Name: a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies
Uploaded: 2020-07-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies at JoVE.com

Dette arbeidet støttes av tilskudd fra Sokken til Sarcoma! Foundation, Australian og New Zealand Sarcoma Association, Children's Leukemia & Cancer Research Foundation og Evigvarende filantropi. W.J.L støttes av et Simon Lee Fellowship og et stipendiat fra National Health and Medical Research Council, og Cancer Council WA.

Dyr som brukes i disse eksperimentene ble hentet fra Animal Resource Centre (Perth, Western Australia). Dyr ble opprettholdt under standard patogenfrie forhold ved Harry Perkins Institute of Medical Research Bioresources North Facility (Perth, Western Australia). Alle eksperimenter ble utført etter protokollen som godkjent av Harry Perkins Institute of Medical Research Animal Ethics Committee. BALB/c mus i alderen 8-12 år ble brukt i disse eksperimentene. WEHI 164 fibrosarcoma cellelinjen ble hentet fra CellBank Austra...

<ol>
	<li>Orosco, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+Surgical+Margins+in+the+10+Most+Common+Solid+Cancers.">Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers.</a> Scientific Reports. 8 (1), 5686 (2018).</li><li>Haas, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+Management+of+Extremity+Soft+Tissue+Sarcomas.">Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (2), 118-124 (2018).</li><li>Brennan, M. F., Antonescu, C. R., Moraco, N., Singer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+learned+from+the+study+of+10,000+patients+with+soft+tissue+sarcoma.">Lessons learned from the study of 10,000 patients with soft tissue sarcoma.</a> Annals of Surgery. 260 (3), 416-421 (2014).</li><li>Smith, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+disease+relapse+in+primary+extremity+soft-tissue+sarcoma.">Patterns of disease relapse in primary extremity soft-tissue sarcoma.</a> British Journal of Surgery. 103 (11), 1487-1496 (2016).</li><li>Uramoto, H., Tanaka, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+after+surgery+in+patients+with+NSCLC.">Recurrence after surgery in patients with NSCLC.</a> Translational Lung Cancer Research. 3 (4), 242-249 (2014).</li><li>Stojadinovic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+prognostic+significance+of+microscopic+margins+in+2,084+localized+primary+adult+soft+tissue+sarcomas.">Analysis of the prognostic significance of microscopic margins in 2,084 localized primary adult soft tissue sarcomas.</a> Annals of Surgery. 235 (3), 424-434 (2002).</li><li>Krall, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+response+to+surgery+triggers+the+outgrowth+of+distant+immune-controlled+tumors+in+mouse+models+of+dormancy.">The systemic response to surgery triggers the outgrowth of distant immune-controlled tumors in mouse models of dormancy.</a> Science Translational Medicine. 10 (436), (2018).</li><li>Bakos, O., Lawson, C., Rouleau, S., Tai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+surgery+and+immunotherapy:+turning+an+immunosuppressive+effect+into+a+therapeutic+opportunity.">Combining surgery and immunotherapy: turning an immunosuppressive effect into a therapeutic opportunity.</a> Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 86 (2018).</li><li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+surgical+models+of+postoperative+tumor+recurrence+for+preclinical+adjuvant+therapy+assessment.">Characterization of surgical models of postoperative tumor recurrence for preclinical adjuvant therapy assessment.</a> American Journal of Translational Research. 4 (2), 206-218 (2012).</li><li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer.">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li><li>Khong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+tumor+debulking+surgery+is+improved+by+adjuvant+immunotherapy+using+imiquimod+and+anti-CD40.">The efficacy of tumor debulking surgery is improved by adjuvant immunotherapy using imiquimod and anti-CD40.</a> BMC Cancer. 14, 969 (2014).</li><li>Broomfield, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial,+but+not+complete,+tumor-debulking+surgery+promotes+protective+antitumor+memory+when+combined+with+chemotherapy+and+adjuvant+immunotherapy.">Partial, but not complete, tumor-debulking surgery promotes protective antitumor memory when combined with chemotherapy and adjuvant immunotherapy.</a> Cancer Research. 65 (17), 7580-7584 (2005).</li><li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+positive-margin+resection+model+recreates+the+postsurgical+tumor+microenvironment+and+is+a+reliable+model+for+adjuvant+therapy+evaluation.">A positive-margin resection model recreates the postsurgical tumor microenvironment and is a reliable model for adjuvant therapy evaluation.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 13 (9), 745-755 (2012).</li><li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice.">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li><li>Overwijk, W. W., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B16+as+a+mouse+model+for+human+melanoma.">B16 as a mouse model for human melanoma.</a> Current Protocols in Immunology. , (2001).</li><li>Predina, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+local+tumor+microenvironment+in+recurrent+cancers+may+explain+the+failure+of+vaccines+after+surgery.">Changes in the local tumor microenvironment in recurrent cancers may explain the failure of vaccines after surgery.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (5), E415-E424 (2013).</li><li>Endo, M., Lin, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+margins+in+the+management+of+extremity+soft+tissue+sarcoma.">Surgical margins in the management of extremity soft tissue sarcoma.</a> Chinese Clinical Oncology. 7 (4), 37 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Efficacy+of+Neoadjuvant+Compared+to+Adjuvant+Immunotherapy+to+Eradicate+Metastatic+Disease.">Improved Efficacy of Neoadjuvant Compared to Adjuvant Immunotherapy to Eradicate Metastatic Disease.</a> Cancer Discovery. 6 (12), 1382-1399 (2016).</li><li>Park, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+release+of+perioperative+immunotherapy+prevents+tumor+recurrence+and+eliminates+metastases.">Extended release of perioperative immunotherapy prevents tumor recurrence and eliminates metastases.</a> Science Translational Medicine. 10 (433), (2018).</li><li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+tumor+model+of+surgical+stress+to+explore+the+mechanisms+of+postoperative+immunosuppression+and+evaluate+novel+perioperative+immunotherapies.">A mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (85), e51253 (2014).</li><li>Gast, C. E., Shaw, A. K., Wong, M. H., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+Procedures+and+Methodology+for+a+Preclinical+Murine+Model+of+De+Novo+Mammary+Cancer+Metastasis.">Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), (2017).</li><li>Qiu, W., Su, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+orthotopic+pancreatic+tumor+mouse+models.">Development of orthotopic pancreatic tumor mouse models.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 215-223 (2013).</li><li>Erstad, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+and+heterotopic+murine+models+of+pancreatic+cancer+and+their+different+responses+to+FOLFIRINOX+chemotherapy.">Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11 (7), (2018).</li></ol>

