Name: laser-induced brain injury in the motor cortex of rats
Uploaded: 2020-09-26T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats at JoVE.com

Vi vil gerne takke Institut for Anæstesiologi af Soroka University Medical Center og laboratoriet personale Ben-Gurion University of the Negev for deres hjælp i udførelsen af dette eksperiment.

Følgende procedure blev gennemført i overensstemmelse med retningslinjerne for anvendelse af forsøgsdyr i Det Europæiske Fællesskab. Forsøgene blev også godkendt af Animal Care Committee på Ben-Gurion University of the Negev.
1. Udvælgelse og forberedelse af dyr
<ol><li>Vælg 65 mandlige Sprague-Dawley rotter vejer 300 til 350 g uden overt patologi for denne procedure. Den mindre størrelse giver tekniske vanskeligheder for MCAO-proceduren.</li>
	<li>Tildel 3 rotter pr bur og lad de...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+health+estimates:+deaths+by+cause,+age,+sex+and+country,+2000-2012.">Global health estimates: deaths by cause, age, sex and country, 2000-2012.</a> World Health Organization. 9, (2014).</li><li>Meadows, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+focal+and+multifocal+cerebral+ischemia:+a+review.">Experimental models of focal and multifocal cerebral ischemia: a review.</a> Reviews in the Neurosciences. 29, 661-674 (2018).</li><li>Durukan, A., Strbian, D., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+ischemic+stroke:+a+useful+tool+for+stroke+drug+development.">Rodent models of ischemic stroke: a useful tool for stroke drug development.</a> Current Pharmaceutical Designs. 14, 359-370 (2008).</li><li>Fluri, F., Schuhmann, M. K., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+ischemic+stroke+and+their+application+in+clinical+research.">Animal models of ischemic stroke and their application in clinical research.</a> Drug Design, Development and Therapy. 9, 3445-3454 (2015).</li><li>Li, F., Omae, T., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hyperthermia+and+its+mechanism+in+the+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+rats.">Spontaneous hyperthermia and its mechanism in the intraluminal suture middle cerebral artery occlusion model of rats.</a> Stroke. 30, 2464-2470 (1999).</li><li>Boyko, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+of+focal+ischemia+using+an+internal+carotid+artery+approach.">An experimental model of focal ischemia using an internal carotid artery approach.</a> Journal of Neuroscience Methods. 193, 246-253 (2010).</li><li>Zhao, Q., Memezawa, H., Smith, M. L., Siesjo, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperthermia+complicates+middle+cerebral+artery+occlusion+induced+by+an+intraluminal+filament.">Hyperthermia complicates middle cerebral artery occlusion induced by an intraluminal filament.</a> Brain Research. 649, 253-259 (1994).</li><li>Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+cerebral+ischemia:+procedural+pitfalls+and+translational+problems.">Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems.</a> Experimental and Translational Stroke Medicine. 1, 8 (2009).</li><li>Choi, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurobehavioural+deficits+correlate+with+the+cerebral+infarction+volume+of+stroke+animals:+a+comparative+study+on+ischaemia-reperfusion+and+photothrombosis+models.">Neurobehavioural deficits correlate with the cerebral infarction volume of stroke animals: a comparative study on ischaemia-reperfusion and photothrombosis models.</a> Environmental Toxicology and Pharmacology. 33, 60-69 (2012).</li><li>Boyko, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Alternative+Model+of+Laser-Induced+Stroke+in+the+Motor+Cortex+of+Rats.">An Alternative Model of Laser-Induced Stroke in the Motor Cortex of Rats.</a> Biological Procedure Online. 21, 9 (2019).</li><li>Bleilevens, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+anesthesia+and+cerebral+blood+flow+on+neuronal+injury+in+a+rat+middle+cerebral+artery+occlusion+(MCAO)+model.">Effect of anesthesia and cerebral blood flow on neuronal injury in a rat middle cerebral artery occlusion (MCAO) model.</a> Experimental Brain Research. 224, 155-164 (2013).</li><li>Kuts, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Middle+Cerebral+Artery+Occlusion+Technique+for+Inducing+Post-stroke+Depression+in+Rats.">A Middle Cerebral Artery Occlusion Technique for Inducing Post-stroke Depression in Rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (147), e58875 (2019).</li><li>Boyko, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+and+neuro-behavioral+parallels+in+the+rat+model+of+stroke.">Morphological and neuro-behavioral parallels in the rat model of stroke.</a> Behavioural Brain Research. 223, 17-23 (2011).</li></ol>

