Name: microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species
Uploaded: 2020-02-21T14:00:00
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1. 첫 번째 항체로 염색
<ol><li>제왁스와 다음 단계각각에 5분 할당된 FFPE 슬라이드를 재수화: 자일렌 또는 등가 시약 3x, 100% 에탄올 2x, 95% 에탄올 1x, 70% 에탄올 1x, 50% 에탄올 1x 및 증류수 2x. 참고: 슬라이드는 이 재수화 단계에서 최종 단계에서 장착될 때까지 촉촉한 상태를 유지해야 합니다.</li>
	<li>선택적 항원 회수의 경우, 슬라이드를 끓는 구연산나트륨 용액(10 mMM, pH = 6.0)의 275 mL에 8분 동안 ?...

<ol>
	<li>Lewis Carl, S. A., Gillete-Ferguson, I., Ferguson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+indirect+immunofluorescence+procedure+for+staining+the+same+cryosection+with+two+mouse+monoclonal+primary+antibodies.">An indirect immunofluorescence procedure for staining the same cryosection with two mouse monoclonal primary antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 41 (8), 1273-1278 (1993).</li><li>Lan, H. Y., Mu, W., Nikolic-Paterson, D. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+simple,+reliable,+and+sensitive+method+for+multiple+immunoenzyme+staining:+use+of+microwave+oven+heating+to+block+antibody+crossreactivity+and+retrieve+antigens.">A novel, simple, reliable, and sensitive method for multiple immunoenzyme staining: use of microwave oven heating to block antibody crossreactivity and retrieve antigens.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (1), 97-102 (1995).</li><li>Tornehave, D., Hougaard, D. M., Larsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microwaving+for+double+indirect+immunofluorescence+with+primary+antibodies+from+the+same+species+and+for+staining+of+mouse+tissues+with+mouse+monoclonal+antibodies.">Microwaving for double indirect immunofluorescence with primary antibodies from the same species and for staining of mouse tissues with mouse monoclonal antibodies.</a> Histochemistry and Cell Biology. 113 (1), 19-23 (2000).</li><li>Kim, M., Soontornniyomkij, V., Ji, B., Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=System-wide+immunohistochemical+analysis+of+protein+co-localization.">System-wide immunohistochemical analysis of protein co-localization.</a> PLoS One. 7 (2), e32043 (2012).</li><li>Bolognesi, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+Staining+by+Sequential+Immunostaining+and+Antibody+Removal+on+Routine+Tissue+Sections.">Multiplex Staining by Sequential Immunostaining and Antibody Removal on Routine Tissue Sections.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 65 (8), 431-444 (2017).</li><li>Toth, Z. E., Mezey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+visualization+of+multiple+antigens+with+tyramide+signal+amplification+using+antibodies+from+the+same+species.">Simultaneous visualization of multiple antigens with tyramide signal amplification using antibodies from the same species.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 55 (6), 545-554 (2007).</li><li>Buchwalow, I., Samoilova, V., Boecker, W., Tiemann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+immunolabeling+with+antibodies+from+the+same+host+species+in+combination+with+tyramide+signal+amplification.">Multiple immunolabeling with antibodies from the same host species in combination with tyramide signal amplification.</a> Acta Histochemica. 120 (5), 405-411 (2018).</li><li>Bauer, M., Schilling, N., Spanel-Borowski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitation+of+microwave+treatment+for+double+immunolabelling+with+antibodies+of+the+same+species+and+isotype.">Limitation of microwave treatment for double immunolabelling with antibodies of the same species and isotype.</a> Histochemistry and Cell Biology. 116 (3), 227-232 (2001).</li><li>Pirici, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+elution+method+for+multiple+immunohistochemistry+on+primary+antibodies+raised+in+the+same+species+and+of+the+same+subtype.">Antibody elution method for multiple immunohistochemistry on primary antibodies raised in the same species and of the same subtype.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (6), 567-575 (2009).</li><li>Glass, G., Papin, J. A., Mandell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIMPLE:+a+sequential+immunoperoxidase+labeling+and+erasing+method.">SIMPLE: a sequential immunoperoxidase labeling and erasing method.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (10), 899-905 (2009).</li><li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+5-plex+fluorescent+immunohistochemistry+with+tyramide+signal+amplification+and+same+species+antibodies.">Fully automated 5-plex fluorescent immunohistochemistry with tyramide signal amplification and same species antibodies.</a> Laboratory Investigation. 97 (7), 873-885 (2017).</li><li>Paul, A., Laufer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+biotin+as+a+marker+of+adrenocortical+cells+with+steroidogenic+potential.">Endogenous biotin as a marker of adrenocortical cells with steroidogenic potential.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 336 (1-2), 133-140 (2011).</li><li>Bussolati, G., Gugliotta, P., Volante, M., Pace, M., Papotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrieved+endogenous+biotin:+a+novel+marker+and+a+potential+pitfall+in+diagnostic+immunohistochemistry.">Retrieved endogenous biotin: a novel marker and a potential pitfall in diagnostic immunohistochemistry.</a> Histopathology. 31 (5), 400-407 (1997).</li><li>Wang, H., Pevsner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+endogenous+biotin+in+various+tissues:+novel+functions+in+the+hippocampus+and+implications+for+its+use+in+avidin-biotin+technology.">Detection of endogenous biotin in various tissues: novel functions in the hippocampus and implications for its use in avidin-biotin technology.</a> Cell and Tissue Research. 296 (3), 511-516 (1999).</li></ol>

