Name: microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species
Uploaded: 2020-02-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals Ã¢Ë†' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species at

Detta arbete stöds av NIH R00 HD032636.

1. Färgning med den första antikroppen
<ol><li>Devax och rehydratFFPE glider med 5 min tilldelas var t.ex. Obs: Diabilder bör förbli fuktigfrån detta rehydreringssteg tills monteringi det sista steget.</li>
	<li>För antigenhämtning som tillval placerar du bilderna i 275 ml kokande natriumcitratlösning (10 mM, pH = 6,0) i 8 min. För att hålla lösningen kokande, placera rutschkanorna platt på botten av en 14 x 9,5 x 9 cm3 (W x L x H) pipett spetslåda med lock och mikrovågsugn lösningen på 70...

<ol>
	<li>Lewis Carl, S. A., Gillete-Ferguson, I., Ferguson, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+indirect+immunofluorescence+procedure+for+staining+the+same+cryosection+with+two+mouse+monoclonal+primary+antibodies.">An indirect immunofluorescence procedure for staining the same cryosection with two mouse monoclonal primary antibodies.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 41 (8), 1273-1278 (1993).</li><li>Lan, H. Y., Mu, W., Nikolic-Paterson, D. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+simple,+reliable,+and+sensitive+method+for+multiple+immunoenzyme+staining:+use+of+microwave+oven+heating+to+block+antibody+crossreactivity+and+retrieve+antigens.">A novel, simple, reliable, and sensitive method for multiple immunoenzyme staining: use of microwave oven heating to block antibody crossreactivity and retrieve antigens.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 43 (1), 97-102 (1995).</li><li>Tornehave, D., Hougaard, D. M., Larsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microwaving+for+double+indirect+immunofluorescence+with+primary+antibodies+from+the+same+species+and+for+staining+of+mouse+tissues+with+mouse+monoclonal+antibodies.">Microwaving for double indirect immunofluorescence with primary antibodies from the same species and for staining of mouse tissues with mouse monoclonal antibodies.</a> Histochemistry and Cell Biology. 113 (1), 19-23 (2000).</li><li>Kim, M., Soontornniyomkij, V., Ji, B., Zhou, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=System-wide+immunohistochemical+analysis+of+protein+co-localization.">System-wide immunohistochemical analysis of protein co-localization.</a> PLoS One. 7 (2), e32043 (2012).</li><li>Bolognesi, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+Staining+by+Sequential+Immunostaining+and+Antibody+Removal+on+Routine+Tissue+Sections.">Multiplex Staining by Sequential Immunostaining and Antibody Removal on Routine Tissue Sections.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 65 (8), 431-444 (2017).</li><li>Toth, Z. E., Mezey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+visualization+of+multiple+antigens+with+tyramide+signal+amplification+using+antibodies+from+the+same+species.">Simultaneous visualization of multiple antigens with tyramide signal amplification using antibodies from the same species.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 55 (6), 545-554 (2007).</li><li>Buchwalow, I., Samoilova, V., Boecker, W., Tiemann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+immunolabeling+with+antibodies+from+the+same+host+species+in+combination+with+tyramide+signal+amplification.">Multiple immunolabeling with antibodies from the same host species in combination with tyramide signal amplification.</a> Acta Histochemica. 120 (5), 405-411 (2018).</li><li>Bauer, M., Schilling, N., Spanel-Borowski, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitation+of+microwave+treatment+for+double+immunolabelling+with+antibodies+of+the+same+species+and+isotype.">Limitation of microwave treatment for double immunolabelling with antibodies of the same species and isotype.</a> Histochemistry and Cell Biology. 116 (3), 227-232 (2001).</li><li>Pirici, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+elution+method+for+multiple+immunohistochemistry+on+primary+antibodies+raised+in+the+same+species+and+of+the+same+subtype.">Antibody elution method for multiple immunohistochemistry on primary antibodies raised in the same species and of the same subtype.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (6), 567-575 (2009).</li><li>Glass, G., Papin, J. A., Mandell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SIMPLE:+a+sequential+immunoperoxidase+labeling+and+erasing+method.">SIMPLE: a sequential immunoperoxidase labeling and erasing method.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (10), 899-905 (2009).</li><li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+5-plex+fluorescent+immunohistochemistry+with+tyramide+signal+amplification+and+same+species+antibodies.">Fully automated 5-plex fluorescent immunohistochemistry with tyramide signal amplification and same species antibodies.</a> Laboratory Investigation. 97 (7), 873-885 (2017).</li><li>Paul, A., Laufer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+biotin+as+a+marker+of+adrenocortical+cells+with+steroidogenic+potential.">Endogenous biotin as a marker of adrenocortical cells with steroidogenic potential.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 336 (1-2), 133-140 (2011).</li><li>Bussolati, G., Gugliotta, P., Volante, M., Pace, M., Papotti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrieved+endogenous+biotin:+a+novel+marker+and+a+potential+pitfall+in+diagnostic+immunohistochemistry.">Retrieved endogenous biotin: a novel marker and a potential pitfall in diagnostic immunohistochemistry.</a> Histopathology. 31 (5), 400-407 (1997).</li><li>Wang, H., Pevsner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+endogenous+biotin+in+various+tissues:+novel+functions+in+the+hippocampus+and+implications+for+its+use+in+avidin-biotin+technology.">Detection of endogenous biotin in various tissues: novel functions in the hippocampus and implications for its use in avidin-biotin technology.</a> Cell and Tissue Research. 296 (3), 511-516 (1999).</li></ol>

