster af et givet protein. Multiplex immunfarvning tillader mærkning ved hjælp af flere primære antistoffer. For at minimere antistofkrydsreaktivitet kræver multipleximmunfarvning ved hjælp af indirekte farvning umærkede primære antistoffer fra forskellige værtsarter. Den passende kombination af forskellige arters antistoffer er dog ikke altid tilgængelig. Her beskriver vi en metode til brug af ikke-mærkede primære antistoffer fra de samme værtsarter (f.eks. i dette tilfælde er begge antistoffer fra kanin) for multiplex immunfluorescens på formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) musebinyresektioner. Denne metode bruger den samme procedure og reagenser, der anvendes i antigen hentning trin til at fratage aktiviteten af den tidligere farvede primære antistof kompleks. Dias blev plettet med det første primære antistof ved hjælp af en generel immunfarvningsprotokol efterfulgt af et bindende trin med et biotinylated sekundært antistof. Derefter blev en avidin-biotin-peroxidase signal udviklingsmetode brugt med fluorophore-tyramid som substrat. Immunaktiviteten i det første primære antistofkompleks blev strippet gennem nedsænkning i en mikroovnkogende natriumcitratopløsning i 8 min. Den uopløselige fluorophore-tyramid deposition forblev på prøven, som gjorde det muligt at plette diaset med andre primære antistoffer. Selv om denne metode eliminerer de fleste falske positive signaler, nogle baggrund fra antistof cross-reaktivitet kan forblive. Hvis prøverne beriges med endogen biotin, kan der anvendes et peroxidasekonjugeret sekundært antistof til at erstatte det biotonerede sekundære antistof for at undgå det falske positive fra genvundet endogen biotin.

Resultaterne blev indhentet fra prøver, der blev behandlet med alle de beskrevne trin, herunder antigenhentningstrin 1.2. Alle sekundære antistoffer, der anvendes her, var biotinylated. Fluorophore-tyramid blev brugt til at udvikle signaler fra første og anden primære antistoffer. Billeder blev taget ved hjælp af en fluorescens mikroskop udstyret med en FITC terning (for grøn fluorescens), en TxRED terning (for Cy3), og en DAPI terning (for DAPI).
<p class="jove_content" fo:keep...

Watch this Scientific Journal Video about Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals Ã¢Ë†' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species at 

Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals ÃƒÂ¢Ã‹â€ ' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

Der er etableret flere forskellige metoder til multipleximmunfarvning ved hjælp af primære antistoffer fra samme værtsart. Her beskriver vi brugen af mikrobølgemedieret antistofstripning og fluorophore-tyramid til at blokere antistofkrydsreaktivitet under multipleximmunfarvning på formalin-fast paraffin-indlejrede musebinyresektioner.

Microwaving og Fluorophore-Tyramid for Multiplex Immunfarvning på Mouse Adrenals − Brug af ukonjugerede primære antistoffer fra samme værtsart

Immunostaining is widely used in biomedical research to show the cellular expression pattern of a given protein. Multiplex immunostaining allows labeling ...