멀티플렉스 면역염색은 2개 이상의 항원들의 세포 동국화를 검사하는데 유용하다. 이 널리 사용되는 기술은 1 차 항체가 다른 기자 (직접 염색)와 공액 될 때 설득력있는 동국화 결과를 제공합니다. 그러나, 직접 염색은 일반적으로 1 차적인 항체를 검출하기 위하여 공액한 이차 항체를 관련시키는 간접 염색에 비교된 더 약한 신호를 제공합니다. 간접 염색에서, 고품질 멀티플렉스 면역염색 결과?...

멀티플렉스 면역 염색에서, 공액 된 1 차 항체를 사용하여 직접 염색은 유익한 결과를 제공 할 수 있습니다. 이차 항체를 사용하지 않고, 직접 염색 방법은 항체 교차 반응성으로부터거짓 동경화 신호의 위험이 낮다. 그러나, 1차 항체상에 공액된 리포터(플루오로폴레, 효소) 또는 비오틴은 향후 사용을 제한한다. 대안적으로, 간접 면역 염색은 일반적으로 표지된 이차 항체를 가진 비공액 1차 항체를 사용하여 더 강한 신호를 제공한다. 이상적으로, 멀티플렉스 면역염색에 사용되는 비conjugated 1 차 항체는 항체 교차 반응성을 피하기 위해 상이한 숙주 종으로부터 와야 한다. 그러나, 상이한 숙주 종으로부터의 1차 항체의 적절한 조합이 항상 이용 가능한 것은 아니다.
바람직하지 않은 1차 항체와 반응하는 이차 항체의 위험을 제거하기 위해 여러 가지 방법이 확립되었다. 한 가지 일반적인 방법은 제1 차 항체 1로 염색하기 전에 제1 차 항체 복합체에 대한 잔존 결합 에피토프를 차단하는 F(ab) 단일성 항체를 사용하는것이다. 서양 블롯 시트의 스트립 및 재프로브와 유사한 항체 스트리핑은 3,3'-다미노벤지딘 테트라하이드로클로라이드(DAB)2 및 형광 티라미드 증착3와같은 검출 가능한 리포터 분자의 증착을 제거하지 않고 이전에 염색된 항체 복합체를 제거한다. 이 방법을 사용하면 서로 다른 색상의 리포터 분자가 동일한 슬라이드에서 멀티플렉스 결과를 표시할 수 있습니다. 멀티플렉스 염색은 또한 이전에 증착된 항체층을 완전히 제거하고 다른 항체로부터 이후에 획득된 이미지의정렬에의해 달성된다4,5. 각 방법에는 한계가 있고 복잡한 절차 또는 특별한 이미징 시스템이 필요하지만 이러한 방법은 모두 신뢰할 수있는 결과를 제공합니다.
본 프로토콜은 일반적으로 이용 가능한 완충제의 사용과 함께 항체 스트리핑 방법의 적용을 나타낸다. 이 프로토콜은 동일한 숙주 종으로부터 2개의 표지되지 않은 1차 항체를 가진 포르말린 고정 파라핀 임베디드(FFPE) 마우스 부신 절편에서 다중 면역형광 염색을 수행하는데 사용될 수 있다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-mouse</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>715-066-151</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-rabbit</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>711-066-152</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>422801</td>
			<td>2 &#956;g/mL in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ECHO</td>
			<td>Revolve 4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horseradish peroxidase-conjugated streptavidin</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-030-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven, 700W</td>
			<td>General Electric</td>
			<td>JEM3072DH1BB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-CYP2F2</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-374540</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-TH</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-25269</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>2% serum in PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-20&#945;HSD</td>
			<td>Kerafast,</td>
			<td>EB4002</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-3&#946;HSD</td>
			<td>TransGenic,</td>
			<td>KO607</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-TH</td>
			<td>NOVUS,</td>
			<td>NB300-109</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-&#946;-catenin</td>
			<td>Abcam,</td>
			<td>ab32572</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin Horseradish Peroxidase (SA-HRP)</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-303-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Cy3 Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT704B001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Fluorescein Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT701001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species

