Name: microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species
Uploaded: 2020-02-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals Ã¢Ë†' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species at

Эта работа поддерживается NIH R00 HD032636.

1. Окрашивание первым антителом
<ol><li>Dewax и регидратировать FFPE слайды с 5 мин, выделенных на каждый из следующих шагов: ксилен или эквивалентные реагенты 3x, 100% этанол 2x, 95% этанола 1x, 70% этанола 1x, 50% этанола 1x, и перегоняемая вода 2x. ПРИМЕЧАНИЕ: Слайды должны оставаться влажными, начиная с эт...

<ol>
	<li>Lewis Carl, S. A., Gillete-Ferguson, I., Ferguson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+indirect+immunofluorescence+procedure+for+staining+the+same+cryosection+with+two+mouse+monoclonal+primary+antibodies.">An indirect immunofluorescence procedure for staining the same cryosection with two mouse monoclonal primary antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 41 (8), 1273-1278 (1993).</li><li>Lan, H. Y., Mu, W., Nikolic-Paterson, D. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+simple,+reliable,+and+sensitive+method+for+multiple+immunoenzyme+staining:+use+of+microwave+oven+heating+to+block+antibody+crossreactivity+and+retrieve+antigens.">A novel, simple, reliable, and sensitive method for multiple immunoenzyme staining: use of microwave oven heating to block antibody crossreactivity and retrieve antigens.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (1), 97-102 (1995).</li><li>Tornehave, D., Hougaard, D. M., Larsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microwaving+for+double+indirect+immunofluorescence+with+primary+antibodies+from+the+same+species+and+for+staining+of+mouse+tissues+with+mouse+monoclonal+antibodies.">Microwaving for double indirect immunofluorescence with primary antibodies from the same species and for staining of mouse tissues with mouse monoclonal antibodies.</a> Histochemistry and Cell Biology. 113 (1), 19-23 (2000).</li><li>Kim, M., Soontornniyomkij, V., Ji, B., Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=System-wide+immunohistochemical+analysis+of+protein+co-localization.">System-wide immunohistochemical analysis of protein co-localization.</a> PLoS One. 7 (2), e32043 (2012).</li><li>Bolognesi, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+Staining+by+Sequential+Immunostaining+and+Antibody+Removal+on+Routine+Tissue+Sections.">Multiplex Staining by Sequential Immunostaining and Antibody Removal on Routine Tissue Sections.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 65 (8), 431-444 (2017).</li><li>Toth, Z. E., Mezey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+visualization+of+multiple+antigens+with+tyramide+signal+amplification+using+antibodies+from+the+same+species.">Simultaneous visualization of multiple antigens with tyramide signal amplification using antibodies from the same species.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 55 (6), 545-554 (2007).</li><li>Buchwalow, I., Samoilova, V., Boecker, W., Tiemann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+immunolabeling+with+antibodies+from+the+same+host+species+in+combination+with+tyramide+signal+amplification.">Multiple immunolabeling with antibodies from the same host species in combination with tyramide signal amplification.</a> Acta Histochemica. 120 (5), 405-411 (2018).</li><li>Bauer, M., Schilling, N., Spanel-Borowski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitation+of+microwave+treatment+for+double+immunolabelling+with+antibodies+of+the+same+species+and+isotype.">Limitation of microwave treatment for double immunolabelling with antibodies of the same species and isotype.</a> Histochemistry and Cell Biology. 116 (3), 227-232 (2001).</li><li>Pirici, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+elution+method+for+multiple+immunohistochemistry+on+primary+antibodies+raised+in+the+same+species+and+of+the+same+subtype.">Antibody elution method for multiple immunohistochemistry on primary antibodies raised in the same species and of the same subtype.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (6), 567-575 (2009).</li><li>Glass, G., Papin, J. A., Mandell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIMPLE:+a+sequential+immunoperoxidase+labeling+and+erasing+method.">SIMPLE: a sequential immunoperoxidase labeling and erasing method.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (10), 899-905 (2009).</li><li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+5-plex+fluorescent+immunohistochemistry+with+tyramide+signal+amplification+and+same+species+antibodies.">Fully automated 5-plex fluorescent immunohistochemistry with tyramide signal amplification and same species antibodies.</a> Laboratory Investigation. 97 (7), 873-885 (2017).</li><li>Paul, A., Laufer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+biotin+as+a+marker+of+adrenocortical+cells+with+steroidogenic+potential.">Endogenous biotin as a marker of adrenocortical cells with steroidogenic potential.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 336 (1-2), 133-140 (2011).</li><li>Bussolati, G., Gugliotta, P., Volante, M., Pace, M., Papotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrieved+endogenous+biotin:+a+novel+marker+and+a+potential+pitfall+in+diagnostic+immunohistochemistry.">Retrieved endogenous biotin: a novel marker and a potential pitfall in diagnostic immunohistochemistry.</a> Histopathology. 31 (5), 400-407 (1997).</li><li>Wang, H., Pevsner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+endogenous+biotin+in+various+tissues:+novel+functions+in+the+hippocampus+and+implications+for+its+use+in+avidin-biotin+technology.">Detection of endogenous biotin in various tissues: novel functions in the hippocampus and implications for its use in avidin-biotin technology.</a> Cell and Tissue Research. 296 (3), 511-516 (1999).</li></ol>

