Name: microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species
Uploaded: 2020-02-21T14:00:00
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1. 第1抗体で染色する
<ol><li>脱ワックスおよびリハイドレートFFPEスライドは、以下の各ステップに5分ずつ割り当て済み:キシレンまたは同等の試薬3x、100%エタノール2x、95%エタノール1x、70%エタノール1x、50%エタノール1x、蒸留水2倍。 注:スライドは、最後のステップに取り付けるまで、この再水和ステップから始めて湿った状態を保つ必要があります。</li>
	<li>任意抗原検索のために、8分?...

<ol>
	<li>Lewis Carl, S. A., Gillete-Ferguson, I., Ferguson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+indirect+immunofluorescence+procedure+for+staining+the+same+cryosection+with+two+mouse+monoclonal+primary+antibodies.">An indirect immunofluorescence procedure for staining the same cryosection with two mouse monoclonal primary antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 41 (8), 1273-1278 (1993).</li><li>Lan, H. Y., Mu, W., Nikolic-Paterson, D. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+simple,+reliable,+and+sensitive+method+for+multiple+immunoenzyme+staining:+use+of+microwave+oven+heating+to+block+antibody+crossreactivity+and+retrieve+antigens.">A novel, simple, reliable, and sensitive method for multiple immunoenzyme staining: use of microwave oven heating to block antibody crossreactivity and retrieve antigens.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (1), 97-102 (1995).</li><li>Tornehave, D., Hougaard, D. M., Larsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microwaving+for+double+indirect+immunofluorescence+with+primary+antibodies+from+the+same+species+and+for+staining+of+mouse+tissues+with+mouse+monoclonal+antibodies.">Microwaving for double indirect immunofluorescence with primary antibodies from the same species and for staining of mouse tissues with mouse monoclonal antibodies.</a> Histochemistry and Cell Biology. 113 (1), 19-23 (2000).</li><li>Kim, M., Soontornniyomkij, V., Ji, B., Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=System-wide+immunohistochemical+analysis+of+protein+co-localization.">System-wide immunohistochemical analysis of protein co-localization.</a> PLoS One. 7 (2), e32043 (2012).</li><li>Bolognesi, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+Staining+by+Sequential+Immunostaining+and+Antibody+Removal+on+Routine+Tissue+Sections.">Multiplex Staining by Sequential Immunostaining and Antibody Removal on Routine Tissue Sections.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 65 (8), 431-444 (2017).</li><li>Toth, Z. E., Mezey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+visualization+of+multiple+antigens+with+tyramide+signal+amplification+using+antibodies+from+the+same+species.">Simultaneous visualization of multiple antigens with tyramide signal amplification using antibodies from the same species.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 55 (6), 545-554 (2007).</li><li>Buchwalow, I., Samoilova, V., Boecker, W., Tiemann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+immunolabeling+with+antibodies+from+the+same+host+species+in+combination+with+tyramide+signal+amplification.">Multiple immunolabeling with antibodies from the same host species in combination with tyramide signal amplification.</a> Acta Histochemica. 120 (5), 405-411 (2018).</li><li>Bauer, M., Schilling, N., Spanel-Borowski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitation+of+microwave+treatment+for+double+immunolabelling+with+antibodies+of+the+same+species+and+isotype.">Limitation of microwave treatment for double immunolabelling with antibodies of the same species and isotype.</a> Histochemistry and Cell Biology. 116 (3), 227-232 (2001).</li><li>Pirici, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+elution+method+for+multiple+immunohistochemistry+on+primary+antibodies+raised+in+the+same+species+and+of+the+same+subtype.">Antibody elution method for multiple immunohistochemistry on primary antibodies raised in the same species and of the same subtype.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (6), 567-575 (2009).</li><li>Glass, G., Papin, J. A., Mandell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIMPLE:+a+sequential+immunoperoxidase+labeling+and+erasing+method.">SIMPLE: a sequential immunoperoxidase labeling and erasing method.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (10), 899-905 (2009).</li><li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+5-plex+fluorescent+immunohistochemistry+with+tyramide+signal+amplification+and+same+species+antibodies.">Fully automated 5-plex fluorescent immunohistochemistry with tyramide signal amplification and same species antibodies.</a> Laboratory Investigation. 97 (7), 873-885 (2017).</li><li>Paul, A., Laufer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+biotin+as+a+marker+of+adrenocortical+cells+with+steroidogenic+potential.">Endogenous biotin as a marker of adrenocortical cells with steroidogenic potential.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 336 (1-2), 133-140 (2011).</li><li>Bussolati, G., Gugliotta, P., Volante, M., Pace, M., Papotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrieved+endogenous+biotin:+a+novel+marker+and+a+potential+pitfall+in+diagnostic+immunohistochemistry.">Retrieved endogenous biotin: a novel marker and a potential pitfall in diagnostic immunohistochemistry.</a> Histopathology. 31 (5), 400-407 (1997).</li><li>Wang, H., Pevsner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+endogenous+biotin+in+various+tissues:+novel+functions+in+the+hippocampus+and+implications+for+its+use+in+avidin-biotin+technology.">Detection of endogenous biotin in various tissues: novel functions in the hippocampus and implications for its use in avidin-biotin technology.</a> Cell and Tissue Research. 296 (3), 511-516 (1999).</li></ol>

