Name: a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies
Uploaded: 2020-07-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies at JoVE.com

Dette arbejde er støttet af tilskud fra Sock det til Sarcoma! Foundation, den australske og New Zealand Sarcoma Association, Children's Leukæmi & Cancer Research Foundation og Perpetual Philanthropy. W.J.L støttes af et Simon Lee Fellowship og et forskningsstipendium fra National Health and Medical Research Council og Cancer Council WA.

Dyr, der anvendes i disse forsøg blev fremstillet fra Animal Resource Centre (Perth, Western Australia). Dyr blev opretholdt under standard patogen-fri betingelser på Harry Perkins Institute of Medical Research Bioresources North Facility (Perth, Western Australia). Alle forsøg blev udført i henhold til protokollen som godkendt af Harry Perkins Institute of Medical Research Animal Ethics Committee. BALB/c mus på 8-12 uger blev anvendt til disse forsøg. DEN WEHI 164 fibrosarcoma celle linje blev opnået fra CellBank...

<ol>
	<li>Orosco, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+Surgical+Margins+in+the+10+Most+Common+Solid+Cancers.">Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers.</a> Scientific Reports. 8 (1), 5686 (2018).</li><li>Haas, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+Management+of+Extremity+Soft+Tissue+Sarcomas.">Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (2), 118-124 (2018).</li><li>Brennan, M. F., Antonescu, C. R., Moraco, N., Singer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+learned+from+the+study+of+10,000+patients+with+soft+tissue+sarcoma.">Lessons learned from the study of 10,000 patients with soft tissue sarcoma.</a> Annals of Surgery. 260 (3), 416-421 (2014).</li><li>Smith, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+disease+relapse+in+primary+extremity+soft-tissue+sarcoma.">Patterns of disease relapse in primary extremity soft-tissue sarcoma.</a> British Journal of Surgery. 103 (11), 1487-1496 (2016).</li><li>Uramoto, H., Tanaka, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+after+surgery+in+patients+with+NSCLC.">Recurrence after surgery in patients with NSCLC.</a> Translational Lung Cancer Research. 3 (4), 242-249 (2014).</li><li>Stojadinovic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+prognostic+significance+of+microscopic+margins+in+2,084+localized+primary+adult+soft+tissue+sarcomas.">Analysis of the prognostic significance of microscopic margins in 2,084 localized primary adult soft tissue sarcomas.</a> Annals of Surgery. 235 (3), 424-434 (2002).</li><li>Krall, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+response+to+surgery+triggers+the+outgrowth+of+distant+immune-controlled+tumors+in+mouse+models+of+dormancy.">The systemic response to surgery triggers the outgrowth of distant immune-controlled tumors in mouse models of dormancy.</a> Science Translational Medicine. 10 (436), (2018).</li><li>Bakos, O., Lawson, C., Rouleau, S., Tai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+surgery+and+immunotherapy:+turning+an+immunosuppressive+effect+into+a+therapeutic+opportunity.">Combining surgery and immunotherapy: turning an immunosuppressive effect into a therapeutic opportunity.</a> Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 86 (2018).</li><li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+surgical+models+of+postoperative+tumor+recurrence+for+preclinical+adjuvant+therapy+assessment.">Characterization of surgical models of postoperative tumor recurrence for preclinical adjuvant therapy assessment.</a> American Journal of Translational Research. 4 (2), 206-218 (2012).</li><li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer.">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li><li>Khong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+tumor+debulking+surgery+is+improved+by+adjuvant+immunotherapy+using+imiquimod+and+anti-CD40.">The efficacy of tumor debulking surgery is improved by adjuvant immunotherapy using imiquimod and anti-CD40.</a> BMC Cancer. 14, 969 (2014).</li><li>Broomfield, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial,+but+not+complete,+tumor-debulking+surgery+promotes+protective+antitumor+memory+when+combined+with+chemotherapy+and+adjuvant+immunotherapy.">Partial, but not complete, tumor-debulking surgery promotes protective antitumor memory when combined with chemotherapy and adjuvant immunotherapy.</a> Cancer Research. 65 (17), 7580-7584 (2005).</li><li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+positive-margin+resection+model+recreates+the+postsurgical+tumor+microenvironment+and+is+a+reliable+model+for+adjuvant+therapy+evaluation.">A positive-margin resection model recreates the postsurgical tumor microenvironment and is a reliable model for adjuvant therapy evaluation.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 13 (9), 745-755 (2012).</li><li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice.">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li><li>Overwijk, W. W., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B16+as+a+mouse+model+for+human+melanoma.">B16 as a mouse model for human melanoma.</a> Current Protocols in Immunology. , (2001).</li><li>Predina, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+local+tumor+microenvironment+in+recurrent+cancers+may+explain+the+failure+of+vaccines+after+surgery.">Changes in the local tumor microenvironment in recurrent cancers may explain the failure of vaccines after surgery.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (5), E415-E424 (2013).</li><li>Endo, M., Lin, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+margins+in+the+management+of+extremity+soft+tissue+sarcoma.">Surgical margins in the management of extremity soft tissue sarcoma.</a> Chinese Clinical Oncology. 7 (4), 37 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Efficacy+of+Neoadjuvant+Compared+to+Adjuvant+Immunotherapy+to+Eradicate+Metastatic+Disease.">Improved Efficacy of Neoadjuvant Compared to Adjuvant Immunotherapy to Eradicate Metastatic Disease.</a> Cancer Discovery. 6 (12), 1382-1399 (2016).</li><li>Park, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+release+of+perioperative+immunotherapy+prevents+tumor+recurrence+and+eliminates+metastases.">Extended release of perioperative immunotherapy prevents tumor recurrence and eliminates metastases.</a> Science Translational Medicine. 10 (433), (2018).</li><li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+tumor+model+of+surgical+stress+to+explore+the+mechanisms+of+postoperative+immunosuppression+and+evaluate+novel+perioperative+immunotherapies.">A mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (85), e51253 (2014).</li><li>Gast, C. E., Shaw, A. K., Wong, M. H., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+Procedures+and+Methodology+for+a+Preclinical+Murine+Model+of+De+Novo+Mammary+Cancer+Metastasis.">Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), (2017).</li><li>Qiu, W., Su, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+orthotopic+pancreatic+tumor+mouse+models.">Development of orthotopic pancreatic tumor mouse models.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 215-223 (2013).</li><li>Erstad, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+and+heterotopic+murine+models+of+pancreatic+cancer+and+their+different+responses+to+FOLFIRINOX+chemotherapy.">Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11 (7), (2018).</li></ol>