Мультиплекс иммуностоинг полезно для изучения клеточной колокализации двух или более антигенов. Этот широко используемый метод дает убедительные результаты colocalization когда главным образом антитела спрягиваются с по-разному репортерами (сразу окрашивание). Тем не менее, прямое окрашив?...

В мультиплексе иммуносточинов, прямое окрашивание с использованием конъюгированных первичных антител может обеспечить информативные результаты. Без использования вторичных антител, метод прямого окрашивания имеет низкий риск ложных сигналов колокализации от перекрестной реактивности антител. Однако конъюгированные репортеры (фторофор, ферменты) или биотин на первичном антителе ограничивают его использование в будущем. Кроме того, косвенное иммуностоирование обычно обеспечивает более сильные сигналы с помощью неконъюгированных первичных антител с помеченными вторичными антителами. В идеале, неконъюгированные первичные антитела, используемые в мультиплексном иммуностонинге, должны поступать от различных видов хозяев, чтобы избежать перекрестной реактивности антител. Однако, соответствующее сочетание первичных антител от различных видов хозяина не всегда доступны.
Было установлено несколько методов для устранения риска реакции вторичных антител нежелательным первичным антителом. Одним из распространенных методов является использование мономерных антител F (AB) для блокирования любых оставшихся связывающих эпитопов на первом первичном комплексе антител перед окрашиванием второго первичного антитела1. Зачистка антител, которая похожа на полосу и повторное исследование западного листа побот, удаляет ранее окрашенные антитела комплекса без зачистки осаждения обнаруживаемых молекул репортера, таких как 3,3'-диаминобензидин тетрагидрохлорид (DAB)2 и флуоресцентные тирамида осаждения3. С помощью этого метода молекулы репортера в разных цветах могут показывать результат мультиплекса на одном слайде. Мультиплексок окрашивания также достижимо путем полного удаления ранее отложенных слоев антител и выравнивание впоследствии приобретенных изображений из других антител4,5. Все эти методы дают надежные результаты, хотя каждый метод имеет свои ограничения и требует либо сложных процедур, либо специальной системы визуализации.
Настоящий протокол показывает применение метода зачистки антител с использованием широко доступных буферов. Этот протокол может быть использован для выполнения мультиплекс иммунофторных окрашивания на формалина фиксированной парафин-встроенных (FFPE) мыши надпочечников разделы с двумя немаркированных первичных антител из тех же видов хозяина.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-mouse</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>715-066-151</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-rabbit</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>711-066-152</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>422801</td>
			<td>2 &#956;g/mL in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ECHO</td>
			<td>Revolve 4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horseradish peroxidase-conjugated streptavidin</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-030-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven, 700W</td>
			<td>General Electric</td>
			<td>JEM3072DH1BB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-CYP2F2</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-374540</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-TH</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-25269</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>2% serum in PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-20&#945;HSD</td>
			<td>Kerafast,</td>
			<td>EB4002</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-3&#946;HSD</td>
			<td>TransGenic,</td>
			<td>KO607</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-TH</td>
			<td>NOVUS,</td>
			<td>NB300-109</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-&#946;-catenin</td>
			<td>Abcam,</td>
			<td>ab32572</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin Horseradish Peroxidase (SA-HRP)</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-303-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Cy3 Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT704B001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Fluorescein Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT701001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species