多重免疫染色は、2種以上の抗原の細胞共局在を調べるのに有用である。この広く使用されている技術は、一次抗体が異なるレポーター(直接染色)と共役する際に説得力のある共局在化結果を与えます。しかし、直接染色は通常、一次抗体を検出するために結合された二次抗体を含む間接染色と比較して弱いシグナルを提供する。間接染色において、高品質の多重免疫染色結果は、二次抗体が?...

多重免疫染色では、結合された一次抗体を用いた直接染色は有益な結果を提供することができる。二次抗体を使用しない場合、直接染色法は抗体交差反応性からの偽の共局在化シグナルのリスクが低い。しかし、一次抗体上の共役レポーター(フルオロフォア、酵素)またはビオチンは、その将来の使用を制限する。あるいは、間接免疫染色は、通常、標識された二次抗体を有する非共役一次抗体を用いてより強いシグナルを提供する。理想的には、多重免疫染色に使用される非共役一次抗体は、抗体交差反応性を回避するために異なる宿主種から来るべきである。しかしながら、異なる宿主種からの一次抗体の適切な組み合わせは、必ずしも利用可能とは限らない。
望ましくない一次抗体と反応する二次抗体のリスクを排除するために、いくつかの方法が確立されている。一般的な方法の1つは、第2一次抗体1で染色する前に、第1次抗体複合体上の残りの結合エピトープを遮断するF(ab)単量体抗体の使用である。抗体ストリッピングは、ウェスタンブロットシートのストリップおよび再プローブと類似しており、3,3'-ジアミノベンジドテトラヒドロリド(DAB)2および蛍光性チラミド堆積物3等の検出可能なレポーター分子の沈着を剥離することなく、以前染色した抗体複合体を除去する。この方法では、異なる色のレポーター分子が同じスライド上で多重結果を示すことができます。また、多重染色は、抗体の前に堆積した層を完全に除去し、その後に他の抗体から取得した画像のアライメントによっても達成可能である4、5。これらの方法はすべて信頼性の高い結果を得ることができますが、各方法には制限があり、複雑な手順または特別なイメージングシステムが必要です。
本プロトコルは、一般に利用可能な緩衝液を用いて抗体ストリッピング法を適用することを示す。このプロトコルは、同じホスト種からの2つの未標識一次抗体を有するホルマリン固定パラフィン埋め込み(FFPE)マウス副腎セクションに対して多重免疫蛍光染色を行うために使用することができる。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-mouse</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>715-066-151</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-rabbit</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>711-066-152</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>422801</td>
			<td>2 &#956;g/mL in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ECHO</td>
			<td>Revolve 4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horseradish peroxidase-conjugated streptavidin</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-030-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven, 700W</td>
			<td>General Electric</td>
			<td>JEM3072DH1BB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-CYP2F2</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-374540</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-TH</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-25269</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>2% serum in PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-20&#945;HSD</td>
			<td>Kerafast,</td>
			<td>EB4002</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-3&#946;HSD</td>
			<td>TransGenic,</td>
			<td>KO607</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-TH</td>
			<td>NOVUS,</td>
			<td>NB300-109</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-&#946;-catenin</td>
			<td>Abcam,</td>
			<td>ab32572</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin Horseradish Peroxidase (SA-HRP)</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-303-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Cy3 Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT704B001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Fluorescein Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT701001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species

免疫染色は、与えられたタンパク質の細胞発現パターンを示す生物医学研究で広く使用されている。多重免疫染色は、複数の一次抗体を使用して標識を可能にします。抗体の交差反応性を最小限に抑えるために、間接染色を用いた多重免疫染色には、異なる宿主種からの標識されていない一次抗体が必要です。しかしながら、異なる種抗体の適切な組合せは、必ずしも利用可能とは限らない。ここでは、ホルマリン固定パラフィン埋め込み(FFPE)マウス副腎切片に対する多重免疫蛍光に対して、同じ宿主種からの非標識一次抗体(例えば、この場合は両方の抗体がウサギ由来)を用いる方法を説明する。この方法は、抗原検索ステップで使用された同じ手順と試薬を用いて、前染色された一次抗体複合体の活性を取り除く。スライドは、一般的な免疫染色プロトコルを使用して第1一次抗体を染色し、その後にビオチン化二次抗体との結合ステップを行った。次に、フッ素動素を基質として、アビジン-ビオチンペルオキシダーゼシグナル現像法を用いた。第1次抗体複合体の免疫活性を、8分間のマイクロ波沸騰クエン酸ナトリウム溶液に浸漬して剥ぎ取った。不溶性の蛍光素体の沈着はサンプル上に残り、スライドを他の一次抗体で染色することができた。この方法は、ほとんどの偽陽性シグナルを排除しますが、抗体の交差反応性の背景が残る可能性があります。サンプルが内因性ビオチンで濃縮される場合、ペルオキシダーゼ結合二次抗体を使用してビオチン化二次抗体を置換し、回収された内因性ビオチンからの偽陽性を回避することができる。