Vi leverer en protokol til en musemodel af ufuldstændig kirurgisk resektion af bløddelssarkom til at teste perioperative behandlinger. Vi har også standardiseret det kirurgiske snit for at muliggøre vurdering af sårheling mellem mus efter behandling.
Tumor placering er en vigtig del af denne protokol. Vi har valgt en subkutan tumor model for at give nem kirurgisk adgang til tumorstedet og administration af lokale behandlinger med minimal byrde på musene. Det er også vigtigt at sikre, at...

Kirurgi er fortsat den vigtigste behandlingsmulighed for mange solidetumorer 1, herunder blødt væv sarkom2,3. På trods af forbedringer i kræft kirurgi teknikker, og kombinationer med (neo) adjuverende behandlinger, der er stadig en høj risiko for kræft tilbagefald og metastase efter primær tumor resektion4,5. I bløddelssarkom forekommer tilbagefald særligt locoregionalt på operationsstedet, hvilket resulterer i øget sygelighed og dødelighed. I den kliniske indstilling, Det kan være vanskeligt at opnå brede nok margener (f.eks på grund af anatomiske begrænsninger), resulterer i ufuldstændig resektion og efterfølgende tumor tilbagefald6. Kirurgisk stress og den efterfølgende proces med sårheling er kendt for at skabe en immunosuppressiv tumor mikromiljø gunstige for tumor tilbagefald7,8. Derfor bør opdagelsen og udviklingen af nye behandlingsformer for bløddelssarkom, især immunterapier, ideelt set tage den kirurgiske sårhelingsrespons i betragtning.
De fleste prækliniske undersøgelser for adjuverende behandlinger udføres i første omgang ved hjælp af subkutane syngeneic eller xenotransplant musemodeller, uden at indarbejde den kirurgiske stress og sårhelingrespons 9,10. Derfor har vi udviklet en syngeneic subkutane mus blødt væv sarkom model indarbejde ufuldstændig kirurgisk resektion. WEHI 164 fibrosarkom celler er podet subkutane, og når tumorer er etableret, vi fjerner 50-75% af tumor bulk(Figur 1A-E). Tumorer konsekvent igen vokse fra de resterende tumor. Denne model giver mulighed for at teste adjuverende behandlinger, mens man overvejer effekten af kirurgisk stress og sårheling. Lignende kirurgiske modeller af ufuldstændig resektion er blevet anvendt i en række undersøgelser af flere grupper og fundet at være reproducerbare og effektive11,,12,13. Her giver vi en detaljeret beskrivelse af denne protokol.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>26 gauge 0.5 mL insulin syringe</td>
			<td>Becton Dickinson, Australia</td>
			<td>326769</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21985023</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaestetic gas machine</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 2848</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CTLA-4</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BE0164</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PD-1</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BP0273</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Hydrochloride Injection, 0.3mg/mL</td>
			<td>RB healthcare UK Limited, UK</td>
			<td>55175</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine Surgical Scrub 4%</td>
			<td>Perigo Australia, Australia</td>
			<td>CHL01449F(scrub</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine serum</td>
			<td>CellSera, Australia</td>
			<td>AU-FBS-PG</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 10.5 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74110</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 12 cm Serrated</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74212</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Halsted 14 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CD01114</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating chamber</td>
			<td>Datesand Ltd, UK</td>
			<td>Mini-Thermacage</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1M)</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15630080</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein Animal Health, Australia</td>
			<td>SKU: 29405</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricating Eye Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>n/a</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin 1000X</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15140122</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Solution 10x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>70013-032</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Clips</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59038</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Wound Clip Applicator</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59036</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex Wound Clip Remover</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59037</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Qube Anesthesia Breathing Circuit</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>#7885</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21870092</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 11 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>KF3211</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 9 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>JH4209</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Induction Chamber</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 9630</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE express 1x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>12604-021</td>
			<td>None</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies

Kirurgi er ofte den første behandling for mange solide tumorer. Men, lokale tilbagefald ofte opstår efter primær tumor resektion, trods adjuverende eller neo-adjuverende behandlinger. Dette sker, når kirurgiske margener er utilstrækkeligt tumor-fri, resulterer i resterende kræftceller. Fra et biologisk og immunologisk perspektiv, kirurgi er ikke en null begivenhed; sårhelingsmiljøet er kendt for at fremkalde både pro- og anti-tumorigenic veje. Som følge heraf bør prækliniske modeller for lægemiddeludvikling, der har til formål at forebygge lokalt tilbagefald, omfatte kirurgisk resektion, når der testes nye (neo)adjuverende behandlinger, for at modellere de kliniske indstillinger hos patienter, der behandles med kirurgi.
Her beskriver vi en musemodel af ufuldstændig kirurgisk resektion af WEHI 164 bløddelssarkom, der gør det muligt at teste (neo)adjuverende behandlinger i forbindelse med et sårhelingsrespons. I denne model, 50% eller 75% af tumoren er fjernet, efterlader nogle kræft væv in situ til model brutto resterende sygdom efter operation i den kliniske indstilling. Denne model gør det muligt at teste behandlinger i forbindelse med kirurgi, samtidig med at man overvejer sårhelingsresponsen, hvilket kan påvirke effekten af (neo)adjuverende behandlinger. Den ufuldstændige kirurgiske resektion resulterer i reproducerbar genvækst af tumoren i alle mus i mangel af adjuverende behandling. Adjuverende behandling med checkpoint blokade resulterer i reduceret tumor genvækst. Denne model er således velegnet til test af behandlinger i forbindelse med debulking kirurgi og dens tilhørende sårheling svar og kan udvides til andre typer af fast kræft.