Det er rimeligt at antage, at laser teknik er minimalt invasive, da ingen dødsfald eller SAH opstod i lasergruppen. Den primære dødsårsag og SAH er skader på blodkar, der fører til en højde af intrakranielt tryk (ICP), som vist i de oprindelige MCAO teknikker10. Fraværet af død og SAH i lasergruppen skyldes sandsynligvis de specifikke virkninger af lasere: de har ikke direkte indvirkning på blodkarrene og kan fremkalde koagulation i tilfælde af lækage. Lav infarkt volumen og hjerne ød...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/60928">Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats</a>. The Authors section was updated.
One of the author names was updated from:
Dmitri Frank
to
Dmitry Frank

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/60928">Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

Globalt, slagtilfælde er den næststørste dødsårsag og den tredje hyppigste årsag til handicap1. Slagtilfælde fører også til alvorlige handicap, ofte kræver ekstra pleje fra medicinsk personale og pårørende. Der er derfor behov for at forstå de komplikationer, der er forbundet med lidelsen, og forbedre risikoen for mere positive resultater.
Brugen af dyremodeller er det første skridt til at forstå sygdomme. For at sikre de bedste forskningsresultater, en typisk model ville omfatte en simpel teknik, overkommelige priser, høj reproducerbarhed, og minimal variation. Determinanterne i iskæmisk slagtilfælde modeller omfatter hjerneødem volumen, infarkt størrelse, omfanget af blod - hjerne barrieren (BBB) opdeling, og funktionel svækkelse generelt evalueret via neurologiske sværhedsgrad score2.
Den mest udbredte slagtilfælde induktion teknik i gnaver modeller okklusioner den midterste cerebral arterie (MCA) forbigående eller permanent3. Denne teknik producerer en slagtilfælde model svarende til dem hos mennesker: det har en penumbra omkring strøg område, er meget reproducerbar, og regulerer iskæmi varighed og reperfusion4. Ikke desto mindre, MCAO metode har nogle komplikationer. Teknikken er tilbøjelig til intrakraniel blødning og skade på ipsilateral nethinden med en dysfunktion af den visuelle cortex og fælles hypertermi, der ofte fører til yderligere resultater5,6,7. Andre begrænsninger omfatter store variationer i induceret slagtilfælde (som følge af den sandsynlige udvidelse af iskæmi til utilsigtede regioner, ligesom den eksterne halspulsåre region), utilstrækkelig okklusion af MCA, og for tidlig reperfusion. Også rotter af forskellige stammer og størrelser udviser forskellige infarkte mængder8. Ud over alle de nævnte ulemper, MCAO model kan ikke fremkalde små isolerede slagtilfælde i dybe hjerneområder, fordi det er begrænset teknisk med hensyn til sit krav om minimum fartøjsstørrelse for kateterisation. Dette gør behovet for en alternativ model endnu mere kritisk. En anden metode, fotothrombosis, giver et muligt alternativ til MCAO procedurer, men forbedrer ikke effektiviteten9. Denne teknik er rettet mod slag med lys og tilbyder nogle forbedringer på de tidligere modeller. Men, fotothrombosis kræver en invasiv kraniotomi, der er forbundet med sekundære compications9.
I lyset af skitserede mangler, den protokol, der præsenteres her giver en dygtig alternativ laser teknik til at fremkalde hjerneskade hos gnavere. Virkningsmekanismen af laser teknik er baseret på laserens fototermiske virkninger bibringes på levende væv, hvilket fører til absorption af lysstråler af kroppens væv og deres konvertering til varme. Fordelene ved at bruge en laser teknik er dens sikkerhed og nem manipulation. En laser evne til at producere varme til at stoppe blødningen gør det meget vigtigt i medicin, mens dens evne til at forstærke forskellige bjælker på et givet mødes punkt sikrer, at lasere undgå at ødelægge sundt væv, der står i vejen for målet punkt10. Laserstrålen, der anvendes i denne protokol kan passere gennem et lavt flydende medium, såsom knogle, uden at udsende sin energi og / eller forårsager nogen ødelæggelse. Når det når et højt flydende medium, såsom hjernevæv, det bruger sin energi til at ødelægge målet væv. Teknikken, derfor, kan fremkalde hjerneskade kun i det relevante område af hjernen.
Den teknik, der præsenteres her, viste en enorm mængde af evnen til at regulere dens niveauer af bestråling, der producerer de valgte variationer af hjerneskade beregnet fra starten. I modsætning til den oprindelige MCAO, der påvirker både cortex og striatum, laser teknik var i stand til at regulere virkningen af hjerneskade, inducerende skade kun på den tilsigtede motoriske cortex. Heri, laser-induceret hjerneskade protokol og et resumé af repræsentative resultater for proceduren udføres på hjernebarken af rotter leveres.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:667px;" width="666">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">298-96-4</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">50% trichloroacetic acid</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">76-03-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Brain &#38; Tissue Matrices</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td>15013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Cannula Venflon 22 G</td>
			<td style="width:123px;">KD-FIX</td>
			<td style="width:161px;">1.83604E+11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Centrifuge Sigma 2-16P</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">Sigma 2-16P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Compact Analytical Balances</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">HR-AZ/HR-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Digital Weighing Scale</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">Rs 4,000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Dissecting scissors</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">Z265969</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Eppendorf pipette</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">Z683884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Eppendorf Tube</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td>EP0030119460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Ethanol 96 %</td>
			<td style="width:123px;">ROMICAL</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td>Flammable Liquid</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Evans Blue 2%</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">314-13-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Fluorescence detector</td>
			<td style="width:123px;">Tecan, M&#228;nnedorf Switzerland</td>
			<td style="width:161px;">model Infinite 200 PRO multimode reader</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Heater with thermometer</td>
			<td>Heatingpad-1</td>
			<td>Model: HEATINGPAD-1/2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Infusion Cuff</td>
			<td style="width:123px;">ABN</td>
			<td style="width:161px;">IC-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Isofluran, USP 100%</td>
			<td style="width:123px;">Piramamal Critical Care, Inc</td>
			<td style="width:161px;">NDC 66794-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Multiset</td>
			<td style="width:123px;">TEVA MEDICAL</td>
			<td style="width:161px;">998702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Olympus BX 40 microscope</td>
			<td style="width:123px;">Olympus</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Optical scanner</td>
			<td style="width:123px;">Canon</td>
			<td style="width:161px;">Cano Scan 4200F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Petri dishes</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">P5606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Scalpel blades 11</td>
			<td style="width:123px;">SIGMA - ALDRICH</td>
			<td style="width:161px;">S2771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Sharplan 3000 Nd:YAG (neodymium-doped yttrium aluminum garnet) laser machine</td>
			<td style="width:123px;">Laser Industries Ltd</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Stereotaxic head holder</td>
			<td style="width:123px;">KOPF</td>
			<td style="width:161px;">900LS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:216px;">Sterile Syringe 2 ml</td>
			<td style="width:123px;">Braun</td>
			<td>4606027V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringe-needle 27 G</td>
			<td style="width:123px;">Braun</td>
			<td style="width:161px;">305620</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