Иммуностоинг широко используется в биомедицинских исследованиях, чтобы показать клеточное выражение картины данного белка. Мультиплекс иммуностоидает позволяет маркировки с использованием нескольких первичных антител. Чтобы свести к минимуму кросс-реактивность антител, мультиплекс иммуномаркировки с использованием косвенного окрашивания требует немаркированных первичных антител от различных видов хозяина. Однако, соответствующее сочетание различных видов антител не всегда доступна. Здесь мы описываем метод использования немаркированных первичных антител из тех же видов хозяев (например, в данном случае оба антитела от кролика) для мультиплекса иммунофлуоресценции на формалино-фиксированной парафин-встроенных (FFPE) мыши надпочечников разделов. Этот метод использует ту же процедуру и реагенты, используемые в шаге поиска антигена, чтобы лишить активность ранее окрашенных первичного комплекса антител. Слайды были окрашены первым первичным антителом с использованием общего протокола иммуностоинга с последующим связывающим шагом с биотинилатированным вторичным антителом. Затем в качестве субстрата использовался метод развития сигнала авидин-биотин-пероксидаза. Иммуноактивность первого первичного комплекса антител была снята путем погружения в микроволновой кипящей цитрат натрия раствор в течение 8 минут. Нерастворимый фторофор-тирамид осаждения остались на образце, что позволило слайд быть окрашены с другими первичными антителами. Хотя этот метод устраняет большинство ложных положительных сигналов, некоторый фон от перекрестной реактивности антител может остаться. Если образцы обогащены эндогенным биотином, пероксидаза-конъюгированных вторичных антител может быть использована для замены биотинилаповых вторичных антител, чтобы избежать ложного срабатывания от восстановленного эндогенного биотина.

Результаты были получены из образцов, обработанных со всеми описанными шагами, включая шаг поиска антигена 1.2. Все вторичные антитела, используемые здесь, были биотинителами. Флурофор-тирамид использовался для разработки сигналов от первого и второго первичных антит?...

Watch this Scientific Journal Video about Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals Ã¢Ë†' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species at 

Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals ÃƒÂ¢Ã‹â€ ' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

Было установлено несколько различных методов мультиплексного иммуностоинга с использованием первичных антител одного и того же вида хозяев. Здесь мы описываем использование микроволновой опосредованной антитела зачистки и фторофора-тирамид блокировать антитела поперечной реактивности во время мультиплексиммуностина на формалин фиксированной парафин-встроенных мыши надпочечников разделов.

Микроволновая печь и флурофор-тирамид для мультиплексиммунов на мышонке надпочечников - Использование неконъюгированных первичных антител из тех же видов хост

Immunostaining is widely used in biomedical research to show the cellular expression pattern of a given protein. Multiplex immunostaining allows labeling ...