その結果は、抗原検索ステップ1.2を含む記載の全工程で処理されたサンプルから得られた。ここで使用した全二次抗体はビオチン化された。フルオロフォア・チラミドは、第1および第2の一次抗体からのシグナルを開発するために使用された。画像は、FITCキューブ(緑色蛍光用)、TxREDキューブ(Cy3用)、およびDAPIキューブ(DAPI用)を備えた蛍光顕微鏡を使用して撮影した。...

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Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals ÃƒÂ¢Ã‹â€ ' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

同じ宿主種からの一次抗体を用いた多重免疫染色に対して、いくつかの異なる方法が確立されている。ここでは、ホルマリン固定パラフィン組み込みマウス副腎切片でのマルチプレックス免疫染色中の抗体クロス反応性を遮断するためのマイクロ波媒介抗体ストリッピングおよびフルオロフォア・チラミドの使用について説明する。

マウス副腎のマルチプレックス免疫染色のためのマイクロウェーブおよび蛍光色素-Tyramide - 同じ宿主種からの非共役一次抗体を使用

Immunostaining is widely used in biomedical research to show the cellular expression pattern of a given protein. Multiplex immunostaining allows labeling ...

免疫染色は、目的のタンパク質の位置を特定するために生物医学研究で広く使用されています。マルチプレックス免疫染色は、異なる一次抗体を使用して同じサンプル上の複数の標的を検出することができます。この方法の利点は、同じ宿主種からの2つ以上の非標識一次抗体を使用して免疫染色を可能にする抗体交差反応性を排除するために一般的に利用可能な緩衝液を使用することです。この手順のデモンストレーションは、大学院生のソフィア・ジェンと、私の研究室の客員研究員であるQiongxia Lyuです。染色前に、示されているように、各溶液に5分間浸漬したホルマリン固定パラフィン埋め込みスライドを脱ワックスし、水分補給します。2回目の蒸留水浸漬後、蓋付きピペットチップボックスの底に275ミリリットルのクエン酸ナトリウム溶液をスライドに入れ、700ワットの電子レンジに75%の電力で8分間置きます。処理の最後に蓋を開け、コップリン瓶に新鮮なPBSTを5分間洗浄してスライドを洗浄する前に、溶液を室温まで冷却します。非特異的結合部位を遮断するには、最後の洗浄後、各スライドから余分なPBSTを振り、適切なブロッキング溶液の十分な体積でスライドを覆う。加湿チャンバ内の室温で30分後、各スライドから過剰なブロッキング溶液を振り、各サンプルに目的の第1一次抗体の250マイクロリットルを加える。サンプルが乾燥するのを防ぐために、スライドはパラフィンフィルムの一部で覆われてもよい。加湿室で摂氏4度で一晩インキュベーションした後、スライドを新鮮なPBSTで3回洗浄して1回5分間洗浄します。余分なPBSTを振り払い、室温で加湿したチャンバーで1時間のインキュベーションのために適切な二次抗体溶液の250マイクロリットルで各スライドを素早く覆います。インキュベーションの最後に、スライドを示すように新鮮なPBSTで3回洗浄し、各スライドに250マイクロリットルの新鮮なレンサビジンワサビのペルオキシダーゼを加えます。室温で30分後、スライドを新鮮なPBSTで3回洗います。その後、余分なPBSTを振り払い、各スライドを250マイクロリットルの新鮮なフルオロフォア-チラミド溶液で覆います。1分後、新鮮なPBSTでスライドを沈下し、続いて新鮮なPBSTで3回の2分間の打ちを行います。最後の洗浄後、1対1のグリセロールからPBSへの溶液を数滴塗布し、蛍光顕微鏡による蛍光シグナルの有無を確認します。第1抗体複合体を取り除くために、抗体標識スライドを少なくとも8分間、クエン酸ナトリウム溶液を沸騰させる275ミリリットルに入れる。処理の最後に蓋を開け、溶液を室温まで冷たませてから、PBSTで3回PBSTで洗浄を5分間洗浄します。目的の第2の標的タンパク質を染色するには、示されているように非特異的結合を遮断した後、各サンプルを摂氏4度で250マイクロリットルの目的の第2一次抗体で標識する。翌朝、各スライドを適切な二次抗体溶液250マイクロリットルで覆う前に、1回の洗浄ごとに新鮮なPBSTでスライドを5分間5分間洗浄し、室温で1時間インキュベーションします。インキュベーションの最後に、スライドを示すように新鮮なPBSTで3回洗浄し、各スライドに250マイクロリットルの新鮮なレンサビジンワサビのペルオキシダーゼを加えます。目的の第2の標的タンパク質のシグナルを開発するために、3回のPBSTの使用後、異なる蛍光スペクトルでジラミドを結合したフルオロフォアでスライドを治療する。チラミド信号の発達を止めるには、スライドをPBSTに沈下する。その後、適切な核染料でサンプルを染色します。蛍光顕微鏡によるイメージングの場合、各核色素標識スライドをカバースリップに適切な取り付け媒体の滴で取り付けます。4Xの目的を使用して、スライド上の組織を見つけます。イメージングの目的を10Xに切り替え、光光源で100~400ミリ秒に調整します。その後、ステージを移動せずに各チャンネルの画像を取得します。各チャンネルの画像を結合して、多重蛍光画像を形成することができます。第1および二次抗体染色の間に剥がれなければ、チロシンヒドロキシラーゼの第2染色は、目的の第1標的タンパク質からのシグナルを拾い上げ、例えば副腎皮質内のこのサンプルで偽陽性のチロシンヒドロキシラーゼ染色を生じる。