Name: a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies
Uploaded: 2020-07-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies at JoVE.com

¡Este trabajo está respaldado por subvenciones del Calcetín al Sarcoma! Fundación, la Asociación de Sarcoma de Australia y Nueva Zelanda, la Fundación para la Investigación de la Leucemia y el Cáncer Infantil y la Filantropía Perpetua. W.J.L cuenta con el apoyo de una beca Simon Lee y una beca de investigación del Consejo Nacional de Salud e Investigación Médica, y el Consejo del Cáncer WA.

Los animales utilizados en estos experimentos se obtuvieron del Centro de Recursos Animales (Perth, Australia Occidental). Los animales fueron mantenidos bajo condiciones estándar libres de patógenos en el Harry Perkins Institute of Medical Research Bioresources North Facility (Perth, Western Australia). Todos los experimentos se llevaron a cabo siguiendo el protocolo aprobado por el Comité de ética animal del Instituto Harry Perkins de Investigación Médica. En estos experimentos se utilizaron ratones BALB/c de 8-1...

<ol>
	<li>Orosco, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+Surgical+Margins+in+the+10+Most+Common+Solid+Cancers.">Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers.</a> Scientific Reports. 8 (1), 5686 (2018).</li><li>Haas, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+Management+of+Extremity+Soft+Tissue+Sarcomas.">Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (2), 118-124 (2018).</li><li>Brennan, M. F., Antonescu, C. R., Moraco, N., Singer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+learned+from+the+study+of+10,000+patients+with+soft+tissue+sarcoma.">Lessons learned from the study of 10,000 patients with soft tissue sarcoma.</a> Annals of Surgery. 260 (3), 416-421 (2014).</li><li>Smith, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+disease+relapse+in+primary+extremity+soft-tissue+sarcoma.">Patterns of disease relapse in primary extremity soft-tissue sarcoma.</a> British Journal of Surgery. 103 (11), 1487-1496 (2016).</li><li>Uramoto, H., Tanaka, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+after+surgery+in+patients+with+NSCLC.">Recurrence after surgery in patients with NSCLC.</a> Translational Lung Cancer Research. 3 (4), 242-249 (2014).</li><li>Stojadinovic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+prognostic+significance+of+microscopic+margins+in+2,084+localized+primary+adult+soft+tissue+sarcomas.">Analysis of the prognostic significance of microscopic margins in 2,084 localized primary adult soft tissue sarcomas.</a> Annals of Surgery. 235 (3), 424-434 (2002).</li><li>Krall, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+response+to+surgery+triggers+the+outgrowth+of+distant+immune-controlled+tumors+in+mouse+models+of+dormancy.">The systemic response to surgery triggers the outgrowth of distant immune-controlled tumors in mouse models of dormancy.</a> Science Translational Medicine. 10 (436), (2018).</li><li>Bakos, O., Lawson, C., Rouleau, S., Tai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+surgery+and+immunotherapy:+turning+an+immunosuppressive+effect+into+a+therapeutic+opportunity.">Combining surgery and immunotherapy: turning an immunosuppressive effect into a therapeutic opportunity.</a> Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 86 (2018).</li><li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+surgical+models+of+postoperative+tumor+recurrence+for+preclinical+adjuvant+therapy+assessment.">Characterization of surgical models of postoperative tumor recurrence for preclinical adjuvant therapy assessment.</a> American Journal of Translational Research. 4 (2), 206-218 (2012).