Name: a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies
Uploaded: 2020-07-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies at JoVE.com

Detta arbete stöds av bidrag från Sock det till Sarkom! Foundation, Australian and New Zealand Sarcoma Association, Children's Leukemia & Cancer Research Foundation och Perpetual Philanthropy. W.J.L stöds av en Simon Lee Fellowship och en forskningsstipendium från National Health and Medical Research Council, och Cancer Council WA.

Djur som används i dessa experiment erhölls från Animal Resource Centre (Perth, Western Australia). Djur bibehölls under standard patogen-fria förhållanden vid Harry Perkins Institute of Medical Research Bioresources North Facility (Perth, Western Australia). Alla experiment utfördes efter protokollet som godkänts av Harry Perkins Institute of Medical Research Animal Ethics Committee. BALB/c möss på 8-12 veckor användes i dessa experiment. Den WEHI 164 fibrosarcoma cellinje erhölls från CellBank Australien (...

<ol>
	<li>Orosco, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Positive+Surgical+Margins+in+the+10+Most+Common+Solid+Cancers.">Positive Surgical Margins in the 10 Most Common Solid Cancers.</a> Scientific Reports. 8 (1), 5686 (2018).</li><li>Haas, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perioperative+Management+of+Extremity+Soft+Tissue+Sarcomas.">Perioperative Management of Extremity Soft Tissue Sarcomas.</a> Journal of Clinical Oncology. 36 (2), 118-124 (2018).</li><li>Brennan, M. F., Antonescu, C. R., Moraco, N., Singer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+learned+from+the+study+of+10,000+patients+with+soft+tissue+sarcoma.">Lessons learned from the study of 10,000 patients with soft tissue sarcoma.</a> Annals of Surgery. 260 (3), 416-421 (2014).</li><li>Smith, H. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+disease+relapse+in+primary+extremity+soft-tissue+sarcoma.">Patterns of disease relapse in primary extremity soft-tissue sarcoma.</a> British Journal of Surgery. 103 (11), 1487-1496 (2016).</li><li>Uramoto, H., Tanaka, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recurrence+after+surgery+in+patients+with+NSCLC.">Recurrence after surgery in patients with NSCLC.</a> Translational Lung Cancer Research. 3 (4), 242-249 (2014).</li><li>Stojadinovic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+prognostic+significance+of+microscopic+margins+in+2,084+localized+primary+adult+soft+tissue+sarcomas.">Analysis of the prognostic significance of microscopic margins in 2,084 localized primary adult soft tissue sarcomas.</a> Annals of Surgery. 235 (3), 424-434 (2002).</li><li>Krall, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+systemic+response+to+surgery+triggers+the+outgrowth+of+distant+immune-controlled+tumors+in+mouse+models+of+dormancy.">The systemic response to surgery triggers the outgrowth of distant immune-controlled tumors in mouse models of dormancy.</a> Science Translational Medicine. 10 (436), (2018).</li><li>Bakos, O., Lawson, C., Rouleau, S., Tai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+surgery+and+immunotherapy:+turning+an+immunosuppressive+effect+into+a+therapeutic+opportunity.">Combining surgery and immunotherapy: turning an immunosuppressive effect into a therapeutic opportunity.</a> Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 6 (1), 86 (2018).</li><li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+surgical+models+of+postoperative+tumor+recurrence+for+preclinical+adjuvant+therapy+assessment.">Characterization of surgical models of postoperative tumor recurrence for preclinical adjuvant therapy assessment.</a> American Journal of Translational Research. 4 (2), 206-218 (2012).</li><li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer.">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li><li>Khong, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+efficacy+of+tumor+debulking+surgery+is+improved+by+adjuvant+immunotherapy+using+imiquimod+and+anti-CD40.">The efficacy of tumor debulking surgery is improved by adjuvant immunotherapy using imiquimod and anti-CD40.