Vi gir en protokoll for en musemodell av ufullstendig kirurgisk reseksjon av bløtvevssarkom for å teste peri-operative terapier. Vi standardiserte også det kirurgiske snittet for å tillate vurdering av sårheling mellom mus etter behandling.
Tumorplassering er en viktig del av denne protokollen. Vi har valgt en subkutan tumormodell for å gi enkel kirurgisk tilgang til tumorstedet og administrasjon av lokale terapier med minimal byrde på musene. Det er også viktig å sikre at svulstene v...

Kirurgi er fortsatt det viktigste behandlingsalternativet for mange faste svulster1, inkludert bløtvev sarkom2,3. Til tross for forbedringer i kreft kirurgi teknikker, og kombinasjoner med (neo)adjuvant terapi, det er fortsatt en høy risiko for kreft tilbakefall og metastase etter primære tumor reseksjon4,5. I bløtvev sarkom forekommer tilbakefall spesielt locoregionalt, på operasjonsstedet, noe som resulterer i økt sykelighet og dødelighet. I den kliniske innstillingen kan det være vanskelig å oppnå brede nok marginer (f.eks. på grunn av anatomiske begrensninger), noe som resulterer i ufullstendig reseksjon og påfølgende tumorfall6. Kirurgisk stress og den påfølgende prosessen med sårheling er kjent for å skape en immunsuppressiv tumor mikromiljø gunstig for tumor tilbakefall7,8. Derfor bør oppdagelsen og utviklingen av nye behandlinger for bløtvevssarkom, spesielt immunterapier, ideelt sett ta hensyn til den kirurgiske sårhelingsresponsen.
De fleste prekliniske studier for adjuvant terapi utføres i utgangspunktet ved hjelp av subkutane syngeneic eller xenotransplante musmodeller, uten å innlemme kirurgisk stress og sårhelingsrespons9,10. Derfor utviklet vi en syngeneic subkutan mus bløtvev sarkom modell som omfatter ufullstendig kirurgisk reseksjon. WEHI 164 fibrosarcoma celler er inokulert subkutuell, og når svulster er etablert, fjerner vi 50-75% av tumor bulk (Figur 1A-E). Svulster konsekvent re-vokse fra den gjenværende svulsten. Denne modellen gjør det mulig å teste adjuvant terapi mens du vurderer effekten av kirurgisk stress og sårheling. Lignende kirurgiske modeller av ufullstendig reseksjon har blitt brukt i en rekke studier av flere grupper og funnet å være reproduserbare og effektive11,12,13. Her gir vi en detaljert beskrivelse av denne protokollen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>26 gauge 0.5 mL insulin syringe</td>
			<td>Becton Dickinson, Australia</td>
			<td>326769</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21985023</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaestetic gas machine</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 2848</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CTLA-4</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BE0164</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PD-1</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BP0273</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Hydrochloride Injection, 0.3mg/mL</td>
			<td>RB healthcare UK Limited, UK</td>
			<td>55175</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine Surgical Scrub 4%</td>
			<td>Perigo Australia, Australia</td>
			<td>CHL01449F(scrub</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine serum</td>
			<td>CellSera, Australia</td>
			<td>AU-FBS-PG</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 10.5 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74110</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 12 cm Serrated</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74212</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Halsted 14 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CD01114</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating chamber</td>
			<td>Datesand Ltd, UK</td>
			<td>Mini-Thermacage</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1M)</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15630080</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein Animal Health, Australia</td>
			<td>SKU: 29405</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricating Eye Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>n/a</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin 1000X</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15140122</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Solution 10x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>70013-032</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Clips</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59038</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Wound Clip Applicator</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59036</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex Wound Clip Remover</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59037</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Qube Anesthesia Breathing Circuit</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>#7885</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21870092</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 11 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>KF3211</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 9 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>JH4209</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Induction Chamber</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 9630</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE express 1x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>12604-021</td>
			<td>None</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies

Kirurgi er ofte den første behandlingen for mange solide svulster. Imidlertid oppstår lokale tilbakefall ofte etter primær tumorreseksjon, til tross for adjuvant eller neo-adjuvant terapi. Dette skjer når kirurgiske marginer er utilstrekkelig tumorfrie, noe som resulterer i gjenværende kreftceller. Fra et biologisk og immunologisk perspektiv er kirurgi ikke en nullhendelse; sårhelingsmiljøet er kjent for å indusere både pro- og anti-tumorigenic veier. Som en konsekvens bør prekliniske modeller for legemiddelutvikling som tar sikte på å forhindre lokal tilbakefall, innlemme kirurgisk reseksjon ved testing av nye (neo)adjuvant terapier, for å modellere de kliniske innstillingene hos pasienter behandlet med kirurgi.
Her beskriver vi en musemodell av ufullstendig kirurgisk reseksjon av WEHI 164 bløtvevssarkom som gjør det mulig å teste (neo)adjuvant terapi i innstillingen av en sårhelingsrespons. I denne modellen fjernes 50% eller 75% av svulsten, og etterlater seg litt kreftvev in situ for å modellere brutto gjenværende sykdom etter operasjonen i klinisk setting. Denne modellen tillater testing terapi i sammenheng med kirurgi samtidig vurderer sårheling respons, som kan påvirke effekten av (neo)adjuvant behandlinger. Den ufullstendige kirurgiske reseksjonen resulterer i reproduserbar gjenvekst av svulsten hos alle mus i fravær av adjuvant terapi. Adjuvant behandling med sjekkpunktblokade resulterer i redusert tumorgjenvekst. Denne modellen er dermed hensiktsmessig for testing terapi i sammenheng med debulking kirurgi og tilhørende sårheling respons og kan utvides til andre typer solid kreft.