</li><li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer.">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li><li>Khong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+tumor+debulking+surgery+is+improved+by+adjuvant+immunotherapy+using+imiquimod+and+anti-CD40.">The efficacy of tumor debulking surgery is improved by adjuvant immunotherapy using imiquimod and anti-CD40.</a> BMC Cancer. 14, 969 (2014).</li><li>Broomfield, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial,+but+not+complete,+tumor-debulking+surgery+promotes+protective+antitumor+memory+when+combined+with+chemotherapy+and+adjuvant+immunotherapy.">Partial, but not complete, tumor-debulking surgery promotes protective antitumor memory when combined with chemotherapy and adjuvant immunotherapy.</a> Cancer Research. 65 (17), 7580-7584 (2005).</li><li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+positive-margin+resection+model+recreates+the+postsurgical+tumor+microenvironment+and+is+a+reliable+model+for+adjuvant+therapy+evaluation.">A positive-margin resection model recreates the postsurgical tumor microenvironment and is a reliable model for adjuvant therapy evaluation.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 13 (9), 745-755 (2012).</li><li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice.">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li><li>Overwijk, W. W., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B16+as+a+mouse+model+for+human+melanoma.">B16 as a mouse model for human melanoma.</a> Current Protocols in Immunology. , (2001).</li><li>Predina, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+local+tumor+microenvironment+in+recurrent+cancers+may+explain+the+failure+of+vaccines+after+surgery.">Changes in the local tumor microenvironment in recurrent cancers may explain the failure of vaccines after surgery.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (5), E415-E424 (2013).</li><li>Endo, M., Lin, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+margins+in+the+management+of+extremity+soft+tissue+sarcoma.">Surgical margins in the management of extremity soft tissue sarcoma.</a> Chinese Clinical Oncology. 7 (4), 37 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Efficacy+of+Neoadjuvant+Compared+to+Adjuvant+Immunotherapy+to+Eradicate+Metastatic+Disease.">Improved Efficacy of Neoadjuvant Compared to Adjuvant Immunotherapy to Eradicate Metastatic Disease.</a> Cancer Discovery. 6 (12), 1382-1399 (2016).</li><li>Park, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+release+of+perioperative+immunotherapy+prevents+tumor+recurrence+and+eliminates+metastases.">Extended release of perioperative immunotherapy prevents tumor recurrence and eliminates metastases.</a> Science Translational Medicine. 10 (433), (2018).</li><li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+tumor+model+of+surgical+stress+to+explore+the+mechanisms+of+postoperative+immunosuppression+and+evaluate+novel+perioperative+immunotherapies.">A mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (85), e51253 (2014).</li><li>Gast, C. E., Shaw, A. K., Wong, M. H., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+Procedures+and+Methodology+for+a+Preclinical+Murine+Model+of+De+Novo+Mammary+Cancer+Metastasis.">Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), (2017).</li><li>Qiu, W., Su, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+orthotopic+pancreatic+tumor+mouse+models.">Development of orthotopic pancreatic tumor mouse models.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 215-223 (2013).</li><li>Erstad, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+and+heterotopic+murine+models+of+pancreatic+cancer+and+their+different+responses+to+FOLFIRINOX+chemotherapy.">Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11 (7), (2018).</li></ol>