Multiplex immunfärgning är användbart för att undersöka cellulär colocalization av två eller flera antigener. Denna allmänt använda teknik ger övertygande colocalization resultat när primära antikroppar är konjugerat med olika reportrar (direkt färgning). Direktfärgning ger dock vanligtvis svagare signaler jämfört med indirekt färgning, vilket innebär konjugerade sekundära antikroppar för att upptäcka de primära antikropparna. Vid indirekt färgning, en högkvalitativ multiplex immunfärgning resul...

Vid multiplex immunfärgning, direkt färgning med konjugerat primära antikroppar kan ge informativa resultat. Utan att använda sekundära antikroppar har den direkta färgningsmetoden en låg risk för falska samtidighetssignaler från antikroppskorsreaktivitet. Emellertid, de konjugerade reportrar (fluoroffor, enzymer) eller biotin på den primära antikroppen begränsa dess framtida användning. Alternativt ger indirekt immunfärgning vanligtvis starkare signaler genom att använda en okonjugerade primära antikroppar med en märkt sekundär antikropp. Helst bör okonjugerade primära antikroppar som används i multiplex immunfärgning komma från olika värdarter för att undvika antikroppskorsreaktivitet. En lämplig kombination av primära antikroppar från olika värdarter är dock inte alltid tillgänglig.
Flera metoder har fastställts för att eliminera risken för att den sekundära antikroppen reagerar med en oönskad primär antikropp. En vanlig metod är användningen av en F(ab) monomeric antikroppar för att blockera eventuella återstående bindande epitoper på den första primära antikroppar komplex innan färgning med den andra primära antibody1. Antibody strippning, som liknar remsan och reprobe av en västerländsk blot blad, tar bort tidigare färgade antikroppar komplex utan att strippa nedfallet av detekterbara reporter molekyler såsom 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB)2 och fluorescerande tyramid nedfall3. Med denna metod kan reportermolekyler i olika färger visa ett multiplexresultat på samma bild. Multiplex färgning kan också uppnås genom fullständig borttagning av tidigare deponerade lager av antikroppar och anpassningen av senare förvärvade bilder från andra antikroppar4,5. Dessa metoder ger alla tillförlitliga resultat, även om varje metod har sina begränsningar och kräver antingen komplicerade förfaranden eller ett särskilt bildsystem.
Det aktuella protokollet visar tillämpningen av en antikroppsstrippningsmetod med användning av allmänt tillgängliga buffertar. Detta protokoll kan användas för att utföra multiplex immunfluorescerande färgning på formalin-fast paraffin-inbäddade (FFPE) mus adrenal sektioner med två omärkta primära antikroppar från samma värdarter.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antifade Mounting Medium</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-mouse</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>715-066-151</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated donkey anti-rabbit</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>711-066-152</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>422801</td>
			<td>2 &#956;g/mL in distilled water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>ECHO</td>
			<td>Revolve 4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Horseradish peroxidase-conjugated streptavidin</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-030-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven, 700W</td>
			<td>General Electric</td>
			<td>JEM3072DH1BB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-CYP2F2</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-374540</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-TH</td>
			<td>Santa Cruz,</td>
			<td>SC-25269</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td>2% serum in PBST</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-20&#945;HSD</td>
			<td>Kerafast,</td>
			<td>EB4002</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-3&#946;HSD</td>
			<td>TransGenic,</td>
			<td>KO607</td>
			<td>1:250 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-TH</td>
			<td>NOVUS,</td>
			<td>NB300-109</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-&#946;-catenin</td>
			<td>Abcam,</td>
			<td>ab32572</td>
			<td>1:500 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin Horseradish Peroxidase (SA-HRP)</td>
			<td>JacksonImmuno</td>
			<td>016-303-084</td>
			<td>1:1000 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Cy3 Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT704B001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TSA Fluorescein Tyramide</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>SAT701001EA</td>
			<td>1:100 dilution</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microwaving and fluorophore-tyramide for multiplex immunostaining on mouse adrenals &#8722; using unconjugated primary antibodies from the same host species

