Name: a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies
Uploaded: 2020-07-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies at JoVE.com

この作品は、肉腫にそれを靴下からの助成金によって支えられている!財団、オーストラリアとニュージーランド肉腫協会、小児白血病&がん研究財団、永久フィランソロピー。W.J.Lは、サイモン・リー・フェローシップと国家保健医療研究評議会とがん評議会WAの研究フェローシップによってサポートされています。

これらの実験で使用された動物は、動物資源センター(パース、西オーストラリア州)から得られた。動物は、ハリー・パーキンス医学研究所生物資源北施設(西オーストラリア州パース)で標準的な病原体のない状態で維持されました。すべての実験は、ハリー・パーキンス医学研究所動物倫理委員会の承認に従ってプロトコルに従って行われました。8~12週齢のBALB/cマウスをこれらの実験に用?...

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	<li>Orosco, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+Surgical+Margins+in+the+10+Most+Common+Solid+Cancers.">Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers.</a> Scientific Reports. 8 (1), 5686 (2018).</li><li>Haas, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+Management+of+Extremity+Soft+Tissue+Sarcomas.">Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (2), 118-124 (2018).</li><li>Brennan, M. F., Antonescu, C. 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我々は、軟部組織肉腫の不完全な外科的切除のマウスモデルのためのプロトコルを提供し、周回手術療法を試験する。また、治療後のマウス間の創傷治癒の評価を可能にするために、外科的切開を標準化した。
腫瘍の配置は、このプロトコルの重要な部分です。我々は、腫瘍部位への容易な外科的アクセスとマウスの負担を最小限に抑えた局所療法の投与を可能にする?...

手術は、軟部組織肉腫2、3を含む多くの固形腫瘍1の3主要な治療オプションのままです。癌手術技術の改善、および(neo)アジュバント療法との併用にもかかわらず、原発性腫瘍切除,4、5に続く癌再発および転移のリスクが依然として高い4。軟部組織肉腫では、再発は特に局所的に起こり、手術部位では、罹患率および死亡率が増加する。臨床現場では、十分な広いマージン(例えば、解剖学的制約による)を得ることは困難であり、不完全な切除およびそれに続く腫瘍再発を生じる6。外科的ストレスとその後の創傷治癒のプロセスは、腫瘍再発に有利な免疫抑制性腫瘍微小環境を作り出すことが知られている7,8。8したがって、軟部組織肉腫、特に免疫療法のための新しい治療法の発見と開発は、理想的には外科的創傷治癒応答を考慮に入れるべきである。
アジュバント療法のためのほとんどの前臨床試験は、最初に外科的ストレスおよび創傷治癒応答99,1010を組み込まずに皮下同系または異種移植マウスモデルを用いて行われる。そこで、不完全な外科的切除を組み込んだ、皮下マウス軟部肉腫モデルを開発した。WEHI 164線維肉腫細胞は皮下に接種され、腫瘍が確立されると、腫瘍バルクの50〜75%を除去する(図1A-E)。腫瘍は一貫して残りの腫瘍から再成長する。このモデルは外科的ストレスおよび創傷治癒の効果を考慮している間のアジュバント療法をテストすることを可能にする。不完全な切除の同様の外科モデルは、いくつかのグループによって多くの研究で使用され、再現性が高く、効果的な1111、12、1312,13であることが判明した。ここでは、このプロトコルの詳細な説明を提供します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>26 gauge 0.5 mL insulin syringe</td>
			<td>Becton Dickinson, Australia</td>
			<td>326769</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21985023</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaestetic gas machine</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 2848</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CTLA-4</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BE0164</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PD-1</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BP0273</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Hydrochloride Injection, 0.3mg/mL</td>
			<td>RB healthcare UK Limited, UK</td>
			<td>55175</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine Surgical Scrub 4%</td>
			<td>Perigo Australia, Australia</td>
			<td>CHL01449F(scrub</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine serum</td>
			<td>CellSera, Australia</td>
			<td>AU-FBS-PG</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 10.5 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74110</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 12 cm Serrated</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74212</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Halsted 14 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CD01114</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating chamber</td>
			<td>Datesand Ltd, UK</td>
			<td>Mini-Thermacage</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1M)</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15630080</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein Animal Health, Australia</td>
			<td>SKU: 29405</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricating Eye Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>n/a</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin 1000X</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15140122</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Solution 10x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>70013-032</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Clips</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59038</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Wound Clip Applicator</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59036</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex Wound Clip Remover</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59037</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Qube Anesthesia Breathing Circuit</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>#7885</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21870092</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 11 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>KF3211</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 9 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>JH4209</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Induction Chamber</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 9630</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE express 1x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>12604-021</td>
			<td>None</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies

手術は、多くの固形腫瘍の最初の治療法であることが多い。しかし、局所再発は、アジュバントまたはネオアジュバント療法にもかかわらず、原発性腫瘍切除後に頻繁に起こる。これは、外科的マージンが腫瘍を含まない不十分な場合に起こり、癌細胞が残留する。生物学的および免疫学的観点から、手術はヌル事象ではありません。創傷治癒環境は、プロおよび抗腫瘍形成経路の両方を誘導することが知られている。その結果、局所再発を予防することを目的とした医薬品開発のための前臨床モデルは、手術で治療された患者の臨床設定をモデル化するために、新しい(ネオ)アジュバント療法をテストする際に外科的切除を組み込むべきである。
ここでは、創傷治癒応答の設定における(ネオ)アジュバント療法の検査を可能にするWEHI 164軟部肉腫の不完全な外科的切除のマウスモデルについて述べた。このモデルでは、腫瘍の50%または75%が除去され、臨床現場で手術後の総残留疾患をモデル化するために、その場でいくつかの癌組織を残す。このモデルは、(ネオ)アジュバント治療の有効性に影響を与える可能性のある創傷治癒応答を考慮しながら、手術の文脈での検査療法を可能にする。不完全な外科的切除は、アジュバント療法がない場合に全てのマウスにおいて腫瘍の再増殖を再現する結果となる。チェックポイント封鎖によるアジュバント治療は、腫瘍再増殖を減少させる。このモデルは、逆増手術およびそれに関連する創傷治癒応答の文脈における検査療法に適しており、他のタイプの固形癌にも拡張することができる。

50mm2の大きさへの腫瘍2の成長は、部分的な逆バルクにとって理想的なサイズである。50mm2腫瘍の不完全な外科的切2除は、アジュバント免疫療法がない場合に腫瘍の100%(n=5)再現性の再成長をもたらす(図4A)。次に、このモデルを使用して、細胞傷害性Tリンパ球関連タンパク質4(CTLA-4)およびプログラム死受容体1(PD-1)に対?...

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A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies

このプロトコルでは、検査用軟部肉腫の不完全な外科的切除(neo)アジュバント療法のマウスモデルについて述べた。

検査のための不完全切除軟部肉腫のマウスモデル(ネオ)アジュバント療法

Surgery is often the first treatment for many solid tumors. However, local relapses frequently occur following primary tumor resection, despite adjuvant ...