Tumorvekst til en størrelse på 50 mm2 er en ideell størrelse for delvis debulk. Den ufullstendige kirurgiske reseksjonen av 50 mm2 svulster resulterer i 100% (n = 5) reproduserbar gjenvekst av svulstene i fravær av adjuvant immunterapi (figur 4A). Vi brukte deretter modellen til å teste adjuvant immunterapier ved hjelp av antistoffer mot sjekkpunktmolekyler Cytotoksisk T Lymfocytt assosiert protein 4 (CTLA-4) og pro...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies at JoVE.com

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies

I denne protokollen beskriver vi en musemodell av ufullstendig kirurgisk reseksjon av bløtvevssarkom for testing (neo)adjuvant terapi.

En musemodell av ufullstendig resected bløtvev sarkom for testing (Neo) adjuvant terapi

Surgery is often the first treatment for many solid tumors. However, local relapses frequently occur following primary tumor resection, despite adjuvant ...

Denne protokollen tar sikte på å etterligne den kliniske innstillingen av gjenværende sykdom etter tumor debulking kirurgi, og derfor tillater oss å teste nye kreftbehandlinger i sammenheng med postoperativ sårheling. Fordelen med denne teknikken er at den tillater standardisering av mengden sår påført og mengden svulst å forbli. Denne teknikken er spesielt viktig for prekliniske studier ved at identifisering av nye behandlinger for kreft, at den tilbakefall lokalt et eksempel som er bløtvevssarkom.Denne visuelle demonstrasjonen er avgjørende for å demonstrere inversjonsteknikken, noe som gjør at vi kan utsette svulsten festet til hudsiden. Begynn denne prosedyren med subkutan inokulasjon av forberedte kreftceller hos mus, som beskrevet i tekstprotokollen. På dag 12, post inokulasjon, når svulster har nådd en størrelse på ca 50 kvadratimentimemer, dose mus med 100 mikroliter buprenorfin subkutant i scruff i nakken, 30 minutter før operasjonen.Sett opp det kirurgiske området med varmeputen dekket med benkefrakk og sett opp en nesekjegle for anestesi. Ordne rent kirurgisk utstyr slik at de er innen rekkevidde, inkludert klorhexadin, vattpinne, gasbind, øyegel, to buede tang, saks, klipsapplikator, klipsfjerner og klipspåfyllinger. Varm varmekammeret til 37 grader Celsius og sett opp en annen varmepute for utvinning.Vær oppmerksom på at denne prosedyren krever to personer. En assistent må overvåke pusten av musen nøye under prosedyren. Etter å ha bedøvet musen som beskrevet i tekstprotokollen, utfør en klypetest og hornhinnereflekstest for å sikre at musen blir fullstendig bedøvet før du begynner operasjonen.Dekk musens øyne med en liten mengde oftalmisk gel for å unngå tørrhet i øynene. Begynn denne operasjonen ved å vattpinne operasjonsområdet med klorhexadin. Ved hjelp av tang og en saks gjør en centimeter rett snitt langs dorsalsiden, tre millimeter unna svulsten.Ikke kutt huden direkte dekker svulsten som det ikke vil helbrede godt. Unngå å bruke en skalpell til å kutte svulsten og bruke pinsett til å øse bitene. Bruk pinsett, trekk bort fascia og subkutant fettvev mellom svulsten og bukhinnen.Den subkutane svulsten er normalt festet til