Proporcionamos un protocolo para un modelo de ratón de resección quirúrgica incompleta de sarcoma de tejidos blandos para probar terapias perioperatorias. También estandarizamos la incisión quirúrgica para permitir la evaluación de la cicatrización de heridas entre ratones después del tratamiento.
La colocación de tumores es una parte importante de este protocolo. Hemos optado por un modelo tumoral subcutáneo para permitir un fácil acceso quirúrgico al sitio del tumor y la adminis...

La cirugía sigue siendo la principal opción de tratamiento para muchos tumores sólidos1,incluyendo el sarcoma de tejidos blandos2,3. A pesar de las mejoras en las técnicas de cirugía oncológica, y las combinaciones con (neo)terapias adyuvantes, todavía existe un alto riesgo de recaída del cáncer y metástasis después de la resección primaria del tumor4,,5. En el sarcoma de tejidos blandos, las recaídas ocurren particularmente locoregionalmente, en el lugar de la cirugía, lo que resulta en un aumento de la morbilidad y mortalidad. En el entorno clínico, puede ser difícil obtener márgenes lo suficientemente amplios (por ejemplo, debido a restricciones anatómicas), lo que resulta en una resección incompleta y una posterior recurrencia tumoral6. Se sabe que el estrés quirúrgico y el proceso posterior de cicatrización de heridas crean un microambiente tumoral inmunosupresor favorable para la recurrencia tumoral7,,8. Por lo tanto, el descubrimiento y desarrollo de nuevas terapias para el sarcoma de tejidos blandos, particularmente las inmunoterapias, deberían tener en cuenta idealmente la respuesta quirúrgica de cicatrización de heridas.
La mayoría de los estudios preclínicos para terapias adyuvantes se llevan a cabo inicialmente utilizando modelos de ratón singénero subcutáneo o xenotrasplante, sin incorporar el estrés quirúrgico y la respuesta de cicatrización de heridas9,,10. Por lo tanto, desarrollamos un modelo de sarcoma de tejido blando de ratón subcutáneo singéneo que incorpora una resección quirúrgica incompleta. WeHI 164 células de fibrosarcoma se inoculan por vía subcutánea, y una vez que se establecen los tumores, extirpamos 50-75% del volumen tumoral (Figura 1A-E). Los tumores rea cultivaron constantemente a partir del tumor restante. Este modelo permite probar terapias adyuvantes teniendo en cuenta el efecto del estrés quirúrgico y la cicatrización de heridas. Modelos quirúrgicos similares de resección incompleta se han utilizado en varios estudios por varios grupos y se ha encontrado que son reproducibles y eficaces11,12,13. Aquí, proporcionamos una descripción detallada de este protocolo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>26 gauge 0.5 mL insulin syringe</td>
			<td>Becton Dickinson, Australia</td>
			<td>326769</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21985023</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaestetic gas machine</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 2848</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CTLA-4</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BE0164</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PD-1</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BP0273</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Hydrochloride Injection, 0.3mg/mL</td>
			<td>RB healthcare UK Limited, UK</td>
			<td>55175</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine Surgical Scrub 4%</td>
			<td>Perigo Australia, Australia</td>
			<td>CHL01449F(scrub</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine serum</td>
			<td>CellSera, Australia</td>
			<td>AU-FBS-PG</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 10.5 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74110</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 12 cm Serrated</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74212</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Halsted 14 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CD01114</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating chamber</td>
			<td>Datesand Ltd, UK</td>
			<td>Mini-Thermacage</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1M)</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15630080</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein Animal Health, Australia</td>
			<td>SKU: 29405</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricating Eye Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>n/a</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin 1000X</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15140122</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Solution 10x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>70013-032</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Clips</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59038</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Wound Clip Applicator</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59036</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex Wound Clip Remover</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59037</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Qube Anesthesia Breathing Circuit</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>#7885</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21870092</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 11 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>KF3211</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 9 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>JH4209</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Induction Chamber</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 9630</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE express 1x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>12604-021</td>
			<td>None</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies

La cirugía es a menudo el primer tratamiento para muchos tumores sólidos. Sin embargo, las recaídas locales ocurren con frecuencia después de la resección primaria del tumor, a pesar de las terapias adyuvante o neoadyuvante. Esto ocurre cuando los márgenes quirúrgicos no son suficientemente libres de tumores, lo que resulta en células cancerosas residuales. Desde una perspectiva biológica e inmunológica, la cirugía no es un evento nulo; el ambiente de cicatrización de heridas es conocido por inducir vías pro y anti-tumorigénicas. Como consecuencia, los modelos preclínicos para el desarrollo de fármacos destinados a prevenir la resección local deben incorporar resección quirúrgica al probar nuevas terapias (neo)adyuvante, para modelar los entornos clínicos en pacientes tratados con cirugía.
Aquí, describimos un modelo de ratón de resección quirúrgica incompleta del sarcoma de tejido blando WEHI 164 que permite probar terapias (neo)adyuvante en el entorno de una respuesta de cicatrización de heridas. En este modelo, se extirpa el 50% o 75% del tumor, dejando atrás algunos tejidos cancerosos in situ para modelar la enfermedad residual bruta después de la cirugía en el entorno clínico. Este modelo permite probar terapias en el contexto de la cirugía mientras se considera la respuesta de cicatrización de heridas, que puede afectar la eficacia de (neo)tratamientos adyuvantes. La resección quirúrgica incompleta da como resultado un recrecimiento reproducible del tumor en todos los ratones en ausencia de terapia adyuvante. El tratamiento adyuvante con bloqueo del punto de control reduce el crecimiento del tumor. Por lo tanto, este modelo es adecuado para las terapias de prueba en el contexto de la cirugía de desbulado y su respuesta de cicatrización de heridas asociada y se puede extender a otros tipos de cáncer sólido.

El crecimiento del tumor a un tamaño de 50 mm2 es un tamaño ideal para el debulk parcial. La resección quirúrgica incompleta de 50 mm2 tumores da como resultado un recrecimiento reproducible del 100% (n-5) de los tumores en ausencia de inmunoterapia adyuvante (Figura 4A). A continuación utilizamos el modelo para probar inmunoterapias adyuvante utilizando anticuerpos contra moléculas de punto de control Citotóxico ...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies at JoVE.com

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies

En este protocolo, describimos un modelo de ratón de resección quirúrgica incompleta de sarcoma de tejido blando para la prueba (neo)terapias adyuvantees.

