Name: microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species
Uploaded: 2020-02-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals Ã¢Ë†' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species at

Dette arbeidet støttes av NIH R00 HD032636.

1. Farging med det første antistoffet
<ol><li>Dewax og rehydrere FFPE lysbilder med 5 min tildelt hvert av følgende trinn: xylen eller tilsvarende reagenser 3x, 100% etanol 2x, 95% etanol 1x, 70% etanol 1x, 50% etanol 1x, og destillert vann 2x. MERK: Lysbildene skal forbli fuktige fra dette rehydreringstrinnet til montering i siste trinn.</li>
	<li>For valgfri antigengjenfinning plasserer du lysbildene i 275 ml kokende natriumsitratoppløsning (10 mM, pH = 6,0) i 8 min. For å holde oppløsningen kokende, plasser ...

<ol>
	<li>Lewis Carl, S. A., Gillete-Ferguson, I., Ferguson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+indirect+immunofluorescence+procedure+for+staining+the+same+cryosection+with+two+mouse+monoclonal+primary+antibodies.">An indirect immunofluorescence procedure for staining the same cryosection with two mouse monoclonal primary antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 41 (8), 1273-1278 (1993).</li><li>Lan, H. Y., Mu, W., Nikolic-Paterson, D. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+simple,+reliable,+and+sensitive+method+for+multiple+immunoenzyme+staining:+use+of+microwave+oven+heating+to+block+antibody+crossreactivity+and+retrieve+antigens.">A novel, simple, reliable, and sensitive method for multiple immunoenzyme staining: use of microwave oven heating to block antibody crossreactivity and retrieve antigens.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (1), 97-102 (1995).</li><li>Tornehave, D., Hougaard, D. M., Larsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microwaving+for+double+indirect+immunofluorescence+with+primary+antibodies+from+the+same+species+and+for+staining+of+mouse+tissues+with+mouse+monoclonal+antibodies.">Microwaving for double indirect immunofluorescence with primary antibodies from the same species and for staining of mouse tissues with mouse monoclonal antibodies.</a> Histochemistry and Cell Biology. 113 (1), 19-23 (2000).</li><li>Kim, M., Soontornniyomkij, V., Ji, B., Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=System-wide+immunohistochemical+analysis+of+protein+co-localization.">System-wide immunohistochemical analysis of protein co-localization.</a> PLoS One. 7 (2), e32043 (2012).</li><li>Bolognesi, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+Staining+by+Sequential+Immunostaining+and+Antibody+Removal+on+Routine+Tissue+Sections.">Multiplex Staining by Sequential Immunostaining and Antibody Removal on Routine Tissue Sections.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 65 (8), 431-444 (2017).</li><li>Toth, Z. E., Mezey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+visualization+of+multiple+antigens+with+tyramide+signal+amplification+using+antibodies+from+the+same+species.">Simultaneous visualization of multiple antigens with tyramide signal amplification using antibodies from the same species.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 55 (6), 545-554 (2007).</li><li>Buchwalow, I., Samoilova, V., Boecker, W., Tiemann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+immunolabeling+with+antibodies+from+the+same+host+species+in+combination+with+tyramide+signal+amplification.">Multiple immunolabeling with antibodies from the same host species in combination with tyramide signal amplification.</a> Acta Histochemica. 120 (5), 405-411 (2018).</li><li>Bauer, M., Schilling, N., Spanel-Borowski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitation+of+microwave+treatment+for+double+immunolabelling+with+antibodies+of+the+same+species+and+isotype.">Limitation of microwave treatment for double immunolabelling with antibodies of the same species and isotype.</a> Histochemistry and Cell Biology. 116 (3), 227-232 (2001).</li><li>Pirici, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+elution+method+for+multiple+immunohistochemistry+on+primary+antibodies+raised+in+the+same+species+and+of+the+same+subtype.">Antibody elution method for multiple immunohistochemistry on primary antibodies raised in the same species and of the same subtype.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (6), 567-575 (2009).</li><li>Glass, G., Papin, J. A., Mandell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIMPLE:+a+sequential+immunoperoxidase+labeling+and+erasing+method.">SIMPLE: a sequential immunoperoxidase labeling and erasing method.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (10), 899-905 (2009).</li><li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+5-plex+fluorescent+immunohistochemistry+with+tyramide+signal+amplification+and+same+species+antibodies.">Fully automated 5-plex fluorescent immunohistochemistry with tyramide signal amplification and same species antibodies.</a> Laboratory Investigation. 97 (7), 873-885 (2017).</li><li>Paul, A., Laufer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+biotin+as+a+marker+of+adrenocortical+cells+with+steroidogenic+potential.">Endogenous biotin as a marker of adrenocortical cells with steroidogenic potential.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 336 (1-2), 133-140 (2011).</li><li>Bussolati, G., Gugliotta, P., Volante, M., Pace, M., Papotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrieved+endogenous+biotin:+a+novel+marker+and+a+potential+pitfall+in+diagnostic+immunohistochemistry.">Retrieved endogenous biotin: a novel marker and a potential pitfall in diagnostic immunohistochemistry.</a> Histopathology. 31 (5), 400-407 (1997).</li><li>Wang, H., Pevsner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+endogenous+biotin+in+various+tissues:+novel+functions+in+the+hippocampus+and+implications+for+its+use+in+avidin-biotin+technology.">Detection of endogenous biotin in various tissues: novel functions in the hippocampus and implications for its use in avidin-biotin technology.</a> Cell and Tissue Research. 296 (3), 511-516 (1999).</li></ol>