Иммуностимация широко используется в биомедицинских исследованиях для определения местонахождения белка, представляющих интерес. Мультиплекс иммуностимулятор может обнаружить несколько целей на одном образце с использованием различных первичных антител. Преимуществом этого метода является использование общедоступных буферов для устранения перекрестной реактивности антител, позволяющих иммуностиметь с использованием двух или более неразмещенных первичных антител от одного и того же вида-хозяина.Демонстрацией процедуры будет София Чжэн, аспирантка, и Цёнся Лю, приглашенный ученый из моей лаборатории. Перед окрашиванием, де-воск и регидратировать формалин фиксированной парафин-встроенные слайды с пятиминутным погружением в каждом растворе, как указано. После второго дистиллированного погружения воды, поместите слайды в 275 миллилитров кипящего раствора цитрата натрия на дне коробки наконечник пипетки с крышкой и поместите коробку в микроволновую печь мощностью 700 ватт при 75%-ной мощности в течение восьми минут.В конце лечения откройте крышку и дайте раствору остыть до комнатной температуры перед мытьем горок тремя пятиминутными стирками свежего PBST в банке Coplin. Чтобы заблокировать любые неспецифические связывающие сайты, после последней стирки встряхните излишки PBST с каждого слайда и накройте слайды достаточным объемом соответствующего блокирующего решения. После 30 минут при комнатной температуре во влажной камере встряхните избыток блокирующего раствора с каждого слайда и добавьте 250 микролитров первого первичного антитела, представляющих интерес для каждого образца.Чтобы предотвратить высыхание образцов, слайды могут быть покрыты куском парафиновой пленки. После ночной инкубации при четырех градусах Цельсия во влажной камере, мыть горки три раза со свежим PBST в течение пяти минут за стирку. Встряхните избыток PBST затем быстро покрыть каждый слайд с 250 микролитров соответствующего вторичного раствора антител для одного часа инкубации во влажной камере при комнатной температуре.В конце инкубации, мыть слайды три раза в свежем PBST, как попродемонстрировано, и добавить 250 микролитров свежеприготовленного стрептавидина хрена peroxidase к каждому слайду. После 30 минут при комнатной температуре, мыть горки три раза в свежем PBST. Затем стряхните лишний PBST и накройте каждый слайд 250 микролитров свежеприготовленного фторфорно-тирамидного раствора.Минуту спустя, погрузить слайды в свежем PBST следуют три две минуты моет в свежем PBST. После последней стирки нанесите несколько капель раствора глицерол-к-PBS один на секции и проверьте наличие сигнала флуоресценции с помощью флуоресцентной микроскопии. Чтобы лишить первый комплекс антител, поместите антитела помечены слайды в 275 миллилитров кипящего раствора цитрата натрия, по крайней мере восемь минут, как попродемонстрировано.В конце лечения откройте крышку и дайте раствору остыть до комнатной температуры перед мытьем слайдов три раза с PBST в течение пяти минут за стирку. Чтобы испачкать второй целевой белок интереса, после блокирования для неспецифической привязки, как попродемонстрировано, этикетка каждого образца с 250 микролитров второго первичного антитела интерес при четырех градусах по Цельсию в одночасье. На следующее утро, мыть слайды три раза в течение пяти минут в свежем PBST за стирку, прежде чем покрыть каждый слайд с 250 микролитров соответствующего вторичного раствора антитела для одного часа инкубации при комнатной температуре.В конце инкубации, мыть слайды три раза в свежем PBST, как попродемонстрировано, и добавить 250 микролитров свежеприготовленного стрептавидина хрена peroxidase к каждому слайду. Для разработки сигнала для второй целевой белок интереса, после трех ПБСТ моет, лечить слайды с флюорофором конъюгированных тирамид в различных флуоресцентного спектра. Чтобы остановить развитие сигнала тирамида, погрузите слайды в PBST.Затем испачкать образцы соответствующим ядерным красителем. Для визуализации с помощью микроскопии флуоресценции, монтировать каждый ядерный краситель помечены слайд с каплей соответствующей монтажной среды в крышке. Используйте цель 4X, чтобы найти ткани на слайде.Переключитесь на цель 10X для визуализации и отрегулируйте время экспозиции до 100-400 миллисекунд с источником света от 40 до 80% интенсивности. Затем получить изображения в каждом канале, не перемещая сцену. Изображения с каждого канала могут быть объединены в мультиплексное флуоресцентное изображение.Без зачистки между первым и вторичным окрашивание антител, второе окрашивание для гидроксилазы тирозина будет забрать сигналы от первого целевого белка интереса в результате ложноположительного окрашивания гидроксилазы тирозина, например, в этом образце в коре надпочечников. Для удаления антитела перекрестной реактивности в пероксидазе хрена от первого иммуностимулятора, одна минута и восемь минут микроволновой опосредовано зачистки могут быть выполнены в результате чего чистые двойные результаты окрашивания. В отрицательных контрольных пробах не подбирается какой-либо значительный сигнал.Восьмиминутная зачистка в кипящем буфере цитратов также достаточна для устранения перекрестной реактивности антител для многих антител, обычно используемых в надпочечниках. В некоторых случаях слабый ложноположительной сигнал по-прежнему обнаруживается, однако, и увеличение на 20 минут до микроволновой обработки по-прежнему не может полностью удалить антитела перекрестной реактивности. Во время флуоресценции изображения, важно не перемещать этап при переключении каналов.Тем не менее, может потребоваться скорректировать фокус, чтобы получить четкие изображения каждого канала. Для каждого канала, не забудьте настроить время экспозиции, чтобы убедиться, что сигналы должным образом подвергаются без переэкспонированных пикселей или областей на изображениях. Во время процедуры окрашивания, важно, чтобы сохранить слайды гидратированных от де-воска и слайды могут быть лишены с помощью тех же методов зачистки несколько раз, чтобы мультиплекс окрашивания.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals &#8722; Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Производство и использование Лентивирус, чтобы выборочно преобразовывать Первичная олигодендроцитов клеток-предшественников для<em&gt; In Vitro</em&gt; миелинизации Анализы