hudsiden. Åpne såret ved å forsiktig holde huden på tumorlagersiden ved hjelp av pinsett og invertere svulsten slik at den er synlig utenfor. Bruk en saks, kutt bort svulstkapselen fra halvparten for å fjerne, fra bunnen av svulsten nærmest åpningen.For 50% debulk kirurgi, kutt over midten av svulsten. Ved hjelp av buede tang scoop opp den delen av svulsten som skal fjernes. Øse opp eventuelle rester fra debulkområdet.For 75% debulk, start med å utføre en 50% tumor debulk deretter kuttet i halvparten av de resterende 50% av svulsten. Øse opp 25% av svulsten ved hjelp av buede tang. For å lukke operasjonsstedet, plasser den gjenværende svulsten tilbake under huden og bruk tang, trekk hudklaffene sammen og linje opp huden langs såret.Hold huden sammen fem millimeter fra kanten av såret og bruk kirurgiske klips for å lukke såret som starter på siden, nærmest tangen. Påfør så mange klipp som nødvendig for å sikre at ingen underliggende vev blir utsatt. Vanligvis brukes tre til fire klipp med to millimeter mellomrom mellom klippene.La musene komme seg ved å sette dem inn i det varme varmekammeret. Plasser musens bur på varmeputen. Overvåk musene i varmekammeret til de har kommet seg fra bedøvelsen.Deretter legger musene tilbake i buret, la buret stå på varmeputen i ytterligere 10 minutter til musene har blitt mer aktive. Gi musene våt og myk mat. Overvåk musene en time etter operasjonen for utvinning.Overvåk musene igjen på slutten av dagen og neste morgen og sørg for at klippene forblir på plass. Behandle mus perioperativt med advents- eller neoadjuvant terapi til enhver tid, avhengig av behandling av interesse. For eksempel, behandle mus med en dose på 100 mikrogram anti-CTLA-4 intraperitoneally på dag 15 etter inokulasjon.Alternativt kan du behandle musene med tre doser på 200 mikrogram anti-PD-1 intraperitonealt på dager, 15, 17 og 19 etter inokulasjon. Den ufullstendige kirurgiske reseksjonen av 50 kvadratimentimimsvulster, indikert her av den stiplede linjen, resulterer i 100% reproduserbar gjenvekst av svulstene i fravær av adjuvant immunterapi. Derfor er tumorvekst til en størrelse på 50 kvadratimen millimeter en ideell størrelse for delvis debulk.Modellen ble deretter brukt til å teste adjuvant immunterapier ved hjelp av antistoffer mot kontrollpunktmoduler, cytotoksisk T-lymfocytt assosiert protein fire og programmert dødreseptor en. Behandling av mus med anti-CTLA-4, resulterte i en kur rate på 80%Mens behandling av mus med anti-PD-1 resulterte i en kur rate på 25%Responsen med anti-PD-1 gir en mulighet til å teste det nye kombinasjoner, for å ytterligere forbedre responsraten. Det er viktig at den gjenværende svulsten forblir festet til huden, ellers vil blodtilførselen bli avskåret og svulsten vil bli nekrotisk.Etter denne prosedyren kan svulster analyseres ved en rekke metoder, for eksempel strømningscytometri for å vurdere hvordan kirurgi påvirker tumorinfiltrerende celler. Denne musemodellen har gjort det mulig for oss å utforske hvordan sårheling påvirker kreftimmunterapier.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing (Neo)adjuvant Therapies