Multipleks immunstaining er nyttig for å undersøke cellulær kolokalisering av to eller flere antigener. Denne mye brukte teknikken gir overbevisende kolokaliseringsresultater når primære antistoffer konjugeres med forskjellige journalister (direkte farging). Imidlertid gir direkte farging vanligvis svakere signaler sammenlignet med indirekte flekker, noe som innebærer konjugerte sekundære antistoffer for å oppdage de primære antistoffene. I indirekte farging er et multiloksimmunostainingsresultat av høy kvalite...

I multix immunbeising kan direkte farging ved hjelp av konjugerte primære antistoffer gi informative resultater. Uten å bruke sekundære antistoffer har den direkte fargingsmetoden lav risiko for falske kolokaliseringssignaler fra antistoffkryssreaktivitet. Imidlertid begrenser de konjugerte journalistene (fluorophore, enzymer) eller biotin på det primære antistoffet sin fremtidige bruk. Alternativt gir indirekte immunstaining vanligvis sterkere signaler ved å bruke et ukonjugert primærantistoff med et merket sekundært antistoff. Ideelt sett bør ukonjugerte primære antistoffer som brukes i multipleks immunstaining komme fra forskjellige vertsarter for å unngå antistoffkryssreaktivitet. Den riktige kombinasjonen av primære antistoffer fra forskjellige vertsarter er imidlertid ikke alltid tilgjengelig.
Flere metoder er etablert for å eliminere risikoen for at det sekundære antistoffet reagerer med et uønsket primærantistoff. En vanlig metode er bruk av et F(ab) monomeriske antistoff for å blokkere eventuelle gjenværende bindende epitoper på det første primære antistoffkomplekset før farging med det andre primære antistoffet1. Antistoffstripping, som ligner på stripen og reprobeav et vestlig flekkark, fjerner det tidligere fargede antistoffkomplekset uten å fjerne avsetning av påviselige reportermolekyler som 3,3'-diaminobenzidin tetrahydrochloride (DAB)2 og fluorescerende tyramiddeponering3. Med denne metoden kan reportermolekyler i forskjellige farger vise et multipleksresultat på samme lysbilde. Multipleksfarering kan også oppnås ved fullstendig fjerning av de tidligere deponerte lagene av antistoffer og justeringen av senere oppkjøpte bilder fra andre antistoffer4,5. Disse metodene gir alle pålitelige resultater, selv om hver metode har sine begrensninger og krever enten kompliserte prosedyrer eller et spesielt bildesystem.
Den nåværende protokollen viser anvendelsen av en antistoffstrippingsmetode ved bruk av allment tilgjengelige buffere. Denne protokollen kan brukes til å utføre multipleks immunofluorescerende farging på formalin-fast parafin-innebygd (FFPE) mus binyreseksjoner med to umerkede primære antistoffer fra samme vertsart.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-mouse</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>715-066-151</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-rabbit</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>711-066-152</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>422801</td>
			<td>2 &#956;g/mL in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ECHO</td>
			<td>Revolve 4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horseradish peroxidase-conjugated streptavidin</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-030-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven, 700W</td>
			<td>General Electric</td>
			<td>JEM3072DH1BB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-CYP2F2</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-374540</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-TH</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-25269</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>2% serum in PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-20&#945;HSD</td>
			<td>Kerafast,</td>
			<td>EB4002</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-3&#946;HSD</td>
			<td>TransGenic,</td>
			<td>KO607</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-TH</td>
			<td>NOVUS,</td>
			<td>NB300-109</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-&#946;-catenin</td>
			<td>Abcam,</td>
			<td>ab32572</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin Horseradish Peroxidase (SA-HRP)</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-303-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Cy3 Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT704B001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Fluorescein Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT701001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species

