Name: analysis of congenital heart defects in mouse embryos using qualitative and quantitative histological methods
Uploaded: 2020-03-10T15:00:00
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アギーレ研究所は、国立衛生研究所の国立心臓、肺、血液研究所の賞番号K01HL135464の下で、賞番号19IPLOI34660342の下で米国心臓協会によってサポートされています。

本論文で参照されている実験で使用されたすべての動物は、ミシガン州立大学の施設動物ケア・使用委員会(IACUC)の動物ケアガイドラインを使用して治療した。
1. 胚生成のためのC57BL6/Jマウスのタイミング交配
<ol><li>マウスが繁殖年齢(6-8週間)に達したら、ハーレム繁殖形式(すなわち、1匹の雄1匹につき2匹の雌)にまとめる。午後または夕方に繁殖のためにそれらを設定?...

<ol>
	<li>Kathiresan, S., Srivastava, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+human+cardiovascular+disease.">Genetics of human cardiovascular disease.</a> Cell. 148 (6), 1242-1257 (2012).</li><li>Sun, R., Liu, M., Lu, L., Zheng, Y., Zhang, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Congenital+Heart+Disease:+Causes,+Diagnosis,+Symptoms,+and+Treatments.">Congenital Heart Disease: Causes, Diagnosis, Symptoms, and Treatments.</a> Cell Biochemistry and Biophysics. 72 (3), 857-860 (2015).</li><li>Hoffman, J. I. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninherited+risk+factors+and+congenital+cardiovascular+defects:+Current+knowledge+-+A+scientific+statement+from+the+American+Heart+Association+Council+on+Cardiovascular+Disease+in+the+Young.">Noninherited risk factors and congenital cardiovascular defects: Current knowledge - A scientific statement from the American Heart Association Council on Cardiovascular Disease in the Young.</a> Circulation. 115 (23), 2995-3014 (2007).</li><li>Botto, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lower+rate+of+selected+congenital+heart+defects+with+better+maternal+diet+quality+:+a+population-based+study.">Lower rate of selected congenital heart defects with better maternal diet quality : a population-based study.</a> Archives of Disease in Childhood - Fetal and Neonatal Edition. 101 (1), F43-F49 (2016).</li><li>Knowles, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethnic+and+socioeconomic+variation+in+incidence+of+congenital+heart+defects.">Ethnic and socioeconomic variation in incidence of congenital heart defects.</a> Archives of Disease in Childhood. 102 (6), 496-502 (2017).</li><li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+Folic+Acid+Supplementation+and+the+Risk+of+Congenital+Heart+Defects+in+Offspring+:+A+Meta-Analysis+of+Epidemiological+Observational+Studies.">Maternal Folic Acid Supplementation and the Risk of Congenital Heart Defects in Offspring : A Meta-Analysis of Epidemiological Observational Studies.</a> Scientific Reports. 17 (5), 8506 (2015).</li><li>Rhinn, M., Dolle, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinoic+acid+signalling+during+development.">Retinoic acid signalling during development.</a> Development. 139 (5), 843-858 (2012).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+retinoic+acid+levels+and+the+development+of+metabolic+syndrome.">Circulating retinoic acid levels and the development of metabolic syndrome.</a> The Journal of Clinical Endocrinology &amp; Metabolism. 101 (February), 2015 (2016).</li><li>Kurian, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+novel+long+noncoding+RNAs+underlying+vertebrate+cardiovascular+development.">Identification of novel long noncoding RNAs underlying vertebrate cardiovascular development.</a> Circulation. 131 (14), 1278-1290 (2015).</li><li>Aguirre, A., Sancho-Martinez, I., Izpisua Belmonte, J. 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Examples of Image Analysis Using ImageJ Available from: <a target="_blank" href="https://imagej.nih.gov/ij/docs/pdfs/examples.pdf">https://imagej.nih.gov/ij/docs/pdfs/examples.pdf</a> (2007)</li><li>MacIver, D. H., Adeniran, I., Zhang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Left+ventricular+ejection+fraction+is+determined+by+both+global+myocardial+strain+and+wall+thickness.">Left ventricular ejection fraction is determined by both global myocardial strain and wall thickness.</a> IJC Heart and Vasculature. 1 (7), 113-118 (2015).</li><li>Towbin, J. 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H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+left+ventricular+trabeculae+using+cardiovascular+magnetic+resonance+for+the+diagnosis+of+left+ventricular+non-compaction:+evaluation+of+trabecular+volume+and+refined+semi-quantitative+criteria.">Quantification of left ventricular trabeculae using cardiovascular magnetic resonance for the diagnosis of left ventricular non-compaction: evaluation of trabecular volume and refined semi-quantitative criteria.</a> Journal of Cardiovascular Magnetic Resonance. 18 (1), 24 (2016).</li></ol>