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Bruk av Animal Model of Sepsis å evaluere Novel urteterapi

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis ALS

Klinisk testing og Spinal Cord fjerning i en mus modell for Amyotrofisk lateral sklerose (ALS)

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disorder resulting in progressive degeneration of motoneurons. Peak of onset is around 60 ...

Surgical Technique for Spinal Cord Delivery of Therapies: Demonstration of Procedure in Gottingen Minipigs

Kirurgisk teknikk for Spinal Cord Levering av Therapies: Demonstrasjon av prosedyre i Göttingen minigriser

This is a  compact visual description of a combination of surgical technique and device  for the  delivery of (gene and cell) therapies into the spinal ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

Den<em&gt; I ovo</em&gt; CAM-analysen som en Xenograftmodel for Sarkom

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

Subretinal transplantasjon av MACS Renset Fotoreseptor Forløper Celler i Voksen Mus Retina

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Implantasjon av vena cava inferior inter Graft i Mouse Model

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Transplantasjon av Pulmonary Valve Bruke en mus modell av Heterotop hjertetransplantasjon

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Vurdering av effektiviteten av<em&gt; H. pylori</em&gt; Protein HP-NAP som et terapeutisk verktøy for behandling av blærekreft i en ortotopiske Murine Model

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

En musemodell for Laser-indusert Koroidal neovascularization

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

A Mouse Model of Orthopedic Surgery to Study Postoperative Cognitive Dysfunction and Tissue Regeneration

En musemodell av Ortopedisk kirurgi postoperativ Cognitive Dysfunction og vev gjenfødelse

Surgery is commonly used to improve and maintain quality of life. Unfortunately, in vulnerable patients such as the elderly, complications may occur and ...