Immunostaining används ofta i biomedicinsk forskning för att visa cellulärt uttryckmönster av ett visst protein. Multiplex immunfärgning tillåter märkning med hjälp av flera primära antikroppar. För att minimera antikroppskorsreaktivitet kräver multiplex immunfärgning med indirekt färgning omärkta primära antikroppar från olika värdarter. En lämplig kombination av olika arter finns dock inte alltid tillgänglig. Här beskriver vi en metod för att använda omärkta primära antikroppar från samma värdarter (t.ex. i detta fall är båda antikropparna från kanin) för multiplex immunfluorescens på formalin-fast paraffin-inbäddade (FFPE) mus adrenal sektioner. Denna metod använder samma procedur och reagenser som används i antigenhämtningssteget för att skala aktiviteten hos det tidigare färgade primära antikroppskomplexet. Diabilder färgades med den första primära antikroppen med hjälp av en allmän immunfärgning protokoll följt av ett bindande steg med en biotinylated sekundär antikropp. Sedan användes en avidin-biotin-peroxidassignalutvecklingsmetod med fluoroffors-tyramid som substratet. Immunaktiviteten hos det första primära antikroppskomplexet togs bort genom nedsänkning i en mikrovågskokande natriumcitratlösning i 8 min. Den olösliga fluoroffors-tyramid nedfall kvar på provet, vilket gjorde att bilden kunde färgas med andra primära antikroppar. Även om denna metod eliminerar de flesta falska positiva signaler, kan viss bakgrund från antikroppskorsreaktivitet finnas kvar. Om proverna är berikade med endogen biotin kan en peroxidaskonjurat sekundär antikropp användas för att ersätta den biotinylated sekundära antikroppen för att undvika falskt positivt från återvunnen endogen biotin.

Resultaten erhölls från prover som behandlades med alla beskrivna steg 1.2, inklusive antigenhämtningssteg 1.2. Alla sekundära antikroppar som används här var biotinylated. Fluorofforsk-tyramid användes för att utveckla signaler från första och andra primära antikroppar. Bilder togs med hjälp av ett fluorescensmikroskop utrustat med en FITC-kub (för grön fluorescens), en TxRED kub (för Cy3) och en DAPI-kub (för DAPI).
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-pag...

Watch this Scientific Journal Video about Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals Ã¢Ë†' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species at 

Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals ÃƒÂ¢Ã‹â€ ' Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

Flera olika metoder har fastställts för multiplex immunfärgning med hjälp av primära antikroppar från samma värdarter. Här beskriver vi användningen av mikrovågsmedierad antikroppsstrippning och fluoroffors-tyramid för att blockera antikroppskorsåteraktivitet under multiplex immunfärgning på formalin-fast paraffin-inbäddade musadrenal sektioner.

Microwaving och fluorofforerare-tyramid för Multiplex Immunstaining på Mus Adrenals − Använda okonjugerade primära antikroppar från samma värdarter

Immunostaining is widely used in biomedical research to show the cellular expression pattern of a given protein. Multiplex immunostaining allows labeling ...