このプロトコルは、胚性心臓における心臓発達の分析に関与する技術を探る。この方法のいくつかの制限は、準備技術に必要な物理的な器用さであり、練習を必要とし、顕微鏡イメージングを伴うスキルを有する。クライオスタットで得られたスライスが乱雑な場合、ヘマトキシリンとエオシン染色が明確でない場合、または顕微鏡で撮影した画像の照明が悪い場合、ImageJで使用される方法?...

CHDは、ヒトにおける出生時欠損の最も一般的なタイプであり、出生時欠損関連死の主な原因である1、2、3、4、5、6。新生児の約90%がCHDを生き残っているが、それはしばしば、患者の生活と医療システム7、8、9、10に大きな負担を課す、長年にわたって重大な罹患率および医学的介入に関連している。純粋に遺伝的要因の外では、CHDの原因は十分に理解されていません4.未確認の原因は、米国心臓協会およびその他の情報源2、3、4、11によると、すべてのCHD症例の約56-66%を占める。既知の因子には、遺伝子変異、CTV、デノボ単一ヌクレオチド変異、および異数体が含まれる。母体の生活様式2、12、経済的剥奪、および人種13を結ぶ疫学的研究によって示唆されるように、環境および食事因子もCHDに寄与する重要な供給源であると疑われる。CHDおよび他の心血管欠損のメカニズムと原因を調査することは、予防戦略および新しい治療オプション1、4、17、18、19を開発するために重要である。
開発中のマウスは、哺乳類のCHDを研究するための基礎モデルです。しかし、心臓形態を保存する分節、発達段階の分析、CHD関連欠陥の同定など、採用された方法や分析の中には、マウスの心臓の分析に新しい科学者にとっては困難な場合があります。このプロトコルで説明されている方法の目的は、これらのプロセスに対して定性的かつ定量的なガイドラインを提供することです。したがって、このプロトコルでは、所望の妊娠期の胚を産生するために時間交配を行い、無傷の心臓回復(流出路などの関連組織を含む)、心臓固定および準備のために妊婦を解剖する方法を説明するクライオスタット断面化、基本的な構造学的方法、一般的な心臓欠損の定量的分析、および心筋圧密の定性的分析は、いくつかのタイプのCHDに対する一般的な前駆体表現型である。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conical Tube(s)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td># 1495970C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J Mice</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>C57BL/6J - stock 000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin Staining Jars (x6)</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td># 25457-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips 24X50MM #1.5</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td># 48393-241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat - Leica CM3050S</td>
			<td>Leica</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting Dish(s)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td># 50930381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 - Fine Forceps (x2)</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td># 11254-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y Solution</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td># HT110116-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl Alcohol (Pure, 200 proof)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td># BP2818-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td># E9884-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eukitt</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td># 03989-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td># 14060-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Stereo Microscope Leica M165 FC</td>
			<td>Leica</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td># 410225-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td># 11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism 8 Software</td>
			<td>Graphpad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageJ Software</td>
			<td>ImageJ</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td># 06666A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s hematoxylin solution</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td># MHS16-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette tip(s) - p200</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td># 02707448</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel Software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OCT Compound</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td># 102094-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus CkX53 Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paint Brushes (at least 2)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td># 0215014601</td>
			<td>Make into 4% solution (dissolved in PBS)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipette(s)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td># 13-711-7M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td># 15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td># 70011044</td>
			<td>Dilute from 10x to 1x before using</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td># MS1602TS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scale</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td># MS105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Handle #3</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td># 10161-918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Blades</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td># 21909-612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Square Mold</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td># 100500-224</td>
			<td>For OCT molds</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td># S9378-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td># 1255015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td># 14002-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Accu-Edge Disposable Microtome Blades</td>
			<td>VWR Scientific</td>
			<td># 25608-964</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Travel Scale</td>
			<td>Acculab</td>
			<td>VIC 5101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>214736-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of congenital heart defects in mouse embryos using qualitative and quantitative histological methods

