Name: a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies
Uploaded: 2020-07-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies at JoVE.com

ويدعم هذا العمل من المنح من سوك إلى ساركوما! المؤسسة، ورابطة ساركوما الأسترالية والنيوزيلندية، ومؤسسة أبحاث سرطان الدم للأطفال، والأعمال الخيرية الدائمة. ويدعم W.J.L من قبل زمالة سيمون لي وزمالات بحثية من المجلس الوطني للصحة والبحوث الطبية، ومجلس السرطان WA.

تم الحصول على الحيوانات المستخدمة في هذه التجارب من مركز الموارد الحيوانية (بيرث، غرب أستراليا). تمت صيانة الحيوانات في ظل ظروف قياسية خالية من مسببات الأمراض في معهد هاري بيركنز للبحوث الطبية بالمرفق الشمالي للبحوث الطبية (بيرث، غرب أستراليا). وقد أجريت جميع التجارب في أعقاب البروتوكول ا...

<ol>
	<li>Orosco, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+Surgical+Margins+in+the+10+Most+Common+Solid+Cancers.">Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers.</a> Scientific Reports. 8 (1), 5686 (2018).</li><li>Haas, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+Management+of+Extremity+Soft+Tissue+Sarcomas.">Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (2), 118-124 (2018).</li><li>Brennan, M. F., Antonescu, C. R., Moraco, N., Singer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+learned+from+the+study+of+10,000+patients+with+soft+tissue+sarcoma.">Lessons learned from the study of 10,000 patients with soft tissue sarcoma.</a> Annals of Surgery. 260 (3), 416-421 (2014).</li><li>Smith, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+disease+relapse+in+primary+extremity+soft-tissue+sarcoma.">Patterns of disease relapse in primary extremity soft-tissue sarcoma.</a> British Journal of Surgery. 103 (11), 1487-1496 (2016).</li><li>Uramoto, H., Tanaka, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+after+surgery+in+patients+with+NSCLC.">Recurrence after surgery in patients with NSCLC.</a> Translational Lung Cancer Research. 3 (4), 242-249 (2014).</li><li>Stojadinovic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+prognostic+significance+of+microscopic+margins+in+2,084+localized+primary+adult+soft+tissue+sarcomas.">Analysis of the prognostic significance of microscopic margins in 2,084 localized primary adult soft tissue sarcomas.</a> Annals of Surgery. 235 (3), 424-434 (2002).</li><li>Krall, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+response+to+surgery+triggers+the+outgrowth+of+distant+immune-controlled+tumors+in+mouse+models+of+dormancy.">The systemic response to surgery triggers the outgrowth of distant immune-controlled tumors in mouse models of dormancy.</a> Science Translational Medicine. 10 (436), (2018).</li><li>Bakos, O., Lawson, C., Rouleau, S., Tai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+surgery+and+immunotherapy:+turning+an+immunosuppressive+effect+into+a+therapeutic+opportunity.">Combining surgery and immunotherapy: turning an immunosuppressive effect into a therapeutic opportunity.</a> Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 86 (2018).</li><li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+surgical+models+of+postoperative+tumor+recurrence+for+preclinical+adjuvant+therapy+assessment.">Characterization of surgical models of postoperative tumor recurrence for preclinical adjuvant therapy assessment.</a> American Journal of Translational Research. 4 (2), 206-218 (2012).</li><li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer.">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li><li>Khong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+tumor+debulking+surgery+is+improved+by+adjuvant+immunotherapy+using+imiquimod+and+anti-CD40.">The efficacy of tumor debulking surgery is improved by adjuvant immunotherapy using imiquimod and anti-CD40.</a> BMC Cancer. 14, 969 (2014).</li><li>Broomfield, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial,+but+not+complete,+tumor-debulking+surgery+promotes+protective+antitumor+memory+when+combined+with+chemotherapy+and+adjuvant+immunotherapy.">Partial, but not complete, tumor-debulking surgery promotes protective antitumor memory when combined with chemotherapy and adjuvant immunotherapy.</a> Cancer Research. 65 (17), 7580-7584 (2005).</li><li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+positive-margin+resection+model+recreates+the+postsurgical+tumor+microenvironment+and+is+a+reliable+model+for+adjuvant+therapy+evaluation.">A positive-margin resection model recreates the postsurgical tumor microenvironment and is a reliable model for adjuvant therapy evaluation.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 13 (9), 745-755 (2012).</li><li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice.">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li><li>Overwijk, W. W., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B16+as+a+mouse+model+for+human+melanoma.">B16 as a mouse model for human melanoma.</a> Current Protocols in Immunology. , (2001).</li><li>Predina, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+local+tumor+microenvironment+in+recurrent+cancers+may+explain+the+failure+of+vaccines+after+surgery.">Changes in the local tumor microenvironment in recurrent cancers may explain the failure of vaccines after surgery.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (5), E415-E424 (2013).</li><li>Endo, M., Lin, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+margins+in+the+management+of+extremity+soft+tissue+sarcoma.">Surgical margins in the management of extremity soft tissue sarcoma.</a> Chinese Clinical Oncology. 7 (4), 37 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Efficacy+of+Neoadjuvant+Compared+to+Adjuvant+Immunotherapy+to+Eradicate+Metastatic+Disease.">Improved Efficacy of Neoadjuvant Compared to Adjuvant Immunotherapy to Eradicate Metastatic Disease.</a> Cancer Discovery. 6 (12), 1382-1399 (2016).</li><li>Park, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+release+of+perioperative+immunotherapy+prevents+tumor+recurrence+and+eliminates+metastases.">Extended release of perioperative immunotherapy prevents tumor recurrence and eliminates metastases.</a> Science Translational Medicine. 10 (433), (2018).</li><li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+tumor+model+of+surgical+stress+to+explore+the+mechanisms+of+postoperative+immunosuppression+and+evaluate+novel+perioperative+immunotherapies.">A mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (85), e51253 (2014).</li><li>Gast, C. E., Shaw, A. K., Wong, M. H., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+Procedures+and+Methodology+for+a+Preclinical+Murine+Model+of+De+Novo+Mammary+Cancer+Metastasis.">Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), (2017).</li><li>Qiu, W., Su, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+orthotopic+pancreatic+tumor+mouse+models.">Development of orthotopic pancreatic tumor mouse models.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 215-223 (2013).</li><li>Erstad, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+and+heterotopic+murine+models+of+pancreatic+cancer+and+their+different+responses+to+FOLFIRINOX+chemotherapy.">Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11 (7), (2018).</li></ol>