</a> BMC Cancer. 14, 969 (2014).</li><li>Broomfield, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partial,+but+not+complete,+tumor-debulking+surgery+promotes+protective+antitumor+memory+when+combined+with+chemotherapy+and+adjuvant+immunotherapy.">Partial, but not complete, tumor-debulking surgery promotes protective antitumor memory when combined with chemotherapy and adjuvant immunotherapy.</a> Cancer Research. 65 (17), 7580-7584 (2005).</li><li>Predina, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+positive-margin+resection+model+recreates+the+postsurgical+tumor+microenvironment+and+is+a+reliable+model+for+adjuvant+therapy+evaluation.">A positive-margin resection model recreates the postsurgical tumor microenvironment and is a reliable model for adjuvant therapy evaluation.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 13 (9), 745-755 (2012).</li><li>Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vital+signs+monitoring+during+injectable+and+inhalant+anesthesia+in+mice.">Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice.</a> Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).</li><li>Overwijk, W. W., Restifo, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B16+as+a+mouse+model+for+human+melanoma.">B16 as a mouse model for human melanoma.</a> Current Protocols in Immunology. , (2001).</li><li>Predina, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+local+tumor+microenvironment+in+recurrent+cancers+may+explain+the+failure+of+vaccines+after+surgery.">Changes in the local tumor microenvironment in recurrent cancers may explain the failure of vaccines after surgery.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (5), E415-E424 (2013).</li><li>Endo, M., Lin, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+margins+in+the+management+of+extremity+soft+tissue+sarcoma.">Surgical margins in the management of extremity soft tissue sarcoma.</a> Chinese Clinical Oncology. 7 (4), 37 (2018).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Efficacy+of+Neoadjuvant+Compared+to+Adjuvant+Immunotherapy+to+Eradicate+Metastatic+Disease.">Improved Efficacy of Neoadjuvant Compared to Adjuvant Immunotherapy to Eradicate Metastatic Disease.</a> Cancer Discovery. 6 (12), 1382-1399 (2016).</li><li>Park, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+release+of+perioperative+immunotherapy+prevents+tumor+recurrence+and+eliminates+metastases.">Extended release of perioperative immunotherapy prevents tumor recurrence and eliminates metastases.</a> Science Translational Medicine. 10 (433), (2018).</li><li>Tai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+tumor+model+of+surgical+stress+to+explore+the+mechanisms+of+postoperative+immunosuppression+and+evaluate+novel+perioperative+immunotherapies.">A mouse tumor model of surgical stress to explore the mechanisms of postoperative immunosuppression and evaluate novel perioperative immunotherapies.</a> Journal of Visualized Experiments. (85), e51253 (2014).</li><li>Gast, C. E., Shaw, A. K., Wong, M. H., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+Procedures+and+Methodology+for+a+Preclinical+Murine+Model+of+De+Novo+Mammary+Cancer+Metastasis.">Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (125), (2017).</li><li>Qiu, W., Su, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+orthotopic+pancreatic+tumor+mouse+models.">Development of orthotopic pancreatic tumor mouse models.</a> Methods in Molecular Biology. 980, 215-223 (2013).</li><li>Erstad, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+and+heterotopic+murine+models+of+pancreatic+cancer+and+their+different+responses+to+FOLFIRINOX+chemotherapy.">Orthotopic and heterotopic murine models of pancreatic cancer and their different responses to FOLFIRINOX chemotherapy.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11 (7), (2018).</li></ol>