laser-induced brain injury in the motor cortex of rats

En fælles teknik til at fremkalde slagtilfælde i eksperimentelle gnaver modeller indebærer forbigående (ofte betegnet som MCAO-t) eller permanent (udpeget som MCAO-p) okklusion af den midterste cerebral arterie (MCA) ved hjælp af et kateter. Denne almindeligt accepterede teknik har dog visse begrænsninger, hvilket begrænser dens omfattende anvendelse. Slagtilfælde induktion ved denne metode er ofte karakteriseret ved høj variation i lokalisering og størrelse af det iskæmiske område, periodiske forekomster af blødning, og høje dødelighed. Også en vellykket gennemførelse af nogen af de forbigående eller permanente procedurer kræver ekspertise og varer ofte i ca. 30 minutter. I denne protokol præsenteres en laserbestrålingsteknik, der kan tjene som en alternativ metode til at fremkalde og studere hjerneskade i gnaveremodeller.
Sammenlignet med rotter i kontrol- og MCAO-grupperne viste hjerneskaden ved lasertiluktion nedsat variation i kropstemperaturen, infarkt volumen, hjerneødem, intrakraniel blødning og dødelighed. Endvidere, brugen af en laser-induceret skade forårsaget skader på hjernen væv kun i den motoriske cortex i modsætning til i MCAO eksperimenter, hvor ødelæggelse af både den motoriske cortex og striatal væv er observeret.
Resultaterne af denne undersøgelse tyder på, at laserbestråling kan tjene som en alternativ og effektiv teknik til at fremkalde hjerneskade i den motoriske cortex. Metoden forkorter også tiden for at afslutte proceduren og kræver ikke sagkyndige.