Un modelo de ratón de sarcoma de tejido blando insegurado incompletamente para terapias adyuvante de pruebas (Neo)

Surgery is often the first treatment for many solid tumors. However, local relapses frequently occur following primary tumor resection, despite adjuvant ...

Este protocolo tiene como objetivo imitar el entorno clínico de la enfermedad residual después de la cirugía de desbulado tumoral, y por lo tanto nos permite probar nuevas terapias oncológicas en el contexto de la cicatrización postoperatoria de heridas. La ventaja de esta técnica es que permite estandarizar la cantidad de herida infligida y la cantidad de tumor que queda. Esta técnica es particularmente importante para los estudios preclínicos en la identificación de nuevos tratamientos para el cáncer, que recidivte localmente un ejemplo de lo cual es el sarcoma de tejidos blandos.Esta demostración visual es fundamental para demostrar la técnica de inversión, que nos permite exponer el tumor unido al lado de la piel. Comience este procedimiento con la inoculación subcutánea de células cancerosas preparadas en ratones, como se describe en el protocolo de texto. En el día 12, después de la inoculación, cuando los tumores han alcanzado un tamaño de aproximadamente 50 milímetros cuadrados, ratones con 100 microlitros de buprenorfina por vía subcutánea en el escrúpulo del cuello, 30 minutos antes de la cirugía.Configure el área quirúrgica con la almohadilla de calor cubierta con una capa de banco y configure un cono nasal para la anestesia. Organice equipos quirúrgicos limpios para que estén al alcance de la mano, incluyendo clorhexadina, hisopo, gasa, gel para los ojos, dos fórceps curvos, tijeras, aplicador de clip, removedor de clip y recargas de clip. Caliente la cámara de calentamiento a 37 grados centígrados y configure otra almohadilla de calor para la recuperación.Tenga en cuenta que este procedimiento requiere dos personas. Un asistente debe vigilar de cerca la respiración del ratón durante el procedimiento. Después de anestesiar el ratón como se describe en el protocolo de texto, realice una prueba de pellizcar y una prueba de reflejo corneal para asegurarse de que el ratón está completamente anestesiado antes de comenzar la cirugía.Cubra los ojos del ratón con una pequeña cantidad de gel oftálmico para evitar la sequedad ocular. Comience esta cirugía frotando el área quirúrgica con clorhexadina. Usando fórceps y un par de tijeras hacen una incisión recta de un centímetro a lo largo del lado dorsal, a tres milímetros del tumor.No corte la piel que cubre directamente el tumor, ya que no sanará bien. Evite usar un bisturí para cortar el tumor y use pinzas para recoger las piezas. Con pinzas, retira la fascia y el tejido graso subcutáneo entre el tumor y el peritoneo.El tumor subcutáneo normalmente se une al lado de la piel. Abra la herida sosteniendo suavemente la piel en el lado del rodamiento del tumor usando pinzas e invierta el tumor para que sea visible en el exterior. Usando un par de tijeras, corta la cápsula tumoral de la mitad para extraerla, comenzando desde la base del tumor más cercana a la abertura.Para la cirugía del 50%debulk, corte a través de la mitad del tumor. El uso de fórceps curvos recoge la sección del tumor que se va a extirpar. Recoja los restos del área de debulk.Para el 75%debulk, comienza por realizar un 50% de debulk tumor y luego corta a la mitad el 50% restante del tumor. Recoge el 25% del tumor usando fórceps curvos. Para cerrar el sitio quirúrgico, coloque el tumor restante debajo de la piel y usando fórceps, tire de los colgajos de la piel y alinee la piel a lo largo de la herida.Sujete la piel a cinco milímetros del borde de la herida y utilice clips quirúrgicos para cerrar la herida comenzando en el lado, más cerca de los fórceps. Aplique tantos clips como sea necesario para asegurarse de que no se exponga ningún tejido subyacente. Generalmente, se aplican de tres a cuatro clips con espacios de dos milímetros entre clips.Permita que los ratones se recuperen poniéndolos en la cámara de calentamiento caliente. Coloque la jaula del ratón en la almohadilla de calor. Monitoree a los ratones en la cámara de calentamiento hasta que se hayan recuperado del anestésico.Luego, vuelva a colocar los ratones en la jaula, deje la jaula en la almohadilla de calor durante otros 10 minutos hasta que los ratones se hayan vuelto más activos. Dale a los ratones alimentos húmedos y suaves. Monitoree a los ratones una hora después de la cirugía para la recuperación.Supervise los ratones de nuevo al final del día y a la mañana siguiente y asegúrese de que los clips permanezcan en su lugar. Tratar los ratones perioperatorios con terapia de advenimiento o neoadyuvante en un momento dado, dependiendo del tratamiento de interés. Por ejemplo, tratar ratones con una dosis de 100 microgramos de anti-CTLA-4 intraperitonealmente el día 15 después de la inoculación.Alternativamente, tratar a los ratones con tres dosis de 200 microgramos de anti-PD-1 intraperitonealmente en días, 15, 17 y 19 después de la inoculación. La resección quirúrgica incompleta de 50 tumores de milímetros cuadrados, indicada aquí por la línea punteada da como resultado un recrecimiento 100% reproducible de los tumores en ausencia de inmunoterapia adyuvante. Por lo tanto, el crecimiento del tumor a un tamaño de 50 milímetros cuadrados es un tamaño ideal para el debulk parcial.El modelo se utilizó entonces para probar inmunoterapias adyuvante utilizando anticuerpos contra módulos de punto de control, proteína asociada al linfocitos T citotóxicos cuatro y receptor de muerte programado uno. El tratamiento de ratones con anti-CTLA-4, dio lugar a una tasa de curación del 80%Mientras que el tratamiento de ratones con anti-PD-1 dio lugar a una tasa de curación del 25%La respuesta con anti-PD-1 ofrece la oportunidad de probar nuevas combinaciones, para mejorar aún más la tasa de respuesta. Es importante que el tumor restante permanezca unido a la piel, de lo contrario se cortará el suministro de sangre y el tumor se convertirá en el necrótico.Después de este procedimiento, los tumores pueden ser analizados por una variedad de métodos, como la citometría de flujo con el fin de evaluar cómo la cirugía afecta a las células infiltrantes tumorales. Este modelo de ratón nos ha permitido explorar cómo la cicatrización de heridas afecta a las inmunoterapias contra el cáncer.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing (Neo)adjuvant Therapies