Immunfärgning används ofta i biomedicinsk forskning för att identifiera platsen för ett protein av intresse. Multipleximmunfärgning kan detektera flera mål på samma prov med hjälp av olika primära antikroppar. Fördelen med denna metod är användning av allmänt tillgängliga buffertar för att eliminera antikroppsöverreaktivitet som tillåter immunfläckning med hjälp av två eller flera omärkta primära antikroppar från samma värdarter.Demonstrera förfarandet kommer att Sophia Zheng, en doktorand, och Qiongxia Lyu, en gästforskare i mitt labb. Innan färgning, de-vax och rehydrera formalin-fast paraffin-inbäddade diabilder med fem minuters nedsänkningar i varje lösning enligt angivelse. Efter den andra destillerade vatten nedsänkning, placera diabilder i 275 milliliter kokande natriumcitratlösning på botten av en pipett spets låda med lock och placera lådan i en 700 watts mikrovågsugn på 75%effekt i åtta minuter.I slutet av behandlingen, öppna locket och låt lösningen svalna till rumstemperatur innan du tvättar objektglasen med tre fem minuters tvättar färska PBST i en Coplin burk. För att blockera eventuella ospecifika bindningsställen, efter den sista tvätten skaka överskottet PBST från varje objektglas och täcka objektglasen med en tillräcklig volym av en lämplig blockerande lösning. Efter 30 minuter vid rumstemperatur i en befuktad kammare ska du skaka den överflödiga blockerande lösningen från varje objektglas och tillsätt 250 mikroliter av den första primära antikroppen av intresse för varje prov.För att förhindra att proverna torkar ut kan objektglasen täckas av en bit paraffinfilm. Efter en övernattning inkubation vid fyra grader Celsius i en befuktad kammare, tvätta diabilder tre gånger med färsk PBST i fem minuter per tvätt. Skaka av överskottet PBST sedan snabbt täcka varje objektglas med 250 mikroliter av en lämplig sekundär antikroppslösning för en timmes inkubation i en fuktad kammare vid rumstemperatur.Vid slutet av inkubationen, tvätta objektglasen tre gånger i färsk PBST som visats och tillsätt 250 mikroliter av nyberedda streptavidin pepparrotperoxidas till varje objektglas. Efter 30 minuter i rumstemperatur tvättar du diabilderna tre gånger i färsk PBST. Skaka sedan av överskottet PBST och täck varje objektglas med 250 mikroliter av nyberedd fluorofore-tyramidlösning.En minut senare, dränka diabilder i färska PBST följt av tre två minuters tvättar i färska PBST. Efter den sista tvätten, applicera några droppar av en en-till-en glycerol-till-PBS-lösning på sektionerna och kontrollera om det finns en fluorescenssignal genom fluorescensmikroskopi. För att ta bort det första antikroppskomplexet placerar du de antikroppsmärkta objektglasen i 275 milliliter kokande natriumcitratlösning i minst åtta minuter som påvisas.I slutet av behandlingen öppnar du locket och låter lösningen svalna till rumstemperatur innan du tvättar objektglasen tre gånger med PBST i fem minuter per tvätt. Att fläcka för det andra målproteinet av intresse, efter blockering för ospecifik bindning som visats, märka varje prov med 250 mikroliter av den andra primära antikroppen av intresse vid fyra grader Celsius över natten. Nästa morgon tvättar du objektglasen tre gånger i fem minuter i färsk PBST per tvätt innan du täcker varje objektglas med 250 mikroliter av en lämplig sekundär antikroppslösning för en timmes inkubation vid rumstemperatur.Vid slutet av inkubationen, tvätta objektglasen tre gånger i färsk PBST som visats och tillsätt 250 mikroliter av nyberedda streptavidin pepparrotperoxidas till varje objektglas. För att utveckla signalen för det andra målproteinet av intresse, efter tre PBST tvättar, behandla diabilderna med fluorophore konjugerade tyramid i en annan fluorescens spektrum. För att stoppa utvecklingen av tyramidesignalen, dränka objektglasen i PBST.Fläcka sedan proverna med ett lämpligt kärnämne. För avbildning genom fluorescensmikroskopi, montera varje kärnämne märkt objektglas med en droppe av ett lämpligt monteringsmedium i en täckplatta. Använd målsättningen 4X för att lokalisera vävnaden på bilden.Byt till 10X-målsättningen för avbildning och justera exponeringstiden till 100 till 400 millisekunder med ljuskällan mellan 40 till 80 %intensitet. Sedan erhålla bilder i varje kanal utan att flytta scenen. Bilderna från varje kanal kan sammanfogas för att bilda en multiplex fluorescerande bild.Utan strippning mellan den första och sekundära antikroppsfärgning, den andra färgning för tyrosin hydroxylas kommer att plocka upp signaler från det första målet protein av intresse vilket resulterar i en falsk positiv tyrosin hydroxylas färgning, till exempel i detta prov inom binjurebarken. För att avlägsna antikroppen korsreaktivitet i pepparrotsperoxidasen från den första immunfärgningen kan en minut och åtta minuters mikrovågsmedierad strippning utföras vilket resulterar i rena dubbelfärgningsresultat. Ingen signifikant signal plockas upp i negativa kontrollprover.Åtta-minuters strippning i kokande citrat buffert är också tillräcklig för att eliminera antikroppen korsreaktivitet för många antikroppar som vanligen används i binjuren. I vissa fall är en svag falsk positiv signal fortfarande detekterbar, dock, och en ökning med 20 minuter till mikrovågsbehandlingen fortfarande inte helt kan ta bort antikroppen korsreaktivitet. Under fluorescensavbildning är det viktigt att inte flytta scenen vid byte av kanal.Det kan dock vara nödvändigt att justera fokus för att få tydliga bilder av varje kanal. För varje kanal ska du se till att justera exponeringstiden för att säkerställa att signalerna exponeras på lämpligt sätt utan överexponerade pixlar eller områden i bilderna. Under infärgningsproceduren är det viktigt att hålla objektglasen hydrerade från avvaxningen och Rutschbanorna kan avskalas med samma strippningsmetoder flera gånger för att tillåta multiplexfärgning.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Microwaving and Fluorophore-Tyramide for Multiplex Immunostaining on Mouse Adrenals &#8722; Using Unconjugated Primary Antibodies from the Same Host Species