Vi tillhandahåller ett protokoll för en mus modell av ofullständiga kirurgiska samband av mjukvävnad sarkom att testa peri-operativa terapier. Vi standardiserade också det kirurgiska snittet för att möjliggöra bedömning av sårläkning mellan möss efter behandling.
Tumör placering är en viktig del av detta protokoll. Vi har valt en subkutan tumör modell för att möjliggöra enkel kirurgisk tillgång till tumör platsen och administrering av lokala terapier med minimal börda på ...

Kirurgi är fortfarande det viktigaste behandlingsalternativet för många solida tumörer1, inklusive mjukdelar sarkom2,3. Trots förbättringar i cancerkirurgi tekniker, och kombinationer med (neo)adjuvant terapier, det finns fortfarande en hög risk för cancer återfall och metastasering efter primära tumör samband4,5. I mjukdelar sarkom, återfall förekommer särskilt locoregionally, på platsen för kirurgi, vilket resulterar i ökad sjuklighet och dödlighet. I den kliniska inställningen kan det vara svårt att få tillräckligt stora marginaler (t.ex. på grund av anatomiska begränsningar), vilket resulterar i ofullständig samband och efterföljande tumör återkommer6. Kirurgisk stress och den efterföljande processen för sårläkning är kända för att skapa en immunsuppressiv tumör mikromiljö gynnsam för tumör återkommande7,8. Därför bör upptäckten och utvecklingen av nya terapier för mjukvävnad sarkom, särskilt immunterapier, helst ta hänsyn till kirurgiska sårläkning svar.
De flesta prekliniska studier för adjuvans terapier utförs ursprungligen med hjälp av subkutan syngeneic eller xenotransplant mus modeller, utan att införliva kirurgisk stress och sårläkning svar9,10. Därför utvecklade vi en syngeneic subkutan mus mjukvävnad sarkom modell som innehåller ofullständiga kirurgiska samband. WEHI 164 fibrosarkom celler är inokulerade subkutant, och när tumörer är etablerade, tar vi bort 50-75% av tumör bulk (Figur 1A-E). Tumörer ständigt åter växa från den återstående tumören. Denna modell möjliggör testning adjuvans terapier samtidigt som man överväger effekten av kirurgisk stress och sårläkning. Liknande kirurgiska modeller av ofullständig samband har använts i ett antal studier av flera grupper och befunnits vara reproducerbara och effektiva11,12,13. Här ger vi en detaljerad beskrivning av detta protokoll.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>26 gauge 0.5 mL insulin syringe</td>
			<td>Becton Dickinson, Australia</td>
			<td>326769</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Mercaptoethanol</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21985023</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anaestetic gas machine</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 2848</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CTLA-4</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BE0164</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PD-1</td>
			<td>BioXcell, USA</td>
			<td>BP0273</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Hydrochloride Injection, 0.3mg/mL</td>
			<td>RB healthcare UK Limited, UK</td>
			<td>55175</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chlorhexidine Surgical Scrub 4%</td>
			<td>Perigo Australia, Australia</td>
			<td>CHL01449F(scrub</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine serum</td>
			<td>CellSera, Australia</td>
			<td>AU-FBS-PG</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 10.5 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74110</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Fine 12 cm Serrated</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CC74212</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Halsted 14 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>CD01114</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating chamber</td>
			<td>Datesand Ltd, UK</td>
			<td>Mini-Thermacage</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1M)</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15630080</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein Animal Health, Australia</td>
			<td>SKU: 29405</td>
			<td>Prescription order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lubricating Eye Ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>n/a</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin 1000X</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>15140122</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Solution 10x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>70013-032</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Clips</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59038</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex 7mm Wound Clip Applicator</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59036</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reflex Wound Clip Remover</td>
			<td>Able scientific, Australia</td>
			<td>AS59037</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Qube Anesthesia Breathing Circuit</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>#7885</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium + L-glutamine</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>21870092</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 11 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>KF3211</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Iris STR 9 cm</td>
			<td>Surgical house, Western Australia</td>
			<td>JH4209</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Induction Chamber</td>
			<td>Darvall Vet, Australia</td>
			<td>SKU: 9630</td>
			<td>None</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE express 1x</td>
			<td>Life Technologies Australia Pty Ltd</td>
			<td>12604-021</td>
			<td>None</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of incompletely resected soft tissue sarcoma for testing (neo)adjuvant therapies

Kirurgi är ofta den första behandlingen för många fasta tumörer. Lokala återfall förekommer dock ofta efter primära tumör samband, trots adjuvant eller neo-adjuvant terapier. Detta inträffar när kirurgiska marginaler är otillräckligt tumörfria, vilket resulterar i kvarvarande cancerceller. Ur ett biologiskt och immunologiskt perspektiv är kirurgi inte en null-händelse; sårläkningsmiljön är känd för att inducera både pro- och anti-tumorigenic vägar. Som en följd av detta bör prekliniska modeller för läkemedelsutveckling som syftar till att förebygga lokala återfall innehålla kirurgiska samband vid testning av nya (neo)adjuvant terapier, att modellera de kliniska inställningarna hos patienter som behandlas med kirurgi.
Här beskriver vi en mus modell av ofullständiga kirurgiska samband av WEHI 164 mjukdelar sarkom som gör det möjligt att testa (neo) adjuvant terapier i inställningen av en sårläkning svar. I denna modell, 50% eller 75% av tumören avlägsnas, lämnar efter sig vissa cancervävnad in situ att modellera brutto kvarvarande sjukdom efter operation i den kliniska inställningen. Denna modell gör det möjligt att testa terapier i samband med kirurgi samtidigt som man överväger sårläkning svar, vilket kan påverka effekten av (neo) adjuvans behandlingar. Ofullständiga kirurgiska samband resulterar i reproducerbar återväxt av tumör i alla möss i avsaknad av adjuvant terapi. Adjuvant behandling med checkpoint blockad resulterar i minskad tumör återväxt. Denna modell är därför lämplig för att testa terapier i samband med debulking kirurgi och dess tillhörande sårläkning svar och kan utvidgas till andra typer av fast cancer.