Der blev ikke registreret dødsfald eller SAH i hverken kontrol- eller forsøgsgrupperne (tabel 1). MCAO-gruppen havde en 20% sats af både dødelighed og SAH.
De relative ændringer i kropstemperaturen i rotter i begge grupper var også ens, på trods af en forskel i variabiliteten i begge grupper (tabel 1).
Der var en betydeligt værre NSS i både lasermodellerne (16 ± 1,1) og MCAO (20 ± 1,5) sammenlignet med den sham-opererede ...

Watch this Scientific Journal Video about Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats at JoVE.com

Laser-Induced Brain Injury in the Motor Cortex of Rats

Protokollen præsenteres her viser en teknik til at skabe en gnaver model af hjerneskade. Den metode, der er beskrevet her bruger laserbestråling og mål motor cortex.

Laser-induceret hjerneskade i Motor Cortex af rotter

A common technique for inducing stroke in experimental rodent models involves the transient (often denoted as MCAO-t) or permanent (designated as MCAO-p) ...

Vores protokol giver en ny metode til at skabe traumatisk hjerneskade hos rotter ved hjælp af laserbestråling for at skabe fokus indvirkning i den motoriske cortex. Den største fordel ved denne teknik er den lave variation i infarkt område, den lave dødelighed, og den relative enkelhed af proceduren, som ikke kræver ekspert håndterer. Demonstration af proceduren vil være Dmitry Natanel, en forsker fra vores laboratorium.At udføre en laser-induceret hjerneskade, først tildele 20, 300 til 350 gram Sprague Dawley rotter i laser-gruppen og 20 til kontrol Sham-opererede gruppe. Efter at have bekræftet en manglende reaktion på tilbagetrækning refleks, placere en rotte på en rektal temperatur reguleret varmepude og bruge en barbermaskine til at fjerne nok hår fra skadesstedet med en cirka to centimeter hår-fri margin omkring snittet. Desinficere den eksponerede hud med 70% ethanol og placere rotten i den udsatte position i en stereotaxic hovedholder.Lav en tre centimeter snit til at tillade lateral afspejling af hovedbunden til at eksponere området mellem bregma og lambda. Holding en Nd:YAG laser med peak bølgelængde af 1064 nanometer på en to millimeter afstand fra kraniet, administrere 50 joule gange 10 point med en et-sekund puls varighed til det udsatte område af kraniet over højre halvkugle. Efter laser skade er blevet leveret, fjerne rotten fra enheden og lukke hovedbunden med 3-0 silke kirurgiske suturer.Derefter placere rotten i sit bur med overvågning, indtil fuld recumbency. 24 timer efter indgrebet skal du bruge et 43-punkts scoringssystem til at vurdere den neurologiske sværhedsgradsscore. Test af dyrene for neurologiske underskud, adfærdsforstyrrelser, stråle balancering opgave, og reflekser, og tildele højere score for mere alvorlige handicap.Efter vurderingen høstes hjernen fra hvert forsøgs- og kontroldyr i henhold til standardprotokoller. For at vurdere hjernen infarkt volumen, afsnit de høstede hjerner i seks to millimeter tykke koronale skiver og inkubere hver skive i 0,05% TTC i 30 minutter ved 37 grader Celsius. Efter farvning skal du scanne disse udsnit med en optisk scanner med en opløsning på 1600 med 1600 prikker pr. tomme.De uhæmmede områder af de faste hjerneskiver defineres som infarkte. For at vurdere forekomsten af brud på blod-hjernebarrieren, 24 timer efter laserinduceret skade belastning en sprøjte med 2%Evans blå farvestof fortyndet i fire milliliter pr kg saltvand opløsning og levere opløsningen intravenøst til de sårede og kontrol rotter via den kanylede hale vene. Lad opløsningen cirkulere i en time, før du bruger kirurgiske pincets og saks til at åbne brystet af det første dyr.Se det eksponerede hjerte med afkølet 0,9% saltvand via venstre hjertekammer ved 110 millimeter kviksølv af tryk, indtil en farveløs overflod væske er observeret fra højre atrium. Dernæst høste hjernen og få to millimeter rostral caudal skiver. Adskå venstre hjerne skiver fra højre hjerne skiver til at tillade evaluering af de sårede og ikke-sårede halvkugler separat, og afveje prøverne.Prøverne homogeniseres ved hjælp af en morter og støder, og vævsprøverne inkuberes i 50%trichloreddikesyre i 24 timer. Den næste dag, centrifuge de homogeniserede hjernevæv prøver i 20 minutter ved 10, 000 gange G og stuetemperatur, og bland en milliliter af supernatant med 1,5 milliliter 96% ethanol ved en til tre forhold. Brug derefter en fluorescensdetektor ved en 620 nanometer excitation og 680 nanometer emissionsbølgelængden til at vurdere blod-hjernebarrieren brud.Som observeret ved histologisk analyse, Evans blå farvning kan bruges til at afsløre forekomsten af hjerneskade på laser og MCAO model dyr. I denne repræsentative analyse blev der ikke registreret dødsfald eller subarafoide blødninger i hverken kontrol- eller forsøgsgrupperne, og MCAO-gruppen havde en 20% dødelighed og subarafoid blødning. De relative kropstemperaturændringer i rotterne fra begge grupper var også ens, på trods af en forskel i variabiliteten i begge grupper.De neurologiske sværhedsgradsscorer var betydeligt værre i både laser- og MCAO-modellerne sammenlignet med den Sham-opererede kontrolgruppe. Laser-induceret til hjerneskade forårsagede også en betydelig stigning i infarkt volumen på målhalvhalsen i forhold til Sham-opererede kontrolgruppe. Lasermodellens infarkte volumen var imidlertid mindre sammenlignet med de dyr, der blev såret af MCAO-teknikken.Der blev ikke observeret nogen forskel i hjerneødem mellem den laserinducerede hjerneskademodel og den Sham-opererede kontrolgruppe. Men, der var en betydelig forskel i hjernen ødem mellem laser model og MCAO sårede grupper. Sammenlignet med sham-opererede kontrolgruppe, laser-induceret hjerneskade og MCAO teknikker både forårsaget en betydelig stigning i blod-hjerne barrieren brud på de ikke-sårede og målhalvhals.Mens du forsøger denne model, skal du huske præcist at målrette den motoriske cortex område og standardisere den energi, antallet af punkter, der bestråles, og den samlede redegørelse tid. Efter denne procedure, en bred overflod af adfærdsmæssige tests, såsom stråle gang, Froedert, og andre evalueringer kan udføres.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Live-Imaging mitosens i udviklingslandene mus embryonale Cortex