先天性心不全(CHD)は、ヒトの出生時欠損の最も一般的なタイプであり、すべての出生の最大1%に影響を及ぼす。しかし、CHDの根本的な原因はまだ十分に理解されていません。開発中のマウスは、マウスとヒトの間の心臓発達プログラムが非常に保存されているため、CHDの研究にとって貴重なモデルです。プロトコルは、所望の妊娠段階のマウス胚を生成する方法、下流処理のために心臓を分離して保存する方法、構造学によってCHDの一般的なタイプを識別する定量的方法(例えば、心室中隔)を詳細に記述する欠陥、心房中隔欠損、特許性管管動脈管)、および定量的な構造学法は、一般的な筋圧膜型を測定する。これらの方法は、サンプルの調製、収集、および分析に関与するすべてのステップを明確にし、科学者がCHDを正しく、再現的に測定することを可能にします。

筋肉圧指数は、コントロールと実験群の2つの異なる環境下で発達する心臓の間で比較された。これらのプロトコルは、筋肉組織の圧縮を定量的に分析するために使用され、統計的分析が可能であった。筋肉圧圧は、非実験的条件で発症した胚に対して実験心臓において有意に減少することが示された。
観察のタイミング?...

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Analysis of Congenital Heart Defects in Mouse Embryos Using Qualitative and Quantitative Histological Methods

本議定書では、先天性心不全に関連するマウスの発達表現型を定性的かつ定量的に分析する手順を説明する。

定性・定量的組織学的手法を用いたマウス胚における先天性心不全の解析

Congenital heart defects (CHD) are the most common type of birth defect in humans, affecting up to 1% of all live births. However, the underlying causes ...