Immunfarging er mye brukt i biomedisinsk forskning for å vise det cellulære uttrykksmønsteret til et gitt protein. Multiplex immunstaining gjør det mulig å merke ved hjelp av flere primære antistoffer. For å minimere antistoffkryssreaktivitet krever multipleks immunbeising ved hjelp av indirekte farging umerkede primære antistoffer fra forskjellige vertsarter. Den riktige kombinasjonen av forskjellige arter antistoffer er imidlertid ikke alltid tilgjengelig. Her beskriver vi en metode for bruk av umerkede primære antistoffer fra samme vertsart (f.eks. i dette tilfellet er begge antistoffene fra kanin) for multipleksimmunofluorescens på formalin-fast parafininnebygd (FFPE) musbinyreseksjoner. Denne metoden bruker samme prosedyre og reagenser som brukes i antigengjenfinningstrinnet for å fjerne aktiviteten til det tidligere fargede primære antistoffkomplekset. Lysbildene ble farget med det første primære antistoffet ved hjelp av en generell immunstainingprotokoll etterfulgt av et bindende trinn med et biotinylated sekundært antistoff. Deretter ble en avidin-biotin-peroxidase signalutviklingsmetode brukt med fluorophore-tyramid som substrat. Immunaktiviteten til det første primære antistoffkomplekset ble strippet gjennom nedsenking i en mikrobølgekokende natriumsitratløsning i 8 min. Den uoppløselige fluorophore-tyramiddeponen forble på prøven, noe som gjorde at lysbildet kunne være farget med andre primære antistoffer. Selv om denne metoden eliminerer de fleste falske positive signaler, kan det hende at noen bakgrunn fra antistoffkryssreaktivitet kan forbli. Hvis prøvene er beriket med endogene biotin, kan et peroksidase-konjugert sekundært antistoff brukes til å erstatte det biotinylated sekundære antistoffet for å unngå falsk positiv fra gjenvunnet endogen biotin.

Resultatene ble hentet fra prøver behandlet med alle tiltak som er beskrevet, inkludert antigenhentingstrinn 1.2. Alle sekundære antistoffer som brukes her var biotinylated. Fluorophore-tyramid ble brukt til å utvikle signaler fra første og andre primære antistoffer. Bilder ble tatt ved hjelp av et fluorescensmikroskop utstyrt med en FITC-kube (for grønn fluorescens), en TxRED-kube (for Cy3) og en DAPI-kube (for DAPI).
<st...

Watch this Scientific Journal Video about Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals Ã¢Ë†' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species at 

Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals ÃƒÂ¢Ã‹â€ ' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

Flere ulike metoder er etablert for multipleks immunstaining ved hjelp av primære antistoffer fra samme vertsarter. Her beskriver vi bruken av mikrobølgemediert antistoffstripping og fluorophore-tyramid for å blokkere antistoffkryssreaktivitet under multipleks immunstaining på formalin-fast parafin-innebygde musbinyreseksjoner.

Mikrowaving og fluorophore-tyramid for multipleks immunbeising på mus binyrene − Ved hjelp av unconjugert primære antistoffer fra samme vertsarter

Immunostaining is widely used in biomedical research to show the cellular expression pattern of a given protein. Multiplex immunostaining allows labeling ...