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Laser-induceret Rygmarvsskader model til opgørelse Mekanismer axon Degeneration i realtid

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Effects of Transcranial Alternating Current Stimulation on the Primary Motor Cortex by Online Combined Approach with Transcranial Magnetic Stimulation

Virkningerne af transkranial vekselstrøm Stimulation på den primære Motor Cortex af Online kombineret tilgang med transkranial magnetisk Stimulation

Transcranial Alternating Current Stimulation (tACS) is a neuromodulatory technique able to act through sinusoidal electrical waveforms in a specific ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging neurale aktivitet i den primære somatosensoriske Cortex ved hjælp af Thy1-GCaMP6s Transgene mus

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

In Vivo Single-Molecule Tracking at the Drosophila Presynaptic Motor Nerve Terminal

In Vivo Enkelt-molekyle sporing på Drosophila præsynaptiske motoriske Nerve Terminal

An increasing number of super-resolution microscopy techniques are helping to uncover the mechanisms that govern the nanoscale cellular world. ...

Combined Transcranial Magnetic Stimulation and Electroencephalography of the Dorsolateral Prefrontal Cortex

Kombinerede transkranial magnetisk Stimulation og electroencefalografi i den Dorsolateral præfrontale Cortex

Transcranial magnetic stimulation (TMS) is a non-invasive method that produces neural excitation in the cortex by means of brief, time-varying magnetic ...

Evaluation of Hemisphere Lateralization with Bilateral Local Field Potential Recording in Secondary Motor Cortex of Mice

Evaluering af halvkugle Lateralisering med bilateral lokal felt potentiel optagelse i sekundær motor cortex af mus

This article demonstrates complete, detailed procedures for both in vivo bilateral recording and analysis of local field potential (LFP) in the cortical ...

Investigating Alterations in Caecum Microbiota After Traumatic Brain Injury in Mice

Undersøgelse af ændringer i Caecum microbiota efter traumatisk hjerneskade i mus

Increasing evidence shows that the microbiota-gut-brain axis plays an important role in the pathogenesis of brain diseases. Several studies also ...

Non-Invasive Modulation and Robotic Mapping of Motor Cortex in the Developing Brain

Ikke-invasiv modulation og robot kortlægning af motorisk cortex i udviklings hjernen

Mapping the motor cortex with transcranial magnetic stimulation (TMS) has potential to interrogate motor cortex physiology and plasticity but carries ...