Tumorvækst til en størrelse på 50 mm2 er en ideel størrelse til delvis debulk. Den ufuldstændige kirurgiske resektion af 50 mm2 tumorer resulterer i 100% (n = 5) reproducerbar genvækst af tumorer i mangel af adjuverende immunterapi (Figur 4A). Vi brugte derefter modellen til at teste adjuverende immunterapier ved hjælp af antistoffer mod checkpoint molekyler Cytotoksisk T Lymphocyt Associated Protein 4 (CTLA-4) og...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies at JoVE.com

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies

I denne protokol beskriver vi en musemodel af ufuldstændig kirurgisk resektion af bløddelssarkom til test (neo)adjuverende behandlinger.

En musemodel af ufuldstændigt resected blødt væv sarkom til test (Neo) adjuverende behandlinger

Surgery is often the first treatment for many solid tumors. However, local relapses frequently occur following primary tumor resection, despite adjuvant ...

Denne protokol har til formål at efterligne den kliniske indstilling af resterende sygdom efter tumor debulking kirurgi, og derfor giver os mulighed for at teste nye kræftbehandlinger i forbindelse med postoperativ sårheling. Fordelen ved denne teknik er, at det giver mulighed for standardisering af mængden af sår påført og mængden af tumor til at forblive. Denne teknik er især vigtigt for prækliniske undersøgelser i at identificere nye behandlinger for kræft, at det tilbagefald lokalt et eksempel på, som er blødt væv sarkom.Denne visuelle demonstration er afgørende for at demonstrere inversion teknik, som giver os mulighed for at udsætte tumoren knyttet til huden side. Begynd denne procedure med subkutan inokulering af forberedte kræftceller i mus, som beskrevet i tekstprotokollen. På dag 12, post inokulering, når tumorer har nået en størrelse på ca 50 kvadratmillimeter, dosis mus med 100 mikroliter af buprenorphin subkutant i scruff af halsen, 30 minutter før operationen.Opsæt det kirurgiske område med varmepuden dækket med bænkefrakke og oprette en næse kegle for anæstesi. Arranger rent kirurgisk udstyr, så de er inden for rækkevidde, herunder chlorhexadin, vatpind, gaze, øjengel, to buede hæcener, saks, klip applikator, klip remover, og klip refills. Varm varmekammeret til 37 grader Celsius og oprette en anden varmepude til nyttiggørelse.Bemærk, at denne procedure kræver to personer. En assistent skal overvåge vejrtrækningen af musen nøje under proceduren. Efter bedøvelse af musen som beskrevet i tekstprotokollen, udføre en knivspids test og hornhinde refleks test for at sikre, at musen er fuldt bedøvet, før du begynder kirurgi.Dæk musens øjne med en lille mængde oftalmologiske gel for at undgå tørhed i øjet. Begynd denne operation ved at swabbing det kirurgiske område med chlorhexadin. Ved hjælp af scener og en saks gøre en en centimeter lige snit langs dorsale side, tre millimeter væk fra tumoren.Skær ikke huden direkte dækker tumoren, da det ikke vil helbrede godt. Undgå at bruge en skalpel til at skære tumoren og bruge pincet til at øse stykkerne. Ved hjælp af pincet, trække væk fascia og subkutane fedtvæv mellem tumor og bughinde.Den subkutane tumor er normalt knyttet til huden side. Åbn