Immunstaining er mye brukt i biomedisinsk forskning for å identifisere plasseringen av et protein av interesse. Multipleks immunstaining kan oppdage flere mål på samme prøve ved hjelp av forskjellige primære antistoffer. Fordelen med denne metoden er bruk av allment tilgjengelige buffere for å eliminere antistoff kryssreaktivitet slik at immunstaining ved hjelp av to eller flere umerkede primære antistoffer fra samme vertsarter.Demonstrere prosedyren vil være Sophia Zheng, en graduate student, og Qiongxia Lyu, en besøkende forsker på laboratoriet mitt. Før farging, de-voks og rehydrere formalin-faste parafin-innebygde lysbilder med fem minutters nedsenking i hver løsning som angitt. Etter den andre destillerte vannnedsenkingen plasserer du lysbildene i 275 milliliter kokende natriumsitratløsning på bunnen av en pipettespissboks med lokk og plasserer boksen i en 700 watt mikrobølgeovn ved 75 % strøm i åtte minutter.På slutten av behandlingen åpner du lokket og lar løsningen avkjøles til romtemperatur før du vasker lysbildene med tre fem minutters vasker av fersk PBST i en Coplin-krukke. For å blokkere eventuelle uspesifikke bindingssteder, rist overskytende PBST fra hvert lysbilde etter siste vask og dekk lysbildene med tilstrekkelig volum av en passende blokkeringsløsning. Etter 30 minutter ved romtemperatur i et fuktet kammer, rist overflødig blokkeringsløsning fra hvert lysbilde og legg til 250 mikroliter av det første primære antistoffet av interesse for hver prøve.For å hindre at prøvene tørker ut, kan lysbildene dekkes av et stykke parafinfilm. Etter en overnattingsinkubasjon ved fire grader Celsius i et fuktet kammer, vask lysbildene tre ganger med fersk PBST i fem minutter per vask. Rist av overflødig PBST og dekk deretter raskt hvert lysbilde med 250 mikroliter av en passende sekundær antistoffløsning for en times inkubasjon i et fuktet kammer ved romtemperatur.På slutten av inkubasjonen vasker du lysbildene tre ganger i fersk PBST som demonstrert og legger til 250 mikroliter nylaget streptavidin pepperrotperoksidase til hvert lysbilde. Etter 30 minutter ved romtemperatur vasker du lysbildene tre ganger i frisk PBST. Rist deretter av overflødig PBST og dekk hvert lysbilde med 250 mikroliter nylaget fluorofore-tyramidløsning.Ett minutt senere, senk lysbildene i fersk PBST etterfulgt av tre to minutters vasker i fersk PBST. Etter den siste vasken, påfør noen dråper av en en-til-en glyserol-til-PBS-løsning på seksjonene og se etter tilstedeværelsen av et fluorescenssignal ved fluorescensmikroskopi. For å fjerne det første antistoffkomplekset, legg antistoffet merket lysbilder i 275 milliliter kokende natriumsitratløsning i minst åtte minutter som demonstrert.På slutten av behandlingen åpner du lokket og lar løsningen avkjøles til romtemperatur før du vasker lysbildene tre ganger med PBST i fem minutter per vask. For å farge for det andre målproteinet av interesse, etter å ha blokkert for uspesifikk binding som demonstrert, merk hver prøve med 250 mikroliter av det andre primære antistoffet av interesse ved fire grader Celsius over natten. Neste morgen vasker du lysbildene tre ganger i fem minutter i frisk PBST per vask før du dekker hvert lysbilde med 250 mikroliter av en passende sekundær antistoffløsning for en times inkubasjon ved romtemperatur.På slutten av inkubasjonen vasker du lysbildene tre ganger i fersk PBST som demonstrert og legger til 250 mikroliter nylaget streptavidin pepperrotperoksidase til hvert lysbilde. For å utvikle signalet for det andre målet protein av interesse, etter tre PBST vasker, behandle lysbildene med fluorofor konjugert tyramid i et annet fluorescensspektrum. For å stoppe tyramidsignalutviklingen, senk lysbildene ned i PBST.Deretter flekker prøvene med en passende kjernefysisk fargestoff. For avbildning ved fluorescensmikroskopi monterer du hvert kjernefysisk fargestoff merket lysbilde med en dråpe av et passende monteringsmedium i en dekkslips. Bruk 4X-målet for å finne vevet på lysbildet.Bytt til 10X-målet for bildebehandling og juster eksponeringstiden til 100 til 400 millisekunder med lyskilden mellom 40 og 80 %intensitet. Deretter får du bilder i hver kanal uten å flytte scenen. Bildene fra hver kanal kan slås sammen for å danne et multipleks fluorescerende bilde.Uten stripping mellom første og sekundære antistofffarging, vil den andre fargingen for tyrosinhydroksylase plukke opp signaler fra det første målet protein av interesse som resulterer i en falsk positiv tyrosinhydroksylasefarging, for eksempel i denne prøven i binyrebarken. For å fjerne antistoffet kryssreaktivitet i pepperrotperoksidase fra den første immunstaining, ett minutt og åtte-minutters mikrobølgeovn-mediert stripping kan utføres som resulterer i rene doble farging resultater. Ingen signifikant signal er plukket opp i negative kontrollprøver.Åtte minutters stripping i kokende citrat buffer er også tilstrekkelig til å eliminere antistoff kryssreaktivitet for mange antistoffer som vanligvis brukes i binyrene. I noen tilfeller er et svakt falskt positivt signal fortsatt påviselig, og en økning på 20 minutter til mikrobølgebehandlingen kan fortsatt ikke helt fjerne antistoffet kryssreaktivitet. Under fluorescensavbildning er det viktig å ikke flytte scenen når du bytter kanal.Det kan imidlertid være nødvendig å justere fokuset for å få klare bilder av hver kanal. For hver kanal må du justere eksponeringstiden for å sikre at signalene eksponeres riktig uten overeksponerte piksler eller områder i bildene. Under fargingsprosedyren er det viktig å holde lysbildene hydrert fra de-voksing og Lysbildene kan fjernes ved hjelp av de samme stripping metodene flere ganger for å tillate multipleks farging.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals &#8722; Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Produksjon og bruk av Lentivirus til Selektivt transduce Primær oligodendrocyte forløper celler for<em&gt; In Vitro</em&gt; myelination Analyser