نحن نقدم بروتوكول لنموذج الماوس من استئصال جراحية غير مكتملة من ساركوما الأنسجة الرخوة لاختبار العلاجات حول العملية. كما قمنا بتوحيد الشق الجراحي للسماح بتقييم التئام الجروح بين الفئران بعد العلاج.
وضع الورم هو جزء مهم من هذا البروتوكول. لقد اخترنا نموذج ورم تحت الجلد للسم...

لا تزال الجراحة هي الخيار العلاجي الرئيسي للعديد من الأورام الصلبة1، بما في ذلك ساركوما الأنسجة الرخوة2،3. على الرغم من التحسينات في تقنيات جراحة السرطان، وتركيبات مع (neo) العلاجات المساعدة، لا يزال هناك خطر كبير من الانتكاس السرطان والانتدرالية بعد استئصال الورم الأولية4،5. في ساركوما الأنسجة الرخوة ، تحدث الانتكاسات بشكل خاص في موقع الجراحة ، مما يؤدي إلى زيادة المراضة والوفيات. في الأجواء السريرية، قد يكون من الصعب الحصول على هوامش واسعة بما فيه الكفاية (على سبيل المثال، بسبب القيود التشريحية)، مما يؤدي إلى استئصال غير كامل وتكرار الورم اللاحق6. ومن المعروف الإجهاد الجراحي وعملية لاحقة من التئام الجروح لخلق بيئة الورم المثبطة للمناعة مواتية لتكرار الورم7,8. ولذلك ، فإن اكتشاف وتطوير علاجات جديدة لساركوما الأنسجة الرخوة ، وخاصة العلاجات المناعية ، يجب أن تأخذ بشكل مثالي استجابة التئام الجروح الجراحية في الاعتبار.
معظم الدراسات قبل الإكلينيكية للعلاجات المساعدة تتم في البداية باستخدام نماذج الماوس السيني تحت الجلد أو xenotransplant ، دون دمج استجابة الإجهاد الجراحي والتئام الجروح9،10. لذلك، قمنا بتطوير نموذج نسيج ساركوما ناعم من الماوس تحت الجلد يدمج استئصال جراحي غير مكتمل. يتم تلقيح خلايا WEHI 164 فيبرومساركوما تحت الجلد ، وبمجرد تأسيس الأورام ، نقوم بإزالة 50-75 ٪ من الجزء الأكبر من الورم(الشكل 1A-E). الأورام باستمرار إعادة النمو من الورم المتبقي. هذا النموذج يسمح لاختبار العلاجات المساعدة مع النظر في تأثير الإجهاد الجراحي والتئام الجروح. وقد استخدمت نماذج جراحية مماثلة من استئصال غير مكتمل في عدد من الدراسات التي أجرتها عدة مجموعات وتبين أن تكون قابلة للتكرار وفعالة11,12,13. هنا، نقدم وصفا مفصلا لهذا البروتوكول.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>26 gauge 0.5 mL insulin syringe</td>
			<td>Becton Dickinson, Australia</td>
			<td>326769</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21985023</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaestetic gas machine</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 2848</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CTLA-4</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BE0164</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PD-1</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BP0273</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Hydrochloride Injection, 0.3mg/mL</td>
			<td>RB healthcare UK Limited, UK</td>
			<td>55175</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine Surgical Scrub 4%</td>
			<td>Perigo Australia, Australia</td>
			<td>CHL01449F(scrub</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine serum</td>
			<td>CellSera, Australia</td>
			<td>AU-FBS-PG</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 10.5 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74110</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 12 cm Serrated</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74212</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Halsted 14 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CD01114</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating chamber</td>
			<td>Datesand Ltd, UK</td>
			<td>Mini-Thermacage</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1M)</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15630080</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein Animal Health, Australia</td>
			<td>SKU: 29405</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricating Eye Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>n/a</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin 1000X</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15140122</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Solution 10x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>70013-032</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Clips</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59038</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Wound Clip Applicator</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59036</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex Wound Clip Remover</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59037</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Qube Anesthesia Breathing Circuit</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>#7885</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21870092</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 11 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>KF3211</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 9 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>JH4209</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Induction Chamber</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 9630</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE express 1x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>12604-021</td>
			<td>None</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies

الجراحة غالباً ما تكون أول علاج للعديد من الأورام الصلبة. ومع ذلك، تحدث الانتكاسات المحلية في كثير من الأحيان بعد استئصال الورم الأساسي، على الرغم من العلاجات المساعدة أو المساعدة الجديدة. يحدث هذا عندما تكون الهوامش الجراحية خالية من الورم بشكل غير كافٍ، مما يؤدي إلى خلايا سرطانية متبقية. من منظور بيولوجي ومناعي ، الجراحة ليست حدثًا فارغًا ؛ فهي لا تعتبر من الناحية البيولوجية أو المناعية . ومن المعروف أن بيئة التئام الجروح للحث على كل من المسارات المؤيدة والمضادة للورم. ونتيجة لذلك، يجب أن تتضمن النماذج قبل السريرية لتطوير الأدوية التي تهدف إلى منع الانتكاس المحلي استئصال جراحي عند اختبار علاجات جديدة (جديدة) مساعدة، لنمين الأوضاع السريرية في المرضى الذين عولجوا بالجراحة.
هنا، ونحن وصف نموذج الماوس من استئصال الجراحية غير مكتملة من الساركوما الأنسجة الرخوة WEHI 164 التي تسمح لاختبار (نيو) العلاجات المساعدة في وضع استجابة التئام الجروح. في هذا النموذج، تتم إزالة 50٪ أو 75٪ من الورم، وترك وراء بعض الأنسجة السرطانية في الموقع لنموذج إجمالي المرض المتبقي بعد الجراحة في الإعداد السريري. هذا النموذج يسمح اختبار العلاجات في سياق عملية جراحية في حين تنظر أيضا في الاستجابة التئام الجروح, التي قد تؤثر على فعالية (نيو) adjuvant العلاجات. يؤدي استئصال الشقوق الجراحي غير المكتمل إلى إعادة نمو الورم القابلة للتكرار في جميع الفئران في غياب العلاج المساعد. العلاج المساعد مع حاجز التفتيش يؤدي إلى انخفاض نمو الورم. وبالتالي فإن هذا النموذج مناسب لاختبار العلاجات في سياق جراحة إزالة الbulking وما يرتبط بها من استجابة لتضميد الجروح ويمكن تمديدها إلى أنواع أخرى من السرطان الصلب.

نمو الورم إلى حجم 50 ملم2 هو حجم مثالي للفك الجزئي. ال استئصال جراحية غير مكتملة من 50 مم2 نتائج الأورام في 100% (ن = 5) إعادة إنتاج للأورام في غياب العلاج المناعي المساعد(الشكل 4A). استخدمنا النموذج التالي لاختبار العلاجات المناعية المساعدة ب...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies at JoVE.com

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies

في هذا البروتوكول، نحن وصف نموذج الماوس من استئصال غير مكتملة الجراحية من ساركوما الأنسجة الرخوة لاختبار (neo) العلاجات المساعدة.

نموذج ماوس من ساركوما الأنسجة الرخوة غير المكتملة لإعادة الاستئصال للاختبار (Neo) العلاجات المساعدة

Surgery is often the first treatment for many solid tumors. However, local relapses frequently occur following primary tumor resection, despite adjuvant ...