Immunostaining er meget udbredt i biomedicinsk forskning for at identificere placeringen af et protein af interesse. Multiplex immunostaining kan detektere flere mål på den samme prøve ved hjælp af forskellige primære antistoffer. Fordelen ved denne metode er anvendelsen af almindeligt tilgængelige buffere til at eliminere antistof krydsreaktivitet, der muliggør immunstaining ved hjælp af to eller flere ikke-mærkede primære antistoffer fra samme værtsart.Demonstration af proceduren vil være Sophia Zheng, en kandidat studerende, og Qiongxia Lyu, en besøgende forsker i mit laboratorium. Før farvning, de-voks og rehydrere formalin-faste paraffin-indlejrede dias med fem minutters nedsænkning i hver opløsning som angivet. Efter den anden destilleret vand nedsænkning, placere dias i 275 milliliter kogende natriumcitrat opløsning på bunden af en pipette spids boks med et låg og læg kassen i en 700 watt mikrobølgeovn på 75% magt i otte minutter.Ved afslutningen af behandlingen åbnes låget, og opløsningen afkøles til stuetemperatur, før du vasker rutsjebanerne med tre fem minutters vask af frisk PBST i en Coplin-krukke. For at blokere eventuelle uspecifikke bindingssteder rystes den overskydende PBST fra hvert objektglas efter den sidste vask og dækkes diasene med et tilstrækkeligt volumen af en passende blokerende opløsning. Efter 30 minutter ved stuetemperatur i et befugtet kammer rystes den overskydende blokerende opløsning fra hvert dias, og der tilsættes 250 mikroliter af det første primære antistof af interesse for hver prøve.For at undgå, at prøverne tørrer ud, kan objektglassene være dækket af et stykke paraffinfilm. Efter en overnight inkubation ved fire grader Celsius i et befugtet kammer, vaskes diasene tre gange med frisk PBST i fem minutter pr vask. Ryst den overskydende PBST derefter hurtigt dække hvert dias med 250 mikroliter af en passende sekundær antistofopløsning for en times inkubation i et befugtet kammer ved stuetemperatur.Ved inkubationens afslutning vaskes objektglassene tre gange i frisk PBST som påvist, og der tilsættes 250 mikroliter frisklavet streptavidin peberrodsperoxidase til hvert objektglas. Efter 30 minutter ved stuetemperatur vaskes objektglassene tre gange i frisk PBST. Ryst derefter den overskydende PBST og dæk hvert dias med 250 mikroliter frisklavet fluorofamidopløsning.Et minut senere nedsænkes rutsjebanerne i frisk PBST efterfulgt af tre to minutters vask i frisk PBST. Efter den sidste vask påføres et par dråber af en en-til-en glycerol-til-PBS-opløsning på sektionerne, og kontroller, om der er et fluorescenssignal ved fluorescensmikroskopi. For at fratage det første antistofkompleks skal antistofmærkede objektglas hældes i 275 milliliter kogende natriumcitratopløsning i mindst otte minutter som påvist.Ved behandlingens afslutning åbnes låget, og opløsningen afkøles til stuetemperatur, før du vasker objektglassene tre gange med PBST i fem minutter pr. vask. For at plette for det andet målprotein af interesse, efter blokering for uspecifikke binding som påvist, mærke hver prøve med 250 mikroliter af den anden primære antistof af interesse ved fire grader Celsius natten over. Næste morgen vaskes objektglassene tre gange i fem minutter i frisk PBST pr. vask, før de dækker hvert objektglas med 250 mikroliter af en passende sekundær antistofopløsning til en times inkubation ved stuetemperatur.Ved inkubationens afslutning vaskes objektglassene tre gange i frisk PBST som påvist, og der tilsættes 250 mikroliter frisklavet streptavidin peberrodsperoxidase til hvert objektglas. For at udvikle signalet til det andet målprotein af interesse, efter tre PBST vasker, behandle dias med fluorophore konjugeret tyramid i et andet fluorescens spektrum. For at stoppe udviklingen af tyramidsignalet skal du nedsænke diasene i PBST.Derefter pletter prøverne med et passende nukleart farvestof. For billeddannelse ved fluorescensmikroskopi monteres hvert nukleart farvestof, der er mærket dias, med en dråbe af et passende monteringsmedium i en dækslet. Brug 4X-målsætningen til at finde vævet på diaset.Skift til 10X-målsætningen for billeddannelse, og juster eksponeringstiden til 100 til 400 millisekunder med lyskilden mellem 40 og 80 %. Derefter hente billeder i hver kanal uden at flytte scenen. Billederne fra hver kanal kan flettes til et multiplex-fluorescerende billede.Uden stripning mellem den første og sekundære antistof farvning, den anden farvning for tyrosin hydroxylase vil afhente signaler fra det første mål protein af interesse resulterer i en falsk positiv tyrosin hydroxylase farvning, for eksempel i denne prøve i binyrebarken. For at fjerne antistoffet cross-reaktivitet i peberrod peroxidase fra den første immunostaining, et minut og otte minutters mikrobølgemedieret stripning kan udføres resulterer i ren dobbelt farvning resultater. Intet væsentligt signal opfanges i negative kontrolprøver.Otte minutters stripning i kogende citrat buffer er også tilstrækkeligt til at fjerne antistof krydsreaktivitet for mange antistoffer, der almindeligvis anvendes i binyrerne. I nogle tilfælde kan der dog stadig påvises et svagt falsk positivt signal, og en stigning på 20 minutter til mikrobølgebehandlingen fjerner måske ikke helt antistoffets krydsreaktivitet. Under fluorescensbilleddannelse er det vigtigt ikke at flytte scenen, når der skiftes kanaler.Det kan dog være nødvendigt at justere fokus for at få klare billeder af hver kanal. For hver kanal skal du sørge for at justere eksponeringstiden for at sikre, at signalerne udsættes korrekt uden overeksponerede pixel eller områder i billederne. Under farvning procedure, er det vigtigt at holde dias hydreret fra de-voksning og dias kan strippes ved hjælp af de samme stripping metoder flere gange for at tillade multiplex farvning.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals &#8722; Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Produktion og anvendelse af Lentivirus til selektivt at transducere Primary oligodendrocyt precursorceller for<em&gt; In vitro</em&gt; myelinering Analyser

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

Alginate Encapsulation of Pluripotent Stem Cells Using a Co-axial Nozzle

Alginat Indkapsling af pluripotente stamceller Ved hjælp af en Co-aksial dyse

Pluripotent stem cells (PS cells) are the focus of intense research due to their role in regenerative medicine and drug screening.  However, the ...

Using Isolated Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High throughput Microplate Respiratory Measurements

Brug af Isoleret Mitokondrier fra minimale mængder af Mouse Skeletmuskel for High throughput Mikropladekrav Respiratory Målinger

Skeletal muscle mitochondria play a specific role in many disease pathologies. As such, the measurement of oxygen consumption as an indicator of ...

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

Generering Primær fibroblastkulturer fra museøre og hale Væv

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Induced Pluripotent Stem Cell Generation from Blood Cells Using Sendai Virus and Centrifugation

Induceret Pluripotente Stem Cell Generation fra Blood Cells Brug Sendai Virus og Centrifugering

The recent development of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) proved that mature somatic cells can return to an undifferentiated, pluripotent ...

Using Primary Neurosphere Cultures to Study Primary Cilia

Brug Primære Neurosfære kulturer til at studere Primær Cilia

The primary cilium is fundamentally important for the proliferation of neural stem/progenitor cells and for neuronal differentiation during embryonic, ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis

Hele-celle patch-clamp optagelser af isolerede primære epitelceller fra epididymis

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

Genteknologi af primære mus intestinale Organoider ved hjælp af magnetisk nanopartikel Transduktionsvirale vektorer for frosne skæring

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

Induktion og validering af cellulære gulne i primære humane celler

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Craniofacial Tissues and Undecalcified Bone

Vævs præparation og immun farvning af mus craniofacial væv og Undecalcificeret knogle

Tissue immunostaining provides highly specific and reliable detection of proteins of interest within a given tissue. Here we describe a complete and ...