このプロトコルは、先天性心不全を研究する他のグループによってより広く使用できるように、新しい組織分析技術を標準化する。定性的分析と定量分析手法の両方に長所と短所があるので、この方法論は両方を使用して、最も幅広い実験問題に対処します。これらの技術は、心臓病の診断方法にプラスの影響を与えることができます。例えば、病理学者は、生検サンプルからヒト心臓病を診断するために、私たちの顕微鏡心臓組織分析技術を適用することができます。このプロトコルは、発達性心学または一般的な心臓病研究に使用することができます。しかし、これらの方法は、あらゆる組織分析に適用できる様々な有用な技術も提供する。胚性15日目から15.5日目の心臓を収集するには、妊娠中のダムの手足を固定し、胸骨まで尿道の周りを開始し、胴体に沿ってI字型の切開を慎重に行います。スクープ運動で鉗子を使用して、抽出を助けるために細かい鉗子で必要に応じて子宮の表面組織をつかむ腹腔から子宮を静かに持ち上げる。はさみを使って腹部から子宮を解放します。氷冷PBSに子宮を浸した後、臓器を解剖皿に固定します。はさみを使用して、子宮をそれぞれ別々の胚を含む個々の切片に切断する。2組の細かい鉗子を使用して、子宮組織から胚をそっと剥がし、4°CのPBS-EDTAを含む新しいペトリ皿に入れます。心臓を収集するには、皿を解剖顕微鏡の下に置き、2組の細かい鉗子を使用して胚をサピネの位置に配置します。胸部へのアクセスを安定させた後、2番目の細い鉗子の鋭い点を使用して、鎖骨からへそまで伸びる胚の胸骨に沿って切開を行う。胸腔の内側に向かって徐々に働きながら、非常に細かく表面的な切開を行い、胚の腹部を開く。心臓がちょうど見えるようになるとき、鉗子のペアを使用して、肋骨ケージにわずかにコッドした胴体を絞り、肋骨を開けて剥がします。鉗子の1組の側面を使用して、組織を分離することなく肺血管をそっとつかみ、心臓を空洞から引き出す。4%パラホルムアルデヒドで45〜60分間組織を固定する前に、新鮮なPBS-EDTAで心臓を1〜2分間洗浄します。次いで、グリシンを補充したPBSで、1回に5~10分間心臓を3回洗浄する。摂氏4度でPBSに心臓を保存する前に。凍結切除のための心臓を準備するには、サンプルを30%スクロースのチューブに入れ、PBSを摂氏4度で24〜40時間置きます。心臓がチューブの底に沈んだら、修正された先端を持つパスツールピペットを使用して、各心臓を糸くず無料のワイプに慎重に移します。短い空気乾燥の後、各サンプルを断面化のために所望の向きで個々の最適な切断温度の型に置きます。泡のない最適な切断温度媒体に組織を水没させる。その後、開氷前に少なくとも24時間、80°Cで組織を凍結する前に、最大20°Cで20°Cで保存します。サンプルのクライオスタットセクションを得るために、新しい最適な温度切断媒体を使用して、対象の組織ブロックをクライオスタットのチャックに取り付け、透明になるまで凍結させます。新しいブレードを挿入し、組織ブロックとブレードの間の距離を調整して、切片を取得できるようにします。目的のポイントに達するまで、10マイクロメートルのスライスでブロックをトリミングします。組織が観察できるときは、小さな平らな絵筆を使って、連続的な切断動作でスタンドに対してスライスを優しく引っ張ります。組織が完全に切断されたら、詳細ブラシを使用してスライスをステージに対して平らになでます。詳細なブラシを取り外してスライスを仕上げる前に、セクションを約20〜30秒間保持します。両方のペイントブラシを使用して、ステージに対してスライスを静かに平らにし、ステージに対して組織セクションを保持します。20~30秒後、セクションを反転させてステージに対して再び平らにしてから、静電に帯電したスライドをスライドに引き付けてスライドに触れることなくスライドに付着させるのに十分近づけます。一般的な心臓欠損の存在について心臓組織切片を評価するために、カメラを搭載した顕微鏡を用いて、5〜10倍および40倍の倍率で画像を得る。心筋圧密解析の場合は、適切な画像解析ソフトウェアプログラムで目的の組織を開き、画像を8ビットに設定します。画像のしきい値を設定するには、[イメージ]、[調整]、[しきい値] をクリックし、上部のバーを移動して、背景のピクセルだけが選択されるまでしきい値を調整します。次に、ポリゴン選択ツールを使用して、組織の周囲に関心のある領域を描画し、[解析]、[測定を設定]、[面積]、および [しきい値に制限] をクリックします。[解析と計測]をクリックして、ハイライトされたピクセルの領域を測定して、負のスペースの面積の値を取得します。対象領域全体の領域を測定するには、[分析]、[測定の設定]、および [しきい値に制限] の選択を解除します。次に、[分析と測定] を選択して、選択した対象領域の領域全体を測定します。筋肉組織の面積を計算するには、対象領域の領域から負の領域を差し引きます。次に、筋肉組織の領域を対象領域で分割して筋肉圧とX.採取した胚性心臓からの組織スライスの染色を計算し、組織の端を作るのに十分なコントラストを提供しますが、細胞の特徴を区別できないようにするにはそれほど暗くはありません。この代表的な分析では、非実験的条件下で発達した胚に対して、実験心臓において筋肉圧密が有意に減少することが観察された。これらのサンプルは貴重であり、作成に長い時間を要します。特に壊死やクライオスタットの切り分けの際には、実行するすべてのアクションについて意図的に行ってください。パラホルムアルデヒドの組織を保存すると、形態評価中に見つかった病理学的原因を特定するのに役立つアミノフルオレセイン染色のようなテストにサンプルを使用することを可能にする抗原活性を維持します。研究室では、さまざまな治療法がサンプルにどの程度影響を与えるかを特定するのに役立つ実験的治療法の定量表現を得ました。パラホルムアルデヒドは、それが触れる任意の組織を固定することができます。この化学物質を使用する場合は常に露出した皮膚を最小限に抑え、フィルムフードで作業するように手袋を着用するように注意してください。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Dual Labeling of Neural Crest Cells and Blood Vessels Within Chicken Embryos Using ChickGFP Neural Tube Grafting and Carbocyanine Dye DiI Injection