يهدف هذا البروتوكول إلى محاكاة الإعداد السريري للمرض المتبقي بعد جراحة إزالة الورم ، وبالتالي يسمح لنا باختبار علاجات السرطان الجديدة في سياق التئام الجروح بعد الجراحة. وميزة هذه التقنية هي أنها تسمح بتوحيد كمية الجرح الذي تسببه وكمية الورم للبقاء. هذه التقنية مهم بشكل خاص للدراسات قبل الكلينيكية في أن تحديد علاجات جديدة للسرطانات، أنه الانتكاسات محليا مثالا على ذلك هو ساركوما الأنسجة الرخوة.هذا العرض البصري أمر بالغ الأهمية لإثبات تقنية الانقلاب ، والتي تسمح لنا بكشف الورم المرتبط بجانب الجلد. ابدأ هذا الإجراء مع التطعيم تحت الجلد للخلايا السرطانية المعدة في الفئران ، كما هو موضح في بروتوكول النص. في اليوم 12، تلقيح آخر، عندما وصلت الأورام إلى حجم ما يقرب من 50 ملليمتر مربع، جرعة الفئران مع 100 ميكرولترات من البوبرينورفين تحت الجلد في scruff من الرقبة، 30 دقيقة قبل الجراحة.اضبط المنطقة الجراحية مع لوحة الحرارة المغطاة بمعطف المقعد و اضبط مخروط الأنف للتخدير. ترتيب معدات جراحية نظيفة بحيث تكون في متناول اليد، بما في ذلك الكلورهيكسادين، مسحة، الشاش، هلام العين، اثنين من ملقط المنحني، مقص، قضيب كليب، مزيل مقطع، وعبوات مقطع. تدفئة غرفة التدفئة إلى 37 درجة مئوية واقامة آخر وسادة الحرارة للانتعاش.لاحظ أن هذا الإجراء يتطلب شخصين. يجب على المساعد مراقبة تنفس الماوس عن كثب أثناء الإجراء. بعد تخدير الماوس كما هو موضح في بروتوكول النص، قم بإجراء اختبار قرصة واختبار انعكاس القرنية للتأكد من تخدير الماوس بالكامل قبل بدء الجراحة.غطي عيون الفأر بكمية صغيرة من جل العيون لتجنب جفاف العين. ابدأ هذه الجراحة عن طريق سحب المنطقة الجراحية بالكلورهيكسادين. باستخدام ملقط وزوج من مقص جعل شق واحد على التوالي سنتيمتر على طول الجانب الظهري، ثلاثة ملليمترات بعيدا عن الورم.لا تقطع الجلد مباشرة تغطي الورم لأنها لن تلتئم بشكل جيد. تجنب استخدام مشرط لقطع الورم واستخدام الملاقط مغرفة القطع. باستخدام ملاقط، وسحب بعيدا اللفافة والأنسجة الدهنية تحت الجلد بين الورم والصواتيون.عادة ما يتم ربط الورم تحت الجلد بجانب الجلد. افتح الجرح عن طريق الإمساك بلطف بالجلد على جانب تحمل الورم باستخدام ملاقط وعكس الورم بحيث يكون مرئيًا في الخارج. باستخدام زوج من مقص، وقطع بعيدا كبسولة الورم من النصف لإزالة، بدءا من قاعدة الورم الأقرب إلى الفتحة.لجراحة 50٪ ديبولك، قطع عبر منتصف الورم. باستخدام ملقط منحنية مغرفة حتى قسم من الورم الذي يتعين إزالته. استخرج أي بقايا من منطقة ديبولكل75٪ debulk, تبدأ من خلال تنفيذ 50٪ ديبول الورم ثم قطع في نصف 50٪ المتبقية من الورم. استخرج 25٪ من الورم باستخدام ملقط منحني. لإغلاق موقع الجراحة، ضع الورم المتبقي مرة أخرى تحت الجلد واستخدام ملقط، وسحب اللوحات الجلدية معًا ومحاذاة الجلد على طول الجرح.