면역 염색은 주어진 단백질의 세포 발현 패턴을 보여주기 위해 생물 의학 연구에서 널리 사용된다. 멀티플렉스 면역 염색은 다중 1 차적인 항체를 사용하여 표지를 허용합니다. 항체 교차 반응성을 최소화하기 위해, 간접 염색을 이용한 멀티플렉스 면역 염색은 다른 숙주 종으로부터의 표지되지 않은 1차 항체를 필요로 한다. 그러나, 상이한 종 항체의 적절한 조합이 항상 이용 가능한 것은 아니다. 여기서, 우리는 포르말린 고정 파라핀-임베디드(FFPE) 마우스 부신 절편상에 대한 다중 면역형광에 대해 동일한 숙주 종(예를 들어, 두 항체가 토끼로부터)으로부터 표지되지 않은 1차 항체를 사용하는 방법을 설명한다. 이 방법은 항원 회수 단계에서 사용되는 동일한 절차 및 시약을 사용하여 이전에 염색된 1차 항체 복합체의 활성을 제거한다. 슬라이드는 일반적인 면역 염색 프로토콜을 사용하여 제1 차 항체로 염색하고 생체면역이차 항체를 이용한 결합 단계를 따랐다. 이어서, 아비딘-비오틴-과산화증 신호 개발 방법을 기질로서 불소-티라미드와 함께 사용하였다. 제1 차 항체 복합체의 면역활성을 전자레인지에 침지하여 8분 동안 구연산나트륨 용액을 제거하였다. 불용성 형광부-티라미드 증착은 샘플에 남아 있었고, 이는 슬라이드가 다른 1차 항체로 염색될 수 있게 하였다. 이 방법은 대부분의 거짓 양성 신호를 제거하지만, 항체 교차 반응성에서 일부 배경은 남아있을 수 있습니다. 시료가 내인성 비오틴으로 농축되는 경우, 과산화공소 이차 항체는 회수된 내인성 비오틴으로부터 거짓 양성을 피하기 위해 생체연화된 이차 항체를 대체하는데 사용될 수 있다.

결과는 항원 회수 단계 1.2를 포함하는 기재된 모든 단계로 처리된 샘플로부터 수득되었다. 여기에서 사용된 모든 이차 항체는 생체화되었다. 플루오로포레-티라미드는 제1 차 및 제1차 항체로부터의 신호를 개발하기 위해 사용되었다. 이미지는 FITC 큐브(녹색 형광의 경우), TxRED 큐브(Cy3용), DAPI 큐브(DAPI용)가 장착된 형광 현미경을 사용하여 캡처되었습니다.
<p class="jove_c...

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Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals ÃƒÂ¢Ã‹â€ ' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

동일한 숙주 종으로부터의 1차 항체를 사용하여 멀티플렉스 면역염색을 위해 여러 가지 다른 방법이 확립되었다. 여기서, 우리는 포르말린 고정 파라핀 내장 마우스 부신 절편에서 멀티플렉스 면역 염색 동안 항체 교차 반응성을 차단하기 위해 마이크로파 매개 항체 스트리핑 및 플루오로포폴-티라미드의 사용을 설명한다.

마우스 부신에 멀티플렉스 면역 염색을 위한 마이크로 웨이브 및 플루오로포어 티라미드 - 동일한 숙주 종에서 분리되지 않은 1 차 항체를 사용하여

Immunostaining is widely used in biomedical research to show the cellular expression pattern of a given protein. Multiplex immunostaining allows labeling ...