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

Alginate Encapsulation of Pluripotent Stem Cells Using a Co-axial Nozzle

Альгинат инкапсуляции плюрипотентных стволовых клеток, используя коаксиальный Насадка

Pluripotent stem cells (PS cells) are the focus of intense research due to their role in regenerative medicine and drug screening.  However, the ...

Using Isolated Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High throughput Microplate Respiratory Measurements

Использование изолированными митохондриями из минимальных количествах мыши скелетных мышц для Высокая пропускная MICROPLATE респираторных измерений

Skeletal muscle mitochondria play a specific role in many disease pathologies. As such, the measurement of oxygen consumption as an indicator of ...

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

Создание первичного фибробластов Культуры с уха мыши и хвост тканей

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Induced Pluripotent Stem Cell Generation from Blood Cells Using Sendai Virus and Centrifugation

Индуцированные плюрипотентные поколение стволовых клеток из клеток крови с помощью вируса Сендай и центрифугирование

The recent development of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) proved that mature somatic cells can return to an undifferentiated, pluripotent ...

Using Primary Neurosphere Cultures to Study Primary Cilia

Использование первичных культур нейросферы для изучения первичных ресничек

The primary cilium is fundamentally important for the proliferation of neural stem/progenitor cells and for neuronal differentiation during embryonic, ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis

Записи цельного клеточного зажима с изолированными первичными эпителиальными клетками от эпидидимиса

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

Генетическая инженерия первичных маучек кишечных органоидов использование магнитных наночастиц Трансдукции Вирусные векторы для замороженных секций

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

Индукция и проверки клеточного старения в первичных клеток человека

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Craniofacial Tissues and Undecalcified Bone

Ткань Подготовка и иммуностоирование мыши Craniofacial тканей и недекализированных костей

Tissue immunostaining provides highly specific and reliable detection of proteins of interest within a given tissue. Here we describe a complete and ...