Dual Labeling of Neural Crest Cells and Blood Vessels Within Chicken Embryos Using ChickGFP Neural Tube Grafting and Carbocyanine Dye DiI Injection

鶏の胚内の神経堤細胞と血管の二重標識は、ひよこGFP 神経管移植とカルボシアニンDyI注射を用いた

All developing organs need to be connected to both the nervous system (for sensory and motor control) as well as the vascular system (for gas exchange, ...

Contrast Imaging in Mouse Embryos Using High-frequency Ultrasound

高周波超音波を用いて、マウス胚におけるコントラストイメージング

Ultrasound contrast-enhanced imaging can convey essential quantitative information regarding tissue vascularity and perfusion and, in targeted ...

Analysis of Cardiomyocyte Development using Immunofluorescence in Embryonic Mouse Heart

胚性マウスの心臓に免疫蛍光を用いて、心筋細胞の開発の分析

During heart development, the generation of myocardial-specific structural and functional units including sarcomeres, contractile myofibrils, intercalated ...

Methods for Precisely Localized Transfer of Cells or DNA into Early Postimplantation Mouse Embryos

早期着床後のマウス胚への細胞やDNAの正確​​ローカライズ転送する方法

Manipulation and culture of early mouse embryos is a powerful yet largely under-utilized technology enhancing the value of this model system. Conversely, ...

Quantitative Analysis of Protein Expression to Study Lineage Specification in Mouse Preimplantation Embryos

マウス着床前胚でリネージュの仕様を研究するためのタンパク質発現の定量分析

This protocol presents a method to perform quantitative, single-cell in situ analyses of protein expression to study lineage specification in mouse ...

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

ゼブラフィッシュ胚からの単一細胞の単離とキャラクタリゼーション

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Analysis of Coronary Vessels in Cleared Embryonic Hearts

クリア胚ハーツにおける冠状血管の分析

Whole mount visualization of the embryonic coronary plexus from which the capillary and arterial networks will form is rendered problematic using standard ...

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

Visualization and Quantitative Analysis of Embryonic Angiogenesis in Xenopus tropicalis

の胚性血管新生の可視化と定量分析<em&gt;ツメガエル</em

Blood vessels supply oxygen and nutrients throughout the body, and the formation of the vascular network is under tight developmental control. The ...

Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos

マウス胚における心臓前駆細胞集団の定量的ホール マウント免疫染色解析

The use of ever-advancing imaging techniques has contributed broadly to our increased understanding of embryonic development. Pre-implantation development ...

Fetal Mouse Cardiovascular Imaging Using a High-frequency Ultrasound (30/45MHZ) System

Fetal Mouse Cardiovascular Imaging Using a High-frequency Ultrasound 30/45MHZ System

心血管イメージング (30/45 MHZ) の高周波超音波を用いた胎児マウス

Congenital heart defects (CHDs) are the most common cause of childhood morbidity and early mortality. Prenatal detection&#160;of the underlying molecular ...