عقد الجلد معا خمسة ملليمترات من حافة الجرح واستخدام لقطات جراحية لإغلاق الجرح بدءا من الجانب، الأقرب إلى ملقط. تطبيق العديد من مقاطع حسب الحاجة لضمان عدم تعرض الأنسجة الكامنة. عموما، يتم تطبيق ثلاثة إلى أربعة مقاطع مع اثنين من الثغرات ملليمتر بين القصاصات.السماح للفئران لاسترداد عن طريق وضعها في غرفة التدفئة الدافئة. ضع قفص الفأر على وسادة الحرارة. مراقبة الفئران في غرفة التدفئة حتى أنها قد تعافى من التخدير.ثم، وضع الفئران مرة أخرى في القفص، وترك القفص على وسادة الحرارة لمدة 10 دقائق أخرى حتى الفئران أصبحت أكثر نشاطا. إعطاء الفئران المواد الغذائية الرطبة والناعمة. مراقبة الفئران ساعة واحدة بعد الجراحة للشفاء.مراقبة الفئران مرة أخرى في نهاية اليوم وصباح اليوم التالي وضمان لقطات تبقى في مكانها. علاج الفئران في فترة ما حولية مع ظهور أو العلاج neoadjuvant في أي وقت من الأوقات، اعتمادا على علاج الفائدة. على سبيل المثال، علاج الفئران بجرعة واحدة من 100 ميكروغرام من المضادة للCTLA-4 intraperitoneally في اليوم 15 بعد التطعيم.بدلا من ذلك ، علاج الفئران مع ثلاث جرعات من 200 ميكروغرام من المضادة لPP - 1 intraperitonally في أيام ، 15 ، 17 ، و 19 بعد التطعيم. ال استئصال جراحية غير مكتملة من 50 ورم ملليمتر مربع, المشار إليها هنا من قبل نتائج خط منقط في 100٪ إعادة إنتاج الأورام في غياب العلاج المناعي المساعد. لذلك ، فإن نمو الورم إلى حجم 50 ملليمتر مربع هو حجم مثالي للسحب الجزئي.ثم استخدم النموذج لاختبار العلاجات المناعية المساعدة باستخدام الأجسام المضادة ضد وحدات نقاط التفتيش ، واللمفيات تي السامة للخلايا المرتبطة البروتين أربعة ومستقبلات الموت المبرمجة واحد. العلاج من الفئران مع المضادة لCTLA-4، أدى إلى معدل علاج 80٪، في حين أن علاج الفئران مع المضادة PD-1 أدى إلى معدل علاج 25٪ وتوفر الاستجابة مع مكافحة PD-1 فرصة لاختباره تركيبات جديدة، لمزيد من تحسين معدل الاستجابة. من المهم أن يبقى الورم المتبقي ملتصقاً بالبشرة، وإلا فإن إمدادات الدم سوف تقطع ويصبح الورم هو النخر.بعد هذا الإجراء، يمكن تحليل الأورام من خلال مجموعة متنوعة من الطرق، مثل عملية استئصال الخلايا التدفق من أجل تقييم كيفية تأثير الجراحة على الخلايا المتسللة الورم. وقد سمح لنا هذا النموذج الماوس لاستكشاف كيفية التئام الجروح يؤثر على العلاجات المناعية السرطان.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing (Neo)adjuvant Therapies