Tumörtillväxt till en storlek på 50 mm2 är en idealisk storlek för partiell debulk. Ofullständiga kirurgiska samband av 50 mm2 tumörer resulterar i 100% (n = 5) reproducerbar återväxt av tumörer i avsaknad av adjuvant immunterapi (Figur 4A). Vi använde därefter modellen för att testa adjuvans immunterapier med antikroppar mot checkpoint molekyler Cytotoxiska T Lymphocyte Associated Protein 4 (CTLA-4) och Pro...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies at JoVE.com

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing Neoadjuvant Therapies

I detta protokoll beskriver vi en mus modell av ofullständiga kirurgiska samband av mjukdelar sarkom för testning (neo) adjuvant terapier.

En mus modell av ofullständigt resected mjukvävnad Sarkom för testning (Neo) adjuvant terapier

Surgery is often the first treatment for many solid tumors. However, local relapses frequently occur following primary tumor resection, despite adjuvant ...

Detta protokoll syftar till att efterlikna den kliniska inställningen av kvarvarande sjukdom efter tumör debulking kirurgi, och därför tillåter oss att testa nya cancerterapier i samband med postoperativa sårläkning. Fördelen med denna teknik är att det tillåter standardisering av mängden sår som tillfogats och mängden tumör att förbli. Denna teknik är särskilt viktig för prekliniska studier däri identifiera nya behandlingar för cancer, att det återfaller lokalt ett exempel på som är mjukvävnad sarkom.Denna visuella demonstration är avgörande för att visa inversion tekniken, som tillåter oss att exponera tumören fäst vid hudsidan. Påbörja denna procedur med subkutan inokulering av beredda cancerceller hos möss, som beskrivs i textprotokollet. Dag 12, post inokulering, när tumörer har nått en storlek på cirka 50 kvadratmillimeter, dos möss med 100 microliters av buprenorfin subkutant i scruff i halsen, 30 minuter före operationen.Ställ in operationsområdet med värmedynan täckt med bänklack och sätt upp en näskon för anestesi. Ordna ren kirurgisk utrustning så att de är inom räckhåll, inklusive klorhexadin, svabb, gasväv, ögongel, två böjda tlyktor, sax, klipp applikator, clip remover, och klipp påfyllning. Värm uppvärmningskammaren till 37 grader Celsius och sätt upp en annan värmedyna för återhämtning.Observera att denna procedur kräver två personer. En assistent måste övervaka musens andning noga under proceduren. Efter att ha sövt musen enligt beskrivningen i textprotokollet, utför ett nyptest och rekonflextest för att säkerställa att musen är helt sövd innan operationen påbörjas.Täck musens ögon med en liten mängd oftalmisk gel för att undvika ögontorrhet. Påbörja denna operation genom att svabba det kirurgiska området med klorhexadin. Använda tång och en sax gör en en centimeter rakt snitt längs dorsala sidan, tre millimeter bort från tumören.Skär inte huden direkt täcker tumören eftersom det inte kommer att läka bra. Undvik att använda en skalpell för att skära tumören och använda pincett för att ösa bitarna. Använda pincett, dra bort fascia och subkutan fettvävnad mellan tumör och peritoneum.Den subkutana tumören är normalt fäst vid hudsidan. Öppna såret genom att försiktigt hålla huden på tumörlagersidan med hjälp av pincett och invertera tumören så att den syns utanför. Med hjälp av en sax, skär bort tumörkapseln från hälften för att ta bort, med början från basen av tumören närmast öppningen.För 50%debulk kirurgi, skär över mitten av tumören. Använda böjda tuppar skopa upp den del av tumören som ska tas bort. Skopa upp eventuella rester från debulkområdet.För 75%debulk, börja med att utföra en 50%tumör debulk sedan skära i hälften av de återstående 50%av tumör. Skopa upp 25%av tumören med hjälp av böjda tuppar. För att stänga operationsområdet, placera den återstående tumören tillbaka under huden och med hjälp av tång, dra huden flikar tillsammans och rada upp huden längs såret.Håll ihop huden fem millimeter från kanten av såret och använd kirurgiska clips för att stänga såret med början på sidan, närmast tämparna. Applicera så många klipp som behövs för att säkerställa att ingen underliggande vävnad exponeras. Generellt är tre till fyra klipp tillämpas med två millimeter mellanrum mellan klipp.Låt mössen återhämta sig genom att sätta dem i den varma värmekammaren. Placera musens bur på värmedynan. Övervaka mössen i värmekammaren tills de har återhämtat sig från bedövningsmedlet.Sätt sedan tillbaka mössen i buren, lämna buren på värmedynan i ytterligare 10 minuter tills mössen har blivit mer aktiva. Ge mössen våt och mjuk mat. Övervaka mössen en timme efter operationen för återhämtning.Övervaka mössen igen i slutet av dagen och följande morgon och se till att clips finns kvar. Behandla möss perioperativt med advent eller neoadjuvant terapi vid en given tidpunkt, beroende på behandling av intresse. Till exempel, behandla möss med en dos av 100 mikrogram anti-CTLA-4 intraperitoneally på dag 15 efter inokulering.Alternativt, behandla möss med tre doser av 200 mikrogram anti-PD-1 intraperitoneally på dagar, 15, 17 och 19 efter inokulering. Den ofullständiga kirurgiska samband av 50 kvadrat millimeter tumörer, anges här av den streckade linjen resulterar i 100%reproducerbara återväxt av tumörer i avsaknad av adjuvant immunterapi. Därför är tumörtillväxt till en storlek på 50 kvadratmillimeter en idealisk storlek för partiell debulk.Modellen användes sedan för att testa adjuvant immunterapier med hjälp av antikroppar mot checkpoint moduler, cytotoxiska T lymfocyter associerade protein fyra och programmerad död receptor en. Behandling av möss med anti-CTLA-4, resulterade i en bota hastighet av 80%Medan behandling av möss med anti-PD-1 resulterade i en bota hastighet på 25%Svaret med anti-PD-1 ger en möjlighet att testa det nya kombinationer, att ytterligare förbättra svarsfrekvensen. Det är viktigt att den återstående tumören stannar fäst vid huden, annars blodtillförseln kommer att skäras av och tumören kommer att bli den nekrotiska.Efter detta förfarande kan tumörer analyseras med en mängd olika metoder, såsom flödescytometri i syfte att bedöma hur kirurgi påverkar tumör infiltrera celler. Denna mus modell har gjort det möjligt för oss att undersöka hur sårläkning påverkar cancer immunterapier.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of Incompletely Resected Soft Tissue Sarcoma for Testing (Neo)adjuvant Therapies