第1の免疫染色からワサビペルオキシダーゼ中の抗体交差反応性を除去するために、1分間および8分間のマイクロ波介在ストリッピングを行い、クリーンな二重染色結果をもたらす。陰性制御サンプルでは、有意な信号は拾われません。沸騰クエン酸バッファーでの 8 分間のストリッピングは、副腎で一般的に使用される多くの抗体に対する抗体交差反応性を排除するのにも十分です。いくつかのケースでは、弱い偽陽性シグナルはまだ検出可能であり、マイクロ波治療に20分の増加はまだ完全に抗体交差反応性を除去しない可能性があります。蛍光イメージングの間、チャネルを切り替える際にステージを動かさないことが重要です。ただし、各チャンネルの鮮明な画像を得るためにフォーカスを再取り付けする必要があるかもしれません。各チャンネルについて、露光時間を調整して、画像内の露出過大なピクセルや領域が存在しない信号が適切に露出されるようにしてください。染色手順の間、脱ワックスからスライドを水分補給し続けることが重要であり、スライドは同じストリッピング方法を数回使用して剥がして多重染色を可能にする。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals &#8722; Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

生産と選択的に伝達する一次オリゴデンドロサイト前駆細胞へのレンチを使用するための<em&gt;インビトロ</em&gt;髄鞘形成アッセイ

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

Alginate Encapsulation of Pluripotent Stem Cells Using a Co-axial Nozzle

同軸ノズルを用いて多能性幹細胞のアルギン酸カプセル化

Pluripotent stem cells (PS cells) are the focus of intense research due to their role in regenerative medicine and drug screening.  However, the ...

Using Isolated Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High throughput Microplate Respiratory Measurements

ハイスループットマイクロプレート呼吸測定のためのマウス骨格筋の最小量から単離されたミトコンドリアを使用して

Skeletal muscle mitochondria play a specific role in many disease pathologies. As such, the measurement of oxygen consumption as an indicator of ...

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

マウスの耳としっぽの組織から生成初代線維芽細胞培養

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Induced Pluripotent Stem Cell Generation from Blood Cells Using Sendai Virus and Centrifugation

センダイウイルスや遠心分離を用いて血液細胞から誘導多能性幹細胞の生成

The recent development of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) proved that mature somatic cells can return to an undifferentiated, pluripotent ...

Using Primary Neurosphere Cultures to Study Primary Cilia

一次繊毛を研究するために一次ニューロスフェア培養物を使用して

The primary cilium is fundamentally important for the proliferation of neural stem/progenitor cells and for neuronal differentiation during embryonic, ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis

精巣上体から分離した一次上皮細胞の全細胞パッチクランプ記録

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

凍結断面化のための磁気ナノ粒子転写ウイルスベクターを用いた一次マウス腸オルガノイドの遺伝子工学

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

ひと初代細胞における細胞老化の誘導性

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Craniofacial Tissues and Undecalcified Bone

マウス頭蓋組織および非除電骨の組織調製と免疫染色

Tissue immunostaining provides highly specific and reliable detection of proteins of interest within a given tissue. Here we describe a complete and ...