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

Alginate Encapsulation of Pluripotent Stem Cells Using a Co-axial Nozzle

Alginat Innkapsling av Pluripotent stamceller ved hjelp av en Co-axial Nozzle

Pluripotent stem cells (PS cells) are the focus of intense research due to their role in regenerative medicine and drug screening.  However, the ...

Using Isolated Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High throughput Microplate Respiratory Measurements

Bruke Isolert Mitokondrier fra minimale mengder av Mouse Skeletal Muscle for høy gjennomstrømming Mikro respirasjonsmålinger

Skeletal muscle mitochondria play a specific role in many disease pathologies. As such, the measurement of oxygen consumption as an indicator of ...

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

Generering Primær fibroblastkulturer fra Muse øre og hale Vev

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Induced Pluripotent Stem Cell Generation from Blood Cells Using Sendai Virus and Centrifugation

Induced pluripotent stamcelle Generation fra Blood Cells hjelp Sendai Virus og sentrifugering

The recent development of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) proved that mature somatic cells can return to an undifferentiated, pluripotent ...

Using Primary Neurosphere Cultures to Study Primary Cilia

Bruke Primære neurosfærekulturer å studere Primær Cilia

The primary cilium is fundamentally important for the proliferation of neural stem/progenitor cells and for neuronal differentiation during embryonic, ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis

Hele-celle Patch-clamp Opptak av isolerte primære epitelceller fra epididymene

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

Genetisk engineering av primær mus intestinal Organoids bruke magnetisk Nanopartikkel Transduction viral vektorer for frossen snitting

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

Induksjon og validering av mobilnettet Senescence i primære menneskeceller

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Craniofacial Tissues and Undecalcified Bone

Vev forberedelse og Immunostaining av mus Kraniofacial vev og Undecalcified Bone

Tissue immunostaining provides highly specific and reliable detection of proteins of interest within a given tissue. Here we describe a complete and ...