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

El uso de modelos animales de sepsis para evaluar nuevas terapias a base de plantas

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Investigación

Medicina

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis ALS

Los ensayos clínicos y de eliminación de la médula espinal en un modelo murino de esclerosis lateral amiotrófica (ELA)

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disorder resulting in progressive degeneration of motoneurons. Peak of onset is around 60 ...

Surgical Technique for Spinal Cord Delivery of Therapies: Demonstration of Procedure in Gottingen Minipigs

Técnica quirúrgica para la entrega de la Médula Espinal de Terapias: Demostración de Procedimiento en Göttingen minipigs

This is a  compact visual description of a combination of surgical technique and device  for the  delivery of (gene and cell) therapies into the spinal ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

La<em&gt; En ovo</em&gt; CAM-ensayo como un Xenograftmodel para el sarcoma

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

Trasplante Subretinal De Macs Purificado Fotorreceptores Precursores De Células En La Retina Del Ratón Adulto

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Implantación de la vena cava inferior interposición del injerto en modelo de ratón

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

El trasplante de la válvula pulmonar Utilizando un modelo de ratón de heterotópico trasplante cardiaco

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Evaluación de la eficacia de la<em&gt; H. pylori</em&gt; Proteína HP-PAN como herramienta terapéutica para el tratamiento de cáncer de vejiga en un modelo murino ortotópico

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

Un modelo de ratón para inducida por láser neovascularización coroidea

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

A Mouse Model of Orthopedic Surgery to Study Postoperative Cognitive Dysfunction and Tissue Regeneration

Un modelo de ratón de cirugía ortopédica para el estudio de la disfunción cognitiva postoperatoria y regeneración de los tejidos

Surgery is commonly used to improve and maintain quality of life. Unfortunately, in vulnerable patients such as the elderly, complications may occur and ...