면역 염색은 관심있는 단백질의 위치를 확인하기 위해 생체 의학 연구에서 널리 사용됩니다. 멀티플렉스 면역스테인링은 상이한 1차 항체를 사용하여 동일한 샘플에서 여러 표적을 검출할 수 있다. 이 방법의 장점은 항체 교차 반응성을 제거하기 위해 일반적으로 이용 가능한 완충제의 사용으로 동일한 숙주 종으로부터 두 개 이상의 라벨이 없는 1차 항체를 사용하여 면역스테인링을 허용하는 것이다.이 절차를 시연하는 것은 대학원생인 소피아 정과 제 연구실방문학자 인 치옹시아 루(Qiongxia Lyu)가 될 것입니다. 염색하기 전에, 탈왁스및 각 솔루션에 5분 몰입이 있는 포르말린 고정 파라핀 임베디드 슬라이드를 재수화합니다. 두 번째 증류수 침수 후, 슬라이딩을 뚜껑이 있는 파이펫 팁 박스 바닥에 끓는 나트륨 구연산용액 275밀리리터에 넣고 8분 동안 75%의 전력으로 상자를 700와트 마이크로파에 넣습니다.치료가 끝나면 뚜껑을 열고 코플린 항아리에 신선한 PBST 3 분 세척으로 슬라이드를 세척하기 전에 용액을 실온으로 식힙니다. 비특이적 결합 부위를 차단하려면 마지막 세척 후 각 슬라이드에서 초과 PBST를 흔들고 적절한 차단 솔루션의 충분한 부피로 슬라이드를 덮습니다. 가습 챔버에서 실온에서 30 분 후, 각 슬라이드에서 초과 차단 용액을 흔들고 각 샘플에 관심의 첫 번째 기본 항체의 250 마이크로 리터를 추가합니다.샘플이 건조되는 것을 방지하기 위해 슬라이드는 파라핀 필름조각으로 덮여 있을 수 있습니다. 가습 챔버에서 섭씨 4도에서 하룻밤 잠복 후, 세척 당 5 분 동안 신선한 PBST로 슬라이드를 세 번 세척하십시오. 여분의 PBST를 흔들어 서 면 신속 하 게 실온에서 가습 챔버에서 1 시간 배양에 대 한 적절 한 이차 항체 용액의 250 마이크로 리터와 각 슬라이드를 커버.인큐베이션이 끝나면 슬라이드를 신선한 PBST에서 세 번 세척하고 새로 준비된 스트렙타비딘 고추냉이 과로시다제 250 마이크로리터를 각 슬라이드에 추가합니다. 실온에서 30분 후, 신선한 PBST에서 슬라이드를 세 번 씻으십시오. 그런 다음 초과 PBST를 흔들어 고 새로 준비 된 플루오로포레 티라미드 용액의 250 마이크로 리터로 각 슬라이드를 덮습니다.1분 후, 신선한 PBST에 슬라이드를 잠수한 다음 신선한 PBST에서 3 개의 2 분 세차재가 뒤따릅니다. 마지막 세척 후, 섹션에 일대일 글리세롤 - PBS 용액의 몇 방울을 적용하고 형광 현미경 검사에 의해 형광 신호의 존재를 확인합니다. 첫 번째 항체 복합체를 제거하기 위해, 입증된 바와 같이, 구연산나트륨 용액의 275 밀리리터에 항체 라벨 슬라이드를 배치한다.치료가 끝나면 뚜껑을 열고 PBST로 슬라이드를 세 번 세척하기 전에 실온으로 용액을 식힙니다. 관심있는 제 2 표적 단백질에 대한 얼룩을 위해, 입증 된 바와 같이 비특이적 결합을 차단 한 후, 각 샘플을 4섭씨에서 관심있는 제 2 차 항체의 마이크로리터로 라벨을 밤새 섭씨 4도로 표시하십시오. 다음 날 아침, 슬라이드를 세척당 신선한 PBST로 5분간 3회 세척한 후 각 슬라이드를 실온에서 1시간 배양할 수 있는 적절한 이차 항체 용액 250마이크로리터로 덮습니다.인큐베이션이 끝나면 슬라이드를 신선한 PBST에서 세 번 세척하고 새로 준비된 스트렙타비딘 고추냉이 과로시다제 250 마이크로리터를 각 슬라이드에 추가합니다. 관심있는 제 2 표적 단백질에 대한 신호를 개발하기 위해, 세 개의 PBST 세차제 후, 다른 형광 스펙트럼에서 플루오로포어 컨쥬게이드 티라미드로 슬라이드를 치료한다. 티라미드 신호 개발을 중지하려면 슬라이드를 PBST에 잠급니다.그런 다음 적절한 핵 염료로 샘플을 얼룩지게합니다. 형광 현미경 검사법에 의한 이미징을 위해 각 핵 염료 표지 슬라이드에 적절한 장착 매체를 커버슬립에 장착하십시오. 슬라이드에서 조직을 찾기 위해 4X 목표를 사용합니다.이미징을 위한 10X 목표로 전환하고 광원으로 40~80% 강도로 노출 시간을 100~400밀리초로 조정합니다. 그런 다음 스테이지를 이동하지 않고 각 채널에서 이미지를 가져옵니다. 각 채널의 이미지를 병합하여 멀티플렉스 형광 이미지를 형성할 수 있습니다.제1 및 이차 항체 염색 사이에 제거하지 않고, 티로신 하이드록실라제에 대한 제2 염색은 부신 피질 내의 이 샘플에서 예를 들어, 거짓 양성 티로신 하이드록실라제 염색의 결과로 관심있는 첫 번째 표적 단백질로부터 신호를 포착합니다. 첫 번째 면역 스테인닝에서 고추냉이 과산화제에서 항체 교차 반응성을 제거하기 위해 1 분 및 8 분 마이크로파 매개 스트립이 수행되어 깨끗한 이중 염색 결과를 초래할 수 있습니다. 음의 제어 샘플에서는 중요한 신호가 포착되지 않습니다.끓는 구연산 완충에서 8 분 스트립은 또한 부신에 일반적으로 사용되는 많은 항체에 대한 항체 교차 반응성을 제거하기에 충분하다. 어떤 경우에는 약한 거짓 양성 신호가 여전히 검출가능하지만, 마이크로파 처리로 20분 증가해도 항체 교차 반응성을 완전히 제거하지 못할 수 있다. 형광 이미징 동안 채널을 전환 할 때 단계를 이동하지 않는 것이 중요합니다.그러나 각 채널의 선명한 이미지를 얻기 위해 초점을 재조정해야 할 수도 있습니다. 각 채널에 대해 노출 시간을 조정하여 이미지가 노출되지 않은 픽셀이나 영역없이 신호가 적절하게 노출되도록 해야 합니다. 염색 절차 동안, 탈 왁싱에서 수화 슬라이드를 유지하는 것이 중요하며 멀티 플렉스 염색을 허용하기 위해 동일한 스트리핑 방법을 여러 번 사용하여 슬라이드를 제거 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals &#8722; Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