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Användning av djurmodell för sepsis till utvärdera nya växtbaserade behandlingar

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis ALS

Klinisk testning och ryggmärg Avlägsnande av en musmodell för amyotrofisk lateralskleros (ALS)

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disorder resulting in progressive degeneration of motoneurons. Peak of onset is around 60 ...

Surgical Technique for Spinal Cord Delivery of Therapies: Demonstration of Procedure in Gottingen Minipigs

Kirurgisk teknik för ryggmärg Leverans av terapier: Demonstration av förfarande i Göttingen minigris

This is a  compact visual description of a combination of surgical technique and device  for the  delivery of (gene and cell) therapies into the spinal ...

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

The In ovo CAM-assay as a Xenograft Model for Sarcoma

Den<em&gt; I ovo</em&gt; CAM-analys såsom en Xenograftmodel för Sarcoma

Sarcoma is a very rare disease that is heterogeneous in nature, all hampering the development of new therapies. Sarcoma patients are ideal candidates for ...

Subretinal Transplantation of MACS Purified Photoreceptor Precursor Cells into the Adult Mouse Retina

Subretinal transplantation av MACS renad fotoreceptor prekursor celler i den vuxna mus näthinnan

Vision impairment and blindness due to the loss of the light-sensing cells of the retina, i.e. photoreceptors, represents the main reason for disability ...

Implantation of Inferior Vena Cava Interposition Graft in Mouse Model

Implantation av nedre hålvenen inter Graft i musmodell

Biodegradable scaffolds seeded with bone marrow mononuclear cells (BMCs) are often used for reconstructive surgery to treat congenital cardiac anomalies. ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Transplantation av pulmonell ventil med hjälp av en musmodell av Heterotopisk hjärttransplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Utvärdering av effektiviteten hos de<em&gt; H. pylori</em&gt; Protein HP-NAP som ett terapeutiskt verktyg för behandling av cancer i urinblåsan i en Orthotopic musmodell

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

A Mouse Model for Laser-induced Choroidal Neovascularization

En musmodell för Laser-inducerad chorioidal kärlnybildning

The mouse laser-induced choroidal neovascularization (CNV) model has been a crucial mainstay model for neovascular age-related macular degeneration (AMD) ...

A Mouse Model of Orthopedic Surgery to Study Postoperative Cognitive Dysfunction and Tissue Regeneration

En musmodell av ortopedisk kirurgi att studera postoperativ kognitiv dysfunktion och vävnadsregeneration

Surgery is commonly used to improve and maintain quality of life. Unfortunately, in vulnerable patients such as the elderly, complications may occur and ...