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Production and Use of Lentivirus to Selectively Transduce Primary Oligodendrocyte Precursor Cells for In Vitro Myelination Assays

Produktion och användning av Lentivirus att selektivt omvandla Primär Oligodendrocyte prekursorceller för<em&gt; In Vitro</em&gt; myeline Analyser

Myelination is a complex process that involves both neurons and the myelin forming glial cells, oligodendrocytes in the central nervous system (CNS) and ...

Alginate Encapsulation of Pluripotent Stem Cells Using a Co-axial Nozzle

Alginat inkapsling av pluripotenta stamceller med hjälp av en Co-axial munstycke

Pluripotent stem cells (PS cells) are the focus of intense research due to their role in regenerative medicine and drug screening.  However, the ...

Using Isolated Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High throughput Microplate Respiratory Measurements

Använda Isolerad Mitokondrier från minimala kvantiteter av mus skelettmuskulatur för hög genomströmning Mikroandnings Mätningar

Skeletal muscle mitochondria play a specific role in many disease pathologies. As such, the measurement of oxygen consumption as an indicator of ...

Generating Primary Fibroblast Cultures from Mouse Ear and Tail Tissues

Generera Primär fibroblastkulturer från mus Öron och Tail Vävnader

Primary cells are derived directly from tissue and are thought to be more representative of the physiological state of cells in vivo than established cell ...

Induced Pluripotent Stem Cell Generation from Blood Cells Using Sendai Virus and Centrifugation

Inducerade pluripotenta stamceller Generation från blodkroppar med användning Sendai virus och centrifugering

The recent development of human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) proved that mature somatic cells can return to an undifferentiated, pluripotent ...

Using Primary Neurosphere Cultures to Study Primary Cilia

Använda Primära neurosfärkulturer att studera Primary Cilia

The primary cilium is fundamentally important for the proliferation of neural stem/progenitor cells and for neuronal differentiation during embryonic, ...

Whole-cell Patch-clamp Recordings of Isolated Primary Epithelial Cells from the Epididymis

Hela cell Patch-clamp inspelningar av isolerade primära epitelceller från epididymis

The epididymis is an essential organ for sperm maturation and reproductive health. The epididymal epithelium consists of intricately connected cell types ...

Genetic Engineering of Primary Mouse Intestinal Organoids Using Magnetic Nanoparticle Transduction Viral Vectors for Frozen Sectioning

Genteknik för primär mus intestinal Organoider med hjälp av magnetiska nanopartikel Transduction virala vektorer för frysta snittning

Intestinal organoid cultures provide a unique opportunity to investigate intestinal stem cell and crypt biology in vitro, although efficient approaches to ...

Induction and Validation of Cellular Senescence in Primary Human Cells

Induktion och validering av cellulära åldras i primära mänskliga celler

Cellular senescence is a state of permanent cell cycle arrest activated in response to different damaging stimuli. Activation of cellular senescence is a ...

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Craniofacial Tissues and Undecalcified Bone

Vävnads beredning och immunofärgning av mus kraniofaciala vävnader och Undecalcified Bone

Tissue immunostaining provides highly specific and reliable detection of proteins of interest within a given tissue. Here we describe a complete and ...