생산 및 선택적으로 형질 도입 기본 희소 돌기 아교 세포 전구체 세포에 렌티 바이러스의 사용을위한<em&gt; 체외</em&gt; 수초 분석

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

연구

발생학

Alginate Encapsulation of Pluripotent Stem Cells Using a Co-axial Nozzle

동축 노즐을 사용하여 다 능성 줄기 세포의 알긴산 캡슐화

Pluripotent stem cells (PS cells) are the focus of intense research due to their role in regenerative medicine and drug screening.  However, the ...

Using Isolated Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High throughput Microplate Respiratory Measurements

높은 처리량 마이크로 호흡 측정을위한 마우스 골격근의 최소 수량에서 미토콘드리아 격리 사용

Skeletal muscle mitochondria play a specific role in many disease pathologies. As such, the measurement of oxygen consumption as an indicator of ...

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

마우스 귀와 꼬리 조직에서 생성 차 섬유 아세포 배양

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Induced Pluripotent Stem Cell Generation from Blood Cells Using Sendai Virus and Centrifugation

센다이 바이러스 원심 분리를 이용하여 혈액 세포로부터 유도 만능 줄기 세포의 생성

The recent development of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) proved that mature somatic cells can return to an undifferentiated, pluripotent ...

Using Primary Neurosphere Cultures to Study Primary Cilia

차 섬모를 연구에 차 Neurosphere 문화를 사용하여

The primary cilium is fundamentally important for the proliferation of neural stem/progenitor cells and for neuronal differentiation during embryonic, ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis

부고환에서 분리 된 1 차 상피 세포의 전체 세포 패치 - 클램프 기록

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

냉동 절편을 위한 자기 나노입자 전착 바이러스성 벡터를 사용하여 1 차적인 마우스 장 오르가노이드의 유전 공학

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

유도 및 기본 인간 세포에서 세포 노화의 유효성 검사

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Craniofacial Tissues and Undecalcified Bone

마우스 두개안면 조직 및 분해되지 않은 뼈의 조직 준비 및 면역 염색

Tissue immunostaining provides highly specific and reliable detection of proteins of interest within a given tissue. Here we describe a complete and ...