このプロトコルは、腫瘍脱バルク手術後の残留疾患の臨床設定を模倣することを目的としており、術後創傷治癒の文脈で新しい癌療法をテストすることを可能にする。この技術の利点は、それが傷の量を与え、腫瘍の量を維持することを標準化できることです。この技術は、癌の新しい治療法を同定し、軟部組織肉腫の一例である局所的に再発するという前臨床試験にとって特に重要である。この視覚的なデモンストレーションは、反転技術を実証するために重要であり、皮膚側に付着した腫瘍を露出させることができます。テキストプロトコルに記載されているように、マウスで調製された癌細胞の皮下接種からこの手順を開始する。12日目、接種後、腫瘍が約50平方ミリメートルの大きさに達すると、100マイクロリットルのブプレノルフィンを頸部の擦り傷の中で30分前に投与する。ベンチコートで覆われたヒートパッドで外科領域を設置し、麻酔のための鼻コーンを設定します。クロルヘキサジン、綿棒、ガーゼ、アイジェル、2つの湾曲した鉗子、はさみ、クリップアプリケーター、クリップリムーバー、クリップリフィルなど、簡単に手の届くところにきれいな外科用機器を配置します。暖房室を摂氏37度に温め、回復のために別のヒートパッドを設置します。この手順には 2 人のユーザーが必要であることに注意してください。アシスタントは、手順中にマウスの呼吸を注意深く監視する必要があります。テキストプロトコルに記載されているようにマウスを麻酔した後、手術を開始する前にマウスが完全に麻酔されていることを確認するためにピンチテストと角膜反射試験を行います。目の乾燥を避けるために、少量の眼科ゲルでマウスの目を覆います。この手術を開始し、クロルヘキサジンで外科領域をスワッピングします。鉗子とハサミを使用すると、腫瘍から3ミリメートル離れた後側に沿って1センチメートルのまっすぐな切開を行います。皮膚は、腫瘍を覆う場合は、よく治らないので直接切り取らないでください。メスを使って腫瘍を切り、ピンセットを使ってすくい。ピンセットを使用して、腫瘍と腹膜の間の筋膜および皮下脂肪組織を引き離す。皮下腫瘍は通常皮膚側に付着する。ピンセットを使用して腫瘍軸受側の皮膚を優しく保持して傷口を開き、外に見えるように腫瘍を反転させます。ハサミを使用して、開口に最も近い腫瘍の基部から始めて、腫瘍カプセルを半分から切り取って取り除く。50%の逆バルク手術のために、腫瘍の真ん中を横切る。湾曲した鉗子を使用して、取り除く腫瘍のセクションをすくい上げる。デバルク領域から残骸をすくい上げろ。75%のデバルクについては、50%の腫瘍脱バルクを行い、残りの50%の腫瘍の半分に切断することによって開始する。湾曲した鉗子を使用して腫瘍の25%をすくい上げる。外科部位を閉じるには、残りの腫瘍を皮膚の下に戻し、鉗子を使用して、皮膚のフラップを一緒に引っ張り、創傷に沿って皮膚を並べます。傷口の端から5ミリメートルの皮膚を一緒に保持し、外科用クリップを使用して、鉗子に最も近い側面から創傷を閉じます。必要な数のクリップを適用して、下層の組織が露出しないようにします。通常、3 ~4 個のクリップが、クリップ間に 2 ミリメートルの間隔で適用されます。マウスを暖かい加熱室に入れて回復させる。マウスのケージをヒートパッドに置きます。麻酔薬から回復するまで、加熱室のマウスを監視します。次いで、マウスをケージに戻し、マウスがより活発になるまでさらに10分間、ケージをヒートパッドに残します。マウスに濡れた柔らかい食べ物を与えます。回復のために手術の1時間後にマウスを監視します。一日の終わりと翌朝にマウスを再び監視し、クリップが所定の位置に残っていることを確認します。マウスは、関心のある治療に応じて、いつでもアドベントまたはネオアジュバント療法で周回治療する。例えば、接種後15日目に100マイクログラムの抗CTLA-4腹腔内でマウスを治療する。あるいは、接種後の日、15、17、および19日に200マイクログラムの抗PD-1腹腔内3回投与でマウスを治療する。50平方ミリメートルの腫瘍の不完全な外科的切除は、点線によってここに示され、アジュバント免疫療法の不在時に腫瘍の100%再現性の再成長をもたらす。したがって、50平方ミリメートルの大きさへの腫瘍の成長は、部分的な逆バルクのための理想的なサイズである。このモデルは、チェックポイントモジュール、細胞傷害性Tリンパ球関連タンパク質4およびプログラム死受容体1に対する抗体を使用してアジュバント免疫療法をテストするために使用された。抗CTLA-4を有するマウスの治療は、80%の治癒率をもたらしたが、抗PD−1を有するマウスの治療は25%の治癒率をもたらした反PD−1の応答は、新しい組み合わせを試験する機会を提供し、応答率をさらに改善する。残りの腫瘍が皮膚に付着したままであることが重要であり、そうでなければ血液供給が遮断され、腫瘍は壊死する。この手順に従って、腫瘍は、手術が腫瘍浸潤細胞にどのように影響するかを評価するために、フローサイトメトリーなどの様々な方法によって分析することができる。このマウスモデルは、創傷治癒ががん免疫療法にどのような影響を与えるかを調べるためのものです。

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing (Neo)adjuvant Therapies

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

新しいハーブ治療法を評価するために敗血症の動物モデルの使用

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

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臨床試験および筋萎縮性側索硬化症（ALS）のマウスモデルにおける脊髄の除去

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disorder resulting in progressive degeneration of motoneurons. Peak of onset is around 60 ...

Surgical Technique for Spinal Cord Delivery of Therapies: Demonstration of Procedure in Gottingen Minipigs

セラピーの脊髄配達のための外科テクニック：ゲッティンゲンミニブタの手順のデモンストレーション

This is a  compact visual description of a combination of surgical technique and device  for the  delivery of (gene and cell) therapies into the spinal ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

ザ<em&gt;卵で</em肉腫のためXenograftmodelとして&gt; CAMアッセイ

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

MACSの精製された感光体前駆体細胞の成人マウス・レチナへの副腎移植

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

マウスモデルにおける下大静脈介在移植の移植

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Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

異心臓移植のマウスモデルを用いた肺動脈弁の移植

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

の有効性の評価<em&gt; H。ピロリ</em同所性マウスモデルにおける膀胱癌の治療のための治療ツールとして&gt;タンパク質HP-NAP

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

レーザ誘起脈絡膜血管新生のためのマウスモデル

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

A Mouse Model of Orthopedic Surgery to Study Postoperative Cognitive Dysfunction and Tissue Regeneration

整形外科術後の高次脳機能障害と組織再生を研究するマウス モデル

Surgery is commonly used to improve and maintain quality of life. Unfortunately, in vulnerable patients such as the elderly, complications may occur and ...