såret ved forsigtigt at holde huden på tumorbærende side ved hjælp af pincet og invertere tumoren, så den er synlig udenfor. Ved hjælp af en saks, skåret væk tumor kapsel fra halvdelen til at fjerne, startende fra bunden af tumoren tættest på åbningen.For 50% debulk kirurgi, skåret over midten af tumoren. Ved hjælp af buede stændel øse op den del af tumoren, der skal fjernes. Scoop op eventuelle rester fra debulk området.For 75% debulk, start med at udføre en 50% tumor debulk derefter skåret i halvdelen af de resterende 50% af tumor. Scoop op 25% af tumoren ved hjælp af buede snævler. For at lukke operationsstedet, placere de resterende tumor tilbage under huden og ved hjælp af spån, trække huden flapper sammen og line op huden langs såret.Hold huden sammen fem millimeter fra kanten af såret og bruge kirurgiske klip til at lukke såret starter på siden, tættest på sce øjnene. Påfør så mange klip som nødvendigt for at sikre, at der ikke er noget underliggende væv, der eksponeres. Generelt anvendes tre til fire klip med to millimeter mellemrum mellem klip.Lad musene komme sig ved at sætte dem ind i det varme varmekammer. Placer musens bur på varmepuden. Overvåg musene i varmekammeret, indtil de er kommet sig efter bedøvelsen.Sæt derefter musene tilbage i buret, lad buret på varmepuden i yderligere 10 minutter, indtil musene er blevet mere aktive. Giv musene våd og blød mad. Overvåg musene en time efter operationen for helbredelse.Overvåg musene igen sidst på dagen og den følgende morgen, og sørg for, at clipsene forbliver på plads. Behandle mus perioperativt med advent eller neoadjuverende behandling på et givet tidspunkt, afhængigt af behandlingen af interesse. For eksempel, behandle mus med en dosis på 100 mikrogram anti-CTLA-4 intraperitoneally på dag 15 efter inokulering.Alternativt kan musene behandles med tre doser på 200 mikrogram anti-PD-1 intraperitoneally på dage, 15, 17 og 19 efter inokulering. Den ufuldstændige kirurgiske resektion af 50 kvadratmillimeter tumorer, angivet her ved den stiplede linje resulterer i 100% reproducerbar genvækst af tumorer i mangel af adjuverende immunterapi. Derfor tumorvækst til en størrelse på 50 kvadrat millimeter er en ideel størrelse til delvis debulk.Modellen blev derefter brugt til at teste adjuverende immunterapier ved hjælp af antistoffer mod checkpoint moduler, cytotoksisk T lymfocyt associeret protein fire og programmeret død receptor en. Behandling af mus med anti-CTLA-4, resulterede i en kur sats på 80%Mens behandling af mus med anti-PD-1 resulterede i en kur sats på 25% Response med anti-PD-1 giver mulighed for at teste det nye kombinationer, for yderligere at forbedre responsraten. Det er vigtigt, at de resterende tumor forbliver knyttet til huden, ellers blodforsyningen vil blive afskåret og tumoren vil blive nekrotisk.Efter denne procedure, tumorer kan analyseres ved en række forskellige metoder, såsom flow cytometri for at vurdere, hvordan kirurgi påvirker tumor infiltrerende celler. Denne musemodel har givet os mulighed for at undersøge, hvordan sårheling påvirker kræftimmunterapier.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing (Neo)adjuvant Therapies