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

استخدام نموذج حيواني للتسمم لتقييم العلاجات العشبية رواية

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis ALS

السريرية اختبار وإزالة العمود الفقري الحبل في الفأر نموذج لتصلب الأنسجة العضلية الجانبية (ALS)

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disorder resulting in progressive degeneration of motoneurons. Peak of onset is around 60 ...

Surgical Technique for Spinal Cord Delivery of Therapies: Demonstration of Procedure in Gottingen Minipigs

تقنية جراحية لتسليم الحبل الشوكي من العلاجات: مظاهرة الداخلي في Minipigs جوتنجن

This is a  compact visual description of a combination of surgical technique and device  for the  delivery of (gene and cell) therapies into the spinal ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

ال<em&gt; في البيضة</em&gt; CAM-مقايسة باعتبارها Xenograftmodel عن الورم اللحمي

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

زرع تحت الشبكية من MACS تنقية الخلايا السلائف مستقبلات ضوئية في شبكية العين الماوس الكبار

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

زرع الوريد الأجوف السفلي مداخلة الكسب غير المشروع في نموذج الفأر

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

زرع صمام الرئوي عن طريق نموذج الفأر من غيري مكاني القلب زرع

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

تقييم فعالية<em&gt; H. بيلوري</em&gt; البروتين HP-NAP كأداة علاجية لعلاج سرطان المثانة في مثلي فأري موديل

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

نموذج الفأر ليزر بفعل اتساع الأوعية الدموية المشيمية

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

A Mouse Model of Orthopedic Surgery to Study Postoperative Cognitive Dysfunction and Tissue Regeneration

نموذج ماوس لجراحة العظام لدراسة الخلل المعرفي بعد العملية الجراحية وتجديد الأنسجة

Surgery is commonly used to improve and maintain quality of life. Unfortunately, in vulnerable patients such as the elderly, complications may occur and ...