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Anvendelse af dyremodel af Sepsis at evaluere Nye Naturlægemidler Terapier

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis ALS

Klinisk Test og fjernelse af rygmarv i en musemodel for Amyotrofisk Lateral Sclerose (ALS)

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disorder resulting in progressive degeneration of motoneurons. Peak of onset is around 60 ...

Surgical Technique for Spinal Cord Delivery of Therapies: Demonstration of Procedure in Gottingen Minipigs

Kirurgisk teknik til Spinal Cord Levering af Terapier: Demonstration af Procedure i Göttingen minigrise

This is a  compact visual description of a combination of surgical technique and device  for the  delivery of (gene and cell) therapies into the spinal ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

Den<em&gt; I ovo</em&gt; CAM-assay som et Xenograftmodel til Sarkom

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

Subretinal Transplantation af MACS renset fotoreceptor prækursor celler i voksenmus nethinden

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Implantation af ringere Vena Cava indskydning Graft i musemodel

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Transplantation af pulmonale ventilen med en musemodel af Heterotop Heart Transplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Evaluering af effekten af<em&gt; H. pylori</em&gt; Protein HP-NAP som et terapeutisk værktøj til behandling af blærekræft i en ortotopisk murin model

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

En mus Model for Laser-induceret choroideaneovaskularisering

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

A Mouse Model of Orthopedic Surgery to Study Postoperative Cognitive Dysfunction and Tissue Regeneration

En musemodel af ortopædisk kirurgi til at studere postoperativ kognitiv dysfunktion og vævsregeneration

Surgery is commonly used to improve and maintain quality of life. Unfortunately, in vulnerable patients such as the elderly, complications may occur and ...